CN104662024A - 酪氨酸激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了根据式I的化合物：其中所有变量如本文所述所定义，其抑制Btk。本文公开的化合物用于调控Btk的活性，并治疗与过度Btk活性相关的疾病。化合物进一步被用于治疗与异常B-细胞增殖作用相关的炎性和自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎。还公开了包含式I化合物和至少一种载体、稀释剂或赋形剂的组合物。

Description

酪氨酸激酶抑制剂
发明领域
本发明涉及抑制Btk并且可以用于治疗由异常B-细胞活化导致的自身免疫疾病和炎性疾病的新化合物的用途。
发明背景
蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一并且通过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许多不同的信号传导过程(T.Hunter，Cell 1987 50：823-829)。特别地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白质在酪氨酸残基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异常的激酶活性已经涉及许多人类疾病，包括癌症、自身免疫病症和炎性疾病。由于蛋白质激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目标，并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激酶介导的疾病过程的治疗，激酶活性的选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传导过程和鉴定其它具有治疗意义的细胞靶标。
关于B细胞在自身免疫和/或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良好的证据。消耗B细胞的基于蛋白质的治疗剂如Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿性关节炎是有效的(Rastetter等人Annu Rev Med2004 55：477)。因此，在B-细胞活化中发挥作用的蛋白质激酶的抑制剂应该是对于B细胞介导的疾病病理如自身抗体生成的有用的治疗剂。
通过B-细胞受体(BCR)的信号传导控制一系列B细胞应答，包括增殖和分化到成熟的抗体生成细胞。BCR是B-细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可以导致失调的B-细胞增殖和病原性自身抗体的形成，其导致多种自身免疫疾病和/或炎性疾病。酪氨酸蛋白激酶(Btk)是在BCR的膜近端和紧接下游的非-BCR相关的激酶。Btk的缺乏已经显示阻断BCR信号传导，并且因此Btk的抑制可以是阻断B细胞介导的疾病过程的有用的治疗方法。
Btk是酪氨酸激酶Tec家族的成员，并且显示是早期B细胞形成以及成熟B细胞活化和存活的关键调节剂(Khan等人Immunity1995 3：283；Ellmeier等人J.Exp.Med.2000 192：1611)。人中的Btk突变导致病症X染色体连锁性无γ球蛋白血症(XLA)(Rosen等人New Eng.J.Med.1995333：431和Lindvall等人Immunol.Rev.2005 203：200中综述)。这些患者是免疫受损的，并且显示受损的B细胞成熟，降低的免疫球蛋白和外周B细胞水平，减少的不依赖T细胞的免疫应答以及在BCR刺激后的减弱的钙动员。
关于Btk在自身免疫病症和炎性疾病中的作用的证据已经由Btk-缺陷型小鼠模型提供。在系统性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性(Jansson和Holmdahl Clin.Exp.Immunol.1993 94：459)。已经证明选择性Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功效(Z.Pan等人，Chem.Med Chem.2007 2：58-61)。
Btk还由除了B-细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如，Btk由肥大细胞表达并且Btk缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱导的脱粒(Iwaki等人J.Biol.Chem.2005 280：40261)。这显示Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如变态反应和哮喘。此外，其中缺乏Btk活性的来自XLA患者的单核细胞显示在刺激后减少的TNFα生成(Horwood等人JExp Med 197：1603，2003)。因此，TNFα介导的炎症可以由小分子Btk抑制剂调节。此外，已经报道Btk在细胞凋亡中发挥作用(Islam和SmithImmunol.Rev.2000 178：49)，并且因此Btk抑制剂对于治疗某些B-细胞淋巴瘤和白血病将是有用的(Feldhahn等人J.Exp.Med.2005 201：1837)。
发明概述
本申请提供式I的Btk抑制剂化合物，它的使用方法，如本文下面所述：
本申请提供式I的化合物，
其中：
A是苯基或哌啶基；
R1各自独立地是卤素、低级烷基、CH2NHC(＝O)R1’、CH2N(CH3)C(＝O)R1’、CH2NHC(＝O)CH2NHR1’、CH2R1’或CH2NHR1’；
n是0、1或2；
R1’是苯基、不饱和或部分不饱和双环或单环杂芳基或杂环烷基，其任选地被一个或多个R1”取代；
R1”各自独立地是低级烷基、卤素、环烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、氧代、氰基低级烷基、羟基低级烷基或低级烷氧基；
R2是H、R3或R4；
R3是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’；
R3’是H、低级烷基、杂环烷基、氨基或OH；
R4是低级烷基或杂芳基，其任选地被一个或多个R4’取代；且
R4’是羟基、氨基、OC(＝O)CH2CH3或C(＝O)OH；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供式I的化合物，
其中：
A是苯基或哌啶基；
R1各自独立地是卤素、低级烷基、CH2NHC(＝O)R1’、CH2N(CH3)C(＝O)R1’、CH2NHC(＝O)CH2NHR1’、CH2R1’或CH2NHR1’；
n是0、1或2；
R1’是苯基、不饱和或部分不饱和双环或单环杂芳基或杂环烷基，其任选地被一个或多个R1”取代；
R1”各自独立地是低级烷基、卤素、环烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、氧代、氰基低级烷基、羟基低级烷基或低级烷氧基；
R2是H、R3或R4；
R3是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’；
R3’是H、低级烷基、杂环烷基、氨基或OH；
R4是低级烷基或杂芳基，其任选地被一个或多个R4’取代；且
