CN104706594B

CN104706594B - 具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法

Info

Publication number: CN104706594B
Application number: CN201410722587.7A
Authority: CN
Inventors: 王成章; 陶冉
Original assignee: Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF
Current assignee: Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF
Priority date: 2014-12-03
Filing date: 2014-12-03
Publication date: 2020-08-11
Anticipated expiration: 2034-12-03
Also published as: CN104706594A

Abstract

本发明提供了具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法，本发明以聚戊烯醇为原料，将乳化剂和助乳化剂混合，然后添加聚戊烯醇组成油相，搅拌并添加去离子水，体系会出现短暂浑浊后变澄清，待体系稳定后，在加热条件下，边搅拌边继续加入大量去离子水转相，体系将由澄清变为浑浊，随后提高温度，高速搅拌若干时间，体系变为澄清即得到聚戊烯醇微乳液。本发明的优点是将脂溶性的聚戊烯醇油状物制备成水分散性良好的聚戊烯醇微乳液，该方法工艺简单，有效提高了聚戊烯醇在水中的分散性、物理性能以及抑菌生物活性，也拓展了脂溶性的聚戊烯醇在食品、保健品、化妆品以及生物医药相关行业的应用范围。

Description

具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法

技术领域

本发明涉及具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法，属于生物医药领域。

背景技术

聚戊烯醇（polyprenols，GBP）是以C₅异戊烯基为结构单元的类脂化合物，从结构上可分：桦木醇型ω-(trans)₂-(cis)_n-OH、菲卡醇型ω-(trans)₃-(cis)_n-OH和茄尼醇型ω-(trans)_n-OH，见图1。聚戊烯醇是生物体细胞膜中糖蛋白合成过程中的重要活性成分，参与生物体内多种代谢，生物活性十分广泛。

拉脱维亚医科院和“BIOLAT”公司按照苏联卫生部药物委员会“新药用物质临床前毒理试验要求”，结果表明，聚戊烯醇对人体安全无毒，无致突变，致畸及致癌作用。拉脱维亚利用针叶聚戊烯醇开发了“ROPREN”制剂,在免疫功能、护肝、多发性硬化症、抗肝炎病毒和爱滋病毒以及辅助化疗白血病等方面具有明显的药效。

聚戊烯醇是生物体细胞膜糖蛋白生物合成的关键产物，以游离态醇或磷酸酯形式分布于细胞膜中，并能够参与生物体内多种生理代谢活动，因此聚戊烯醇可作为良好的药物运输载体。利用聚戊烯醇作为良好的生物细胞膜载体将药物送入细胞内部参与代谢，可以较好的提高药物的生物利用度以及靶向性，从而达到减少药物使用量的目的。

聚戊烯醇分子量大，具有强疏水性，导致聚戊烯醇在人体和动物体内的生物利用度较低，更影响其生物活性研究以及相关制剂开发。因此，将聚戊烯醇通过化学或物理方法进行亲水改性，是解决聚戊烯醇制剂及其生物利用度问题的关键。对于聚戊烯醇化学改性通常是通过对聚戊烯醇末端羟基进行取代，通过引入亲水基团达到改性目标；对于聚戊烯醇物理改性可以采用制备聚戊烯醇微乳液来达到目的。本发明以桦木醇型聚戊烯醇ω-(trans)₂-(cis)_n-OH，其中n的范围为10～24为原料，来制备具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液。

发明内容

为实现上述目的，发明了具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法，本发明解决技术问题所采用的技术方案如下。

制作上述聚戊烯醇微乳液的方法，其工艺步骤是：

第一步：将乳化剂以及助乳化剂混合并搅拌均匀，并在加热条件下，边搅拌边缓慢加入聚戊烯醇若干，直至搅拌均匀，得到油相；

第二步：向第一步制得的油相中边搅拌边缓慢加入少量去离子水，体系会出现短暂浑浊后变澄清；

第三步：待体系稳定后，在加热条件下，边搅拌边继续加入大量去离子水转相，体系将由澄清变为浑浊，随后提高温度至A，搅拌速度X，搅拌时间T，体系变为澄清即可得到聚戊烯醇微乳液。

