CN104749290A - 一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的高效液相色谱测定方法 - Google Patents
一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的高效液相色谱测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的高效液相色谱测定方法。本发明的目的在于针对目前蜂蜜中淀粉糖浆掺假现状，找到一种操作简单、易推广、低成本的蜂蜜中淀粉糖浆掺假的检测方法。通过对样品进行前处理和高效液相色谱检测，掺入淀粉糖浆的蜂蜜存在特征的低聚寡糖“指纹区”(DP6～13)及在麦芽六糖至麦芽七糖之间存在典型的“指纹峰”M，将其作为蜂蜜中掺入淀粉糖浆的判定指标。淀粉糖浆掺假的最低检测限为1％，适合于所有蜂蜜品种的淀粉糖浆掺假鉴定。
Description
技术领域
本发明涉及一种蜂蜜中淀粉糖浆掺假的检测方法，具体是利用高效液相色谱法鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的定性判定方法。属于食品掺假鉴别及食品质量控制范围。
背景技术
蜂蜜作为一种天然保健食品，一直深受消费者的青睐。近年来常用的蜂蜜掺假手段中，利用淀粉糖浆掺假，形式最为普遍。目前国内外通用的关于蜂蜜掺假的主要检验手段对淀粉糖浆的掺假欠缺鉴别手段，有一些办法不同程度解决着该问题，但都存在着一定的缺陷和不足：花粉显微法受到杂花粉的限制；薄层层析法(TLC)外在影响因素多，误差较大；用红外光谱(IR)研究掺伪还只是一种尝试并无实质性应用。目前，国际上承认的最权威的鉴定方法是碳同位素法(13C／12C)，受国情的限制一般不能普及；近几年快速发展的离子色谱法则由于仪器较昂贵、前处理成本高、专用性强，也难以普及于各检测机构。
高效液相色谱法因具有普及度高、前处理简便、灵敏度高等特点也广泛的应用于蜂蜜的掺假检测。相较于碳同位素法、离子色谱法，该法只需一台普通的液相色谱仪即可完成，是切实可行的并可较好地满足实际检测需要的检测方法。目前高效液相色谱应用于蜂蜜的掺假检测主要针对天然蜂蜜中独有的某些特殊成分或通过结合化学计量学方法分析蜂蜜中糖组成及比例以确定蜜源和蜜种进而判断是否掺伪，但该法检测限高且很难得到完整地分析和准确的数据使该法几乎不可能实现于实际检测中。针对现有方法的不足，急需建立一个即能够准确判断蜂蜜掺假，检测成本低、检测步骤简单且便于普及的蜂蜜淀粉糖浆掺假的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于针对目前蜂蜜中淀粉糖浆频繁掺假现状，找到一种操作简单、易推广、低成本高并可较好地满足实际工作需要的蜂蜜中淀粉糖浆掺假检测方法，满足蜂蜜掺假淀粉糖浆鉴别及质量控制需要。
本发明技术方案为：
本发明建立了一种蜂蜜中鉴别淀粉糖浆掺假的高效液相色谱测定方法，该方法包括以下的步骤：
(1)麦芽寡糖标准混合液配制
用麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准物质配制麦芽寡糖标准混合液，该溶液用于样品色谱图中寡糖保留时间的定位。
(2)样品的预处理
每克蜂蜜样品溶于1～5mL蒸馏水中，所得溶液用0.22～0.45μm滤膜过滤；或为每克蜂蜜样品 溶解于1～5mL蒸馏水中，然后样品溶液转移至固相萃取小柱，并至样液完全流出后，再用1～5倍柱体积的乙腈或甲醇水溶液(10～30％，v／v)洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用0.22～0.45μm滤膜过滤待测定。
(3)高效液相色谱仪测定
取预处理后的样品进行高效液相色谱测定；其液相色谱条件为：
色谱柱：低聚糖分析柱；
流动相：蒸馏水；
柱温：70～100℃；
流速：0.2～1mL／min；
进样量：10～20μL；
检测器：示差检测器(RI)。
(4)结果判定
根据特征的“指纹区”和“指纹峰”M，可定性判定蜂蜜中是否掺入淀粉糖浆；淀粉糖浆及掺入淀粉糖浆的蜂蜜中均在10～30min出现特征的低聚寡糖“指纹区”(DP6～13)并在麦芽六糖至麦芽七糖之间存在典型的“指纹峰”M，而纯蜂蜜中不存在“指纹区”和“指纹峰”M。不同工艺条件和不同原料生产的糖浆掺假的蜂蜜特征低聚寡糖“指纹区”会有所差异，但不影响“指纹峰”M的基本特征和判定。淀粉糖浆掺假的最低检测限为1％，适合于所有蜂蜜品种的淀粉糖浆掺假鉴定。
本发明鉴别蜂蜜中掺入淀粉糖浆的高效液相色谱测定方法。其特点为样品前处理简便；所涉及仪器只需一台普通的高效液相色谱仪即可。可真正意义上普及于各个检测机构。采用本法可较好地满足蜂蜜中掺假淀粉糖浆的检测工作需要。
附图说明
图1为标准麦芽寡糖分离色谱图；
图中：1～6峰依次为麦芽七糖、麦芽六糖、麦芽五糖、麦芽四糖、麦芽三糖、麦芽糖；图2为A为42型果葡糖浆、B为麦芽七糖(a)、麦芽六糖(b)和麦芽五糖(c)的标准混合液、C为洋槐纯蜜色谱图；
图中：a为麦芽七糖、b为麦芽六糖、c为麦芽五糖；
