CN104672196A - 一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法 - Google Patents

一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及蓝莓花青素性能改性技术领域，尤其是一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，通过对酚酸试剂进行制备，再将酚酸试剂对蓝莓花青素进行改性处理，酰化度较高，使得酰化度达到了53-70％；并且整个工艺流程短，工艺参数易于控制，原料易得，反应条件温和，无污染物排放，进而制作的成本较低；使得改性后的蓝莓花青素对自由基的清除功能得到显著的增强，进而增强了蓝莓花青素的抗氧化性能，提高了蓝莓花青素的稳定性，能够被广泛应用于食品、保健品、化妆品、医药等领域。

Description

一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法
技术领域
本发明涉及蓝莓花青素性能改性技术领域，尤其是一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法。
背景技术
蓝莓花青素是从蓝莓果或叶中提取得到的一种重要活性成分，具有增强视力、消除眼睛疲劳、延缓脑神经衰老、增强心肺、预防老年痴呆的功能，对由糖尿病引起的毛细管病、艾滋病等有治疗作用。作为一种纯天然的抗衰老的营养补充剂，花青素被研究证明是当今人类发现最有效的抗氧化剂，在欧洲，它被称为“口服的皮肤化妆品”，其抗氧化性能比维生素E高出50倍，比维生素C高出200倍，且对人体的生物有效性是100％，服用后20分钟就能在血液中检测到。
与其它抗氧化剂不同的是，花青素能通过血脑屏障，直接保护大脑和神经系统。然而，花青素不稳定、易降解变质、贮藏期短，使其应用受到了很大地限制，也是当前蓝莓研究中亟待解决的难题。
于是，有研究者将蓝莓花青素的稳定性作出了研究与探讨，并提供了提高蓝莓花青素稳定性的手段，如专利号为《CN201310421249.5》的一种提高蓝莓花青素稳定性的处理方法，通过将0.5％三氯乙酸的甲醇溶液进行蓝莓花青素的提取，依次通过离子交换树脂柱和葡萄糖凝胶柱进行纯化后，获得蓝莓花青素精制物，再将其与三乙酰没食子酸酰氯进行没食子酸酰化反应，在其分子结构中引入具有邻三酚羟基的没食子酰基，获得改性产物没食子酰化花青素，再通过高效液相色谱法测定改性产物水解后生成的没食子酸量，计算没食子酰化度为52-63％。再经过实验进行验证，获得稳定性较高的蓝莓花青素，并且操作简单、成本低、污染少、酰化度高，通过分子修饰，一方面提高了蓝莓花青素的原有特性，如抗氧化性能得到增强，使其作用效果提高；另外一方面通过引入多种官能团进而赋予蓝莓花青素新的生理活性，扩大了蓝莓花青素的应用范围。
由此可见，对于蓝莓花青素稳定性的提高以及蓝莓花青素进行酰化反应能够改性蓝莓花青素，使得蓝莓花青素的各项性能得到提高和增强，如增强蓝莓花青素的抗氧化性能等。同时，也可以从上述的现有技术文献中看出，蓝莓花青素中的稳定性以及各项性能的增强，尤其是抗氧化性能的增强过程中，对于如何制取酰化试剂以及在何种条件下进行改性处理以及酰化试剂的种类选取均有较大的影响。
花青素(anthocyanidin)又称花色素，是一类水溶性的类黄酮类天然色素，属酚类化合物，基本结构单元为2-苯基苯并吡喃阳离子，其结构式如下：
其由于近些年来科学家的大量研究，获得酚类化合物对于抗氧化性能具有独特的功效，其抗氧化性能的活性较高，能与维生素C、E和胡萝卜素等其他抗氧化物在体内一起发挥抗氧化功效，清除有害人体健康的坏分子，即自由基，进而达到良好的抗氧化功效。
但是，由于蓝莓花青素存在上述稳定性较差的缺陷，现有技术中大量的研究人员对蓝莓花青素作出的稳定性改性处理时，由于酰化试剂的选取以及制备酰化试剂的条件以及对蓝莓花青素进行改性处理过程的条件控制不恰当，进而导致对蓝莓花青素的改性处理达不到较佳的效果，进而导致蓝莓花青素的稳定性和各项性能的优化程度还不够，如抗氧化性能的增强程度较低，进而导致蓝莓花青素的应用受到局限性。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，工艺步骤简单、处理成本较低、无污染物质产生，对蓝莓花青素的稳定性和抗氧化性性能的提高具有显著的进步性，相比传统技术的蓝莓花青素的处理方式来看，对蓝莓花青素的酰化度提高了7个百分点。
具体是通过以下技术方案得以实现的：
一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步骤：
(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1：(1-6)：(1-6)进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用50-70r/min的搅拌速度进行搅拌处理20-30min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水氯化亚砜按照摩尔比为1：(1-5)进行混合，并在氮气存在的30-100℃的温度下采用搅拌速度为80-100r/min搅拌反应1-24h，再采用非质子溶剂重结晶处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1-1.5倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将其置于冰浴中，并向其中采用50-80r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧化钠溶液，并持续搅拌3-5h，调节PH值为7-9，获得酚酸试剂；
(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为1：(3-10)加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为(3-10)的三乙胺，搅拌速度为70-80r/min，在30-60℃下搅拌反应2-12h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值为1-4，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花青素。
所述的酚酸为水杨酸、尼泊金酸、原儿茶酸、焦儿茶酸、龙胆酸、没食子酸、对香豆酸、咖啡酸中的一种。
所述的非质子溶剂是二氯甲烷、甲苯、四氯化碳、三氯甲烷中的一种。
