CN104736171B - 交叉保护的沙门氏菌疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了肠道沙门氏菌血清群C2‑3血清型交叉保护抵御肠道沙门氏菌血清群C1血清型，并且反之亦然。因此，本发明公开了肠道沙门氏菌血清群C2‑3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备疫苗中的用途，所述疫苗用于施用于家禽以保护抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C2‑3血清型的病症和/或起因于肠道沙门氏菌血清群C1血清型的病症。
Description
发明领域
本发明涉及肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)血清群C2-3血清型与肠道沙门氏菌血清群C1血清型的交叉保护，允许制备这样的疫苗，其包含来自这两个不同血清群中的仅一个血清群的血清型，以保护抵御任一个肠道沙门氏菌血清群。
背景技术
沙门氏菌(Salmonella)是家禽的主要病原体，并且它在家禽群体中的存在是人类公共卫生的主要关注问题。由沙门氏菌引起的食物中毒事件在全世界保持流行，并且是仅次于弯曲杆菌(Campylobacter)的由于细菌导致的食物中毒的最常见原因。并不令人惊讶地，家禽产品是人中的沙门氏菌感染的主要来源，且这种病原体发源于产蛋鸡转移到蛋，或发源于肉鸡胴体(broiler carcasses)转移到肉制品。由于一些菌株定殖在母鸡的生殖组织的能力(这可以导致活的沙门氏菌在蛋中和/或蛋壳上的存在)，肠炎沙门氏菌(SE)在蛋相关食物中毒中是尤其重要的。
沙门氏菌的污染可以通过使用有效的生物安全措施、竞争性排斥产品和消毒操作，在一定程度上得到控制。这些措施与疫苗接种结合使用，以提供针对变得污染的家禽群体的最佳保护，其中疫苗接种有效帮助降低由SE对蛋的污染。事实上，自从在1990年代的沙门氏菌控制计划中引入疫苗，其应用已变得遍及全世界的许多部分。
由于提供的早期保护和特别在劳力方面降低的成本，在鸡蛋生产商市场中，首先引入的灭活疫苗NOBILIS SALENVAC®和SALENVAC T®几乎已完全被活疫苗取代，因为施用可以通过饮用水来完成。因此，在家禽业的产蛋部分内，在生命的第一周内用沙门氏菌活疫苗的疫苗接种已成为英国的标准实践，并且在欧盟各国变得更常见。尽管要求反复疫苗接种以在群体寿命自始至终提供对母鸡的保护，但许多生产商遵循使用灭活疫苗的剂量或疗程的初始活疫苗接种计划。后面一种操作的基础是已显示与来自未接种疫苗的母鸡或用活疫苗接种疫苗的母鸡的那些相比较，由已用灭活疫苗接种疫苗的母鸡产的蛋的蛋黄中存在的抗体降低沙门氏菌的生长。灭活疫苗仍保持为肉禽行业中的常见实践，因为它们经由抗体通过蛋的转移对新孵化的小鸡提供抵御沙门氏菌的被动保护[Inoue等人Avian Diseases 52:567-571(2008)]。
沙门氏菌属种是分成两个种类的革兰氏阴性菌属：肠道沙门氏菌和邦戈尔沙门氏菌(S. bongori)。肠道沙门氏菌含有已根据其脂多糖结构分类的6个主要血清群(A、B、C1、C2-3、D和E)。基本上所有上市的现有疫苗均要求保护抵御血清群B (即血清型鼠伤寒沙门氏菌(S. Typhimurium))和D (即血清型肠炎沙门氏菌)的沙门氏菌，并且从而特异性靶向降低这些血清型。事实上，直到最近，这些血清群不仅是最流行的，而且从人畜共患病观点来看也是最重要的。然而，尽管肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌仍是涉及欧洲的人类疾病的最常见血清型，但它们在受污染的鸡肉产品中的流行率看起来是下降的，而血清群C1(其包括例如婴儿沙门氏菌(S. Infantis)、姆班达卡沙门氏菌(S. Mbandaka)和维尔肖沙门氏菌(S. Virchow))和C2-3 (其包括例如哈达尔沙门氏菌(S. Hadar)、纽波特沙门氏菌(S. Newport)和肯塔基沙门氏菌(S. Kentucky))的沙门氏菌具有显著增加的流行率。值得注意的是，包含血清型鼠伤寒沙门氏菌(血清群B)和肠炎沙门氏菌(血清群D)的疫苗已显示提供抵御血清群B的其他血清型，即海德堡沙门氏菌(S. Heidelberg)和阿贡纳沙门氏菌(S. Agona)的交叉保护，但未能显示抵御用哈达尔沙门氏菌(血清群 C2-3)的攻击的任何功效，指示疫苗中需要另外的抗原，以提供必要保护。
更新近地，已报道含有肠炎沙门氏菌(血清群D)、鼠伤寒沙门氏菌(血清群B)和婴儿沙门氏菌(血清群C1)的灭活的三价疫苗有效抵御来自肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、婴儿沙门氏菌或海德堡沙门氏菌(血清群B)的攻击[Deguchi等人，Avian Disease 53:281-286 (2009)]。另外，还报道含有鼠伤寒沙门氏菌(血清群B)、姆班达卡沙门氏菌(血清群C1)和俄赖翁沙门氏菌(S. Orion)(血清群E)的另一种灭活的三价疫苗保护抵御几种血清群B和C1血清型，尽管对于血清群E血清型的结果尚无定论[Pavic等人，Avian Pathology 39(1):31-39(2010)]。
O抗原是所有革兰氏阴性菌的细胞表面的主要脂多糖组分。肠道沙门氏菌的血清群的每一个表达可区别的O抗原，并且相应地，O抗原可以用于其分类中[Nori和Thong，African Journal of Microbiology Research 4(9)871-876(2010)]。一致地，当执行酶联免疫吸附测定(ELISA)时，在六个不同的肠道沙门氏菌血清群之间发现很少至无交叉反应[Smith等人，J. Vet. Diagn. Invest.，7:481-487(1995)]。
O抗原由肠道沙门氏菌基因组的rfb基因簇中的多基因编码，并且并不令人惊讶地，在肠道沙门氏菌的6个主要血清群之间在rfb基因簇内存在显著差异[Lee等人，J. Gen. Microbiol.，138:1843-1855(1992)；Nori和Thong，African Journal of Microbiology Research 4(9)871-876(2010)]。更具体而言，血清群C1的rfb基因簇已显示仅与血清群A、B、C2-3、D或E的rfb簇具有有限的相似性[Lee等人，J. Gen. Microbiol.,138:1843-1855(1992)]。此外，针对加热的醇-丙酮提取的血清群C2-3血清型(纽波特沙门氏菌)产生的单克隆抗体与来自其他血清群C2-3血清型的无蛋白质的脂多糖反应，但不与来自任何其他血清群的无蛋白质的脂多糖反应。另外，通过将来自血清群C2-3的相应抗原与多克隆兔抗血清群C2-C3抗体的预温育抑制了与该单克隆抗体的反应性，但通过将抗原与得自血清群C1抗原，或测试的任何其他沙门氏菌血清群抗原的多克隆抗血清的预温育则没有抑制该单克隆抗体的反应性[Duffey等人，J. Clin. Microbiol. 30(12):3050-3057(1992)]。
尽管针对特异性沙门氏菌血清群的疫苗已在商业上可获得几十年，但仍需要提供沙门氏菌疫苗，其可以保护抵御沙门氏菌血清群C1和C2-3两者，以及血清群B和D。
本文任何参考文献的引用均不应解释为承认此类参考文献可用作本申请的“现有技术”获得。
发明概述
为了克服针对沙门氏菌的目前疫苗的缺陷，本发明的一个方面提供了用于保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C2-3感染、或肠道沙门氏菌血清群C2-3和肠道沙门氏菌血清群C1感染的病症的肠道沙门氏菌血清群C1血清型。类似地，本发明提供了肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备疫苗中的用途，所述疫苗用于施用于家禽以保护抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C2-3感染，或肠道沙门氏菌血清群C2-3和肠道沙门氏菌血清群C1感染的病症。在具体实施方案中，肠道沙门氏菌C1疫苗用于施用于鸡。
在具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是利文斯通沙门氏菌(S. Livingstone)。在另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是姆班达卡沙门氏菌。在又另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是蒙特维迪亚沙门氏菌(S. Montevideo)。在仍另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是俄亥俄沙门氏菌(S. Ohio)。在又另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是汤卜逊沙门氏菌(S. Thompson)。在仍另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是维尔肖沙门氏菌。在具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C1血清型是婴儿沙门氏菌。
