一种野生革耳的人工栽培方法
技术领域
本发明涉及一种珍稀食用菌的栽培方法,尤其涉及一种野生革耳的人工栽培方法。
背景技术
目前,食用菌的产业发展迅猛,我国食用菌每年的产量达到2000万吨以上,占全球70%以上,从业人员超过2000万人,食用菌产业在种植业中排在除了粮、棉、油、菜之后的第五位,超过了果、茶叶和蚕桑。
在食用菌产业蓬勃发展的今天,越来越多的珍稀食用菌品种逐渐进入人们的视野,许多原有的珍稀品种逐渐被驯化,如竹荪、茶薪菇、离褶伞等;但是,也有大批的野生食药用菌由于未能被人类认识,没有得到研究。在目前有的15万种大型真菌中,仅仅有80种左右的野生食药用菌被人类驯化,而且规模化栽培的品种更只有20多种。随着人们生活水平的逐步上升,对于生活品质的要求更高,而大型真菌由于其富含具有营养及功能作用的各种成分,包括真菌多糖、三萜类、甾醇等,对于人体健康具有非常良好的作用,日益受到人们的重视。
目前,对于革耳的研究不多,它幼时可以食用,成熟后可以入药,同时由于漆酶含量较高在工业上也有广泛的应用前景,漆酶广泛用于生物制浆、生物漂白、污染物生物降解等工业生产中,而革耳是一种优良产漆酶的菌株,因此,革耳是一种具有开发潜力的野生食药用菌。野生革耳Panus neostrigosusDrechsler-Santos&Wartchow,属于担子菌门,担子菌纲,多孔菌目,多孔菌科,革耳属。目前,关于野生革耳的人工栽培方法还没有报道。
发明内容
本发明旨在提供一种针对野生革耳的人工栽培方法。
本发明通过以下方案达到上述目的:
一种野生革耳的人工栽培方法,包括以下步骤:
(1)制作母种:采集野生革耳组织分离的子实体,将所述子实体菌肉组织无菌接种至生产母种培养基中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,待菌丝长满斜面后转接至综合PDA斜面,置于25℃培养箱中恒温暗培养,直至菌丝长满斜面即得生产母种,其中所述分离母种培养基的原料组成按质量百分比计为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%、维生素B1微量,其余为水;
(2)制作原种:将生产母种无菌接入原种袋中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,至菌丝吃满料后即得原种,其中所述原种料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳38%-42%、木屑36%-40%、麸皮18%-20%、碳酸钙1%-2%,将所述将原种料装入菌种袋中,制得原种袋;
(3)制作生产种:将原种无菌接入生产种袋中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,至菌丝吃满料后即得生产种,其中所述生产种料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳38%-42%、木屑36%-40%、麸皮18%-20%、碳酸钙1%-2%,将所述将生产种料装入菌种袋中,制得生产种袋;
(4)接种栽培:将生产种无菌接入栽培料袋中,在25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,待栽培袋中的菌丝长满栽培料后,继续遮光后熟培养至菌丝完成后熟期,其中所述栽培料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳48%-52%、木屑34%-38%、麸皮8%-12%、碳酸钙1%-2%;,将所述将栽培料装入菌种袋中,制得栽培袋;
(5)出菇管理:打开栽培袋的盖子,将栽培袋竖排放置,调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,至革耳幼菇长出,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘。
其中,上述栽培方法还优选包括步骤(6)出菇管理:将采摘后的栽培袋置于25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,10d后,再调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,直至幼菇再次产生,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘。
其中,上述步骤(6)优选重复1-2次,即出菇期可出菇2-3潮。
其中,上述步骤(1)的制作母种中的野生革耳子实体菌肉组织无菌接种包括:采集野生革耳组织分离的子实体,在无菌条件下用75%酒精擦拭表面后,撕开,以无菌方式将0.2-0.5mm×0.2-0.5mm的菌肉组织接入生产母种培养基中。
其中,上述步骤(2)的制作原种中将生产母种无菌接入原种袋中时生产母种的料块完全埋入原种料中。
其中,上述原种袋、生产种袋、栽培袋的制作方法是分别将原种料、生产种料、栽培料装入相应的菌种袋,用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,再在袋口套上塑料环,并扣上配套的盖子。
进一步优选的,上述原种袋的制作方法包括:按照原种料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得原种袋。
进一步优选的,上述生产种袋的制作方法包括:按照生产种料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得生产种袋。
进一步优选的,上述栽培袋的制作方法包括:按照栽培料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得栽培袋。
进一步优选的,上述原种袋为13cm×25cm的耐高温透明聚丙烯菌种袋,折合每袋装干料250-300g。
进一步优选的,上述生产种袋为15cm×30cm的耐高温透明聚丙烯菌种袋,折合每袋装干料350-400。
进一步优选的,上述栽培袋为17cm×35cm的耐高温透明聚丙烯菌种袋,折合每袋装干料450-500g。
其中,上述步骤(5)出菇管理中将栽培袋竖排放置时栽培袋之间留有空隙。
其中,上述综合PDA的原料组成按质量百分比计为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%及微量维生素B1,其余为水。
本发明的栽培方法所栽培的野生革耳,具有以下的形态特征:
子实体中小或中等大。菌盖直径2-9cm,中部下凹或漏斗形,初浅粉红色,后深土黄色、茶色至锈褐色,有粗毛,革质。菌褶白至浅粉红色,干后浅土黄色,延生,窄,稠密。菌柄长0.5-2cm,粗0.2-1cm,偏生或近侧生,短,内实。孢子无色,光滑,椭圆形,(3.6-6)μm*(2-3)μm。囊体无色,棒状,(23.4-56)μm*(7.2-14)μm。