R4’是甲基、羟基、氨基、CH2-CH2N(CH3)2、OC(＝O)CH2CH3、CH2C(＝O)OH、CH2CH2OH或C(＝O)OH；
或其药学上可接受的盐。
本申请提供了用于治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I的化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
发明详述
定义
如本文使用的，短语“一(a)”或“一(an)”种实体是指一种或多种该实体；例如，一种化合物指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一种(a)”(或“一种(an)”)，“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中可交换使用。
短语“如上文所定义”是指如说明书概述或最宽权利要求中提供的每个基团的最宽定义。在下面提供的所有的其它实施方案中，可以在每个实施方案中存在并且没有明确定义的取代基保留在发明概述中提供的最宽定义。
如在此说明书中使用的，不管在过渡性短语中或在权利要求的主体中，术语″包含″和″包括″应当被解释为具有开放式的含义。即，该术语应当被解释为与短语″至少具有″或″至少包括″同义。当在方法的上下文中使用时，术语″包含″是指该方法至少包括所述的步骤，但是可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语″包含″是指该化合物或组合物至少包括所述的特征或组分，但是还可以包括另外的特征或组分。
如本文中所用的，除非另外具体指出，单词″或″的使用是“和/或”的“包括”意思，而不是“或/或”的“排它”意思。
本文中使用的术语″独立地″是指变量被用于任何一种情况，而不考虑在相同的化合物内存在或不存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R″出现两次并且被定义为″独立地为碳或氮″的化合物中，两个R″可以是碳，两个R″可以是氮，或者一个R″可以是碳并且另一个是氮。
在描绘或描述本发明中采用的或要求保护的化合物的任何部分或式中，任何变量出现多于一次时，其在每一次出现时的定义独立于其在每一次另外出现时的定义。此外，取代基和/或变量的组合只有在这些化合物导致稳定的化合物的情况下才是允许的。
在键末端处的符号″＊″或划过键的″------″分别是指官能团或其它化学部分与其作为一部分的分子的余下部分的连接点。因此，例如：
MeC(＝O)OR4其中或
划入环体系中的键(与在明确的顶点处连接相反的)是指该键可以连接到任何适宜的环原子。
如本文中所用的术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可以、但不是必须发生，并且是指该描述包括事件或情形发生的情况，和它不发生的情况。例如，“任选取代的”是指任选取代的部分可以结合氢原子或取代基。
短语“任选的键”是指该键可以存在或可以不存在，并且是指该描述包括单键、双键或叁键。如果取代基被指定为是″键″或″不存在″，则连接到该取代基上的原子直接连接。
本文使用的术语″约″是指大致地、在...的附近、粗略地或大约。当术语″约″与一个数值范围一起使用时，它通过将边界延伸高于和低于所列出的数值而改变该范围。通常，本文使用的术语″约″将数值改变到高于和低于所述的值20％的方差。
式I的某些化合物可以显示出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可以相互转化的物种存在。质子转移的互变异构体由共价结合的氢原子在两个原子之间的迁移得到。互变异构体通常存在着平衡并且分离单个互变异构体的尝试通常制备出其化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮如乙醛的情况下，酮形式占优势，而在酚类中，烯醇形式占优势。常见的质子转移的互变异构体包括酮/烯醇 酰胺/亚氨酸和脒互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中是特别常见的，并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。
本文使用的技术和科学术语具有本发明所属技术领域内的技术人员所通常理解的含义，除非另外定义。本文参考本领域技术人员已知的各种方法和材料。列出药理学的通用原理的标准参考作品包括Goodman和Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGrawHill Companies Inc.，new York(2001)。可以将本领域技术人员已知的任何适宜材料和/或方法用于实施本发明。但是，描述的是优选的材料和方法。在下面的说明和实施例中涉及的材料、试剂等可获自商业来源，除非另外指出。
本文所述的定义可以被附加以形成化学上相关的组合，如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”是指具有1至2个苯基取代基的烷基，并且因此包括苄基、苯基乙基和联苯。“烷基氨基烷基”是具有1至2个烷基氨基取代基的烷基。“羟基烷基″包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2，3-二羟基丁基、2-(羟甲基)、3-羟基丙基等。因而，如本文中所用的，术语“羟基烷基”用来定义下面定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未取代的烷基或芳烷基。术语(杂(hetero))芳基或(杂(het))芳基是指芳基或杂芳基。
如本文中所用的术语“螺环烷基”是指螺环的环烷基，诸如，例如，螺[3.3]庚烷。如本文中所用的术语螺杂环烷基是指螺环的杂环烷基，诸如，例如，2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷。
如本文中所用的术语“酰基”表示式-C(＝O)R的基团，其中R是氢或如本文中定义的低级烷基。如本文中所用的术语″烷基羰基″表示式-C(＝O)R的基团，其中R是如本文中定义的烷基。术语C1-6酰基是指基团-C(＝O)R含1-6个碳原子。如本文中所用的术语″芳基羰基″表示式C(＝O)R的基团，其中R是芳基；如本文中所用的术语″苯甲酰基″是其中R是苯基的″芳基羰基″。
如本文中所用的术语“酯”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R是如本文所定义的低级烷基。
如本文中所用的术语“烷基”表示含有1至10个碳原子的非支链或支链的饱和一价烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文中所用的″C1-10烷基″是指由1至10个碳构成的烷基。烷基的实例包括，但不限于低级烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”表示基团R′R″-，其中R′是苯基，并且R″是如本文中定义的亚烷基，其中理解的是苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但是不限于苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或″芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′是芳基。术语″(杂)芳基烷基″或″(杂)芳烷基″被类似地解释，不同之处在于R′任选是芳基或杂芳基。
