CN112098574A - 一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及蜂蜜检测技术领域，尤其涉及一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法。所述方法为：分析蜂蜜样品在正离子模式下m/z值为215.0808±5ppm的特征化合物；如果所述特征化合物在离子淌度上出现两个峰，则所述蜂蜜样品为高果糖浆掺假蜂蜜；蜂蜜中该特征化合物仅出现一个峰；基于此即可鉴别高果糖浆掺假蜂蜜。本发明提出的方法，通过检测筛选m/z为215.0808±5ppm的离子在确定保留时间，淌度分离峰的情况即可鉴别高果糖浆掺假的蜂蜜。该方法简单准确，通过一次分析即可完成检测，可以覆盖目前主要类型的高果糖浆掺假蜂蜜。

Description

一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法
技术领域
本发明涉及蜂蜜检测技术领域，尤其涉及一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法。
背景技术
蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、蜜露或分泌物，结合自身分泌物，在蜂巢中经充分酿造而形成的甜味物质。作为一种常见的甜味剂和养生佳品，蜂蜜深受人们喜爱。蜂蜜本身就是一种高度浓缩的糖溶液，在高额利润的驱动下，近年来一些厂家及个体户向蜂蜜中掺入转化糖、高果糖浆、果葡糖等，制造掺假蜂蜜。这些生产假蜜坑骗消费者的行为，极大损坏了蜂产品行业的信誉，对蜂农的生产积极性造成了极大影响。近些年，新的糖浆掺假技术层出不穷，C-4植物糖含量测定方法-稳定碳同位比例法、薄层色谱及离子色谱法等检测方法已无法满足新型掺假蜂蜜的鉴别。因此，急需寻求能同时精准鉴定多种糖浆掺假蜂蜜的方法。
发明内容
针对现有对掺假蜂蜜识别技术的不足之处，本发明要解决的技术问题是提供一种可以同时识别多种类型高果糖浆掺假蜂蜜的方法。
具体而言，所述识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法为：分析蜂蜜样品在正离子模式下m/z值为215.0808±5ppm的特征化合物；
如果所述特征化合物在离子淌度上出现两个峰，则所述蜂蜜样品为高果糖浆掺假蜂蜜。
本发明中，m/z值为215.0808±5ppm的特征化合物在糖浆中具有结构相似的两个同分异构体，然而液相色谱法无法分离二者；本发明意外发现，通过液相色谱结合离子淌度高分辨质谱法可实现糖浆中上述两个同分异构体的分离；基于此，即可识别高果糖浆掺假蜂蜜。具体而言，通过分析蜂蜜样品在正离子模式下m/z值为215.0808±5ppm的特征化合物，在同一保留时间，若该特征化合物在离子淌度上出现两个峰(上述两个同分异构体)，则待测的蜂蜜样品为高果糖浆掺假蜂蜜。未掺假蜂蜜中，该特征化合物在离子淌度上仅出现一个峰。基于此，即可鉴别高果糖浆掺假蜂蜜。
上述方法简单有效，一次分析即可覆盖目前主要高果糖浆掺假蜂蜜。
作为优选，进行检测的方法为液相色谱-离子淌度高分辨质谱法。
进一步地，使用邻苯二胺作为衍生剂。
本发明中，蜂蜜样品被邻苯二胺衍生处理后，以特定m/z值的离子作为靶标离子，通过离子淌度对一特定保留时间的靶标离子分离情况进行检测；若离子淌度在某一保留时间下，检测出m/z为215.0808±5ppm的离子有两个峰，则可判定该蜂蜜样品为高果糖浆掺假蜂蜜。
更进一步的，衍生条件为：取蜂蜜样品1～20g，在pH值4.0～11.0条件下，加入过量的邻苯二胺，在10℃～110℃下反应30min～24h。
作为本发明的优选技术方案，所述方法包括如下步骤：
1)衍生：蜂蜜样品在pH＝4.0～11.0的缓冲溶液中，加入质量浓度为0.1～5％衍生剂溶液，在常温、避光条件下，反应10～24h，蜂蜜样品和衍生剂溶液的比例为1～3g：1mL；
2)纯化：反应溶液经反相色谱柱净化，用水清洗，再用流动相洗脱后，用甲醇定容，用滤膜过滤；
3)检测：使用液相色谱-离子淌度高分辨质谱法检测。
作为上述技术方案的优选，步骤1)中，所述缓冲溶液的pH值为4.0～5.0。
