CN104689599A - 利用超临界co2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法 - Google Patents
利用超临界co2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，采用CO2流体为萃取剂提取总黄酮。本发明以开花期向日葵花盘为提取原料，利用超临界CO2萃取方法进行总黄酮的提取分离，其操作简便、方法简单、提取效率高等特点。超临界CO2提取是用无毒、无残留的CO2代替水或有机溶剂作提取溶剂，不仅可以在接近室温的条件下萃取，而且可以实现高选择性提取和分离从而获得高质量的产品。并且超临界CO2提取不会产生三废，对环境保护极为有利，提取材料CO2价廉易得，可循环使用，生产成本较低。
Description
技术领域
本发明涉及一种开花期向日葵花盘中总黄酮的方法，属于天然产物分离领域。
背景技术
由于黄酮类化合物结构多样，提取时选用的溶剂和提取方法也不尽相同。一般以甲醇、乙醇和丙酮等有机溶剂来提取，提取之前，可先用石油醚除去脂溶性化合物，或以醇沉淀的方法除去蛋白质、多糖类等水溶性物质。利用微波、超声波辅助提取黄酮类化合物，可使产率显著提高，时间大大节省。
黄酮类化合物在人体不能直接合成，只能从食物中获得，因此从不同绿色植物中提取纯度高、活性强的天然黄酮成分的研究也很重要。黄酮类化合物对人体有多种生理功能且不良反应少，有较大的开发和应用前景。
目前，尚未见采用超临界CO2提取开花期向日葵花盘总黄酮的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种提取率高、能耗低、操作简便的开花期向日葵花盘中总黄酮的新提取方法。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
一种利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，采用CO2流体为萃取剂提取总黄酮。
作为优选方案，上述的利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
1）将开花期向日葵花盘自然晾干后，粉碎；
2）放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取温度为40-60℃、萃取压力20-40MPa、萃取时间为1.5-2.5h，得到淡黄色的总黄酮的提取物。
优选的，所述步骤1）中，粉碎后过200目筛。
优选的，所述步骤2）中，萃取温度为60℃。
优选的，所述步骤2）中，萃取压力为40MPa。
优选的，所述步骤2）中，萃取时间为2h。
本发明以开花期向日葵花盘为提取原料，利用超临界CO2萃取方法进行总黄酮的提取分离，其操作简便、方法简单、提取效率高等特点。超临界CO2提取是用无毒、无残留的CO2代替水或有机溶剂作提取溶剂，不仅可以在接近室温的条件下萃取，而且可以实现高选择性提取和分离从而获得高质量的产品。并且超临界CO2提取不会产生三废，对环境保护极为有利，提取材料CO2价廉易得，可循环使用，生产成本较低。
在本发明提供的工艺参数范围内，针对开花期向日葵花盘中总黄酮的提取效率高，提取速度快，节省试剂，耗能少，成本低，污染少，优于采用传统提取技术提取开花期向日葵花盘中总黄酮。
在更进一步的优选条件下，也就是在，开花期向日葵花盘粉碎过200目筛，萃取温度为60℃、萃取压力40 MPa、反应时间为2h的参数条件下，提取效果最佳。
为了进一步说明本发明的实质，申请人进做了如下实验。
1、材料及方法
1.1仪器与试剂材料
紫外可见分光光度计(普析 TU-1810)；超临界萃取仪（Applied Separations，美国）；开花期向日葵花盘原料由甘肃兰州市红古区某向日葵种植地采摘；芦丁标准品采购自中国食品药品检定研究院，纯度为92.8%，硝酸铝采购自天津市科密欧化学试剂有限公司，甲醇等化学试剂均为分析纯。
1.2提取方法
1.2.1开花期向日葵花盘原料处理
将开花期向日葵花盘自然条件下户外晾干，粉碎后过200目筛，备用。
1.2.2 总黄酮提取
精密称取适量开花期向日葵花盘粉于萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，进行提取，从接样口收集到淡黄色总黄酮提取物，用甲醇溶解备用。
1.2.3样品处理
将1-9号样品加入少许甲醇（约2 ml）超声溶解，转移至10 ml容量瓶中并用甲醇定容至刻线；（7号溶解于25ml容量瓶中），分别精密吸取1-9号样品1ml，用上述标准曲线制备方法处理样品，测出吸光值并代入标准曲线计算。
1.2.4 数据计算
注：W2为称取干燥向日葵的质量(g)；W1为由W2提取的总黄酮的质量(g)。
2.试验结果
2.1提取率影响条件的优化结果
选用了对提取率有主要影响的3个因素（萃取温度℃、萃取压力Mpa、萃取时间h）考虑三个水平，以L9(33)正交表进行试验影响因素优化。优化结果见表1、表2、表3。