术语“卤代烷基”或“卤代-低级烷基”或“低级卤代烷基”是指含1至6个碳原子的直链或支链烃残基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″亚烷基(alkylene或alkylenyl)″表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如(CH2)n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH2CH(i-Pr)CH2-)，除非另外指出。除了在亚甲基的情况下之外，亚烷基的开放价态不连接到相同的原子上。亚烷基的实例包括但是不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1，1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。
如本文中所用的术语″烷氧基″表示-O-烷基，其中烷基如上定义，诸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文中所用的″低级烷氧基″表示具有如上面定义的″低级烷基″基团的烷氧基。如本文中所用的″C1-10烷氧基″是指-O-烷基，其中烷基是C1-10。
术语“PCy3”是指被三个环状部分三取代的膦。
术语“卤代烷氧基”或“卤代-低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指低级烷氧基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
如本文中所用的术语″羟基烷基″表示如本文中定义的烷基，其中在不同碳原子上的1至3个氢原子被羟基替代。
如本文中所用的术语″烷基磺酰基″和″芳基磺酰基″是指式-S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，并且烷基和芳基如本文中定义。如本文中所用的术语“杂烷基磺酰基”表示式-S(＝O)2R的基团，其中R是如本文中定义的“杂烷基”。
如本文中所用的术语″烷基磺酰氨基″和″芳基磺酰氨基″是指式-NR′S(＝O)2R的基团，其中R分别是烷基或芳基，R′是氢或C1-3烷基，并且烷基和芳基如本文中所定义。
如本文中所用的术语“环烷基”是指含有3至8个碳原子的饱和碳环，即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。如本文中所用的″C3-7环烷基″是指由在碳环中的3至7个碳构成的环烷基。
如本文中所用的术语羧基-烷基是指烷基部分，其中一个氢原子已经被羧基替代，其中应理解，杂烷基的连接点是通过碳原子。术语“羧基(carboxy或carboxyl)”是指-CO2H部分。
如本文中所用的术语″杂芳基”或″杂芳族″是指5至12个环原子的单环或双环基团，其具有至少一个芳族或部分不饱和的环，每个环含有4至8个原子，结合有一个或多个N、O或S杂原子，其余环原子是碳，其中理解的是杂芳基的连接点将在芳族或部分不饱和的环上。如本领域中技术人员周知的，杂芳基环比它们的全碳副本具有更低的芳族特性。因此，对于本发明而言，杂芳基只需要具有一定程度的芳族特性。杂芳基部分的实例包括具有5至6个环原子和1至3个杂原子的单环芳族杂环，包括但不限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噁嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、4，5-二氢-噁唑基、5，6-二氢-4H-[1，3]噁唑基、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑啉、噻二唑和噁二唑啉(oxadiaxoline)，它们可以任选被1个或多个，优选1或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氰基、烷基、烷氧基、硫代、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、硝基、烷氧基羰基和氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基。双环部分的实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、萘啶基、5，6，7，8-四氢-[1，6]萘啶基和苯并异噻唑。双环部分可以在任一环上任选取代，但是连接点在含有杂原子的环上。
如本文中所用的术语″杂环基″、″杂环烷基″或″杂环″表示由一个或多个环，优选1至2个环(包括螺环系统)组成的一价饱和环状基团，每个环3至8个原子，其结合有一个或多个环杂原子(选自N、O或S(O)0-2)，并且其可以任选独立地被一个或多个，优选1个或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、羟基烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基及其离子形式，除非另外指出。杂环基的实例包括但不限于吗啉基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、六氢氮杂基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噁唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、奎宁环基和咪唑啉基及其离子形式。实例还可以是双环的，诸如，例如，3，8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2，5-二氮杂-双环[2.2.2]辛烷或八氢-吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪。
Btk抑制剂
本申请提供了式I化合物，
其中：
A是苯基或哌啶基；
R1各自独立地是卤素、低级烷基、CH2NHC(＝O)R1’、CH2N(CH3)C(＝O)R1’、CH2NHC(＝O)CH2NHR1’、CH2R1’或CH2NHR1’；
n是0、1或2；
R1’是苯基、不饱和或部分不饱和双环或单环杂芳基或杂环烷基，其任选地被一个或多个R1”取代；
R1”各自独立地是低级烷基、卤素、环烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、氧代、氰基低级烷基、羟基低级烷基或低级烷氧基；
R2是H、R3或R4；
R3是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’；
R3’是H、低级烷基、杂环烷基、氨基或OH；
R4是低级烷基或杂芳基，其任选地被一个或多个R4’取代；且
R4’是甲基、羟基、氨基、CH2-CH2N(CH3)2、OC(＝O)CH2CH3、CH2C(＝O)OH、CH2CH2OH或C(＝O)OH；
或其药学上可接受的盐。