在另一个方面，本发明提供了用于保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C1感染，或肠道沙门氏菌血清群C2-3和肠道沙门氏菌血清群C1感染的病症的肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型。类似地，本发明提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型在制备疫苗中的用途，所述疫苗用于施用于家禽以保护抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C1感染，或肠道沙门氏菌血清群C2-3和肠道沙门氏菌血清群C1感染的病症。在具体实施方案中，肠道沙门氏菌C2-3/疫苗用于施用于鸡。
在具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是布洛克利沙门氏菌(S. Blockley)。在另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是病牛沙门氏菌(S. Bovismorbificans)。在又另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是肯塔基沙门氏菌。在仍另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是科特布斯沙门氏菌(S. Kottbus)。在又另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是慕尼黑沙门氏菌(S. Muenchen)。在仍另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是纽波特沙门氏菌。在具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型是哈达尔沙门氏菌。
本发明还提供了与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合的肠道沙门氏菌血清群C1血清型或肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。类似地，本发明进一步提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括肠道沙门氏菌血清群B血清型的使用。在具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。在其他实施方案中，肠道沙门氏菌血清群B血清型可以是阿格玛沙门氏菌(S. Agama)、阿贡纳沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌(S. Derby)、海德堡沙门氏菌、印第安纳沙门氏菌(S. Indiana)、圣保罗沙门氏菌(S. Saintpaul)、萨拉贾恩沙门氏菌(S. Sarajane)或鼠伤寒沙门氏菌单相变种(S. Monophasic Typhimurium)。
本发明还提供了与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合的肠道沙门氏菌血清群C1血清型或肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。类似地，本发明进一步提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括肠道沙门氏菌血清群D血清型的使用。在具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。在另一个此类实施方案中，肠道沙门氏菌血清群D血清型是鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌(S. Pullorum/Gallinarum)。
本发明还提供了与肠道沙门氏菌血清群B血清型和肠道沙门氏菌血清群D血清型组合的肠道沙门氏菌血清群C1血清型或肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B和肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。类似地，本发明还提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括肠道沙门氏菌血清群B血清型和肠道沙门氏菌血清群D血清型的使用。在这种类型的具体实施方案中，本发明提供了肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的用途，包括在制备疫苗，用于保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C1、C2-C3、B和D感染的病症中的用途。在另一个此类实施方案中，本发明提供了肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和哈达尔沙门氏菌的用途，包括在制备疫苗，用于保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C1、C2-C3、B和D感染的病症中的用途。
本发明进一步提供了本发明的肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型的用途，包括在制备疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括肠道沙门氏菌血清群G血清型(例如达汉姆沙门氏菌(S. Durham)、凯杜古沙门氏菌(S. Kedougou)、密士码亥米克沙门菌(S. Mishmarhaemek)或浦那沙门氏菌(S. Poona))、肠道沙门氏菌血清群E1血清型(例如鸭沙门氏菌(S. Anatum)、宾查沙沙门氏菌(S. Binza)、俄赖翁沙门氏菌或托马斯维尔沙门氏菌(S. Thomasville)、或肠道沙门氏菌血清群E4血清型(例如山夫顿堡沙门氏菌(S. Senftenberg))的使用。
由本发明使用的所有肠道沙门氏菌血清型，包括在疫苗制备中的那些，均可在铁受限的培养基中生长，导致铁受限的细胞。在某些实施方案中，肠道沙门氏菌血清型是灭活的。在本发明的具体实施方案中，肠道沙门氏菌血清型和/或制备的相应疫苗是福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌细胞的液体悬浮液。在本发明的另一个实施方案中，肠道沙门氏菌血清型和/或制备的相应疫苗是福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和哈达尔沙门氏菌细胞的液体悬浮液。在某些实施方案中，肠道沙门氏菌血清型是活的。在具体实施方案中，活的肠道沙门氏菌血清型是减毒的。
本发明进一步提供了肠道沙门氏菌血清型和/或疫苗的相应制备，其包含福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌或哈达尔沙门氏菌细胞，其进一步包括禽鼻气管炎(avian rhinotracheitis)，传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和减蛋综合征病毒的一种或多种毒株的使用。在可替代实施方案中，本发明进一步提供了肠道沙门氏菌血清型和/或疫苗的相应制备，其包含福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌或哈达尔沙门氏菌细胞，其进一步包括禽鼻气管炎，传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和传染性法氏囊病病毒(甘保罗病(Gumboro disease))的一种或多种毒株，以及灭活的呼肠孤病毒的使用。在另外其他实施方案中，本发明进一步提供了肠道沙门氏菌血清型和/或疫苗的相应制备，其包含福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌或哈达尔沙门氏菌细胞，其进一步包括灭活的呼肠孤病毒，传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒(甘保罗病)的一种或多种毒株和产气荚膜梭菌(C. perfringens)α类毒素的使用。
本发明的所有肠道沙门氏菌血清型和/或通过使用肠道沙门氏菌血清群制备的相应疫苗，可以施用一次，或通过第一次(例如初次)疫苗接种，随后为第二次(加强)和/或另外的加强疫苗接种施用。如上所述，本发明的灭活的肠道沙门氏菌血清型和/或通过使用灭活的肠道沙门氏菌血清群制备的相应疫苗，还可以在家禽对象的早先的活的肠道沙门氏菌疫苗接种后施用。
