CN104663436A - 一种红镜的组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红镜的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域，它包括外植体灭菌，初代培养，继代培养和生根培养的步骤。本发明建立了组培快繁体系，使用的培养基配方简单，操作方便，红镜繁殖系数较高，能快速获得无菌健壮红镜苗，为红镜的工业化育苗及其深加工提供了技术支持。

Description

一种红镜的组培快繁方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种组培方法，具体涉及一种红镜的组培快繁方法。
背景技术
红镜（Acer palmatum‘Beni Kagami’）是槭树科槭属鸡爪槭的一个变种。根据地域及遮阴情况的不同，春天叶子颜色由橙红色到紫红色，但没有像其他红叶品种那样呈黑红色，在较阴凉环境中生长的叶子带绿色色调；秋天叶子呈光亮的深红色。红镜生长健壮，形成展开的乔木，树形优美，成龄株高达8m。红镜作为视觉效果较好的鸡爪槭新品种，具有很高的观赏价值，可用于庭院、池畔、道路中央隔离带造景，公园绿化、城市景观等。但是红镜的数量少，自然繁殖率低，现在一般采用扦插和嫁接两种方式繁殖，扦插繁殖受季节限制且不易生根，繁殖速度慢，繁殖率低，后期管理流程繁琐，扦插苗成活率低，难以规模化生产；嫁接繁殖其生长周期长，难以满足市场的需求，不易获得经济效益。
因此，如何提高红镜的繁殖效率并保持红镜的优良特性成为红镜资源供应需要解决的一个关键技术。植物组织培养是植物规模化生产的一种快速高效繁殖方法。目前关于鸡爪槭的组培技术，如专利申请号201310338739.9涉及一种鸡爪槭组培快繁新方法，它包括以下步骤：S1. 切取外植体：采集鸡爪槭幼嫩茎段，切割成2～3cm 长的茎段；S2. 灭菌：将外植体放入超净工作台，用酒精和升汞灭菌；S3.启动培养：将灭菌后的外植体接种于启动培养基中培养，启动培养基为WPM+GA30.1mg/L+TDZ0.05mg/L+ 蔗糖30g/L+ 琼脂5g/L ；S4. 生根培养：选取经启动培养后茎长为1～2cm 的鸡爪槭带芽茎段，将腋芽切下后转移至生根培养基中进行培养，生根培养基为1/2WPM+NAA0.05mg/L+ 蔗糖25g/L+ 琼脂5g/L。但目前尚没有关于红镜组培的报道，因此，急需对红镜组培快繁技术研究，建立红镜组培快繁体系获得红镜组培苗。
发明内容
本发明利用组织培养技术进行红镜外植体培养获得红镜组培苗，提供了一种红镜的组培快繁方法，组培所用培养基配方简单，组培流程简便，操作方便，繁殖系数较高，为红镜的工厂化育苗及其深加工提供了技术支持。
本发明采用植物的组织培养技术，利用红镜茎段外植体诱导腋芽生成，再诱导腋芽生成丛生芽增殖，切割丛生芽生根。
本发明的目的通过以下技术方案实现：一种红镜的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：取红镜无病虫害的幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2～3cm带芽茎段，放置在超净工作台上，用70～80%酒精灭菌8～12s,0.1～0.2%升汞灭菌8～12min，无菌水冲洗4～6次；
（2）初代培养：将灭菌的带芽茎段接种到初代培养基中，在培养室内培养2～3周，腋芽伸长2～4cm；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室内培养3～4周，丛生芽生成，株高2.5～4.0cm，增殖系数为2～4；
（4）生根培养：选取生长健壮的丛生芽，将其切成单芽茎段转接到生根培养基中，在培养室内培养2～3周，得到生根的无菌健壮红镜苗。
进一步地，所述的初代培养基为nitsch基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.3～6.7。
进一步地，所述的继代培养基为nitsch基本培养基+0.1mg/LNAA+0.5mg/LTDZ+ 0.1mg/LZT + 200mg/L CH+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.3～6.7。
进一步地，所述的生根培养基为1/2nitsch基本培养基+0.01mg/LIBA+0.05mg/LNAA。
进一步地，步骤（2）、步骤（3）和步骤（4）中所述的培养室内条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h/d，温度24～28℃。
本发明具有以下有益效果：本发明建立了组培快繁体系，使用的培养基配方简单，培养流程简便，操作方便，提高了红镜繁殖的效率，繁殖系数较高为2～4，能快速获得遗传性状一致的无菌健壮红镜苗；本发明利用组织培养技术，进行外植体培养获得了无菌健壮红镜苗，不受季节气候变化、自然灾害的影响，为红镜的工业化育苗及其深加工提供了技术支持。
附图说明
图1为本发明所述的启动培养中腋芽萌发；
图2为本发明所述的增殖培养中生成的丛生芽；
图3为本发明所述的生根培养得到的无菌健壮红镜苗；
图4为本发明所述的生根培养得到的无菌健壮红镜苗的根系。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1：一种红镜的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：取红镜无病虫害的幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2cm带芽茎段，放置在超净工作台上，用70%酒精灭菌8s,0.1%升汞灭菌12min，无菌水冲洗6次；
（2）初代培养：将灭菌的带芽茎段接种到初代培养基中，在培养室内培养2周，腋芽伸长2cm，其中，初代培养基为：nitsch基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.3；培养室内条件为：光照强度2000LX，光照时间18h/d，温度24℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室内培养3周，丛生芽生成，株高2.5cm，增殖系数为2，其中，继代培养基为：nitsch基本培养基+0.1mg/LNAA+0.5mg/LTDZ+ 0.1mg/LZT + 200mg/L CH+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.3；培养室内条件与步骤（2）中培养室内条件一致；
（4）生根培养：选取生长健壮的丛生芽，将其切成单芽茎段转接到生根培养基中，在培养室内培养2周，得到生根的无菌健壮红镜苗，其中，生根培养基为：1/2nitsch基本培养基+0.01mg/LIBA+0.05mg/LNAA，培养室内条件与步骤（2）、步骤（3）中培养室内条件一致。
实施例2：一种红镜的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：取红镜无病虫害的幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成3cm带芽茎段，放置在超净工作台上，用80%酒精灭菌12s,0.2%升汞灭菌8min，无菌水冲洗4次；（2）初代培养：将灭菌的带芽茎段接种到初代培养基中，在培养室内培养3周，腋芽伸长4cm，其中，初代培养基为：nitsch基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.7；培养室内条件为：光照强度3000LX，光照时间14h/d，温度28℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室内培养4周，丛生芽生成，株高4.0cm，增殖系数为4，其中，继代培养基为：nitsch基本培养基+0.1mg/LNAA+0.5mg/LTDZ+ 0.1mg/LZT + 200mg/L CH+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.7；培养室内条件与步骤（2）中培养室内条件一致；
（4）生根培养：选取生长健壮的丛生芽，将其切成单芽茎段转接到生根培养基中，在培养室内培养3周，得到生根的无菌健壮红镜苗，其中，生根培养基为：1/2nitsch基本培养基+0.01mg/LIBA+0.05mg/LNAA，培养室内条件与步骤（2）、步骤（3）中培养室内条件一致。
实施例3：一种红镜的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：取红镜无病虫害的幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2.3cm带芽茎段，放置在超净工作台上，用73%酒精灭菌10s,0.13%升汞灭菌10min，无菌水冲洗5次；
（2）初代培养：将灭菌的带芽茎段接种到初代培养基中，在培养室内培养16天，腋芽伸长2.8cm，其中，初代培养基为：nitsch基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.4；培养室内条件为：光照强度2300LX，光照时间16h/d，温度25℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室内培养24天，丛生芽生成，株高3.2cm，增殖系数为2.8，其中，继代培养基为：nitsch基本培养基+0.1mg/LNAA+0.5mg/LTDZ+ 0.1mg/LZT + 200mg/L CH+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.4；培养室内条件与步骤（2）中培养室内条件一致；
（4）生根培养：选取生长健壮的丛生芽，将其切成单芽茎段转接到生根培养基中，在培养室内培养16天，得到生根的无菌健壮红镜苗，其中，生根培养基为：1/2nitsch基本培养基+0.01mg/LIBA+0.05mg/LNAA，培养室内条件与步骤（2）、步骤（3）中培养室内条件一致。
实施例4：一种红镜的组培快繁方法，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：取红镜无病虫害的幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2.8cm带芽茎段，放置在超净工作台上，用76%酒精灭菌11s,0.18%升汞灭菌10min，无菌水冲洗5次；
（2）初代培养：将灭菌的带芽茎段接种到初代培养基中，在培养室内培养18天，腋芽伸长3.5cm，其中，初代培养基为：nitsch基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.6；培养室内条件为：光照强度2600LX，光照时间15h/d，温度27℃；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室内培养26天，丛生芽生成，株高3.5cm，增殖系数为3.2，其中，继代培养基为：nitsch基本培养基+0.1mg/LNAA+0.5mg/LTDZ+ 0.1mg/LZT + 200mg/L CH+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.6；培养室内条件与步骤（2）中培养室内条件一致；
（4）生根培养：选取生长健壮的丛生芽，将其切成单芽茎段转接到生根培养基中，在培养室内培养18天，得到生根的无菌健壮红镜苗，其中，生根培养基为：1/2nitsch基本培养基+0.01mg/LIBA+0.05mg/LNAA，培养室内条件与步骤（2）、步骤（3）中培养室内条件一致。
从实施例1～4得出：本发明利用植物组织培养技术，建立组培快繁体系，所用的培养基配方简单，增殖系数为2～4，能在短时间得到大量的无菌健壮红镜苗。