作为上述技术方案的优选，步骤2)中，所述反相色谱柱为C18、C8、苯基填充柱中的一种；所述流动相为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流速为0.2～1.0mL/min。
作为上述技术方案的优选，步骤3)中，所述液相色谱-离子淌度高分辨质谱法检测，质谱为电喷雾质谱法，雾化气温度为250～350℃，雾化气流速为6～12L/min，雾化气压力为30～50psi，鞘气温度为260～350℃，鞘气流速为6～16L/min，电离电压为3500～4000v(优选为3500v)，碎片电压为60～175v，扫描方式为正离子模式；离子淌度的采集速率不快于1Frame/s，淌度捕集时间为3900μs，淌度释放时间为150μs，淌度采集模式设为4bit。
本发明的有益效果：
(1)本发明通过对高果糖浆和蜂蜜的加工方式的研究，发现不同的原料对应的加工方式不同会导致样品中出现不同的同分异构体，因此可以筛选这些同分异构体作为靶标离子，确定可以精准识别多类型高果糖浆掺假蜂蜜的方法；
(2)本发明提出的方法，通过检测筛选m/z为215.0808±5ppm的离子在确定保留时间，淌度分离峰的情况即可鉴别高果糖浆掺假的蜂蜜。该方法简单准确，通过一次分析即可完成检测，可以覆盖目前主要类型的高果糖浆掺假蜂蜜。
附图说明
图1为高果糖浆和蜂蜜的质谱TIC图；
图2为高果糖浆和蜂蜜中m/z为215.0808±5ppm离子在不同保留时间下的离子淌度分离图；
图3为同位素确认为掺假蜂蜜的样品的离子淌度分离图；
图4为TLC方法确认为掺假蜂蜜的样品的离子淌度分离图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例中，若无特别说明，所使用的方法均为本领域常规的方法。
实施例1
(1)实验样品常见的高果糖浆样品其中甜菜高果糖浆样品10个，编号TC1-TC10；大米高果糖浆样品20个，编号DM1-DM20；玉米高果糖浆样品10个，编号YM1-YM10；蔗糖高果糖浆10个，编号ZT1-ZT10。
(2)实验用真实蜂蜜样品：油菜蜂蜜30个，编号YC1-YC30；洋槐蜂蜜35个，编号YH1-YH35；椴树蜂蜜15个，编号DS1-DS15；荆条蜂蜜30个，编号JT1-JT30；荔枝蜂蜜5个，编号LZ1-LZ5；龙眼蜂蜜5个，编号LY1-LY5；多花种混合蜂蜜30个，编号DHZ1-DHZ30。
(3)样品提取与衍生(实施例中，衍生剂浓度为质量浓度)：称取高果糖浆或蜂蜜样品2g，用pH＝5.0的磷酸盐缓冲溶液2mL溶解，加入1mL的1％邻苯二胺水溶液，常温避光反应24h，冰水终止反应。
(4)样品净化：①衍生完的样品，经微孔滤膜过滤后直接测定；②衍生后的样液分批经过OASIS HLB(6ml，200mg，使用前，用5ml甲醇和5ml水活化)柱净化，样液流完后，用6mL水清洗，使用8ml甲醇洗脱，氮吹后加1mL甲醇复溶，滤膜过滤后，测定。
(5)超高效液相色谱-离子淌度-飞行时间质谱(UHPLC-IM-TOF/MS)分析衍生物，比较高果糖浆与天然蜂蜜离子差异，用于筛选特征性的具有同分异构体的离子作为指示离子。高效液相色谱结合离子淌度分析具体条件为：
液相色谱：Agilent 6560UHPLC-IM-TOF/MS，色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3，2.1×100mm，1.8μm；柱温：45℃；流动相：0.1％甲酸水溶液A+0.1％甲酸甲醇溶液B，梯度洗脱，0-1.5min，A+B＝95+5；1.5-10min，A+B＝45+55；10-20min，A+B＝5+95；20-23min，A+B＝5+95；流速：0.3mL/min；进针体积：2μL；
淌度分析：ESI+，雾化气温度：320℃，雾化气流速：6L/min；雾化气压力：40psi；鞘气温度：320℃；鞘气流速：16L/min；电离电压：3500v；扫描方式：全扫描；扫描范围65-1100；采集速率不快于1Frame/s，淌度捕集时间为3900μs，淌度释放时间为150μs，淌度采集模式设为4bit。高果糖浆和天然蜂蜜中衍生物(邻苯二胺)的质谱TIC图见图1；图1为高果糖浆和蜂蜜在某一保留时间(5.703，5.745)时的差异比较，在该保留时间下蜂蜜和糖浆的总离子流图有所差异。图2为高果糖浆和蜂蜜215.0808离子的淌度分离图，可以明显看到高果糖浆的215.0808离子在淌度上有两个基线分离的峰，而蜂蜜中的该离子只有一个峰。
