CN104726344A - 一种适于香菇工厂化栽培菌种沪f2及其指纹图谱以及栽培方法 - Google Patents

一种适于香菇工厂化栽培菌种沪f2及其指纹图谱以及栽培方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法，该指纹图谱由4对SSR标记的特异等位片段组合而成。栽培方法包括：(1)初次培养；(2)二次培养恢复期；(3)二次培养转色期；(4)二次培养催蕾期。本发明可以解决香菇菌丝恢复缓慢、转色延迟、抗杂菌能力弱、原基发生需要较大温差刺激的技术难题，使香菇工厂化生产经济可行，长期运行可降低成本，提高香菇生产效益。

Description

一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法
技术领域
本发明属于香菇食用菌领域，特别涉及一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法。
背景技术
我国食用菌产值过千亿，名列种植业第五位，其中香菇产量最多。我国的食用菌种植主要有两种模式：以手工操作为主的传统模式和以自动化设备操作为主的工厂化模式。随着人口老龄化进程的加剧和劳动力成本的提高，我国食用菌栽培由传统模式向工厂化模式的转型升级已经成为一种必然趋势。工厂化栽培，即在食用菌的各个栽培环节上，最大限度地以机器代替人工劳动，同时在人造菇房内，人为调控光、温、水、气，模拟食用菌的生长环境，以实现食用菌大批量的周年生产。但是，由于不同食用菌生物学特性及对出菇的技术要求不同，目前并不是所有的品种都能进行自动化的工厂化生产。一般而言，无论哪种模式，食用菌生产通常包括拌料，装袋(瓶)，高压、常压灭菌，冷却后接种，培养，出菇管理，采收到包装等环节。其中工厂化模式下，培养料的搅拌、装瓶、杀菌、接种等环节全部由机械完成，各环节之间靠机械传送带输送，最大限度地减轻了工人劳动强度，并且生产效率很高。以高速装瓶机为例，一台自动装瓶机每小时可装约4500瓶(每瓶约900毫升)，以每日工作8小时计，则每日装瓶量近4万瓶，且程序由电脑控制，每瓶装瓶误差仅为15克。在我国大规模栽培的10余种食用菌中，适于瓶式栽培的品种可采用机械化操作的工厂化栽培模式，如金针菇、真姬菇、杏鲍菇等。有一些食用菌种类由于不能在现有的瓶式栽培技术条件下生产出具有市场竞争力的产品，因此只能采用传统的袋式栽培，如香菇、木耳等，这些食用菌种类在装袋、接种等环节无法实现自动化，极大地消耗了劳动力，在劳动力成本日益上涨的形势下，阻碍了产业的进一步发展。
香菇等食用菌不能完全实现工厂化生产的另一重要原因在于其出菇特性。首先，香菇不能象金针菇那样单潮集中出菇采收，一个生产周期通常出4-5潮菇，且出菇不集中。其次，传统香菇品种的出菇需要温差、湿差、光照及机械震动等多方面的刺激才能实现，这些措施往往是个性化的，很多情况下是靠经验，很难有统一的标准化、精准化的管理措施。
因此，要想实现香菇工厂化生产，必须采用具有特殊生物学特性的香菇品种。本发明提供一种可以实现香菇工厂化生产的香菇菌种及制备工艺。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2及其指纹图谱以及栽培方法，在二次压块培养的香菇生产模式下，可以解决香菇菌丝恢复缓慢、转色延迟、 抗杂菌能力弱、原基发生需要较大温差刺激的技术难题，使香菇工厂化生产经济可行，长期运行可降低成本，提高香菇生产效益。
本发明的一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2(Lentinula edodes沪F2)，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，单位地址：中国武汉市武昌珞珈山(武汉大学)，保藏编号为CCTCC M 2014355，保藏日期2014.7.23。
本发明的一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的指纹图谱，该指纹图谱由4对SSR标记的特异等位片段组合而成。源于香菇的SSR引物(扩增信息见表1和图1)对其基因组进行扩增时，分别产生0条、1条、2条和1条的DNA扩增条带，这样的DNA扩增条带组合使其区别于其他香菇菌种。图1中M是50bp DNA ladder；1：引物Le_fp0004扩增带型，菌株“沪F2”没有条带；2：引物Le_fp0008扩增带型，菌株“沪F2”具有该引物编号为1的条带；3：引物Le_fp0009扩增带型，菌株“沪F2”具有该引物编号为3和4的条带；4：引物Le_fp0007扩增带型，菌株“沪F2”具有该引物编号为1的条带；N：空白对照。
表1 SSR标记扩增信息表
所述4对SSR标记具体为：
Le_fp0004正向引物：CCCAAAAAGGATTTCAGCAA；
反向引物：AACCGGAGTGGTGTAAGTGC；
Le_fp0007正向引物：CATTGCTCGGATCCTTCATT；
反向引物：TACCTCGTGCGGACTTTGAT；
Le_fp0008正向引物：CTCTTTGCACCCTCAACCTC；
反向引物：CAGCAGTCTCCTCTTGGCTC；
Le_fp0009正向引物：AAGCAGGTCAGAGCAGGTTC；
反向引物：ACCGAGAGCAGAGTCGAGAG。
所述4对SSR标记等位片段的特异编号组合为：01(3+4)(1+2)。
本发明的一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的栽培方法，包括：
(1)初次培养：栽培瓶培养，培养30天以上，温度为23-26℃，相对湿度为60-70％，光照强度小于100lux；
(2)二次培养恢复期：压块成型培养，培养7-8天，温度为14-16℃，相对湿度大于90％， 光照强度小于200lux；
(3)二次培养转色期：温度逐渐提高到21℃，相对湿度大于85％，光照强度大于500lux，培养15-20天；
(4)二次培养催蕾期：温度逐渐降至17℃，湿度大于90％，光照强度大于500lux，培养5天。
所述步骤(4)中每天用清水喷淋使菌块表面保持湿润。
有益效果
本发明提供了适用于工厂化二次压块栽培的香菇菌种的指纹图谱，与目前通过国家品种审定的其他品种区分开；可以解决香菇菌丝恢复缓慢、转色延迟、抗杂菌能力弱、原基发生需要较大温差刺激的技术难题，使香菇工厂化生产经济可行，长期运行可降低成本，提高香菇生产效益。
附图说明
图1为香菇“沪F2”菌种SSR标记指纹图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
一、香菇菌种沪F2的SSR分子鉴定
1.菌丝培养：将香菇菌种转接到马铃薯葡萄糖培养基中，23℃～25℃下避光摇瓶培养，3d～4d后收集菌丝；
2.基因组DNA的提取：用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法提取上述菌丝的基因组DNA，紫外分光光度法检测总基因组DNA浓度和纯度，调整样品DNA的浓度一致； 
3.SSR分子标记的检测：对上述提取的DNA进行基因SSR标记的PCR扩增，PCR扩增体系：总体积20μL，包括：10×PCR buffer 2μL，25mmol/L MgCl22μL，10mmol/L dNTP 0.4μL，5U/μL Taq DNA酶0.2μL，10μmol/L SSR标记正向引物和反向引物总体积各1.5μL，浓度20ng～30ng/μL提取的模板DNA 2μL，ddH2O 10.4μL；
PCR反应条件：94℃5min；94℃30second，55℃30second，72℃30second，30个循环；72℃5min；
4.电泳检测，银染，显色，拍照，分析结果。
采用4对SSR引物对香菇菌株进行PCR扩增，通过对照50bp DNA ladder可确定各SSR 引物扩增的等位片段的数量和相对分子量，符合编号组合为：01(3+4)(1)的菌种，即可确定该菌种为香菇“沪F2”菌种。为保证鉴定的准确性，建议进行三次重复实验。
二、香菇菌种沪F2的二次培养工艺
1、将香菇菌种接种于栽培瓶后，初次培养至少32天以上，培养条件为：温度为23-26度，湿度为60-70％，光照强度小于100lux。
2、初次培养结束后，进行压块处理后，转入二次培养恢复及转色管理，其中二次培养恢复期：设置培养环境的条件温度不超过16度、湿度大于90％、光照强度小于200lux，培养7-8天，进入转色期后温度逐渐调高到不超过21度、湿度大于85％、光照强度大于500lux，继续培养15-20天。
3、催蕾：清水充分喷淋菌块表面后，温度逐渐调降至17度以下、湿度大于90％、光照强度大于500lux处理5天，大量菇蕾突破菌皮而出。
序列表
 