所述的乳化剂包括聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯、失水山梨醇单油酸酯、失水山梨醇单硬脂酸酯、失水山梨醇单棕榈酸酯等中的一种或其中两种的复配混合物。

所述的助乳化剂包括正丁醇、甘油或聚甘油酯中的至少一种。

所述的乳化剂和助乳化剂的混合物与聚戊烯醇的质量比为1～5：1。

所述的乳化剂与助乳化剂的质量比为3～8：1。

所述的第三步中温度A为40～75 ℃。

所述的第三步中搅拌速度X为5000～20000 r／min。

所述的第三步中搅拌时间T为5～30 min。

所述的聚戊烯醇来源于银杏叶、松针叶、桑叶中的一种，聚戊烯醇的结构为桦木醇型ω-(trans)₂-(cis) _n-OH，其中n的范围为10～24。

本发明还提供了所述的制备方法制得的具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液。

对上述方法制成的聚戊烯醇微乳液进行粒径分布以及显微分析，结果显示该方法制成的乳液平均粒径可达到100 nm以下，粒径分布变异系数达到0.4以下，如图2；显微显示粒径分布较为平均且排列有序，如图3。

对上述方法制成的聚戊烯醇微乳液按标准GB11543-89测定，离心稳定性、贮藏稳定性及分散性结果均为1级，即乳液展现出良好的均匀性。冻融稳定性测试显示，聚戊烯醇微乳液在经过多次循环冷冻后分散性仍能保持良好均匀性，达到1级。

对上述方法制成的聚戊烯醇微乳液进行与抗生素配伍的抑菌协同作用考察，结果显示，该乳液具有良好的协同抗生素抑菌作用，具体表现为：上述方法制成的聚戊烯醇微乳液分别与氨苄西林、氧氟沙星、庆大霉素硫酸盐、红霉素以及多粘菌素B硫酸盐联合使用时，除了与氨苄西林和多粘菌素B硫酸盐配伍对大肠杆菌无协同作用外，该乳液与氧氟沙星、庆大霉素硫酸盐和红霉素配伍对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的协同抑制作用，即单一抗生素抑菌圈由8.9～26.8 mm上升至与该乳液配伍后抑菌圈11.6～29.5mm，分级抑菌浓度指数最低达0.5。同时，与其它平均粒径较大的聚戊烯醇微乳液相比，本发明方法制得的聚戊烯醇微乳液具有更强的抑菌作用，因此本发明可以有效的提高聚戊烯醇自身的抑菌能力。

本发明的有益效果表现为：

1.本发明是利用微乳分散技术将脂溶性的聚戊烯醇油状物与一定比例的乳化剂、助乳化剂和水形成外观呈微黄澄清、热力学稳定的水分散体系，该乳液体系平均粒径可达到100 nm以下，粒径分布变异系数达到0.4以下，显微显示粒径分布较为平均且排列有序。该体系可无限加水稀释，既能满足科研相关生物活性实验要求，又能在流体、半流体以及水含量较高的相关食品、保健品、化妆品和药品中得到广泛应用。

2.本发明制成的聚戊烯醇微乳液展现出良好的离心稳定性、贮藏稳定性、分散性以及冻融稳定性，客服了聚戊烯醇因为疏水性强且分子量较大，难以在水相中平衡等问题，从而提高了聚戊烯醇在科研、食品和药品中的实际应用。