本发明的这些及其他方面通过参考下述附图和详述将得到更佳理解。
附图简述
图1A-1C比较了三价和/或四价血清型疫苗和对照就用哈达尔沙门氏菌攻击后的天数而言的功效。数据呈现为关于每只鸟的单独的点。功效反映为通过泄殖腔拭子分离的攻击血清型的log10 cfu/g。图1A和1B比较了两种三价疫苗(SE/ST/SI和SE/ST/SH)和四价疫苗(Quad 1，SE/ST/SH/SI)相对于对照的功效。
图1A(研究1哈达尔攻击：鸟个体的泄殖腔拭子)描述了在研究1中在攻击后第3(●)天和第5(♦)天时获得的数据，而
图1B(研究2哈达尔攻击：泄殖腔拭子个体鸟)描述了在研究2中在攻击后第3(●)、5(▲)和7(♦)天时获得的数据。
图1C(研究3：个体鸟脱落(shedding)相对于哈达尔攻击时间)描述了来自研究3在第3(●)、5(▲)和7(♦)天时获得的数据，其比较了三种不同四价(SE/ST/SH/SI)制剂相对于对照的功效。
下表1提供了测试的每一种疫苗的内容物。在图1A-1C中描述了平均值()。
图2A-2B描述了通过直接培养，阳性的鸟的百分比，如在用哈达尔沙门氏菌攻击后的第7天时获得的死后器官分离物测定的。
图2A (研究1哈达尔：通过直接培养(第7天)，阳性的鸟的比例)显示了来自研究1的结果，如图1A中所述，比较来自盲肠、肝和脾的死后样品。
图2B (研究2哈达尔：通过直接培养(第7天))，阳性的鸟的比例)显示了来自研究2的结果，如图1B中所述，比较来自盲肠和脾的死后样品。
下表1提供了测试的每一种疫苗的内容物。
图3A-3C描述了通过直接培养，阳性的鸟的百分比，如在用婴儿沙门氏菌攻击后的第7天和/或第14天时获得的死后器官分离物测定的。研究1和2将两种三价疫苗(SE/ST/SI和SE/ST/SH)和一种四价疫苗(Quad 1，如下文定义)相对于对照进行了比较。
图3A (研究1婴儿：第7天的直接阳性样品比例)显示了对于研究1在第7天时的死后盲肠样品的比较。
图3B (研究1婴儿：第14天的直接阳性脾样品比例)显示了对于研究1在第14天时的死后脾样品的比较。
图3C (研究2婴儿：第7天时的直接阳性样品比例)显示了对于研究2在第7天时的死后肝和脾样品的比较。下表1提供了测试的每一种疫苗的内容物。疫苗内容物和条形图底纹的关联如上图2A-2B中提供。
图4描述了实施例3，对于两个测试组，在所有取样日期时，通过直接培养从泄殖腔样品中回收的，以平均Log10 cfu/g表示的攻击细菌哈达尔沙门氏菌的脱落结果。
图5呈现了实施例3，在攻击后10和14天时，对于两个测试组，以总阳性脾样品的百分比表示的(通过直接和富集培养)的传播结果。
发明详述
本发明公开了尽管先前报道的在来自如上所述的血清群C1和C2-3的沙门氏菌血清型之间的显著抗原差异，在这两个不同血清群之间的交叉保护的量足以允许包含来自任一血清群的血清型的疫苗保护抵御来自两个血清群的血清型。更具体而言，由血清群C2-3或C1血清型产生的抗原的保护能力已显示保护抵御通过哈达尔沙门氏菌(C2/3)和婴儿沙门氏菌(C1)两者的攻击。
相应地，本发明呈现的数据指示包含来自血清群B、D和另外C2-3或C1的沙门氏菌血清型的三价沙门氏菌疫苗，将提供跨越血清群B和D以及C2-3和C1的足够保护。此类三价疫苗超过四价疫苗的优点包括使货品成本降到最低，且使抗原相互干扰的可能性降到最低。
在本发明的一个方面，肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。在沙门氏菌血清型的生长培养基中掺入铁螯合剂诱导细菌活化其铁螯合机制(iron sequesteringmechanisms)，这导致与更常规生长的生物相比，更紧密地与在体内的生长匹配的生理学。这种生长铁受限的沙门氏菌的过程导致产生出针对在野外感染和定殖期间可见的抗原的抗体，并且因此提供了更有效的免疫应答。
在具体实施方案中，对于用于产蛋的母鸡，即蛋鸡，本发明的三价疫苗可以用于降低在饲养和产蛋期间的肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、哈达尔沙门氏菌和婴儿沙门氏菌感染或排泄或水平传播或内脏侵入。在另一个具体实施方案中，对于在用于肉类的育种用家禽中使用的家禽，即肉鸡和/或烤鸡中的应用，本发明的三价疫苗可以通过被动保护用于降低在后代的生命的前几周内的肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、哈达尔沙门氏菌和婴儿沙门氏菌感染或排泄或水平传播或内脏侵入。
为了方便起见，在说明书中单数术语的使用决不预期是如此限制的。因此，例如，提及“血清型”包括提及此类血清型中的一种或多种，除非另有说明。复数术语的使用也不预期是限制性的，除非另有说明。
术语“大约”与术语“约”可互换使用，并且表示值在所示值的百分之五十内，即含有“约”2 x 109个细胞/ml的剂量可以含有1-3 x 109个细胞/ml。
如本文使用的，“疫苗”是适合于应用于动物(在某些实施方案中，包括人，然而对于其他实施方案，特别不用于人)的组合物，其在施用于动物例如鸡后，诱导足够强的免疫应答，以最低限度帮助保护免于起因于由野生型微生物感染的临床疾病，即足够强以用于帮助预防临床疾病，和/或预防、改善或治愈临床疾病。除非另有明确说明，术语疫苗的使用包括多价疫苗。相应地，下文例示的三价疫苗包含福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的细胞。
如本文使用的，“多价疫苗”是包含两种或更多种不同抗原的疫苗。在这类具体实施方案中，多价疫苗刺激接受者的免疫系统抵抗两种或更多种不同病原体。
如本文使用的，术语“保护(protect, protecting)”、“提供保护(provideprotection to, providing protection to)”和“帮助保护(aids in the protection)”不要求免于任何感染指征的完全保护。例如，“帮助保护”可以意指保护是足够的，从而使得在攻击后，潜在感染的症状至少得到降低，和/或引起症状的潜在的细胞、生理学或生物化学原因或机制中的一种或多种得到降低和/或消除。应当理解如该上下文中使用的，“降低的”意指相对于感染状态，包括感染的分子状态，不仅是感染的生理学状态。
如本文使用的，术语“治疗有效量”是给定抗原，例如被杀死的沙门氏菌分离物的量，当在单一施用中提供时，和/或当期望作为初始施用及一次或多次后续加强施用提供时，所述量足以提供保护和/或帮助保护以抵御施用抗原以保护抵御的病原体。
如本文使用的，“有效”疫苗包含治疗有效量的给定抗原。
如本文使用的，术语“药学可接受的”作为形容词使用，以意指经修饰的名词适用于药学产品中。当它例如用于描述药物疫苗中的赋形剂时，它将赋形剂表征为与组合物的其他成分相容，并且没有不利地对预期接受者造成伤害。
术语“载体”指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。药学可接受的载体可以是无菌液体，例如水和/或油，包括石油、动物、植物或合成起源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。水或水溶液盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液可以作为载体使用，特别是用于可注射溶液。
如本文使用的，“佐剂”是能够有利于或扩增免疫事件级联的物质，最终导致更佳的免疫学应答，即针对抗原的整合的机体应答。佐剂通常不是免疫学应答发生所必需的，但有利于或扩增该应答。
如本文使用的，“全身施用”是施用到机体的循环系统(包含心脏血管和淋巴系统)内，因此影响整个机体而不是特异性部位，例如胃肠道(经由例如经口或直肠施用)和呼吸系统(经由例如鼻内施用)。全身施用可以例如通过施用到肌肉组织内(肌内)、真皮内(皮内、经皮或皮上)、皮肤下方(皮下)、粘膜下方(粘膜下)、静脉中(静脉内)等执行。
“肠胃外施用”包括皮下注射、粘膜下照射、静脉内注射、肌内注射、皮内注射和输注。
如本文使用的，术语“家禽”可以包括鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑和雉鸡。
疫苗：
本发明提供了含有肠道沙门氏菌血清群C1或肠道沙门氏菌血清群C2-3的成员的疫苗，其提供抵御来自两个血清群的血清型的足够保护。在本发明的具体实施方案中，疫苗是被杀死的(例如使用福尔马林或热灭活)、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的液体悬浮液。在更具体的实施方案中，被杀死的肠道沙门氏菌血清型是使用福尔马林杀死的。在一个此类实施方案中，每种抗原的最终浓度是约2x 109细胞/ml。在另一个实施方案中，疫苗包含约25% v/v的氢氧化铝佐剂。在相关实施方案中，疫苗肌内施用。在另一个相关实施方案中，疫苗在最小六周龄时施用于家禽(例如鸡)。
