CN104693433B - 一种聚乙二醇化氨磷汀、制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种聚乙二醇化氨磷汀、制备方法及其用途。该聚合物为小分子药物氨磷汀与聚乙二醇(PEG)通过共价键连接的结构，其中氨磷汀上的氨基通过酰胺键与聚乙二醇衍生物长链共价连接。本发明还提供了一种聚乙二醇化氨磷汀的制备方法。本发明还包括所述聚乙二醇化氨磷汀在细胞水平具有增强性的抗氧化作用。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体地，本发明涉及一种聚乙二醇化氨磷汀及其制备方法，本发明还涉及该聚乙二醇化氨磷汀在制备治疗抗氧化损伤方面的药物中的用途。
背景技术
氨磷汀(式I)为一种小分子前体药物。在癌症治疗中，氨磷汀进入体内后，其一端的硫代磷酸根结构能够被正常组织内的碱性磷酸酶去磷酸化而生成带有自由巯基的活性代谢产物，该结构能够清除由放疗及化疗引起的氧化自由基(ROS)成分，有效的抵抗ROS对组织的氧化损伤。肿瘤组织内碱性磷酸酶的分布和pH均较正常组织偏低，导致碱性磷酸酶的活性低于正常组织，因此氨磷汀具有对正常组织细胞的选择性保护功能。
但是，由于小分子氨磷汀药物的药效为剂量依赖型，静脉注射时用药量存在体内饱和浓度(740mg/m2)，同时高浓度用药剂量会引起严重不可逆的副作用，主要如一过性低血压、眩晕和呕吐等。因此，在氨磷汀给药的同时必须严格监控血压变化。
近年来PEG化小分子药物的开发研究受到了广泛的关注。PEG化小分子药物具有很多优势，主要在于：有效延长小分子药物体内循环时间，降低血液清除速率，改善小分子药物的药代动力学性质，增加小分子药物亲水性及生物相容性。
但是，已有技术还未有将PEG用于氨磷汀的研究。
发明内容
基于此，为了克服现有氨磷汀静脉注射代谢快、稳定性差、作用时间短以及副作用大的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种具有长效保护时间、高稳定性以及低副作用的PEG化氨磷汀静脉注射剂型。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种聚乙二醇化氨磷汀，其中，氨磷汀中的氨基通过共价键与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物连接。
在本发明中，所述氨磷汀，又名阿米福汀或WR2721，其为人工合成的化学药品。
优选地，所述聚乙二醇衍生物和氨磷汀的摩尔比为1:1～40，该摩尔比选择在于使PEG反应完全，又不浪费过多的氨磷汀原料。
优选地，所述聚乙二醇衍生物的分子量为0.5～40KDa，优选分子量为2～20KDa。
优选地，所述聚乙二醇衍生物可为直链、支链或多臂的聚乙二醇衍生物中的任意一种或者至少两种的混合物，所述多臂指至少为两臂。
优选地，所述聚乙二醇衍生物末端具有的功能基团能够在水相中与氨磷汀末端氨基发生化学反应。由于氨磷汀极易溶于水，所以反应能够在水相中具有极高反应效率。
在本发明中，聚乙二醇衍生物中的末端功能基团可与氨磷汀的末端氨基发生化学反应，形成共价连接。该末端功能基团可以是任意的可与氨磷汀中的氨基(-NH2)发生化学反应形成共价链接的任意基团，优选所述聚乙二醇衍生物具有N-琥珀酰亚胺酯末端结构，其可与氨磷汀发生反应，形成酰胺基团。即，氨基优选通过酰胺键与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物连接，聚乙二醇衍生物末端与氨磷汀连接的基团为羰基，此时，所述聚乙二醇化氨磷汀具有如下结构：
优选地，所述聚乙二醇衍生物包括但不限于具有如下结构中的任意一种或者至少两种的混合物，优选自具有如下结构中的任意一种化合物：
CH3O-(CH2CH2O)a1(CH2)b1-M或M-CH2-O-(CH2CH2O)a2-CH2-M或C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4，优选为C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4，
其中，M为具有该M结构的聚乙二醇衍生物与氨磷汀接触，发生水解，羰基与O原子之间的键水解，PEG末端带有活化了的羰基，与氨磷汀末端氨基发生化学反应，进而实现PEG和氨磷汀以酰胺键的形式连接。具有该M结构的优势在于，其与氨基能够在水相中反应，反应的最适pH为偏碱性，有利于氨磷汀自身的稳定性保持，且合成容易。
a1为6-900之间的整数，优选40-450；a2为4-900之间的整数，优选40-450；a3为6-250之间的整数，优选7-200；b1为0-4之间的整数，优选1-3。