3.本发明避免了长时间搅拌、高温或高压均质等耗能高的方法，既能保持聚戊烯醇的生物活性，又能节约能源，在实际应用以及相关功能产品开发均有良好前景。

4.与其它平均粒径较大的聚戊烯醇微乳液相比，本发明制成的聚戊烯醇微乳液具有更强的抑菌作用，本发明可以有效的提高聚戊烯醇自身的协同抑菌能力。

附图说明：

图1三种类型的聚戊烯醇的化学结构

图2聚戊烯醇微乳液粒径分布图

图3聚戊烯醇微乳液粒显微图（400倍）

图4 各因素交互作用对聚戊烯醇微乳液平均粒径的影响

具体实施方式

以下实施例为本发明的一些举例，不应被看做是对本发明的限定。

实施例1 乳化剂HLB值的单因素考察

乳化剂HLB值定义式为：HLB_混合=HLB_a*W_a/（W_a+W_b）+HLB_b*W_b/（W_a+W_b），式中，W_a代表Span-80的质量分数，HLB_a代表Span-80的HLB值，W_b代表Tween-80的质量分数，HLB_b代表Tween-80的HLB值。

乳化条件：聚戊烯醇10 g，乳化剂20 g，搅拌速度10000 r／min，乳化温度60 ℃，搅拌时间10 min，考察复配型乳化剂的HLB值（8～12）对乳液粒径大小的影响。乳化完毕后各自取出15 ml乳液，冷却至室温，放入离心机中以8000 r／min离心分离20min，观察分层情况。

表1 不同HLB值乳化剂制备聚戊烯醇微乳液分层情况

HLB值	离心后状态
		8	明显分层
8.5	略有分层
		9	略有分层
9.5	无分层
		10	无分层
10.5	无分层
		11	无分层
11.5	略有分层
		12	明显分层

如表1所示，当乳化剂HLB值在8.5～11.5范围时，所得聚戊烯醇微乳液相对稳定。将乳化剂HLB值在8.5～11.5范围的乳液进行粒径分析，结果如表2。

表2 乳化剂HLB值的选择

HLB值	平均粒径(nm)
		8.5	389
9	332
		9.5	296
10	439
		10.5	855
11	1001
		11.5	988

结果显示，HLB值在9.5时乳液的平均粒径最小，从而确定HLB值9.5为最佳值。此时Span-80的质量分数为0.514；Tween-80的质量分数为0.486。

实施例2 乳化剂与聚戊烯醇比例的单因素考察

乳化条件：聚戊烯醇10 g，搅拌速度10000 r／min，乳化温度60 ℃，搅拌时间10min，考察复配型乳化剂与聚戊烯醇的比例[m(乳化剂):m(聚戊烯醇)=(1～2):1]对乳液粒径大小的影响。将所得乳液进行粒径分析，结果如表3。

表3 乳化剂与聚戊烯醇比例的选择

乳化剂与聚戊烯醇的比例	平均粒径(nm)
		1:1	4202
1.25:1	2121
		1.5:1	921
1.75:1	283
		2:1	625

结果显示，乳化剂与聚戊烯醇比例在1.75:1时乳液的平均粒径最小，从而确定乳化剂与聚戊烯醇比例1.75:1为最佳值。

实施例3 搅拌速度的单因素考察

乳化条件：聚戊烯醇10 g，乳化剂20 g，乳化温度60 ℃，搅拌时间10 min，考察搅拌速度对乳液粒径大小的影响。将所得乳液进行粒径分析，结果如表4。

表4 搅拌速度的选择

搅拌速度r／min	平均粒径(nm)
		5000	1360
10000	354
		15000	124
20000	119

结果显示，搅拌速度在15000 r／min和20000 r／min时乳液的平均粒径较为接近，考虑到实际操作的经济性，确定搅拌速度15000 r／min时为最佳值。

实施例4 乳化温度的单因素考察

乳化条件：聚戊烯醇10 g，乳化剂20 g，搅拌速度10000 r／min，搅拌时间10 min，考察乳化温度对乳液粒径大小的影响。将所得乳液进行粒径分析，结果如表5。