本发明所栽培的野生革耳,夏秋季于柳、杨、桦等树腐木上丛生或群生,分布较广泛,幼时可食,质韧浓香,国外常磨粉作调味香料,入药可治疮毒,煎水洗疮痂,疗效显著,还可治杨梅结毒和无名肿毒等病症,其对小白鼠肉瘤S-180和艾氏癌的抵制率分别为60%和70%。据分析,该野生革耳含17种氨基酸,总量为11.59%,其中有人体必需氨基酸7种,占总量的39.78%。
本发明提供的人工栽培方法,出菇期约1个月,可出菇2-3潮,每个菇袋每潮出菇15-18克之间,总体生物转化率在10-15%之间。
本发明从野生环境下采集到的野生革耳经过组织分离纯化获得纯菌株,并且经过人工驯化栽培得到其人工栽培子实体,为革耳的利用提供了一个重要途径。与野生状态相比,通过本发明的人工栽培方法栽培得到的子实体的肉质更厚,个体质量明显增大。该野生革耳品种的出菇较快,人工驯化的子实体品质较野生状态更佳。
附图说明
图1是实施例1栽培得到的野生革耳的子实体图。
图2是实施例2栽培得到的野生革耳的子实体图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1:使用本发明进行野生革耳的人工栽培
(1)按质量百分比计为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%及微量维生素B1,其余为水的原料组成常规制作综合PDA斜面,0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min;
(2)按质量百分比计为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%、维生素B1微量,其余为水的原料组成制作分离母种培养基斜面,0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min;
(3)原种料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳38%-42%、木屑36%-40%、麸皮18%-20%、碳酸钙1%-2%,按照原种料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入13cm*25cm的耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得原种袋,折合每原种袋装干料300g;
(4)生产种料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳38%-42%、木屑36%-40%、麸皮18%-20%、碳酸钙1%-2%,按照生产种料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入15cm*30cm的耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得生产种袋,折合每生产种袋装干料350g;
(5)栽培料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳48%-52%、木屑34%-38%、麸皮8%-12%、碳酸钙1%-2%,按照栽培料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入17cm*35cm的耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得栽培袋,折合每袋装干料500g;
(6)制作母种:采集野生革耳组织分离的子实体,将所述子实体菌肉组织无菌接种至生产母种培养基中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,待菌丝长满斜面后转接至综合PDA斜面,置于25℃培养箱中恒温暗培养,直至菌丝长满斜面即得生产母种,菌丝长满斜面的时间大约在10-15d之间;
(7)制作原种:将生产母种无菌接入原种袋中,生产母种的料块完全埋入原种料中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,至菌丝吃满料后即得原种(30d左右);
(8)制作生产种:将原种无菌接入生产种袋中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,至菌丝吃满料后即得生产种(30d左右);
(9)接种栽培:将生产种无菌接入栽培料袋中,在25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,待栽培袋中的菌丝长满栽培料后,继续遮光后熟培养至菌丝完成后熟期;
(10)出菇管理:打开栽培袋的盖子,将栽培袋竖排放置,栽培袋之间应留有空隙,调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,至革耳幼菇长出,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘;
(11)出菇管理:将采摘后的栽培袋置于25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,10d后,再调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,直至幼菇再次产生,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘。
结果:栽培时每一潮菇约出菇4-8朵,每朵约重5-10g,每潮菇培养时间大约在5-7d之间。
如图1所示为栽培得到的野生革耳,子实体呈浅褐色,柄长3-4厘米,菌盖中部下陷,呈下凹形;菌柄肉较厚,较肥嫩;菌盖上有一层细密的绒毛。与野生状态相比,该品种在人工驯化后子实体的肉质厚了许多,个体质量明显增大。
实施例2:
(1)按质量百分比计为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%及微量维生素B1,其余为水的原料组成常规制作综合PDA斜面,0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min;
(2)按质量百分比计为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.15%、维生素B1微量,其余为水的原料组成制作分离母种培养基斜面,0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min;