本发明进一步提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型和任选的肠道沙门氏菌血清群B血清型和/或肠道沙门氏菌血清群D血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括禽鼻气管炎、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒(甘保罗病)、减蛋综合征病毒、呼肠孤病毒的一种或多种毒株和产气荚膜梭菌(C. perfringens)抗原的使用。在具体实施方案中，产气荚膜梭菌抗原是产气荚膜梭菌α类毒素[参见WO2006/113722；US 2006/0233825 A1，其内容在此整体通过引用并入]。在其他此类实施方案中，产气荚膜梭菌抗原是重组减毒的产气荚膜梭菌生物[参见US7,732,187 B2，其内容在此整体通过引用并入]。在又另其他实施方案中，产气荚膜梭菌抗原是产气荚膜梭菌α类毒素的基本上无毒的突变蛋白[参见US 7,972,604 B2，其内容在此整体通过引用并入]。
本发明还提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括禽鼻气管炎、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和减蛋综合征病毒的一种或多种毒株的使用。此类疫苗可特别针对产蛋母鸡(即蛋鸡)。
在可替代实施方案中，本发明提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括禽鼻气管炎，传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和传染性法氏囊病病毒(甘保罗病)的一种或多种毒株，以及灭活的呼肠孤病毒的使用。在可替代实施方案中，本发明提供了肠道沙门氏菌血清群C2-3血清型或肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备本发明的疫苗中的用途，所述疫苗进一步包括灭活的呼肠孤病毒，传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒(甘保罗病)的一种或多种毒株和产气荚膜梭菌抗原(例如产气荚膜梭菌α类毒素)的使用。此类疫苗可以特别针对用于肉类产业中的家禽(即肉鸡和烤鸡)。
本发明进一步提供了包含福尔马林杀死的、铁受限的肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌或哈达尔沙门氏菌细胞的疫苗的制备，其另外包括禽鼻气管炎，传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒(甘保罗病)、减蛋综合征病毒、呼肠孤病毒的一种或多种毒株和产气荚膜梭菌抗原的使用。
本发明的疫苗和免疫原性组合物可以，但不一定，包括生理学相容的缓冲液和盐水等等，以及药学可接受的佐剂。在本发明的某些实施方案中，本发明的疫苗和/或免疫原性组合物冷冻贮存，并且相应地包含冷冻保护剂，例如二甲亚砜(DMSO)，以保存冷冻的受感染细胞。
还考虑疫苗可以冷冻干燥(冻干)，或以其他方式减少液体体积，用于贮存，且随后在施用前或施用时在液体稀释剂中重构。此类重构可以使用例如疫苗级别水来实现。在某些实施方案中，多价疫苗的冻干部分可以包含一种或多种抗原，并且稀释剂可以包含一种或多种抗原。
在具体实施方案中，本发明的疫苗(或其部分)可以采取冷冻干燥形式，例如作为通过WO 2010/125084中所述的方法产生的片剂或球体，所述专利在此整体通过引用并入。具体地，参考WO 2010/125084的实施例，从第15页，第28行到第27页，第9行，描述了产生此类快速崩解片剂/球体的方法。此类冷冻干燥形式可以容易地溶解于稀释剂中，以使得疫苗能够全身施用。
疫苗施用：
本发明的疫苗和/或免疫原性组合物可以通过任何常规方式施用，例如通过全身施用，包括通过肠胃外施用例如但不限于肌内或皮下施用、静脉内注射、皮内注射、蛋内或通过其组合进行施用。本发明的疫苗还可以通过粘膜施用，例如通过鼻内、气管内、直肠和/或眼施用进行施用。可选地，疫苗可以经由皮肤贴剂、划痕或局部施用进行施用。考虑本发明的疫苗还可以通过经口施用，包括经由接受者的饮用水和/或食物进行施用。
本发明的疫苗(包括多价疫苗)还可以作为组合疗法的部分进行施用，所述组合疗法即除疫苗自身之外，还包括施用一种或多种另外的活性剂、疗法等的疗法。在所述情况下，应认识到构成“治疗有效”量的疫苗量可以多于或少于疫苗单独施用时构成“治疗有效”量的疫苗量。其他疗法可以包括本领域已知的那些，例如止痛药、退烧药、祛痰药、消炎药、抗组胺剂和/或流体的施用。
免疫原性水平可以通过本领域一般已知的攻击剂量滴度研究技术在实验上测定。此类技术通常包括用不同剂量的疫苗给许多动物对象接种疫苗，并且随后用合适的毒性肠道沙门氏菌血清型攻击动物对象，以测定最小保护剂量。
剂量/施用间隔：
在具体实施方案中，以至少四周的相隔给予两个0.5 ml剂量的本发明疫苗。在具体实施方案中，第一次疫苗接种的最小年龄是6周，并且第二个剂量应在产蛋前至少3-4周给予。
影响优选给药方案的其他因素可以包括例如对象的年龄、体重、性别、饮食、活动、肺大小和状况；施用途径；使用的具体疫苗的功效、安全性和免疫持续时间概况；是否使用递送系统；以及疫苗是否作为药物和/或疫苗组合的部分施用。因此，实际上采用的剂量可以对于具体动物改变，并且因此可以偏离上文所述的典型剂量。确定此类剂量调整一般在使用常规方法的疫苗开发领域人员的技术能力之内。
考虑疫苗可以单次或可选地，经过数天、数周、数月或数年的两次或更多次施用于疫苗接受者。在一些实施方案中，疫苗施用至少两次。在某些此类实施方案中，例如，疫苗施用两次，其中第二个剂量(例如加强剂量)在第一个剂量后至少2周施用。在具体实施方案中，疫苗施用两次，其中第二个剂量在第一个剂量后不长于8周施用。在其他实施方案中，第二个剂量在第一个剂量后1周 - 2年，第一个剂量后1.5周 - 8周，或第一个剂量后2周 - 4周施用。在其他实施方案中，第二个剂量在第一个剂量后约3周施用。
在上述实施方案中，第一个和后续剂量可以例如在量和/或形式方面不同。然而，通常，所述剂量在量和形式方面是相同的。当仅施用单个剂量时，该剂量中的疫苗量通常独自包含治疗有效量的疫苗。然而，当施用超过一个剂量时，那些剂量中的疫苗量可以一起构成治疗有效量。另外，疫苗可以初始施用，并且随后加强剂量可以在2-12周后施用，如上所述。然而，疫苗的后续施用可以在每年(1年)或两年(2年)基础上进行，与是否施用加强剂量无关。
本发明可以通过参考下述非限制性实施例得到更佳理解，所述实施例作为本发明的例示提供。呈现下述实施例，以便更全面举例说明本发明的实施方案。然而，它们决不应解释为限制本发明的广泛范围。
实施例
实施例1
含有不同沙门氏菌血清型的疫苗的比较
制备含有单独或与灭活的哈达尔沙门氏菌(S. Hadar；SH)和/或婴儿沙门氏菌(S.Infantis；SI)血清型组合的，灭活的肠炎沙门氏菌(S. Enteritidis；SE)和鼠伤寒沙门氏菌(S. Typhimurium；ST)(NB：肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌血清型与SALENVAC T中的那些相同)血清型的疫苗。所有血清型均在铁受限的培养基中生长，并且在使用前进行福尔马林灭活。在研究中使用的疫苗制剂在表1中列出。
表1：疫苗组合物
SE/ST/SH/SI四价疫苗1 (Quad 1)含有另外数量的佐剂，因为用含有高细胞数目的类似疫苗的先前研究已表明25%氢氧化铝含量对于含有总共8 x 109细胞/ml的疫苗可能不足够。SE/ST/SH/SI四价疫苗2 (Quad 2)含有25%佐剂，以研究佐剂浓度假设，并且SE/ST/SH/SI四价疫苗3 (Quad 3)含有所有抗原的一半剂量，以提供具有与商购可得的SALENVACT (SE/ST)中相同的总细胞浓度的疫苗。
两个研究(研究1和研究2)将两种单独的三价疫苗(SE/ST/SI和SE/ST/SH)的功效与Quad 1进行了比较，并且包括对照。第三个研究(研究3)针对用婴儿沙门氏菌或哈达尔沙门氏菌的攻击，对三种四价制剂进行了比较，并且包括适当对照。疫苗的功效使用来自商业供应商的产蛋品种的小鸡进行测试。鸟以三周的相隔给予两次肌内疫苗接种，并且在三周后用大约1010 cfu的哈达尔沙门氏菌或婴儿沙门氏菌的经口剂量进行攻击。
样品如下进行加工：称重的样品在无菌缓冲蛋白胨水(BPW)中进行匀浆化。允许块状物(lump)沉降，并且将上清液的等分试样在无菌BPW中连续稀释。上清液和稀释物的等分试样用于接种沙门氏菌选择性琼脂平板。上清液的第二个等分试样用于接种一瓶Rappaport Vassiliadis培养液，其是用于沙门氏菌的选择性培养基[参见Rappaport等人，J. Clin. Pathol. 9:261-266(1956)； Vassiliadis等人，J. Appl. Bacteriol. 44:233-239(1978)]。所述培养液和平板在适当温度下进行温育。检查平板的沙门氏菌，并且计数任何菌落。这提供了直接回收率，其可以表示为每克样品的计数或直接阳性(directpositive)。当从与样品有关的平板未见沙门氏菌时，将相应的Rappaport Vassiliadis培养液接种到沙门氏菌选择性板上且温育。当随后可见沙门氏菌时，结果记录为富集阳性，而当未见沙门氏菌时，结果是阴性的。在组间的差异可以视为分离的沙门氏菌数目、直接阳性数目或总阳性数目(直接加上富集)中的差异。
