CN104686371A - 一种高粱花药高效诱导培养基配方 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高粱花药高效诱导培养基，该培养基的配方由一定含量的KNO3、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2?2H2O、MgSO4、Na2-EDTA、FeSO4?7H2O、MnSO4?H2O、ZnSO4?7H2O、H3BO3、KI、CuSO4?5H2O、CoCl?6H2O、NaMoO4?2H2O、甲基磺酸乙酯、甘氨酸、肌醇、维生素B1、维生素B6、烟酸、D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖、蔗糖、植物凝胶、2，4-D、激动素、复酞核酸、植物硫化激动素PSK-α、胰岛素和水解蛋白所组成。本发明所述的培养基具有显著提高高粱花药出愈率的优点，可以大幅度地提高高粱花药培养效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种高粱花药高效诱导培养基配方，具体涉及一种显著提高高粱花药出愈率的诱导培养基配方，属于农业科学技术领域。
背景技术
高梁为禾本科高粱属一年生草本植物，是我国最早种植的禾谷类作物之一。高粱在世界谷物生产中占有重要地位，6大洲47个国家每年种植面积约0.45亿hm，为世界第五大作物。高梁具有食用、饲用、酿造用、能源用及加工用等多种用途，在我国，高梁主要用于酿酒，但随着畜牧业、能源业、加工业及膳食结构的改变，饲料、饲草高梁、能源甜高梁、帚用高粱及食用高梁等具有特殊用途的高粱越来越受到重视，种植面积不断扩大。
高粱抗逆性强、适应性广且综合利用价值高而在国民经济中占有不可替代的重要地位。高粱具有耐旱、耐涝、耐贫瘠、耐盐碱等多重抗性，生物量大，是公认的抗旱性较强的作物，在水资源严重短缺的干旱和半干旱地区具有很大的发展潜力。高粱以其独具的高含糖量、高生物产量、高乙醇转化率和高抗逆性被誉为“高能作物”，成为符合我国国情、适合我国国土和气候条件、既产能源又产粮食的理想作物之一。加强高粱茎秆生物能源综合开发利用，对缓解国家能源紧张、改善生态环境、促进国民经济稳定持续发展，都具有十分重要而深远的意义。
我国的高梁产区集中在东北、华北和西北地区，品种资源丰富，这为新品种的选育奠定了丰厚的遗传基础。高产、含糖量高、抗性好、适应性广的高粱品种是促进高粱生产发展的核心和基础。随着生物技术的发展和市场需求的变化，高粱的育种方法也有了很大发展。目前我国高粱的育种方法主要有：传统育种方法、诱变育种法、倍性育种法、分子育种法等。针对高粱产业化开发的实践需求，创新育种思路，加快品种选育，为生产提供适宜的新品种，将有力地推动高粱产业的发展，并且可以促进种植业结构调整和农村经济发展。
花药培养是利用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药。通过无菌操作接种在培养基上，在一系列条件诱导下改变花药的发育程序，进行有丝分裂，经过脱分化后形成细胞团，进而形成愈伤组织，经历再分化发育成完整的单倍体植株的过程。现在花药培养集成了杂交育种、诱变育种、细胞学、遗传学等各种生物科学的内容，是育种学发展的趋势之一，利用花药培养可以明显的加快育种进程、缩短育种年限。
目前小麦、水稻、玉米及木本植物的花药培养已经取得了成功，而高梁的花药培养诱导单倍体的方法和培养基还不完善。培养基是花药培养的物质基础，直接关系到培养物的生长与分化，培养基组分是影响花培成功的一个很重要的因素，多种禾本科作物花培实验表明：培养基各组分的合适用量，以及它们之间一定的组合关系，可显著影响花培效率，发现和优化组合花药培养有机附加物质，可进一步提高花药培养力。
在花药程序中，愈伤组织的诱导培养是水稻花药培养过程的第一步，也是重点和难点，而花药愈伤组织诱导的频率和质量直接决定着花药培养的成败。因此，组合和优化培养基组分，摸索出实用的花药诱导培养基配方是实现高粱花药诱导培养的关键。通过多年高粱花药培养的摸索和实践，我们进一步优化了基本培养基配方，并且不断尝试加入一些提高高粱药诱导力的有机添加物并组合其种类搭配及浓度，最终摸索出了一种高粱花药高效诱导培养基配方。我们的研究结果对于进一步推广和应用高粱单倍体育种和理论研究无疑有较大的现实意义和实用价值。
发明内容
本发明提供了一种高粱花药高效诱导培养培养基，该培养基的配方如下：
KNO3 1500～1800mg/L，NH4NO3 900～1100mg/L，KH2PO4 230～270mg/L，CaCl2?2H2O 270～330mg/L，MgSO4 120～140mg/L，Na2-EDTA 35～40mg/L，FeSO4?7H2O 26～30mg/L，MnSO4?H2O 10～12mg/L，ZnSO4?7H2O 5.5～6.5mg/L，H3BO3 3.5～4.5mg/L，KI 0.9～1.1mg/L，CuSO4?5H2O 0.035～0.045mg/L，CoCl?6H2O 0.035～0.045mg/L，NaMoO4?2H2O 0.09～0.11mg/L，甲基磺酸乙酯 0.5～0.7mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，肌醇 45～55mg/L，维生素B1 0.45～0.55mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，烟酸 0.45～0.55mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.2～0.3g/L，蔗糖 32～38g/L，植物凝胶 4.5～5.5g/L；