所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为30～50％的精制物。
所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。
所述的氢氧化钠溶液的质量分数为20-30％。
所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1-1.5倍。
所述的盐酸的质量分数为10-15％。
所述的真空干燥的真空度为0.02-0.08MPa。
其中的过滤可以是采用反渗透膜进行过滤处理，也可以是采用超滤膜进行过滤处理，还可以是采用纳滤膜进行过滤处理；除此之外，过滤还可以是采用多种过滤技术相结合的方式进行的过滤，如先采用纳滤膜进行纳滤处理之后，再将其采用超滤膜进行超滤处理，超滤处理完成之后，再采用反渗透膜技术进行反渗透膜过滤处理，并且在处理过程中，可以将环境条件控制在超临界状态下进行，并且通过实验证明，在超临界环境中进行处理获得的改性蓝莓花青素的各项性能优于一般环境中进行的，尤其是抗氧化性能的提高。
同时，本发明中采用的氮气的量为足以达到保护目的时即可，进而降低了氮气的用量，降低了成本；而氮气的最佳用量为混合溶液量的0.7-1.1倍摩尔量。
本发明在制得改性的蓝莓花青素后，采用KBr压片法，利用傅里叶变换红外光谱仪对蓝莓花青素和酚酸酰化花青素进行红外光谱扫描，波长范围从400～4000cm-1，分辨率在2cm-1，将得到的谱图进行比较和鉴别，进而得出如图2所示的比较结果，进而达到对改性后的蓝莓花青素和原始的蓝莓花青素的区分对比。
再采用HPLC，对酚酸酰化花青素的酰化度进行测定。将酚酸酰化的花青素溶于质量分数10％的氢氧化钠溶液中，水解完全后，采用HPLC标品对照法测定水解液中酚酸含量，并计算酚酸酰化度。可以得知其酰化度达到了53-70％，可见其酰化度较高。
本发明还进行了改性后的蓝莓花青素分别进行1，1-二苯基-2-苦基苯肼清除(DPPH)、超氧阴离子清除(O2-·)、羟自由基清除(·OH)、H2O2清除、金属离子络合、抗油脂氧化、抗卵磷脂过氧化等实验来判定酚酸酰化花青素的自由基清除和抗氧化性能。并且得出，改性后的蓝莓花青素对自由基的清除功能和抗氧化性能均得到较大程度的提高，并且改性后的蓝莓花青素的稳定性能得到显著的提高。
本发明中的水洗是每进行过滤一次，就进行2-3次水洗。
本发明还提供一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法制得的改性蓝莓花青素的应用，改性蓝莓花青素应用于食品、保健品、化妆品、医药领域。
与现有技术相比，本发明的技术效果体现在：
本发明通过对酚酸试剂进行制备，再将酚酸试剂对蓝莓花青素进行改性处理，酰化度较高，使得酰化度达到了53-70％；并且整个工艺流程短，工艺参数易于控制，原料易得，反应条件温和，无污染物排放，进而制作的成本较低；使得改性后的蓝莓花青素对自由基的清除功能得到显著的增强，进而增强了蓝莓花青素的抗氧化性能，提高了蓝莓花青素的稳定性，能够被广泛应用于食品、保健品、化妆品、医药等领域。
附图说明
图1为本发明的蓝莓花青素抗氧化性能增强的流程示意图。
图2为本发明的蓝莓花青素抗氧化性能增强的前后的红外光谱图。
1-未通过性能改性处理的蓝莓花青素处理结果；
2-通过性能改性处理的蓝莓花青素处理结果。
图3为本发明的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法的蓝莓花青素对自由基清除效果与传统的采用Vc清除自由基和未经过改性处理的蓝莓花青素清除自由基的结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
如图1所示，一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步骤：
(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1：1：1进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用50r/min的搅拌速度进行搅拌处理20min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水氯化亚砜按照摩尔比为1：1进行混合，并在氮气存在的30℃的温度下采用搅拌速度为80r/min搅拌反应1h，再采用非质子溶剂重结晶处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将其置于冰浴中，并向其中采用50r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧化钠溶液，并持续搅拌3h，调节PH值为7，获得酚酸试剂；
(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为3：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为3的三乙胺，搅拌速度为70，在30℃下搅拌反应2h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值为1，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花青素。
所述的酚酸为水杨酸。
所述的非质子溶剂是二氯甲烷。
所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为30％的精制物。
所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。
所述的氢氧化钠溶液的质量分数为20％。
所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1倍。
所述的盐酸的质量分数为10％。
所述的真空干燥的真空度为0.02MPa。
实施例2
如图1所示，一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步骤：