表5 乳化温度的选择

温度	平均粒径(nm)
		30	2140
45	398
		60	135
75	147
		90	479

结果显示，乳化温度在60 ℃时乳液的平均粒径最小，确定乳化温度60 ℃时为最佳值。

实施例5 搅拌时间的单因素考察

乳化条件：聚戊烯醇10 g，转速10000 r／min，乳化温度60℃，考察搅拌时间对乳液粒径大小的影响。将所得乳液进行粒径分析，结果如表6。

表6 搅拌时间的选择

时间	平均粒径(nm)
		5	402
10	241
		15	127
20	147
		25	203
30	297

结果显示，搅拌时间在15min时乳液的平均粒径最小，确定搅拌时间15min时为最佳值。

实施例6 响应面分析优化试验

选取搅拌时间（X ₁）、乳化温度（X ₂）和搅拌速度/r·min^-1（X ₃）3个因素，以平均粒径（Y）作为响应值。运用Design Expert 7.0 中Box-Behnken法进行3因素3水平的响应面分析，结果如表7所示，方差分析见表8。

表7 Box-Behnken法响应面优化方案及结果

试验号	<i>X</i><sub>1</sub>时间/min	<i>X</i><sub>2</sub>温度/℃	<i>X</i><sub>3</sub>转速（r/min）	<i>Y</i>平均粒径/nm
					1	0	0	0	118
2	0	0	0	116
					3	0	0	0	119
4	1	-1	0	125
					5	-1	0	-1	348
6	1	0	1	100
					7	0	-1	1	136
8	0	0	0	122
					9	0	1	-1	312
10	0	0	0	118
					11	0	1	1	105
12	-1	0	1	145
					13	1	0	-1	238
14	1	1	0	126
					15	0	-1	-1	246
16	-1	1	0	162
					17	-1	-1	0	159

从表8可以看出，在一次项中，搅拌速度（X ₃）对聚戊烯醇微乳液的平均粒径影响达到极显著水平（P<0.001），在二次项中乳化时间（X ₁）和搅拌速度（X ₃）对乳液平均粒径影响均为显著，其中搅拌速度（X ₃）的影响达到极显著水平（P<0.001）；交互项中，乳化温度（X ₂）和搅拌速度（X ₃）对乳液平均粒径的影响较为显著（P<0.01）。综上所述，各因素对聚戊烯醇微乳液平均粒径的影响复杂，受多方面的影响，并非简单的线性关系。各项因素对聚戊烯醇微乳液的影响经回归拟合后得到二次多项回归模型为：Y=118.6-28.12X ₁+4.88X ₂-82.25X ₃-0.50X ₁ X ₂+16.25X ₁ X ₃-24.25X ₂ X ₃+16.20X ₁ ²+8.20X ₂ ²+72.95X ₃ ²。该模型P＜0.001，表明方程达到极显著，模型能够用于真实实验数据的预测；根据回归模型方程3个因素前的拟合系数绝对值大小82.25>28.12>4.88可知，3个考察因素对聚戊烯醇微乳液平均粒径的影响大小依次为搅拌速度（X ₃）＞搅拌时间（X ₁）＞乳化温度（X ₂）。

表 8 回归模型的方差分析

方差来源	平方和	自由度	均方	<i>F</i>值	<i>P</i>值
						模型	88883.67	9	9875.96	62.03	<0.0001
<i>X</i><sub>1</sub>	6328.13	1	6328.13	39.75	0.0004
						<i>X</i><sub>2</sub>	190.13	1	190.13	1.19	0.3107
<i>X</i><sub>3</sub>	54120.50	1	54120.50	339.94	<0.0001
						<i>X</i><sub>1</sub><i>X</i><sub>2</sub>	1.00	1	1.00	0.006	0.9390
<i>X</i><sub>1</sub><i>X</i><sub>3</sub>	1056.25	1	1056.25	6.63	0.0367
						<i>X</i><sub>2</sub><i>X</i><sub>3</sub>	2352.25	1	2352.25	14.77	0.0063
<i>X</i><sub>1</sub><sup>2</sup>	1105.01	1	1105.01	6.94	0.0337
						<i>X</i><sub>2</sub><sup>2</sup>	283.12	1	283.12	1.78	0.2241
<i>X</i><sub>3</sub><sup>2</sup>	22407.17	1	22407.17	140.74	<0.001
						残差	1114.45	7	159.21
失拟项	1095.25	3	365.08	76.06	0.0006
						纯误差	19.20	4	4.80
所有项	89998.12	16