通过将不同的高果糖浆加入天然蜂蜜，分别添加10％、20％、30％、50％，按照上述处理和检测方法分析添加样品，通过分析目标离子215.0808在淌度的分离情况，可以准确识别添加20％的各类高果糖浆。该方法简单有效，一次分析，可以覆盖目前主要类型高果糖浆掺假蜂蜜。
实施例2
送检的蜂蜜样品已经过同位素和TLC检测确认其为糖浆掺假蜂蜜，其中同位素测定阳性样品5个，TLC测定样品4个。按照本方法进行检测识别。同实施例1，不同的是选择pH＝11.0。步骤(5)中的液相色谱梯度洗脱为：0-1.5min，A+B＝95+5；1.5-10min，A+B＝80+20；10-35min，A+B＝5+95；35-40min，A+B＝5+95；40-41min，A+B＝95+5。
其他操作同实施例1。
测定结果显示，本方法可以准确识别9个糖浆掺假蜂蜜，与已经报道的同位素方法和TLC方法的测试结果一致；具体见图3和图4。通过对m/z 215.0808离子的离子淌度进行分离，可以看到明显的两个分离峰，与对照的天然蜂蜜相比，具有明显的差异。因此，本方法可以准确识别高果糖浆掺假蜂蜜。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种识别高果糖浆掺假蜂蜜的方法，其特征在于，分析蜂蜜样品在正离子模式下m/z值为215.0808±5ppm的特征化合物；
如果所述特征化合物在离子淌度上出现两个峰，则所述蜂蜜样品为高果糖浆掺假蜂蜜。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行检测的方法为液相色谱-离子淌度高分辨质谱法。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用邻苯二胺作为衍生剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，衍生条件为：取蜂蜜样品1～20g，在pH值4.0～11.0条件下，加入过量的邻苯二胺，在10℃～110℃下反应30min～24h。
5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)衍生：蜂蜜样品在pH＝4.0～11.0的缓冲溶液中，加入质量浓度为0.1～5％衍生剂溶液，在常温、避光条件下，反应10～24h，蜂蜜样品和衍生剂溶液的比例为1～3g：1mL；
2)纯化：反应溶液经反相色谱柱净化，用水清洗，再用流动相洗脱后，用甲醇定容，用滤膜过滤；
3)检测：使用液相色谱-离子淌度高分辨质谱法检测。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述缓冲溶液的pH值为4.0～5.0。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述反相色谱柱为C18、C8、苯基填充柱中的一种；所述流动相为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流速为0.2～1.0mL/min。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述液相色谱-离子淌度高分辨质谱法检测，质谱为电喷雾质谱法，雾化气温度为250～350℃，雾化气流速为6～12L/min，雾化气压力为30～50psi，鞘气温度为260～350℃，鞘气流速为6～16L/min，电离电压为3500～4000v，碎片电压为60～175v，扫描方式为正离子模式；离子淌度的采集速率不快于1Frame/s，淌度捕集时间为3900μs，淌度释放时间为150μs，淌度采集模式设为4bit。
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