(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1：6：6进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用70r/min的搅拌速度进行搅拌处理30min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水氯化亚砜按照摩尔比为1：5进行混合，并在氮气存在的100℃的温度下采用搅拌速度为100r/min搅拌反应24h，再采用非质子溶剂重结晶处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1.5倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将其置于冰浴中，并向其中采用80r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧化钠溶液，并持续搅拌5h，调节PH值为9，获得酚酸试剂；
(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为8：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为8的三乙胺，搅拌速度为80r/min，在60℃下搅拌反应10h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值为3，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花青素。
所述的酚酸为原儿茶酸。
所述的非质子溶剂是甲苯。
所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为50％的精制物。
所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。
所述的氢氧化钠溶液的质量分数为30％。
所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1.5倍。
所述的盐酸的质量分数为15％。
所述的真空干燥的真空度为0.08MPa。
实施例3
如图1所示，一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，包括以下步骤：
(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1：3：3进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用60r/min的搅拌速度进行搅拌处理25min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水氯化亚砜按照摩尔比为1：3进行混合，并在氮气存在的50℃的温度下采用搅拌速度为90r/min搅拌反应12h，再采用非质子溶剂重结晶处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1.3倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将其置于冰浴中，并向其中采用70r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧化钠溶液，并持续搅拌4h，调节PH值为8，获得酚酸试剂；
(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为7的三乙胺，搅拌速度为75r/min，在40℃下搅拌反应7h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值为4，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花青素。
所述的酚酸为焦儿茶酸。
所述的非质子溶剂是三氯甲烷。
所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为40％的精制物。
所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。
所述的氢氧化钠溶液的质量分数为25％。
所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1.1倍。
所述的盐酸的质量分数为13％。
所述的真空干燥的真空度为0.05MPa。
实施例4
如图1所示，将无水尼泊金酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：1.2：1.2的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例1的步骤1)得到乙酰化的尼泊金酸。按1：1.5的摩尔比将乙酰化的尼泊金酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，50℃搅拌回流反应3小时，减压旋蒸，用二氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的尼泊金酰氯。按实施例1的步骤(1)得到尼泊金酰氯。在氮气保护下，将制备得到的尼泊金酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，35℃回流反应5小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为2，过滤，水洗，真空干燥，得到尼泊金酰化花青素。
采用KBr压片法，利用傅里叶变换红外光谱仪对蓝莓花青素和尼泊金酰化花青素进行红外光谱扫描，波长范围从4000～400cm-1，分辨率在2cm-1，将得到的谱图进行比较和鉴别。见附图2，其特征峰：3450左右为芳香环和糖基上的羟基伸缩振动峰，2925左右为亚甲基伸缩振动峰，1780左右为羰基伸缩振动峰，1620、1520、1440左右为苯环和杂环骨架结构的伸缩振动峰，1320、1200、1180左右为C-O-C基团的伸缩振动峰，这些都证明：尼泊金酰化花青素的合成是成功的。
利用HPLC，对尼泊金酰化花青素的酰化度进行测定。将尼泊金酰化的花青素溶于质量分数10％的氢氧化钠溶液中，在氮气保护下，室温搅拌水解完全后，采用HPLC标品对照法测定水解液中尼泊金酸含量，以飞燕草素-3-O-葡萄糖苷中酚羟基全部酰化时定位酰化度100％。计算尼泊金酰化度为70％。
将制备得到的尼泊金酰化花青素进行DPPH(1，1-二苯基-2-苦基苯肼)清除实验，其半抑制浓度(IC50)为19.5μg/mL。采用紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素及尼泊金酰化花青素和抗坏血酸的DPPH清除效率见附图3。通过比较可知，尼泊金酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的DPPH清除能力。