优选地，所述聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯，其和氨磷汀的摩尔比为1:4～40，该摩尔比选择在于使PEG反应完全，又不浪费过多的氨磷汀原料。
优选地，所述聚乙二醇衍生物为分子量2～20KDa、具有多臂结构且具有N-琥珀酰亚胺酯末端结构的聚乙二醇衍生物，优选为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯。连接PEG可以延长小分子药物的体内代谢，选择多臂结构可以增加PEG上小分子药物的载药量，PEG分子量控制在优选范围可尽量使上述两点平衡。
本发明的目的之二在于提供一种如上所述的聚乙二醇化氨磷汀的制备方法，所述方法包括将氨磷汀与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物在缓冲溶液中接触，并发生化学反应，得到含有聚乙二醇化氨磷汀的物料。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，使用的术语“溶液”的范围并不限于分散质的粒子直径小于1nm的分散系(真溶液)，而是泛指均一的液态混合物，可以包括胶状分散体(胶体溶液)。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，液体的体积数值均为标准状态下的数值。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，对聚乙二醇衍生物的合成方法没有特别的限定，可以为本领域内常规的聚乙二醇衍生物的合成方法，也可为购买的商业化产品。
优选地，所述聚乙二醇衍生物和氨磷汀的摩尔比为1:1～40，该摩尔比选择在于使PEG反应完全，又不浪费过多的氨磷汀原料。
优选地，所述聚乙二醇衍生物的分子量为0.5～40KDa，优选分子量为2～20KDa。
优选地，所述聚乙二醇衍生物可为直链、支链或多臂的聚乙二醇衍生物中的任意一种或者至少两种的混合物，所述多臂指至少为两臂。
优选地，所述聚乙二醇衍生物末端具有的功能基团能够在水相中与氨磷汀末端氨基发生化学反应。由于氨磷汀极易溶于水，所以反应能够在水相中具有极高反应效率。
在本发明中，聚乙二醇衍生物中的末端功能基团可与氨磷汀的末端氨基发生化学反应，形成共价连接。该末端功能基团可以是任意的可与氨磷汀中的氨基-NH2发生化学反应形成共价链接的任意基团，优选所述聚乙二醇衍生物具有N-琥珀酰亚胺酯末端结构，其可与氨磷汀发生反应，形成酰胺基团。即，氨基优选通过酰胺键与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物连接，聚乙二醇衍生物末端与氨磷汀连接的基团为羰基，此时，所述聚乙二醇化氨磷汀具有如下结构：
优选地，所述聚乙二醇衍生物包括但不限于具有如下结构中的任意一种或者至少两种的混合物，优选自具有如下结构中的任意一种化合物：
CH3O-(CH2CH2O)a1(CH2)b1-M或M-CH2-O-(CH2CH2O)a2-CH2-M或C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4，优选为C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4，
其中，M为具有该M结构的聚乙二醇衍生物与氨磷汀接触，发生水解，羰基与O原子之间的键断裂，PEG末端带有活化了的羰基，与氨磷汀末端氨基发生化学反应，进而实现PEG和氨磷汀以酰胺键的形式连接。具有该M结构的优势在于，其与氨基能够在水相中反应，反应的最合适条件为偏碱性，有利于氨磷汀自身的稳定性保持，且合成容易。
a1为6-900之间的整数，优选40-450；a2为4-900之间的整数，优选40-450；a3为6-250之间的整数，优选7-200；b1为1-4之间的整数，优选2-3。
优选地，所述聚乙二醇衍生物为分子量2～20KDa、具有多臂结构且具有NHS酯末端结构的聚乙二醇衍生物，优选为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯。连接PEG可以延长小分子药物的体内代谢，选择多臂结构可以增加PEG上小分子药物的载药量，PEG分子量控制在优选范围可尽量使上述两点平衡。
根据本发明提供的聚乙二醇化氨磷汀的制备方法，相对每物质的量份的聚乙二醇衍生物，氨磷汀的用量为1～40物质的量份，例如2物质的量份、5物质的量份、10物质的量份、15物质的量份、20物质的量份、25物质的量份、30物质的量份或35物质的量份，优选情况下，相对每物质的量份的聚乙二醇衍生物，氨磷汀的用量为1.5～20物质的量份。