研究显示这些血清型和婴儿沙门氏菌以及其他组C1菌株和血清型无法充分定殖，以给出一致地证实来自疫苗接种鸟的脱落降低的脱落概况。进一步地，此类高攻击剂量的使用可能压倒所获得的保护水平，因此阻止特别是关于脱落的功效的重现性证实。
疫苗接种的功效通过比较泄殖腔拭子中的攻击血清型的脱落进行测定。脱落结果表示为如通过直接培养检测的脱落生物数目和来自所述组的阳性泄殖腔拭子数目的比较。另外，抵御对肝和脾的侵入的保护在死后检查时进行测定。死后器官分离物结果表示为通过直接培养或富集后的每组中的阳性鸟百分比(参见表2)。
这些研究中的婴儿沙门氏菌攻击并不强。即使对于使用的高攻击剂量，脱落在对照鸟中也太低，以至于无法获得有意义的结果，然而，在研究3中观察到脱落在所有组中在第7天时增加，即在接种疫苗的鸟中未见降低。认为使用的高攻击剂量可以突破在疫苗接种后获得的保护水平。使用婴儿沙门氏菌攻击模型的其他团体已报道了类似的结果。测试的不同制剂的有效性中的表观差异可能是由于在各个研究之间进行的攻击中的可变性造成的。
表2：攻击研究结果概括
- 通过阳性计数或数目的降低所示的保护。
X - 指示未见保护，即阳性计数或数目没有降低。
NR - 无结果。对照中的阳性计数或数目太低。
NR* - 所有组中的相同脱落模式，参见下文。
/X -模棱两可的结果。
结果
关于来自泄殖腔拭子的分离物的结果在图1A-1C中显示为对于每只鸟的单独的点，且指示攻击血清型的log10 cfu/g。为清楚起见，来自每组的平均计数由实线连接显示。图2A-2B和图3A-3C中的死后样品分离物的结果表示为对于攻击的分离物呈阳性的样品百分比。在研究1中，样品在第7天时从每组中的一些鸟死后获得，并且剩余部分在攻击后第14天时获得。
针对在哈达尔沙门氏菌攻击后的脱落的功效：
研究1：图1A显示了在用哈达尔沙门氏菌攻击后第3天和第5天之间，来自对照鸟的脱落维持在约3 log10，并且在第5天时，所有鸟通过直接培养是阳性的。对于所有接种疫苗的组，SE/ST/SI、SE/ST/SH和Quad 1 (参见上表1)，包括用婴儿沙门氏菌配制的三价疫苗(SE/ST/SI)，平均脱落在所述时期内降低并且通过直接培养呈阴性的鸟数目增加。同源疫苗(SE/ST/SH)具有最急剧的下降，而四价疫苗(Quad 1)具有最高数目的阴性鸟。
研究2：研究2，是上文研究1的重复，除了如图1B中所述，包括关于用哈达尔沙门氏菌攻击后第7天的数据。如图1B中可见的，平均脱落同样为约3 log10，但如通过直接培养检测的，在对照组中存在攻击后不脱落的许多鸟，并且因此，接种疫苗的组的平均脱落在一些情况下高于对照组。然而，疫苗接种的效应通过平均脱落的快速减少(计数到第7天时低于对照组至少10倍)和三价疫苗组的每一组中的阴性鸟的数目增加得到证实。四价疫苗，Quad1，在研究2中表现不如研究1中那么好。
研究3：如图1C中所述，所有三个四价疫苗组，即Quad 1、Quad 2和Quad 3 (参见上表1)到第7天时具有比对照组低大约10倍的计数。这包括用Quad 3接种疫苗的组，其为具有50%抗原剂量的制剂。用含有25%佐剂的疫苗接种疫苗的两组，即Quad 2和Quad 3，在第3天和第5天时，也显示比用含有40%佐剂的疫苗接种疫苗的组(即Quad 1)更低的计数。
在哈达尔沙门氏菌攻击后的死后分离物：
在研究1中，在第7天时，来自所有组中的大多数鸟的盲肠内容物是阳性的(参见图2A)。在肝中，每种三价疫苗均使侵入降低至其中没有样品是直接阳性的程度。直接阳性的脾样品比例中的降低看起来显示血清型特异性效应，其中仅含有哈达尔沙门氏菌细胞的三价疫苗和四价疫苗显示降低。有少数阳性样品来自在攻击后第14天时采集的任何肝或脾样品。
研究2的结果显示与其他组相比较，三价SE/ST/SI疫苗组具有降低数目的阳性盲肠内容物样品(参见图2B)。来自脾的分离物模式类似于研究1，尽管阳性对照的比例更高，并且所有疫苗均显示阳性样品比例的降低。在该研究中，来自对照鸟的肝的阳性样品太少而无法进行有效分析。
在研究3中，虽然来自所有鸟的盲肠内容物样品均为阳性的，但少数肝样品是阳性的(与12只接种疫苗的鸟中的1或2只相比较，15只对照中的5只)。每种疫苗均显示免于脾定殖的保护水平，其中含有25%佐剂的疫苗具有最低的阳性比例，如下表3中所示。
表3：阳性脾样品的百分比
*与对照显著不同，p = <0.05。
针对在婴儿沙门氏菌攻击后的脱落的功效：
在研究1和2中，没有婴儿沙门氏菌定殖在对照鸟中的盲肠的明确指示。到攻击后七天时，不存在通过直接培养阳性的鸟。在研究3中，每天，在组间的平均计数中的差异很低，尽管与对照和Quad 3两者相比较，四价疫苗1和2中在攻击后第3天时直接培养阳性的鸟更少，参见下表4。在每组中，从第5天到第7天计数显著增加，指示攻击剂量足够高以突破保护。
表4：在攻击后第3天时直接阳性的鸟百分比
在婴儿沙门氏菌攻击后的死后分离物：
在研究1中，在用婴儿沙门氏菌攻击后第7天时，与对照相比较，在接种疫苗组的任一个中存在更少的阳性盲肠内容物样品，但来自对照的阳性肝和脾比例太低而无法进行有意义的分析(参见图3A)。来自攻击后第14天的脾样品数据显示了与对照相比较，来自四价组(Quad 1)的阳性样品比例中的减少(参见图3B)。
在研究2中，在第7天时，来自盲肠的阳性样品太少而无法进行有效分析。对于制剂中的任一种都没有观察到阳性脾样品比例的降低(参见图3C)。然而，观察到免于肝侵入的同源保护，因为来自三价SE/ST/SI和四价疫苗(Quad 1；参见图3C)两者的直接阳性样品较少。
表5：在死后阳性的肝样品百分比
在研究3中，在第7天的死后检查时，对于制剂中的任一种，未观察到就阳性盲肠或脾样品比例的降低而言的保护效应。然而，每种疫苗显示免于肝侵入的保护水平，其中含有25%佐剂的疫苗(Quad 2和Quad 3)具有最低的阳性比例，如上表5中所示。
实施例2
在4日龄时用哈达尔沙门氏菌或婴儿沙门氏菌攻击的肉鸡中的被动保护
亲本鸟用具有25% Rehydrogel™的肠炎沙门氏菌 + 鼠伤寒沙门氏菌 + 婴儿沙门氏菌(SE/ST/SI)组合疫苗进行疫苗接种，或可选地不接种疫苗作为对照。已从接种疫苗或未接种疫苗的母鸡的蛋中孵化的处于四日龄的肉鸡，用哈达尔沙门氏菌或婴儿沙门氏菌进行攻击，以测试抵御这两种不同血清型的被动保护。
攻击血清型从研究鸟的回收率很高。通过泄殖腔拭子监控或在死后的盲肠内容物中，关于攻击脱落，在接种疫苗的组和对照组之间未见差异。然而，当考虑对肝和脾两者的侵入时，在接种疫苗的组中存在的阳性鸟比对照组少。发现这在攻击后10天的取样且在使用102 cfu哈达尔沙门氏菌或103 cfu婴儿沙门氏菌的攻击时最一致。对于抵御器官侵入的保护，哈达尔沙门氏菌和婴儿沙门氏菌攻击组两者均显示非常相似的结果，尽管事实上亲本群体接受了包含婴儿沙门氏菌而不包含哈达尔沙门氏菌的疫苗。这些结果与上文实施例1的那些一致，并且因此它们提供了这两种不同的肠道沙门氏菌亚群之间的交叉保护的强烈证据。
实验方法
将来自已用肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌(SE/ST/SI)组合疫苗接种疫苗的亲本群体的蛋，或可选地未接种疫苗的亲本群体的蛋，分开贮存、孵化且温育，以确保可以鉴定孵化小鸡的起源。在一日龄时，将小鸡分配至来自接种疫苗鸟的具有四组和来自未接种疫苗鸟的四组，其中每组分别含有15只。鸟在4日龄时根据组分配用适当的沙门氏菌菌株和剂量进行攻击(参见下表6)。
表6：用于被动保护攻击的实验方案
在攻击后第3、5、7和10天时，通过鸟的泄殖腔拭子检查监控感染过程。在泄殖腔和盲肠内容物中的攻击生物的存在以及对肝和脾样品的传播通过在攻击后7天时每组中的一半鸟的死后检查进行测定，并且剩余部分在攻击后第10天时进行测定。
结果
用哈达尔沙门氏菌攻击后 ：使用任一攻击剂量，未见与对照相比较，来自疫苗接种的在脱落中的降低或盲肠分离物中的差异。
在更高攻击水平(104 cfu/剂量)的攻击后第7和10天时，可见在第7天和第10天时来自肝和脾的分离物中的降低，并且对于更低攻击水平(102 cfu/剂量)，在攻击后第10天时，对于肝和脾两者，比较疫苗接种与对照可见降低。阳性鸟的比例反映在更低剂量攻击后，用疫苗接种组分离的数目在第7天和第10天时具有更少的阳性样品。低剂量攻击仅在攻击后第10天时显示疫苗接种的保护性效应。然而，这是接种疫苗和对照鸟之间的最大差异，并且反映为相对于阳性疫苗接种组的鸟的比例降低，阳性对照鸟的比例增加。结果在下表7中制表为在哈达尔沙门氏菌攻击后阳性的鸟的总百分比。
表7：在哈达尔沙门氏菌攻击后阳性的鸟的总百分比(在第7和10天时的直接和富
集培养)
用婴儿沙门氏菌攻击后 ：用以103 cfu的婴儿沙门氏菌的攻击最初在第3天时显示来自接种疫苗组的脱落的降低，然而，该组间差异在以后取样天数时降低。跨越所有时间点，对于接种疫苗组，更高剂量的攻击水平(105 cfu/剂量)未显示脱落的降低。几乎所有盲肠样品均为阳性的。