2，4-D 2.3～2.7mg/L，激动素1.4～1.6mg/L，复酞核酸0.7～0.9mg/L，植物硫化激动素PSK-α 35～45pmol/L，胰岛素 4.5～5.5mg/L，水解蛋白 0.25～0.35g/L，PH 5.8～6.0。
本发明所述的培养基具有显著提高高粱花药出愈率的优点，可以大幅度地提高高粱花药培养效率。下面的实施例以及对比实验可以清楚地反映本发明所述培养基的特点。
具体实施方式
实施例1
配制如下配方的培养基：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
选取高粱品种关东青和平原红作为花药培养供体，采集主茎上的圆锥花序，其花药中的小孢子处于单核晚期，表面消毒后，5℃下低温预处理2天。用60%的乙醇表面消毒3分钟，然后进一步外植体消毒后接种花药于该诱导培养基，每个培养皿接种30枚花药，在温度为28℃、湿度70%左右的环境下暗培养。愈伤组织形成后（长到2 mm左右），计算愈伤组织诱导率，然后转移入再生培养基。
实施例2
配制如下配方的培养基（甲基磺酸乙酯添加浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
甲基磺酸乙酯的添加浓度设置以下8种：0；0.1 mg/L；0.2 mg/L；0.3 mg/L；0.4mg/L；0.6mg/L；0.7mg/L；0.8mg/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例3
配制如下配方的培养基（凝固剂的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
凝固剂设置为以下2种：植物凝胶 2.5g/L，琼脂 3.5g；琼脂 7g。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例4
配制如下配方的培养基（肌醇添加浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
肌醇的添加浓度设置以下8种：0；10mg/L；20mg/L；30mg/L；40mg/L；60mg/L；70mg/L；80mg/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例5
配制如下配方的培养基（D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖添加浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖添加浓度设置以下7种：0；0.05g/L；0.1g/L；0.15g/L；0.2g/L；0.3g/L；0.35g/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例6
配制如下配方的培养基（激素配比浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
激素组合以及配比浓度设置为以下两类：
2，4-D和激动素组合方式设置以下11种：2，4D 0.5mg/L，激动素1.5mg/L；2，4D 1mg/L，激动素1.5mg/L；2，4D 1.5mg/L，激动素1.5mg/L；2，4D 2mg/L，激动素1.5mg/L；2，4D 3mg/L，激动素1.5mg/L；2，4D 3.5mg/L，激动素1.5mg/L；2，4D 4mg/L，激动素1.5mg/L；2，4-D 2.5mg/L，激动素 0.5mg/L；2，4-D 2.5mg/L，激动素1mg/L；2，4-D 2.5mg/L，激动素 2mg/L；2，4-D 2.5mg/L，激动素 2.5mg/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例7
配制如下配方的培养基（复酞核酸添加浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
复酞核酸添加浓度设置以下6种：0；0.2mg/L；0.4mg/L；0.6mg/L；1.0mg/L；1.2mg/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例8
配制如下配方的培养基（植物硫化激动素PSK-α的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，胰岛素 5.0mg/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
植物硫化激动素PSK-α添加浓度设置以下7种：0；10pmol/L；20pmol/L；30pmol/L；50pmol/L；60pmol/L；80pmol/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例9
配制如下配方的培养基（胰岛素添加浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，水解蛋白 0.3g/L，PH 5.9。
胰岛素添加浓度设置以下8种：0；1mg/L；2mg/L；3mg/L；4mg/L；6mg/L；7mg/L；8mg/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
实施例10
配制如下配方的培养基（水解蛋白添加浓度的优选）：