优选地，所述聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯，相对每物质的量份的聚乙二醇衍生物，氨磷汀的用量为4～40物质的量份。
在本发明中，在未作相反说明的情况下，所述的接触或混合可以在搅拌的条件下进行。搅拌的速度可以为常规的选择。本发明的发明点在于聚乙二醇衍生物以及由此聚乙二醇衍生物与氨磷汀接触，并发生化学反应所获得的聚乙二醇化氨磷汀及其制备方法。在本发明中，对聚乙二醇衍生物与氨磷汀的接触方式没有特别的限定，只要能够使得氨磷汀与聚乙二醇衍生物接触反应即可。本领域的技术人员可以采用本领域内常规使用的手段进行接触，使发生化学反应，只要能够获得本发明所述的聚乙二醇化氨磷汀即可，优选地，所述接触的条件包括pH值为6～10，例如6.5、7、7.5、8、8.5、9或9.5，温度为0～60℃，例如5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃或55℃，时间为0.5～48小时，例如5小时、10小时、15小时、20小时、25小时、30小时、35小时、40小时或45小时。优选情况下，所述接触条件包括：选择四臂的聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯，氨磷汀与四臂的聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯的物质的量比为4～40，pH值为6～10，温度为0～60℃，时间为0.5-48小时。优选情况下，所述接触的条件包括：氨磷汀与四臂的聚乙二醇乙酸琥珀酰亚胺酯的物质的量比为5～20，pH值为7～8，温度为0～37℃，时间为2～24小时。
优选地，化学反应过程中，在缓冲溶液中，聚乙二醇衍生物的浓度为10～100克/升，氨磷汀溶液浓度为1～50克/升。
在本发明中，所述缓冲溶液中的溶剂没有特别的限定，只要所述溶剂具有一定缓冲能力并能够溶解聚乙二醇及氨磷汀即可，例如可以为磷酸盐缓冲液或/和硼酸缓冲液，优选为磷酸盐缓冲液。
所述方法还包括对反应后得到的物料进行分离纯化的步骤，具体包括透析或有机溶剂重结晶，可得到高纯度的聚乙二醇化氨磷汀。
将反应的混合液通过透析方式分离纯化，或通过有机溶剂重结晶的方式分离纯化，具体优选为分子量为0.5-10kDa(低分子量范围)的聚乙二醇化氨磷汀经透析方式分离纯化，分子量为10-40kDa(高分子量范围)的聚乙二醇化氨磷汀通过有机溶剂重结晶的方式分离纯化。
根据本发明的一种优选实施方式，所述聚乙二醇化氨磷汀的制备方法包括将氨磷汀化合物与低分子量范围内的聚乙二醇衍生物在缓冲溶液中接触并发生化学反应，将得到的混合物料用透析袋进行透析，没有反应的氨磷汀在此过程中被清除，由此得到聚乙二醇化氨磷汀。透析袋例如可以使用截留分子量为1kDa的透析袋。所述透析优选在偏碱性三蒸水(pH值为7-8，NaOH溶液微调)中进行，进一步优选每3-5h换一次三蒸水，透析进行20-30h。
本发明的目的之三在于提供一种如上所述的聚乙二醇化氨磷汀在制备治疗抗氧化损伤方面的药物中的用途。
根据本发明，所述聚乙二醇氨磷汀可制成适用于哺乳动物用的各种剂型，包括但不限于混悬剂、溶液剂或乳剂等注射剂形式，例如用甘露醇作赋形剂制成的注射剂。根据本发明，本发明的聚乙二醇化氨磷汀可以以标准方式施用，例如肠胃外施用包括但不限于静脉内的、动脉内的、腹膜内的、皮下的、肌肉内的施用或连续输注。
与已有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明利用氨磷汀分子另一端的伯胺结构与具有末端功能基团的PEG(聚乙二醇)进行共价连接，形成的PEG化氨磷汀分子具有很多优势，主要在于：有效延长氨磷汀体内半衰期，增加氨磷汀生物相容性，增加安全性并降低副作用。此外，聚合物的链状结构能够有效增加小分子药物周围生理环境的空间位阻，降低非接触性的药物代谢损失，增加小分子药物稳定性，减少药物用量，提高药效。
附图说明
图1表示通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)观察氨磷汀与测试实施例3中聚乙二醇(5kDa)化氨磷汀的质谱分析图。
图2中的(a)和(b)分别表示测试氨磷汀与实施例3中聚乙二醇(5kDa)化氨磷汀体外作用于正常细胞后的细胞活力分析图。
图3表示测试实施例3中聚乙二醇(5kDa)化氨磷汀体外在正常细胞ROS增强时对其保护作用的流式结果分析柱状图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。
以下通过实施例进一步详细说明本发明。其中，在没有特别说明的情况下，所用的试剂均为市售品。实施例采用平均分子量为0.5KDa，5kDa和40kDa的聚乙二醇衍生物