实施例5
将无水原儿茶酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：2.5：2.5的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例2的步骤(1)得到乙酰化的原儿茶酸。按1：2.5的摩尔比将乙酰化的原儿茶酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，70℃搅拌回流反应5小时，减压旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的原儿茶酰氯。按实施例2的步骤(1)得到原儿茶酰氯。在氮气保护下，将制备得到的原儿茶酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为5：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为5的三乙胺，45℃回流反应4小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为3.5，过滤，水洗，真空干燥，得到原儿茶酸酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算原儿茶酸酰化度为59％。采用紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素及其衍生物和抗坏血酸的超氧阴离子(O2-·)清除效果，它们的半抑制浓度(IC50)分别为27.8μg/mL、16.8μg/mL、51.5μg/mL。可见，原儿茶酸酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的O2-·清除能力。
实施例6
将无水没食子酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：3.5：3.5的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰化的没食子酸。按1：3.5的摩尔比将乙酰化的没食子酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，80℃搅拌回流反应3.5小时，减压旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的没食子酰氯。按实施例3的步骤(1)得到没食子酸酰氯。在氮气保护下，将制备得到的没食子酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，50℃回流反应3小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为2，过滤，水洗，真空干燥，得到没食子酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算没食子酰化度为65％。以Fe3+离子为实验对象，分别考察蓝莓花青素和没食子酰化花青素络合金属离子的能力。向5mL蓝莓花青素和没食子酰化花青素溶液中加入氯化铁试液，达到络合饱和时，Fe3+的用量分别为1.305mg和2.583mg，可见没食子酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的金属离子络合能力。
实施例7
将无水对香豆酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：2：2的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例1的步骤(1)得到乙酰化的对香豆酸。按1：1.5的摩尔比将乙酰化的对香豆酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，50℃搅拌回流反应2小时，减压旋蒸，用二氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的对香豆酰氯。按实施例1的步骤(1)得到对香豆酰氯。在氮气保护下，将制备得到的对香豆酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，40℃回流反应4小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为3，过滤，水洗，真空干燥，得到对香豆酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算对香豆酰化度为66％。按照GB5009.37-2003《食用植物油卫生标准的分析方法》分别考察蓝莓花青素和对香豆酰化花青素的油脂抗氧化能力。每隔24小时取样分析它们的过氧化值(POV,meq/kg)，得出与蓝莓花青素相比，对香豆酰化花青素对不饱和油脂的抗氧化作用得到明显提高。
实施例8
将无水咖啡酸、无水乙酸酐、无水吡啶按按1：2.5：2.5的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰化的咖啡酸。按1：2的摩尔比将乙酰化的咖啡酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，50℃搅拌回流反应4小时，减压旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的咖啡酰氯。按实施例3的步骤(1)得到咖啡酰氯。在氮气保护下，将制备得到的咖啡酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6.5：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为6.5的三乙胺，50℃回流反应8小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为2.5，过滤，水洗，真空干燥，得到咖啡酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算咖啡酸酰化度为64％。利用铁离子诱导卵磷脂脂质体过氧化模型，进行蓝莓花青素、咖啡酰化花青素和抗坏血酸的抗氧化活性评价，得出它们抑制脂质过氧化的IC50值分别218.9、165.3、1075.5μg/mL。可见咖啡酰化花青素具有很强的抑制脂质过氧化活性。
实施例9