由图4可见，在3个交互项中，交互项X ₂ X ₃存在较为显著的交互作用，表现为响应曲面的等高线图呈椭圆状，这说明乳化温度（X ₂）与搅拌速度（X ₃）这两个因素存在相互影响，即当选用较高的乳化温度时相应的搅拌速度可以降低；反之，当乳化温度比较低时，乳液平均粒径受到搅拌速度不足的制约，可以相应提高搅拌速度以达到乳化目的。交互项X ₁ X ₃的等高线形状也趋向于椭圆状，但交互作用较X ₂ X ₃小；交互项X ₁ X ₂的等高线形状偏向于圆形，表明搅拌时间（X ₁）与乳化温度（X ₂）这两项的交互作用并不显著，说明这两者相互作用对聚戊烯醇微乳液平均粒径的影响较小。上述分析与模型回归的方差分析基本一致。

通过上述回归模型分析并计算得到聚戊烯醇微乳液制备的最佳工艺条件为：搅拌时间12.210 min，温度59.910 ℃，转速16679.850r/min。考虑到实际实验和生产的可操作性，将以上最优参数分别调整为搅拌时间12 min，温度60℃，转速17000r/min。并据此进行结果验证，平行测定3次所获聚戊烯醇微乳液的平均粒径为97nm，与模型预测值（92nm）的RSD为2.7%＜5%，说明经该模型推测得到的最佳工艺参数对实际操作的预测较为可靠，有一定指导意义。

实施例7 聚戊烯醇微乳液的制备方法及物理性能

具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法，由以下步骤组成：

第一步：将总量为15 g Tween-80和Span-80的乳化剂，Tween-80和Span-80的质量比为1：1，与3 g聚甘油酯充分混合，并在40 ℃下，边搅拌边缓慢加入聚戊烯醇10 g(约8.3mmol)于250 mL锥形瓶中，直至搅拌均匀，得到油相；

第二步：向第一步制得的油相中边搅拌边缓慢加入5 g去离子水，体系会出现短暂浑浊后变澄清；

第三步：待体系稳定后，在40 ℃下，边搅拌边继续加入大量去离子水转相，体系将由澄清变为浑浊，随后提高温度至60 ℃，搅拌速度17000 r／min，搅拌时间12 min，体系变为澄清即可得到聚戊烯醇微乳液。

对上述方法制成的聚戊烯醇微乳液进行粒径分布以及显微分析，结果显示该方法制成的乳液平均粒径可达到97 nm，粒径分布变异系数达到0.383，如图1；显微显示粒径分布较为平均且排列有序，如图2。

对上述方法制成的聚戊烯醇微乳液进行离心稳定性、贮藏稳定性及分散性按标准GB11543-89测定，结果均为1级，即乳液展现出良好的均匀性。冻融稳定性测试显示，聚戊烯醇微乳液在经过多次循环冷冻后分散性仍能保持良好均匀性，达到1级。