为北京健凯公司产品，三水合氨磷汀由大连市美罗公司提供。
下述实施例代表本发明的说明性实施方案，但本发明不受这些实施例的限制。
实施例1：
本实施例用于直链单官能团聚乙二醇(0.5kDa)化氨磷汀的合成
直链单官能团聚乙二醇乙酸琥珀酰亚胺酯(0.5kDa)(100mg，≈200μmol)和三水合氨磷汀(43mg，≈200μmol)置于50ml圆底烧瓶中，加入10ml pH＝6.0磷酸盐缓冲液，0℃反应48h。反应后的混合溶液通过截留分子量为300Da的透析袋在三蒸水(pH值为7-8)中透析，透析过程在4℃层析柜中进行，毎4h换一次三蒸水，没有与聚乙二醇衍生物连接的氨磷汀在此过程中被清除。透析后的产物经过低温冷冻干燥36h，获得粉末状干燥原料药，产率约40％。
实施例2
本实施例用于四臂多官能团聚乙二醇(40kDa)化氨磷汀合成及纯化。
四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯(40kDa)(200mg，≈5μmol)和三水合氨磷汀(43mg，≈200μmol)置于10ml反应瓶中加入2ml pH＝10磷酸盐缓冲液，60℃反应0.5h。合成反应完成后，反应后的混合溶液经过低温冷冻干燥36h，获得粉末状干燥产物。将分子量约为40kDa的聚乙二醇化氨磷汀重新溶解于40ml二氯甲烷中，震荡溶解后，12000rpm离心10min，取上清重复离心步骤4次，后将其加入到360ml的无水乙醚中进行重结晶，10000rpm离心10min，将沉淀产物用无水乙醚洗3次，放置与常温真空干燥箱中进行干燥，获得最终产物，产率约60％。
实施例3
本实施例用于合成四臂多官能团聚乙二醇(5kDa)化氨磷汀的合成。
四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯(5kDa)(500mg，≈95μmol)和三水合氨磷汀(125mg，480μmol)置于50ml圆底烧瓶中，加入10ml pH＝7.4磷酸盐缓冲液，室温反应2h。反应后的混合溶液通过截留分子量为1kDa的透析袋在三蒸水(pH值为7-8)中透析，透析过程在4℃层析柜中进行，毎4h换一次三蒸水，没有与聚乙二醇衍生物连接的氨磷汀在此过程中被清除。透析后的产物经过低温冷冻干燥36h，获得粉末状干燥原料药。与实施例1和2相比，连接在聚乙二醇衍生物上的氨磷汀结构稳定，产品纯度高(不掺杂氨磷汀末端硫代磷酸根自发水解产生的氨磷汀代谢产物)，产率超过80％。
测试例1
通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF，美国布鲁克道尔顿，Microflex LRF)检测实施例3得到的四臂聚乙二醇(5KDa)化氨磷汀的相对分子量，实施例3得到的四臂聚乙二醇(5KDa)化氨磷汀与四臂聚乙二醇衍生物的相对分子量分布如图1所示。根据分子量的计算，四臂聚乙二醇衍生物每与一个氨磷汀反应，分子量增加99，MALDITOF结果显示四臂聚乙二醇衍生物与聚乙二醇化氨磷汀的峰值相差282.55，可确定平均每个四臂聚乙二醇衍生物约连接2.85个氨磷汀分子。
测试例2
本测试例用于测定聚乙二醇化氨磷汀体外模拟碱性磷酸酶水解过程。
反应体系共150μl，其中，2μl大肠杆菌来源的碱性磷酸酶(Takara,codeNo.2120A)，43μl实施例3中浓度为10mg/ml的所得四臂聚乙二醇(5KDa)化氨磷汀(≈75nmol，终浓度约为0.5mM)，105ul碱性磷酸酶反应缓冲溶液。室温反应5min，DTNB法检测自由巯基浓度。
氨磷汀的连接效率％＝平均每个聚乙二醇衍生物的实际连接分子数/理论连接分子数×100％
0.5mM四臂聚乙二醇化氨磷汀测得自由巯基浓度约为1.4mM，平均每个聚乙二醇衍生物的实际连接2.8个氨磷汀分子，理论每个四臂聚乙二醇衍生物应连接4个氨磷汀，氨磷汀的连接效率约为70％。
测试例3
本测试例用于测定实施例3所制备的聚乙二醇化氨磷汀的安全性
选择人脐带静脉内皮细胞HUVEC细胞系，接种细胞于96孔板(5000个细胞每孔)并培养于含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基中，置于37℃含5％CO2的细胞培养箱中，培养24小时后，无药物的阴性对照组加入培养基100μl，给药组每孔加入含有不同浓度受试物的培养基100μl，每个组别设5个平行孔。培养24小时后弃上清。每孔加入100μl由无血清培养液新鲜配制的CCK8，37℃培养2小时后，检测每孔OD450吸光度值，同时设置无细胞孔进行空白对照。
本测试例中最高浓度设置依据(JS Thompson等，《骨髓移植》(Bone MarrowTransplantation)，2008，41,927–934)等文献中用到的小鼠给药剂量400mg/kg，20g小鼠约2mL血液量进行计算，最高浓度约为18.7mM。