将无水2,3,4-三羟基苯甲酸、无水乙酸酐、无水吡啶按按1：4.5：4.5的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例2的步骤(1)得到2,3,4-三乙酰化的苯甲酸。按1：5的摩尔比将2,3,4-三乙酰化的苯甲酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，90℃搅拌回流反应8小时，减压旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到2,3,4-三乙酰化的苯甲酰氯。按实施例2的步骤(1)得到2,3,4-三羟基苯甲酰氯。在氮气保护下，将制备得到的2,3,4-三羟基苯甲酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为6：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为6的三乙胺，55℃回流反应4小时，减压蒸出二氧六环和吡啶，加适量稀盐酸调pH为2.5，过滤，水洗，真空干燥，得到2,3,4-三羟基苯甲酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算2,3,4-三羟基苯甲酸酰化度为36％。采用紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素及其衍生物的羟自由基(·OH)清除效果，它们的半抑制浓度(IC50)分别为2.68μg/mL和、1.80μg/mL。可见，2,3,4-三羟基苯甲酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的·OH清除能力。
实施例10
将无水水杨酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：2.1：2.1的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰化的水杨酸。按1：2.5的摩尔比将乙酰化的水杨酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，80℃搅拌回流反应5小时，减压旋蒸，用三氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的水杨酰氯。按实施例3的步骤(1)得到水杨酰氯。将制备得到的水杨酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为8：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为8的三乙胺，50℃回流反应10小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为3，过滤，水洗，真空干燥，得到水杨酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算水杨酸酰化度为59％。进行DPPH清除实验，测得蓝莓花青素及水杨酰化花青素DPPH的IC50分别为32.9μg/mL和24.1μg/mL。可知，水杨酰化花青素可明显提高蓝莓花青素的DPPH清除能力。
实施例11
将无水焦儿茶酸、无水乙酸酐、无水吡啶按1：3：3的摩尔比加入到放在冰水浴中的圆底烧瓶中，按实施例3的步骤(1)得到乙酰化的焦儿茶酸。按1：3的摩尔比将乙酰化的焦儿茶酸和无水氯化亚砜加入到圆底烧瓶中，氮气保护，80℃搅拌回流反应5小时，减压旋蒸，用二氯甲烷洗涤产物，室温下真空干燥，得到乙酰化的焦儿茶酰氯。按实施例3的步骤(1)得到焦儿茶酰氯。将制备得到的焦儿茶酰氯与蓝莓花青素按照摩尔比为5：1加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为5的三乙胺，55℃回流反应5小时，减压蒸出二氧六环和三乙胺，加适量稀盐酸调pH为3，过滤，水洗，真空干燥，得到焦儿茶酸酰化花青素。
参照实施例4进行结构鉴定，计算焦儿茶酸酰化度为53％。采用紫外可见分光光度计测定蓝莓花青素、焦儿茶酸酰化花青素和抗坏血酸的H2O2清除效果，它们的IC50分别为2.60μg/mL、1.83μg/mL、12.0μg/mL。可见，焦儿茶酸酰化花青素可显著提高蓝莓花青素的H2O2清除能力。
在此有必要指出的是，上述实施例和实验处理结果仅限于对本发明的技术方案和本发明的技术方案所能够达到的技术效果做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本领域技术人员在此基础上做出的非突出的实质性特征和非显著进步的改进，均属于本发明的保护范畴。

Claims (10)

1.一种蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)酚酸试剂制备：将无水酚酸、乙酸酐、吡啶按照摩尔比为1：(1-6)：(1-6)进行混合，并在氮气存在的常温环境中采用50-70r/min的搅拌速度进行搅拌处理20-30min，获得乙酰化的酚酸；再将乙酰化的酚酸和无水氯化亚砜按照摩尔比为1：(1-5)进行混合，并在氮气存在的30-100℃的温度下采用搅拌速度为80-100r/min搅拌反应1-24h，再采用非质子溶剂重结晶处理，获得乙酰化的酚酸酰氯；再将乙酰化的酚酸酰氯与丙酮相溶，丙酮的量为乙酰化的酚酸酰氯的1-1.5倍的重量，并将其搅拌混合均匀后，再将其置于冰浴中，并向其中采用50-80r/min的搅拌速度边搅拌边滴加氢氧化钠溶液，并持续搅拌3-5h，调节PH值为7-9，获得酚酸试剂；
(2)蓝莓花青素改性处理：在氮气保护下，将步骤1)获得的酚酸试剂与蓝莓花青素按照摩尔比为1：(3-10)加入到二氧六环中，同时缓慢滴加摩尔比为(3-10)的三乙胺，搅拌速度为70-80r/min，在30-60℃下搅拌反应2-12h，对其进行减压蒸出二氧六环和三乙胺，再向其中加入盐酸调整PH值为1-4，并将其依次进行过滤、水洗、真空干燥，即可得到改性蓝莓花青素。
2.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的酚酸为水杨酸、尼泊金酸、原儿茶酸、焦儿茶酸、龙胆酸、没食子酸、对香豆酸、咖啡酸中的一种。
3.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的非质子溶剂是二氯甲烷、甲苯、四氯化碳、三氯甲烷中的一种。
4.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的蓝莓花青素为从蓝莓果或叶中提取精制得到纯度为30～50％的精制物。