在用更高攻击剂量攻击后第7天时，来自肝和脾的婴儿沙门氏菌的分离物导致来自疫苗接种的阳性样品比对照组少，同时两个攻击水平在第10天时都显示出疫苗接种的保护效应(参见下表8)。对于更低攻击剂量，与阳性对照鸟的比例增加相比较，在7和10天之间存在阳性鸟的比例降低。
表8：在婴儿沙门氏菌攻击后阳性的鸟的总百分比(直接和富集培养)
结论
与对照相比较，在两个哈达尔沙门氏菌攻击水平下的疫苗组未显示泄殖腔脱落(脱落数目和阳性样品数目)或盲肠内容物样品的减少。然而，在两个攻击水平时的疫苗组均显示器官定殖的降低，其中最大差异可见于攻击后第10天时的更低攻击水平(102 cfu)中。因此，就降低器官定殖而言，在已针对婴儿沙门氏菌被动免疫接种的小鸡中，观察到针对哈达尔沙门氏菌攻击的交叉保护的证据。
与对照相比较，在两个婴儿沙门氏菌攻击水平下的疫苗组均显示泄殖腔脱落或盲肠内容物样品几乎没有降低。对于疫苗接种组可见器官侵入的降低，显示比对照更少的阳性器官样品，具有与用哈达尔沙门氏菌攻击所见相似的模式。
实施例3
在14周龄时在蛋鸡中三价疫苗针对哈达尔沙门氏菌攻击的功效测试
概括
六周龄SPF起源产蛋型小鸡用三价疫苗进行免疫接种，所述三价疫苗含有相等数目的肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的福尔马林杀死的细胞，其已在铁受限的条件下生长。第二个疫苗剂量在10周龄时给予。在第二次疫苗接种后四周，鸟和未接种疫苗的同类者通过经口途径用哈达尔沙门氏菌进行攻击，并且通过泄殖腔拭子检查监控攻击菌株的脱落。攻击细菌对内脏的传播通过在攻击后10和14天时鸟的死后检查进行测定。
当鸟个体脱落水平与对照组相比较时，由接种疫苗组脱落的攻击生物显著更少(p= 0.001)。
来自对照鸟的阳性脾样品比例显著高于接种疫苗的组(p = 0.01)。该研究中没有从肝培养物回收攻击生物。
此处测试的三价疫苗已显示针对哈达尔沙门氏菌的功效，因为：
· 在不同取样天数时，对于取样的每个时间点，在攻击后来自接种疫苗的小鸡的新鲜粪便样品中的肠道沙门氏菌血清型哈达尔沙门氏菌数目，在接种疫苗的鸟中低于对照鸟：当比较随着时间过去的总脱落时，接种疫苗的鸟脱落的生物数目显著低于对照鸟脱落的生物数目。
· 当与对照相比较时，阳性脾样品的总数目在接种疫苗的鸟中显示显著降低。
实验设计
SPF起源的蛋鸡在常规鸡舍(accommodation)中作为一组饲养几周，以便发展出常见的正常肠内菌丛，直至研究的攻击期。55只鸟在6周龄时用0.5 ml疫苗进行疫苗接种，在胸部中肌内给予。四周后，通过相同途径给予第二个疫苗剂量。52只鸟作为对照组保持未接种疫苗。在攻击施用时间之前，将鸟转移至封闭设施，以在落地畜舍中以其分开的组饲养。
在大约14周龄时，使鸟暴露于用哈达尔沙门氏菌攻击的经口攻击感染。在攻击前一天，将食物与鸟移开，并且随后在攻击后再引入。在攻击后3、5、7、10和14天时，通过每组相同30只鸟的泄殖腔拭子检查监控感染过程。攻击细菌在肝和脾样品中的存在通过检查在死后从鸟获得的样品进行测定，所述鸟在攻击后第10天时未选择用于泄殖腔取样，或在攻击后第14天时的剩余鸟。研究组如表9中呈现。
表9：研究组：
疫苗： 疫苗含有鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和婴儿沙门氏菌中的每一种的1.5x 109个铁受限的、福尔马林杀死的细胞和氢氧化铝佐剂。疫苗在使用前已通过无菌测试和分析测试。
攻击： 鸟各自用3.8 x 108 c.f.u.哈达尔沙门氏菌菌株PT16进行攻击，所述菌株由在微需氧环境中在37℃下的过夜培养物新鲜制备。
培养物通过离心浓缩10倍，并且通过在血琼脂上铺平板检查活力和纯度。攻击作为20 ml经口剂量/鸟施用。
动物： 性别混合的SPF白色来航蛋鸡，在第一次疫苗接种时6周龄。
方法和操作
环境样品测试： 通过将来自畜舍底部的至少五个分离的场所的粪便材料样品收集到无菌容器内，在疫苗接种和攻击时测试窝(litter)样品的沙门氏菌的存在。将粪便材料在缓冲的蛋白胨水中悬浮至1:10 w/v的粪便与培养基比，并且在37℃下温育长达24小时。将来自培养液的100 µl生长样品接种到10 ml体积的Rappaport Vassiliadis (RV)培养液内，并且在42℃下温育长达72小时。将菌环量的每种RV培养液生长物接种到Brilliance™沙门氏菌选择性培养基(Oxoid)上，并且在37℃下温育长达24小时。通过紫红色菌落的存在显示任何沙门氏菌的存在。任何可疑菌落均通过血清学鉴定加以证实。从环境中分离出沙门氏菌将使研究无效。
血清学： 在攻击前，从每只研究鸟的桡静脉获得血样。使用内部ELISA，就针对鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的抗体的存在测试血清样品。测定涉及测试和参考血清的稀释物在微量滴定板上的温育，所述微量滴定板先前涂布有由相关血清型的沙门氏菌细胞制备的鞭毛。在洗涤后，使用缀合至过氧化物酶的抗鸡IgY抗体，随后与底物一起温育，从而检测结合的抗体。用酸停止显色，并且在450 nm处读取光密度。对于每种血清型，计算相对于参考血清的抗体水平。
沙门氏菌分离物
检查泄殖腔拭子和肝和脾的死后样品的攻击细菌的存在，如实施例1中所述。
数据分析 ：由来自直接培养的分离物计算来自泄殖腔拭子的每克粪便分离的沙门氏菌的数目。还记录了在富集后来自每组的阳性样品数目。
计算脱落的几何平均值、阳性样品总数和每只鸟的总脱落。使用‘曲线下面积’估计来计算经过研究持续时间在组中的每只鸟的总脱落，并且使用双样品t检验对两个组进行比较。
适当时，使用列联表(使用耶茨连续性校正(Yates continuity correction)的卡方分析)比较具有阳性脾样品(通过直接和富集培养)的鸟比例。没有包括关于肝样品的结果，因为未发现对于沙门氏菌是阳性的肝样品。
结果
哈达尔沙门氏菌菌株的脱落 - 泄殖腔拭子结果 ：在攻击后的每个时间点，计算从泄殖腔拭子回收的沙门氏菌数目的几何平均值。计算每克盲肠内容物的计数的log10，并且在每个时间点对于每组计算平均值(参见图4和表10)。
在直至攻击后14天的每一个时间点，与接种疫苗的组相比较，从对照组的平均回收水平都更高。在攻击后第14天时，由两个组脱落的数目是相似的。计算关于每只鸟随着时间过去的总脱落，并且当通过t检验比较时，在接种疫苗的组(1)和对照组(2)之间显示统计上显著的差异(p=0.001)。
表10：随着时间过去从接种疫苗的鸟和对照鸟回收的几何平均log10 cfu/g的比
较
死后哈达尔沙门氏菌的分离： 在每个时间点，来自未接种疫苗鸟的阳性样品，来自直接培养和作为总数两者，都比来自接种疫苗组的更多。
在攻击后10天时，来自接种疫苗组的25个脾样品中的总共9个(36%)是阳性，其中7个是直接阳性，与之相比，来自对照组的22个中的16个(73%)是阳性，其中11个是直接阳性。
在攻击后14天时，来自接种疫苗组的30个脾样品中的总共8个(27%)是阳性，其中4个是直接阳性，与之相比，来自对照组的30个培养物中的14个(47%)是阳性，其中11个是直接阳性(参见图2和表11)。
表11：阳性脾样品数目(直接和富集培养)。
通过来自在攻击后10和14天时获得的肝样品的直接或富集培养，没有回收到攻击生物。
在攻击后10和14天时，来自组1和2的总阳性脾样品(直接和富集培养)的百分比，参见图5。
产生死后阳性样品的鸟数目总结于表12中。
表12：在死后阳性鸟总数目的总结(直接和富集培养)。
结论
该研究的目的是证实三价沙门氏菌疫苗针对异源哈达尔沙门氏菌攻击感染的功效。
令人信服地显示了疫苗在降低脱落中的功效，因为在研究的持续过程中，与对照组相比较，在来自接种疫苗组的粪便中存在显著更少的脱落的攻击生物(p = 0.001)；以低100倍的脱落水平开始。
也显示了针对对于内脏的传播的令人印象深刻的功效，因为与对照相比较，来自接种疫苗组的显著更少的鸟在死后呈现阳性样品(p < 0.01)；事实上，传播水平有效减半。
因此，此处测试的三价疫苗导致与对照相比较，来自接种疫苗的小鸡的新鲜粪便样品中的肠道沙门氏菌数目的显著降低，这保持较低直至测试结束时。另外，在疫苗接种中的来自肝或脾的沙门氏菌阳性样品数目显著低于对照中。
Claims (154)
1.肠道沙门氏菌血清群C1血清型在制备疫苗中的用途，所述疫苗用于保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群C2-3感染，或肠道沙门氏菌血清群C2-3和肠道沙门氏菌血清群C1感染的病症。
2.根据权利要求1的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型是灭活的。
3.根据权利要求1的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型选自婴儿沙门氏菌、利文斯通沙门氏菌、姆班达卡沙门氏菌、蒙特维迪亚沙门氏菌、俄亥俄沙门氏菌、汤卜逊沙门氏菌和维尔肖沙门氏菌。