(3)原种料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳38%-42%、木屑36%-40%、麸皮18%-20%、碳酸钙1%-2%,按照原种料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入13cm*25cm的耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得原种袋,折合每原种袋装干料300g;
(4)生产种料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳38%-42%、木屑36%-40%、麸皮18%-20%、碳酸钙1%-2%,按照生产种料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入15cm*30cm的耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得生产种袋,折合每生产种袋装干料350g;
(5)栽培料的原料组成按质量百分比计为棉籽壳48%-52%、木屑34%-38%、麸皮8%-12%、碳酸钙1%-2%,按照栽培料的原料组成称取各组分,将棉籽壳经水泡湿过夜,再混合木屑、麸皮、碳酸钙,装入17cm*35cm的耐高温的透明聚丙烯菌种袋中,装好料后用小木棒在袋料中打洞,洞深至袋底,然后在袋口套上塑料环,扣上配套的盖子,制得栽培袋,折合每袋装干料500g;
(6)制作母种:采集野生革耳组织分离的子实体,将所述子实体菌肉组织无菌接种至生产母种培养基中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,待菌丝长满斜面后转接至综合PDA斜面,置于25℃培养箱中恒温暗培养,直至菌丝长满斜面即得生产母种,菌丝长满斜面的时间大约在10-15d之间;
(7)制作原种:将生产母种无菌接入原种袋中,生产母种的料块完全埋入原种料中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,至菌丝吃满料后即得原种(30d左右);
(8)制作生产种:将原种无菌接入生产种袋中,置于25℃培养箱中恒温暗培养,至菌丝吃满料后即得生产种(30d左右);
(9)接种栽培:将生产种无菌接入栽培料袋中,在25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,待栽培袋中的菌丝长满栽培料后(30d左右),说明菌丝成熟,置于25℃遮光处,再经30天左右,菌丝开始进入转色期,当观察到菌袋肩膀处出现褐色色素,说明菌丝已经完全成熟,再经10天-15天左右的后熟培养就可以进入出菇阶段;
(10)出菇管理:打开栽培袋的盖子,将栽培袋竖排放置,栽培袋之间应留有空隙,调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,至革耳幼菇长出,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘;
(11)出菇管理:将采摘后的栽培袋置于25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,10d后,再调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,直至幼菇再次产生,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘;
(12)出菇管理:将采摘后的栽培袋置于25℃±1℃、空气相对湿度60-70%的培养室中避光培养,10d后,再调节温度为18-20℃、空气相对湿度85-90%,光照强度300-500lux,每天光照8小时,并保持空气中二氧化碳质量百分浓度小于2%,直至幼菇再次产生,然后每天向幼菇喷施水雾1-2次,直至子实体菌盖从内收至平伸时,采摘。
结果:出菇期约1个月,可出菇2-3潮,每个菇袋每潮出菇15-18克之间,总体生物转化率约在10-15%之间。
实施例3:野生革耳的鉴定
在广东肇庆鼎湖山国家级自然保护区进行大型真菌资源采集和调查,得到一份革耳属(Panus)真菌,该真菌散生于海拔117米,温度15.4℃,相对湿度97%的针阔混交林的腐木上,通过组织分离得到其PDA纯培养物,经过实施例1的人工驯化栽培方法得到其子实体,对驯化的子实体分别取样,得到其菌褶和菌柄组织,低温(40℃)烘干,使用液氮研磨,利用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)进行DNA基因组的提取,得到的DNA溶液(DNA模板)-20℃冷藏备用。
通过真菌核糖体基因间隔区通用引物ITS1/ITS4(ITS1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG,ITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成)进行ITS-PCR实验,扩增在Biometra PCR仪上进行,PCR反应液组成(共50μl)如下:
TaKaRaTaq(5units/μl) 0.25μl
10×PCR Buffer 5μl
dNTP Mixture(各2.5mM) 4μl
DNA模板 2μl
引物1(10μmol·L-1)5μl
引物2(10μmol·L-1)5μl
灭菌蒸馏水28.75μl
以上生物试剂由宝生物工程(大连)有限公司生产,反应条件为:94℃反应5min;94℃反应1min,55℃反应1min,72℃反应1min,30个循环;72℃反应10min。PCR产物直接送检进行双向测序,由华大基因完成。将测序结果在GenBank进行序列Blast,发现与革耳属真菌Panus lecomtei相似性高达99%,经过形态学鉴定,该真菌标本宏观特征和显微特征与野生革耳(Panus rudis Fr.)描述一致,鉴定结果为野生革耳(Panus rudis Fr.),而通过http://www.indexfungorum.org/Names/Names.asp真菌分类在线检索系统查询得到:野生革耳(Panus rudis Fr.)最新拉丁学名为Panus neostrigosusDrechsler-Santos&Wartchow,而Panuslecomtei为其同物异名,故该菌种鉴定结果为野生革耳(Panus neostrigosusDrechsler-Santos&Wartchow)。
以上所述,仅为本发明的较佳的具体实施例,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围内。