细胞活力％＝(OD450给药组-OD450空白对照)/(OD450阴性对照组-OD450空白对照)×100％
由于氨磷汀发挥作用需要依赖于剂量效应，而随着剂量的增加，氨磷汀的细胞毒性是增加的，而聚乙二醇化氨磷汀在一个较宽的剂量范围内(0-18.7mM)均未显示出细胞毒性。
测试例4
本测试例用于测定实施例3所制备的聚乙二醇化氨磷汀体外清除细胞内氧化自由基的能力。
选择人脐带静脉内皮细胞HUVEC细胞系，接种细胞于六孔板并培养于含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基中，置于37℃含5％CO2的细胞培养箱中，每2-3天换液一次，待细胞80％-90％融合时使用。无荧光的DCFH-DA荧光探针能够通过自由扩散进入胞内，与胞内ROS反应生成有荧光产物，并被截留在胞内而不能通过细胞膜，因此DCFH-DA荧光探针所产生的荧光与细胞内ROS水平呈正比。设置空白对照组(Ctr)、阳性对照组(H2O2)、实验组1(Ami)和实验组2(PEG-5000-Ami)。空白对照组用无血清培养基37℃培养半小时，阳性对照组用无血清培养基配制的10μM DCFH-DA荧光探针37℃培养半小时，实验组1用无血清培养基配置10μM DCFH-DA荧光探针和1mM氨磷汀37℃培养半小时，实验组2用无血清培养基配置10μMDCFH-DA荧光探针和对应1mM氨磷汀有效浓度的聚乙二醇化氨磷汀37℃培养半小时。半小时后吸去药物和探针，加入PBS配置的1mM H2O2，37度孵育20分钟，PBS清洗两遍，胰酶消化，离心，再用PBS重悬后准备测试。通过流式细胞仪检测胞内DCFH-DA荧光探针荧光强度，以此确定胞内ROS水平。
图3为通过对流式结果的统计分析，将胞内DCFH-DA荧光探针的荧光强度进行绘制的柱状图，其荧光强度的高低反应了胞内ROS的水平。由图可知，阳性对照组在未提前孵育氨磷汀和聚乙二醇化氨磷汀的情况下，在H2O2的刺激后，胞内ROS较阴性对照组具有明显的增高，而实验组1和实验组2二分别在提前孵育了氨磷汀和聚乙二醇化氨磷汀的情况下，在H2O2的刺激后，胞内ROS浓度的增高程度均低于阳性对照组，且聚乙二醇化氨磷汀具有更明显的细胞保护效果。
通过以上实施例1-3及测试例1-4可以得知，本发明提供的聚乙二醇化氨磷汀不改变氨磷汀作用位点，稳定性好，安全性提高，且具有增强型的抗氧化能力。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (29)
1.一种聚乙二醇化氨磷汀，其中，氨磷汀中的氨基通过共价键与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物连接；所述聚乙二醇衍生物和氨磷汀的摩尔比为1:1～40；
所述聚乙二醇衍生物的分子量为0.5～40kDa；
所述聚乙二醇衍生物为多臂的聚乙二醇衍生物中的任意一种或者至少两种的混合物。
2.如权利要求1所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物的分子量为2～20kDa。
3.如权利要求1所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物末端具有的功能基团能够在水相中与氨磷汀中的氨基发生化学反应。
4.如权利要求1-3任一项所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，氨磷汀中的氨基通过酰胺键与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物连接。
5.如权利要求1-3之一所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物选自具有如下结构中的任意一种或者至少两种的混合物：
M-CH2-O-(CH2CH2O)a2-CH2-M或C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4
其中，M为
a2为4-900之间的整数；a3为6-250之间的整数；b1为0-4之间的整数。
6.如权利要求5所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，a2为40-450之间的整数。
7.如权利要求5所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，a3为7-200之间的整数。
8.如权利要求5所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，b1为1-3之间的整数。