4.根据权利要求2的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型选自婴儿沙门氏菌、利文斯通沙门氏菌、姆班达卡沙门氏菌、蒙特维迪亚沙门氏菌、俄亥俄沙门氏菌、汤卜逊沙门氏菌和维尔肖沙门氏菌。
5.根据权利要求3的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型是婴儿沙门氏菌。
6.根据权利要求4的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型是婴儿沙门氏菌。
7.根据权利要求1的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。
8.根据权利要求2的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。
9.根据权利要求3的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。
10.根据权利要求4的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。
11.根据权利要求5的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。
12.根据权利要求6的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群B血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群B感染的病症。
13.根据权利要求7的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。
14.根据权利要求8的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。
15.根据权利要求9的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。
16.根据权利要求10的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。
17.根据权利要求11的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。
18.根据权利要求12的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群B血清型是鼠伤寒沙门氏菌。
19.根据权利要求1的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
20.根据权利要求2的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
21.根据权利要求3的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
22.根据权利要求4的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
23.根据权利要求5的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
24.根据权利要求6的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
25.根据权利要求7的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
26.根据权利要求8的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
27.根据权利要求9的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
28.根据权利要求10的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
29.根据权利要求11的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
30.根据权利要求12的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
31.根据权利要求13的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
32.根据权利要求14的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
33.根据权利要求15的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
34.根据权利要求16的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
35.根据权利要求17的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
36.根据权利要求18的用途，其中所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型与肠道沙门氏菌血清群D血清型组合，用于额外地保护家禽抵御起因于肠道沙门氏菌血清群D感染的病症。
37.根据权利要求19的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
38.根据权利要求20的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
39.根据权利要求21的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
40.根据权利要求22的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
41.根据权利要求23的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
42.根据权利要求24的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
43.根据权利要求25的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
44.根据权利要求26的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
45.根据权利要求27的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
46.根据权利要求28的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
47.根据权利要求29的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
48.根据权利要求30的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
49.根据权利要求31的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
50.根据权利要求32的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
51.根据权利要求33的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
52.根据权利要求34的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
53.根据权利要求35的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
54.根据权利要求36的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群D血清型是肠炎沙门氏菌。
55.根据权利要求37的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
56.根据权利要求38的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
57.根据权利要求39的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
58.根据权利要求40的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
59.根据权利要求41的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
60.根据权利要求42的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
61.根据权利要求43的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