表1 L9(33)正交试验影响因素水平表
。
表2 L9(33)正交试验结果
。
表3 L9(33)正交试验方差分析
。
在实验范围内，考虑提取生产成本，最佳提取条件是A3B3C2，即茎直黄芪粉碎为200目、萃取温度为60℃、萃取压力40MPa、反应时间2h为最佳提取条件。
2.2 总黄酮含量测定
2.2.1总黄酮标准曲线绘制
准确称量0.1700 g芦丁标准品于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻线；取上述溶液2.5 ml于10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻线，制备成0.85 mg/ml的标准液；分别精密吸上述标准液0、100、150、200、250、300μl于5 ml容量瓶中，依次加入5 %亚硝酸钠（NaNO2）溶液150μl，混匀，静置6 min；在分别加入10 %硝酸铝（AlNO3）溶液150μl，混匀，静置6 min；最后依次加入4%氢氧化钠（NaOH）溶液2 ml，并用甲醇定容至刻线，摇匀，静置15 min。将上述含有0μl芦丁标准液的一组作为参比液，进行全波长扫描，得其在510 nm处有最大吸收，分别记录各浓度梯度溶液的吸光度值，绘制标准曲线，见图1。
注：（1）5%亚硝酸钠（NaNO2）溶液的配制：准确称取1g亚硝酸钠（NaNO2）于50ml烧杯中，加24 g蒸馏水，搅拌溶解；
（2）10%硝酸铝（AlNO3）溶液的配制：准确称取1g硝酸铝（AlNO3）于25ml烧杯中，加9 g蒸馏水，搅拌溶解；
（3）4%氢氧化钠（NaOH）溶液的配制：准确称取2g氢氧化钠（NaOH）于100ml烧杯中，加入48 g蒸馏水，搅拌溶解，冷却可用；
（4）所有经过处理标准液在60 min内稳定。
2.2.2总黄酮含量计算
按照正交优化的开花期向日葵花盘中总黄酮的超临界CO2提取方法，对该条件进行验证试验，得到总黄酮的提取率为1.93%。
附图说明
图1为实验中绘制的芦丁的标准曲线。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
一种利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）将开花期向日葵花盘自然晾干后，粉碎后过200目筛；
（2）放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取温度为60℃、萃取压力40MPa、萃取时间为2h，得到淡黄色的总黄酮的提取物。
实施例2：
一种利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）将开花期向日葵花盘自然晾干后，粉碎后过200目筛；
（2）放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取温度为40℃、萃取压力40MPa、萃取时间为1.5h，得到淡黄色的总黄酮的提取物。
实施例3：
一种利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
（1）将开花期向日葵花盘自然晾干后，粉碎后过200目筛；
（2）放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取温度为60℃、萃取压力20MPa、萃取时间为2.5h，得到淡黄色的总黄酮的提取物。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，其特征在于:采用CO2流体为萃取剂提取总黄酮。
2.根据权利要求1所述的利用超临界CO2提取开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）将开花期向日葵花盘自然晾干后，粉碎；
2）放入萃取釜中，以CO2流体为萃取剂，萃取温度为40-60℃、萃取压力20-40MPa、萃取时间为1.5-2.5h，得到淡黄色的总黄酮的提取物。
3.根据权利要求2所述的开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，其特征在于：所述步骤1）中，粉碎后过200目筛。
4.根据权利要求2所述的开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，其特征在于：所述步骤2）中，萃取温度为60℃。
5.根据权利要求2所述的开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，其特征在于：所述步骤2）中，萃取压力为40MPa。
6.根据权利要求2所述的开花期向日葵花盘中总黄酮的提取方法，其特征在于：所述步骤2）中，萃取时间为2h。
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