KNO3 1650mg/L，NH4NO3 1000mg/L，KH2PO4 250mg/L，CaCl2?2H2O 300mg/L，MgSO4 130mg/L，Na2-EDTA 37.5mg/L，FeSO4?7H2O 28mg/L，MnSO4?H2O 11mg/L，ZnSO4?7H2O 6.0mg/L，H3BO3 4.0mg/L，KI 1.0mg/L，CuSO4?5H2O 0.04mg/L，CoCl?6H2O 0.04mg/L，NaMoO4?2H2O 0.1mg/L，甲基磺酸乙酯 0.6mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，肌醇 50mg/L，维生素B1 0.5mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.25g/L，蔗糖 35g/L，植物凝胶 5.0g/L；
2，4-D 2.5mg/L，激动素1.5mg/L，复酞核酸0.8mg/L，植物硫化激动素PSK-α 40pmol/L，胰岛素 5.0mg/L，PH 5.9。
水解蛋白添加浓度设置以下6种：0；0.1 g/L；0.2g/L；0.4g/L；0.5g/L；0.6g/L。
同样选取该两个高粱品种作为花药供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
培养基对比实验
将实施例2-10分别与实施例1进行对比，对比的结果如下表所示：
从表1-9可以看出，使用本发明所提供的培养基比使用其它任何对比培养基诱导高粱花药愈伤组织的效率更高，表明本发明提供的培养基配方是经过大量单因子、多因子试验所筛选的最优组合，多年来我们亦围绕本发明的组合配比做了小范围单因子改变优化组合试验，大量的实验研究亦得出本发明的组分配比是最优的。使用本发明所提供的培养基对高粱品种关东青、平原红的愈伤组织诱导率高达11.5%和15.4%，充分说明了本发明提供的培养基是一种优良的高粱花药诱导培养基，填补了当前有应用价值的高粱花药诱导培养基的空白，具有较高的产业推广价值和理论研究价值。
实施例11
为了比较本发明所提供的培养基与前人采用的培养基诱导高粱花药愈伤效果的差异，我们从相关文献查找了3个高粱花药愈伤诱导培养基配方，配置成花药愈伤诱导培养基，同样选取高粱品种关东青、平原红作为花药供体诱导花药愈伤，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织诱导率。
其它3个诱导培养基为：
MS-t-z-2培养基：MS-t-z-2基本培养基+20g/L蔗糖+5g/L琼脂+3mg/L 2，4-D+0.3mg/L激动素+2.2mg/L玉米素，pH为5.8（对比文件来自于F?S?Wen等《高粱花药和花序培养诱导愈伤组织及再生植株》）；
C17-2培养基：C17-2基本培养基+20g/L蔗糖+7g/L琼脂+2mg/L 2，4-D+1mg/L激动素，pH为5.8（对比文件来自于F?S?Wen等《高粱花药和花序培养诱导愈伤组织及再生植株》）；
85D3-2培养基：85D3-2基本培养基+30g/L蔗糖+5g/L琼脂+1mg/LNAA+1.5mg/L激动素，pH为5.8（对比文件来自于F?S?Wen等《高粱花药和花序培养诱导愈伤组织及再生植株》）。
培养基对比实验
将实施例11与实施例1进行对比，对比的结果如下表所示：
从不同培养基的诱导效果来看，本发明培养基对高粱花药愈伤组织平均诱导率为13.5%，而MS-t-z-2培养基、C17-2培养基、85D3-2培养基培养基则分别只有5.9%、6.1%、3.2%，可以发现本发明对高粱花药愈伤组织的诱导率要显著高于其他3种诱导培养基。
以上11个实施例可以说明本发明提供的培养基配方的组分配比是最优组合，本发明提供的培养基对高粱花药愈伤组织的诱导比前人发现的高粱花药诱导培养基具有明显优势。我们的研究结果对于进一步推广和应用高粱单倍体育种无疑有较大的现实意义和实用价值。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。
Claims (1)
1.一种高粱花药高效诱导培养基，该培养基的配方如下：
KNO3 1500～1800mg/L，NH4NO3 900～1100mg/L，KH2PO4 230～270mg/L，CaCl2?2H2O 270～330mg/L，MgSO4 120～140mg/L，Na2-EDTA 35～40mg/L，FeSO4?7H2O 26～30mg/L，MnSO4?H2O 10～12mg/L，ZnSO4?7H2O 5.5～6.5mg/L，H3BO3 3.5～4.5mg/L，KI 0.9～1.1mg/L，CuSO4?5H2O 0.035～0.045mg/L，CoCl?6H2O 0.035～0.045mg/L，NaMoO4?2H2O 0.09～0.11mg/L，甲基磺酸乙酯 0.5～0.7mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，肌醇 45～55mg/L，维生素B1 0.45～0.55mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，烟酸 0.45～0.55mg/L，D-阿拉伯糖基-2-去氧已糖 0.2～0.3g/L，蔗糖 32～38g/L，植物凝胶 4.5～5.5g/L；
2，4-D 2.3～2.7mg/L，激动素1.4～1.6mg/L，复酞核酸0.7～0.9mg/L，植物硫化激动素PSK-α 35～45pmol/L，胰岛素 4.5～5.5mg/L，水解蛋白 0.25～0.35g/L，PH 5.8～6.0。
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