实施例8 聚戊烯醇微乳液的抑菌活性考察方法

1.实验菌种、原料

1.1 供试菌种

大肠杆菌NCTC 12923和金黄色葡萄球菌ATCC 25923

1.2 待测样品

实施例1中所制得的聚戊烯醇微乳液以及氨苄西林、氧氟沙星、庆大霉素硫酸盐、红霉素和多粘菌素B硫酸盐等抗生素样品

2 实验方法

2.1 滤纸片法测定样品的抑菌活性

（1）培养基的配制

热溶解，冷却后，调节pH至 7.0～7.2，此为液体培养基，在其中添加2.0 g琼脂粉，此为固体培养基，121 ℃灭菌20 min。

（2）液体培养基接种与活化菌种

打开净化工作台的紫外灭菌灯，杀菌半小时后，打开净化台的操作开关，用灭菌后的接种环取一环菌种溶入液体培养基中，轻轻摩擦锥形瓶壁，让菌落与接种环上分离，取出接种环，封好锥形瓶，轻轻振荡培养基，使菌种分散均匀，放于生化培养箱中，37 ℃下活化24 h。

（3）实验所需仪器的灭菌

倒平板所用培养皿和装有6 mm滤纸片的培养皿用牛皮纸包好，塞好胶塞的试管、装有移液枪头的盒子分别用牛皮纸包好，将配制好的生理盐水、固体培养基分别用纱布和牛皮纸封好。将其在121 ℃，100 Pa下高压灭菌20 min。

（4）调节菌落浓度

将溶化的固体培养基倒入20 mL左右于培养皿中，置于净化操作台上，自流平冷却。

取7支试管，依次稀释活化好的菌悬液，1号试管为原液经生理盐水稀释10倍后的菌悬液，2号试管为稀释100倍的菌悬液，依次稀释后，第七号试管为稀释10⁷倍的菌悬液。

移取100 µL 1～7号试管中的菌悬液涂布固体培养基，静置使其渗透于培养基中，后倒置培养皿，于生化培养箱中37 ℃培养24 h。

根据菌落计算法则：菌落形成单位cfu×稀释倍数=菌落数，计数可数菌落平皿，推算每皿菌落数，选择菌落涂布浓度为10⁵cfu/mL。

（5）测试样品的配制

分别配制500μg/mL聚戊烯醇微乳液，10 μg/mL 氨苄西林，10 μg/mL 氧氟沙星，10μg/mL 庆大霉素硫酸盐，15 μg/mL 红霉素和10 μg/mL 多粘菌素B硫酸盐。

（6）牛津杯法测定供试样品的抑菌活性

在培养基表面直接垂直放上牛津杯（内径6 mm），轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，在杯中加入待检样品。37 ℃下生化培养24 h，测量样品对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径。

2.2 样品MIC（最小抑菌浓度）值的测定以及FIC（分级抑菌浓度）指数的计算

（1）按上法配制培养基、液体培养基接种与活化菌种，调节菌落浓度和配制测试样品，将样品配置成不同浓度256, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5 μg/mL的溶液。

（2）各样品的MIC和MFC值的测定

将混合了样品的培养基倒平皿，自流平冷却凝固，以沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉菌为检测菌种，涂布平板，放置一段时间待菌悬液渗入，37 ℃下倒置生化培养24 h。观察无菌生长的最低浓度平皿，记为此浓度为样品对于该菌种的MIC值。

（3）FIC指数的计算：FIC指数=MIC甲药联用/MIC甲药单用+MIC乙药联用/MIC乙药单用

2.3 抑菌实验结果

表9抑菌圈值比较（抑菌圈值 (mm) ± 标准误, n=3）

Figure DEST_PATH_640796DEST_PATH_IMAGE010

GBP表示聚戊烯醇微乳液，GBP-1组表示本发明方法制备的聚戊烯醇微乳液，GBP-2，3和4组表示其它方法制备的聚戊烯醇微乳液，其中GBP-1，2，3和4组粒径分布依次为97nm，289 nm，632 nm和11012 nm；A，C，G，E和P分别表示氨苄西林，氧氟沙星，庆大霉素硫酸盐，红霉素和多粘菌素B硫酸盐；^*表示与对应单抗生素组抑菌圈值相比大于且有统计学差异(Tukey 检验, p﹤0.05)，在同一组竖栏中相同小写字母表示没有统计学差异 (Tukey 检验, p＞0.05)。