62.根据权利要求44的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
63.根据权利要求45的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
64.根据权利要求46的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
65.根据权利要求47的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
66.根据权利要求48的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
67.根据权利要求49的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
68.根据权利要求50的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
69.根据权利要求51的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
70.根据权利要求52的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
71.根据权利要求53的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
72.根据权利要求54的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种和随后的第二次疫苗接种中施用于家禽。
73.根据权利要求1的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
74.根据权利要求2的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
75.根据权利要求3的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
76.根据权利要求4的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
77.根据权利要求5的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
78.根据权利要求6的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
79.根据权利要求7的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
80.根据权利要求8的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
81.根据权利要求9的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
82.根据权利要求10的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
83.根据权利要求11的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
84.根据权利要求12的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
85.根据权利要求13的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
86.根据权利要求14的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
87.根据权利要求15的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
88.根据权利要求16的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
89.根据权利要求17的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
90.根据权利要求18的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
91.根据权利要求19的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
92.根据权利要求20的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
93.根据权利要求21的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
94.根据权利要求22的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
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96.根据权利要求24的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
97.根据权利要求25的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
98.根据权利要求26的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
99.根据权利要求27的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
100.根据权利要求28的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
101.根据权利要求29的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
102.根据权利要求30的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
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114.根据权利要求42的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
115.根据权利要求43的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
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142.根据权利要求70的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
143.根据权利要求71的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
144.根据权利要求72的用途，其特征在于所述肠道沙门氏菌血清型在铁受限的培养基中生长。
145.根据权利要求1-144中任一项的用途，其中将一种活的肠道沙门氏菌血清群C1血清型在第一次疫苗接种中施用于家禽，随后为使用根据权利要求2-144中任一项限定的肠道沙门氏菌血清群C1血清型的第二次疫苗接种施用。
146.根据权利要求1-144中任一项的用途，其中所述疫苗包含根据权利要求2-144中任一项限定的肠道沙门氏菌血清群C1血清型。
147.根据权利要求145的用途，其中所述疫苗包含根据权利要求2-144中任一项限定的肠道沙门氏菌血清群C1血清型。
148.根据权利要求146的用途，其中所述疫苗是肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的福尔马林杀死的、铁受限的细胞的液体悬浮液。
149.根据权利要求147的用途，其中所述疫苗是肠道沙门氏菌血清型肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和婴儿沙门氏菌的福尔马林杀死的、铁受限的细胞的液体悬浮液。
150.根据权利要求146的用途，其中所述疫苗进一步包括禽鼻气管炎、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和减蛋综合征病毒的一种或多种毒株。
151.根据权利要求147-149中任一项的用途，其中所述疫苗进一步包括禽鼻气管炎、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒和减蛋综合征病毒的一种或多种毒株。
152.根据权利要求146的用途，其中所述疫苗包含氢氧化铝佐剂。
153.根据权利要求147-150中任一项的用途，其中所述疫苗包含氢氧化铝佐剂。
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