Claims (6)

1.一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2，其特征在于：保藏编号为CCTCC M 2014355。
2.一种如权利要求1所述的适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的指纹图谱，其特征在于：该指纹图谱由4对SSR标记的特异等位片段组合而成，4对SSR标记在沪F2菌种上扩增的等位片段信息具体为：
Le_fp0004的等位片段的数量为0；
Le_fp0008的等位片段的数量为1，等位片段1相对于50bp DNA ladder的分子量为1200bp；
Le_fp0009的等位片段的数量为2，等位片段3相对于50bp DNA ladder的分子量为730bp，等位片段4相对于50bp DNA ladder的分子量为670bp；
Le_fp0007的等位片段的数量为1，等位片段1相对于50bp DNA ladder的分子量为800bp。
3.根据权利要求2所述的一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的指纹图谱，其特征在于：所述4对SSR标记具体为：
Le_fp0004正向引物：CCCAAAAAGGATTTCAGCAA；
反向引物：AACCGGAGTGGTGTAAGTGC；
Le_fp0007正向引物：CATTGCTCGGATCCTTCATT；
反向引物：TACCTCGTGCGGACTTTGAT；
Le_fp0008正向引物：CTCTTTGCACCCTCAACCTC；
反向引物：CAGCAGTCTCCTCTTGGCTC；
Le_fp0009正向引物：AAGCAGGTCAGAGCAGGTTC；
反向引物：ACCGAGAGCAGAGTCGAGAG。
4.根据权利要求2所述的一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的指纹图谱，其特征在于：所述4对SSR标记等位片段的特异编号组合为：01(3+4)1。
5.一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的栽培方法，包括：
(1)初次培养：栽培瓶培养，培养30天以上，温度为23-26℃，相对湿度为60-70％，光照强度小于100lux；
(2)二次培养恢复期：压块成型培养，培养7-8天，温度为14-16℃，相对湿度大于90％，光照强度小于200lux；
(3)二次培养转色期：温度逐渐提高到21℃，相对湿度大于85％，光照强度大于500lux，培养15-20天；
(4)二次培养催蕾期：温度逐渐降至17℃，湿度大于90％，光照强度大于500lux，培养5天。
6.根据权利要求5所述的一种适于香菇工厂化栽培菌种沪F2的栽培方法，其特征在于：所述步骤(4)中每天用清水喷淋使菌块表面保持湿润。
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