由表9结果显示，除了与氨苄西林和多粘菌素B硫酸盐配伍对大肠杆菌无协同作用外，该乳液与氧氟沙星、庆大霉素硫酸盐和红霉素配伍对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的协同抑制作用，即单一抗生素抑菌圈由8.9～26.8 mm上升至与该乳液配伍后抑菌圈11.6～29.5mm。同时，与其它平均粒径较大的聚戊烯醇微乳液相比，本发明方法制得的聚戊烯醇微乳液具有更强的抑菌作用，即抑菌圈随着乳液粒径增大而减小，因此本发明可以有效的提高聚戊烯醇自身的抑菌能力。

表10 FIC指数确定联合用药效应（FIC指数）

Figure DEST_PATH_112229DEST_PATH_IMAGE011

GBP表示聚戊烯醇微乳液，GBP-1组表示本发明方法制备的聚戊烯醇微乳液；A，C，G，E和P分别表示氨苄西林，氧氟沙星，庆大霉素硫酸盐，红霉素和多粘菌素B硫酸盐；^*协同作用(0＜FIC指数≤0.5); ^△部分协同作用(0.5＜FIC指数≤1)和^▲无关作用(1＜FIC指数≤4)。

由表10结果显示，除了与氨苄西林和多粘菌素B硫酸盐配伍对大肠杆菌无协同作用外，其它配伍对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的协同抑制作用；其中庆大霉素硫酸盐与本发明方法制备的聚戊烯醇微乳液协同抑制金黄色葡萄球菌作用最强，FIC指数达到0.5。

Claims

1.具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：

第三步：待体系稳定后，在加热条件下，边搅拌边继续加入大量去离子水转相，体系将由澄清变为浑浊，随后提高温度至 45~75℃，搅拌速度 15000~20000 r/min，搅拌时间 12~15min，体系变为澄清即可得到聚戊烯醇微乳液；

乳化剂为 Tween-80和span-80，质量比为 1：1；

所述乳化剂和助乳化剂的质量比为 3~8：1；所述乳化剂与聚戊烯醇的质量比为1.5~2:1；所述乳化剂和助乳化剂的混合物与聚戊烯醇的质量比为1~5:1；

所述助乳化剂为聚甘油酯。

2.根据权利要求 1 所述的具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液的制备方法，其特征在于聚戊烯醇来源于银杏叶、松针叶、桑叶中的一种，聚戊烯醇的结构为桦木醇型ω-(trans)2-(cis) n-OH，其中 n 的范围为 10~ 24。

3.权利要求 1 或2 所述的制备方法制得的具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液。

4.根据权利要求 3 所述的具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液，其特征在于：所述的乳液平均粒径达到 100 nm 以下，粒径分布变异系数达到 0.4 以下，显微显示粒径分布较为平均且排列有序；按标准 GB11543-89 测定，离心稳定性、贮藏稳定性及分散性结果均为 1级，即乳液展现出良好的均匀性；冻融稳定性测试显示，聚戊烯醇微乳液在经过多次循环冷冻后分散性仍能保持良好均匀性，达到 1 级。

5.权利要求 3 所述具有抑菌活性的聚戊烯醇微乳液，其特征在于该乳液分别与氨苄西林、氧氟沙星、庆大霉素硫酸盐、红霉素以及多粘菌素 B 硫酸盐联合使用时，除了与氨苄西林和多粘菌素 B 硫酸盐配伍对大肠杆菌无协同作用外，该乳液与氧氟沙星、庆大霉素硫酸盐和红霉素配伍对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的协同抑制作用，分级抑菌浓度指数最低达 0.5，与其它平均粒径较大的聚戊烯醇微乳液相比，该乳液具有更强的抑菌作用。