5.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的冰浴，其温度为-3℃到0℃。
6.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的氢氧化钠溶液的质量分数为20-30％。
7.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的步骤2)中的二氧六环的用量为混合物的1-1.5倍。
8.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的盐酸的质量分数为10-15％。
9.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法，其特征在于，所述的真空干燥的真空度为0.02-0.08MPa。
10.如权利要求1所述的蓝莓花青素抗氧化性能增强方法制得的改性蓝莓花青素的应用，其特征在于，改性蓝莓花青素应用于食品、保健品、化妆品、医药领域。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107312354A (zh) * 2017-06-08 2017-11-03 青海大学 一种天然染料敏化剂黑枸杞色素的提取及其酰化的方法
CN109651323A (zh) * 2018-12-20 2019-04-19 长江师范学院 一种提高胭脂萝卜天竺葵素稳定性的方法
CN116949118A (zh) * 2023-07-24 2023-10-27 暨南大学 一种黑豆皮花色苷油酸酰化产物及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6474271A (en) * 1987-09-11 1989-03-20 Hidekazu Idaka Acylated anthocyanin
CN101747308A (zh) * 2009-12-24 2010-06-23 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 一种增强原花青素生物活性的分子修饰方法
US20110055963A1 (en) * 2004-10-29 2011-03-03 International Flower Developments Proprietary Limited Stabilization and blueing of anthocyanin pigments using gene encoding aromatic acyltransferase capable of transferring an aromatic acyl group to the 3'-position of anthocyanin
CN103435589A (zh) * 2013-09-17 2013-12-11 北京林业大学 一种提高蓝莓花青素稳定性的处理方法
CN103833718A (zh) * 2013-04-24 2014-06-04 新乡医学院 原花青素衍生物的制备方法和应用
CN103958614A (zh) * 2011-11-28 2014-07-30 科·汉森有限公司 花青素基着色剂

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6474271A (en) * 1987-09-11 1989-03-20 Hidekazu Idaka Acylated anthocyanin
US20110055963A1 (en) * 2004-10-29 2011-03-03 International Flower Developments Proprietary Limited Stabilization and blueing of anthocyanin pigments using gene encoding aromatic acyltransferase capable of transferring an aromatic acyl group to the 3'-position of anthocyanin
CN101747308A (zh) * 2009-12-24 2010-06-23 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 一种增强原花青素生物活性的分子修饰方法
CN103958614A (zh) * 2011-11-28 2014-07-30 科·汉森有限公司 花青素基着色剂
CN103833718A (zh) * 2013-04-24 2014-06-04 新乡医学院 原花青素衍生物的制备方法和应用
CN103435589A (zh) * 2013-09-17 2013-12-11 北京林业大学 一种提高蓝莓花青素稳定性的处理方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
左玉等: "花青素稳定性研究进展", 《粮食与油脂》 *
李路宁: "蓝莓花青素的没食子酰化及其活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 *
李路宁等: "蓝莓花青素的酰化及其抗氧化性评价", 《食品工业科技》 *
李颖畅: "酰基化蓝莓话色苷的稳定性和对氧自由基清除能力", 《食品工业科技》 *
赵立仪等: "酰基化蓝莓花青素的稳定性研究", 《食品工业科技》 *
顾林等: "花青素的生物合成和成色机理及提高其稳定性的途径", 《食品工业科技》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107312354A (zh) * 2017-06-08 2017-11-03 青海大学 一种天然染料敏化剂黑枸杞色素的提取及其酰化的方法
CN109651323A (zh) * 2018-12-20 2019-04-19 长江师范学院 一种提高胭脂萝卜天竺葵素稳定性的方法
CN116949118A (zh) * 2023-07-24 2023-10-27 暨南大学 一种黑豆皮花色苷油酸酰化产物及其制备方法
CN116949118B (zh) * 2023-07-24 2024-02-20 暨南大学 一种黑豆皮花色苷油酸酰化产物及其制备方法

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