图3为掺入1％42型果葡糖浆的纯蜂蜜样品；
图4为6种纯蜂蜜样品；
图中：1～6依次为洋槐蜜、油菜蜜、枣花蜜、椴树蜜、枇杷蜜、百花蜜。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明：
实施例1
1.麦芽寡糖标准混合液配制：分别称取色谱纯麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准物质各10.0mg用蒸馏水分别溶解定容至10mL，配制成浓度1.0mg／mL的储备液于棕色瓶中。
具体如下：
表1麦芽寡糖标准混合液配制
2.样品前处理方法：称取1g样品，精确到0.001g。溶于4mL蒸馏水中，将样品溶液转移至OASIS HLB(6mL，200mg)小柱，并至样液完全流出后，再用6mL30％的乙腈水溶液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用0.22μm滤膜过滤待测定。待测。
3.液相色谱条件：
a)色谱柱：Benson BP-200Ag+(7.8mm I.D×300mm)；
b)柱温：70℃；
c)流动相：蒸馏水；
d)流速为：0.2mL／min；
e)进样量：10uL；
f)检测器：示差检测器(RI)；
g)数据采集时间：0～30min。
实施例2
1.麦芽寡糖标准混合液配制：分别称取色谱纯麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准物质各10.0mg用水分别溶解定容至10mL，配制成浓度1.0mg／mL的储备液于棕色瓶中。
具体如下：
表1麦芽寡糖标准混合液配制
2.样品前处理方法：称取1g样品，精确到0.001g。溶于2mL水中，所得溶液用0.45μm过滤膜过滤，待测。
3.液相色谱条件：
a)色谱柱：三菱MCI GEL CK04SS(10mm I.D×200mm)；
b)柱温：100℃；
c)流动相：蒸馏水；
d)流速为：1mL／min；
e)进样量：10uL；
f)检测器：示差检测器(RI)；
g)数据采集时间：0～22min。
4.试验及分析：试验不同的样品，将得到的色谱图进行比较分析。
图1 将配制好的麦芽寡糖标准混合液分别在上述色谱条件下(除采集时间不同)进样分析；其中1～6峰依次为麦芽七糖、麦芽六糖、麦芽五糖、麦芽四糖、麦芽三糖、麦芽糖；
图2 A为42型果葡糖浆、B为麦芽七糖(a)、麦芽六糖(b)和麦芽五糖(c)的标准混合液、C为洋槐纯蜜，其中A和C按照上述前处理方法，三个样品均采用上述色谱条件下进样并进行色谱分析；可以明显的观察到糖浆样品中低聚寡糖“指纹区”(DP6～13)和保留时间为19.2的“指纹峰”M；
图3 掺入1％42型果葡糖浆的纯蜂蜜样品的色谱图，前处理方法及色谱条件相同；可明显的观察到掺假的判断指标：低聚寡糖“指纹区”(DP6～13)和保留时间为19.2的“指纹峰”M：
图4 6种不同蜜源的纯蜂蜜样品的色谱图，前处理方法及色谱条件相同。
Claims (5)
1.一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的高效液相色谱测定方法，其特征在于：该方法包括以下的步骤：
(1)样品的预处理
每克蜂蜜样品溶于1～5mL蒸馏水中，所得溶液用0.22～0.45μm滤膜过滤；或为每克蜂蜜样品溶解于1～5mL蒸馏水中，然后样品溶液转移至固相萃取小柱，并至样液完全流出后，再用1～5倍柱体积的乙腈或甲醇水溶液(10～30％，v／v)洗脱，收集洗脱液。将洗脱液用0.22～0.45μm滤膜过滤待测定。
(2)高效液相色谱仪测定
取预处理后的样品进行高效液相色谱测定；其液相色谱条件为：
色谱柱：低聚糖分析柱；
流动相：蒸馏水；
柱温：70～100℃；
流速：0.2～1mL／min；
进样量：10～20μL；
检测器：示差检测器(RI)。
(3)结果判定
根据特征的“指纹区”和“指纹峰”M，可定性判定蜂蜜中是否掺入淀粉糖浆；淀粉糖浆掺假的最低检测限为1％，适合于所有蜂蜜品种的淀粉糖浆掺假鉴定。
2.根据权利要求1所述步骤(1)中固相萃取柱为：OASIS HLB或相当者。
3.根据权利要求1所述的步骤(2)中所述低聚糖分析柱为三菱MCI GEL CK04SS、BensonBP-200碳水化合物Ag+、Aminex HPX-42A或相当者。
4.根据权利要求1中步骤(3)所述特征的“指纹区”和“指纹峰”M，其特征在于，淀粉糖浆及掺入淀粉糖浆的蜂蜜中均在10～30min出现特征的低聚寡糖“指纹区”(DP6～13)并在麦芽六糖至麦芽七糖之间存在典型“指纹峰”M，而纯蜂蜜中不存在“指纹区”和“指纹峰”M；以此作为蜂蜜中掺入淀粉糖浆的鉴定指标；不同工艺条件和不同原料生产的糖浆掺假的蜂蜜特征低聚寡糖“指纹区”会有所差异，但不影响“指纹峰”M的基本特征和判定。
5.根据权利要求1、4所述的方法，其特征在于不同工艺条件和不同原料生产的淀粉糖浆包括果葡糖浆、麦芽糖浆、异麦芽糖浆、饴糖浆等淀粉糖浆。
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