Claims (5)

1.一种红镜的组培快繁方法，其特征在于，它包括以下步骤：
（1）外植体灭菌：取红镜无病虫害的幼嫩茎段，去掉叶片，将茎段切割成2～3cm带芽茎段，放置在超净工作台上，用70～80%酒精灭菌8～12s，0.1～0.2%升汞灭菌8～12min，无菌水冲洗4～6次； 
（2）初代培养：将灭菌的带芽茎段接种到初代培养基中，在培养室内培养2～3周，腋芽伸长2～4cm；
（3）继代培养：将腋芽切下接种到继代培养基中，在培养室内培养3～4周，丛生芽生成，株高2.5～4.0cm；
（4）生根培养：选取生长健壮的丛生芽，将其切成单芽茎段转接到生根培养基中，在培养室内培养2～3周，得到生根的无菌健壮红镜苗。
2.根据权利要求1所述的一种红镜的组培快繁方法，其特征在于，所述的初代培养基为nitsch基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.3～6.7。
3.根据权利要求1所述的一种红镜的组培快繁方法，其特征在于，所述的继代培养基为nitsch基本培养基+0.1mg/LNAA+0.5mg/LTDZ+0.1mg/LZT+200mg/LCH+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH 6.3～6.7。
4.根据权利要求1所述的一种红镜的组培快繁方法，其特征在于，所述的生根培养基为1/2nitsch基本培养基+0.01mg/LIBA+0.05mg/LNAA。
5.根据权利要求1所述的一种红镜的组培快繁方法，其特征在于，步骤（2）、步骤（3）和步骤（4）中所述的培养室内条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h/d，温度24～28℃。
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