9.如权利要求5所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4。
10.如权利要求1-3之一所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为分子量2～20kDa、具有多臂结构且具有N-琥珀酰亚胺酯末端结构的聚乙二醇衍生物。
11.如权利要求10所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯。
12.如权利要求1-3之一所述的聚乙二醇化氨磷汀，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯，其和氨磷汀的摩尔比为1:4～40。
13.一种聚乙二醇化氨磷汀的制备方法，所述方法包括将氨磷汀与末端具有功能基团的聚乙二醇衍生物在缓冲溶液中接触，并发生化学反应，得到含有聚乙二醇化氨磷汀的物料；所述聚乙二醇衍生物和氨磷汀的摩尔比为1:1～40；所述聚乙二醇衍生物的分子量为0.5～40kDa；所述聚乙二醇衍生物为多臂的聚乙二醇衍生物中的任意一种或者至少两种的混合物。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物的分子量为2～20kDa。
15.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物末端具有的功能基团能够在水相中与氨磷汀中的氨基发生化学反应。
16.如权利要求13-15之一所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物选自具有如下结构中的任意一种或者至少两种的混合物：
M-CH2-O-(CH2CH2O)a2-CH2-M或C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4，
其中，M为
a2为4-900之间的整数；a3为6-250之间的整数；b1为0-4之间的整数。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，a2为40-450之间的整数。
18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，a3为7-200之间的整数。
19.如权利要求16所述的方法，其特征在于，b1为1-3之间的整数。
20.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为C-[CH2-O-(CH2CH2O)a3(CH2)b1-M]4。
21.如权利要求13-15之一所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为分子量2～20kDa、具有多臂结构且具有N-琥珀酰亚胺酯末端结构的聚乙二醇衍生物。
22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯。
23.如权利要求13所述的方法，其特征在于，相对每物质的量份的聚乙二醇衍生物，氨磷汀的用量为1.5～20物质的量份。
24.如权利要求13-15之一所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯，相对每物质的量份的聚乙二醇衍生物，氨磷汀的用量为4～40物质的量份。
25.如权利要求13-15之一所述的方法，其特征在于，所述接触的条件包括pH值为6～10，温度为0～60℃，时间为0.5～48小时。
26.如权利要求13-15之一所述的方法，其特征在于，所述接触条件包括：聚乙二醇衍生物为四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯，氨磷汀与四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯的物质的量比为4～40，pH值为6～10，温度为0～60℃，时间为0.5-48小时。
27.如权利要求26所述的方法，其特征在于，氨磷汀与四臂聚乙二醇乙酸-N-琥珀酰亚胺酯的物质的量比为5～20，pH值为7～8，温度为0～37℃，时间为2～24小时。
28.如权利要求13-15之一所述的方法，其特征在于，化学反应过程中，在缓冲溶液中，聚乙二醇衍生物的浓度为10～100克/升，氨磷汀浓度为1～50克/升。
29.一种如权利要求1-12之一所述的聚乙二醇化氨磷汀在制备治疗抗氧化损伤方面的药物中的用途。
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