此外，应理解，涉及如本文公开的具体残基A、R1、R1`、R1``、R2、R3、R3`、R4和R4`的每个实施方案可以与涉及本文公开的另一种残基A、R1、R1`、R1``、R2、R3、R3`、R4和R4`的任意其它实施方案组合。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，且n是1。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是卤素，R2是H，且n是1。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是卤素。
本申请提供了式I的化合物，其中R2是H，且n是2。
本申请提供了式I的化合物，其中R2是H，n是2，且一个R1是卤素。
本申请提供了式I的化合物，其中R2是H，n是2，一个R1是低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是CH2NHC(＝O)R1’。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是CH2NHC(＝O)CH2NHR1’。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是CH2NHR1’。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是CH2NHC(＝O)R1’，R2是H，且n是1。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是CH2NHC(＝O)CH2NHR1’，R2是H，且n是1。
本申请提供了式I的化合物，其中R1是CH2NHR1’，R2是H，且n是1。
本申请提供了式I的化合物，其中n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R2是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’。
本申请提供了式I的化合物，其中n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R2是低级烷基或杂芳基。
本申请提供了式I的化合物，其中R1’是叔丁基或卤素。
本申请提供了式I的化合物，其中R1’是叔丁基或卤素，R1是CH2NHC(＝O)R1’，R2是H，且n是1。
本申请提供了式I的化合物，其中一个R1是氟，且R1’是叔丁基。
本申请提供了式I的化合物，其中一个R1是氟，且R1’是叔丁基，n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R2是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’。
本申请提供了式I的化合物，其中一个R1是氟，且R1’是叔丁基，n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R2是低级烷基或杂芳基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是哌啶基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是哌啶基，且n＝1。
本申请提供了式I的化合物，其中A是哌啶基，n＝1，且R1是CH2NHC(＝O)R1’。
本申请提供了式I的化合物，其中A是哌啶基，n＝，R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个R1``取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是哌啶基，n＝，R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个低级烷基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是哌啶基，n＝，R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R1`是苯基，其任选地被叔丁基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，且n＝1或2。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1或2，且一个R1是CH2NHC(＝O)R1’。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是卤素，且R1`是苯基、不饱和或部分不饱和双环或单环杂芳基或杂环烷基，其任选地被一个或多个R1``取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个R1``取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是卤素，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个低级烷基、卤素、环烷基或杂环烷基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是卤素，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个低级烷基或卤素取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个低级烷基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是卤素，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个甲基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是杂芳基，其任选地被甲基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是任选地被甲基取代的吡唑基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，R1是CH2NHC(＝O)R1’，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，R1是CH2NHC(＝O)R1’，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是吡唑基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，R1是CH2NHC(＝O)R1’，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是吡唑基，其任选地被一个或多个甲基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，R1是CH2NHC(＝O)R1’，R1`是苯基，其任选地被一个或多个叔丁基取代，且R4是任选地被甲基取代的吡唑基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个卤素、低级烷基或环烷基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是苯基，其任选地被一个或多个Cl、叔丁基或环丙基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，且R4＝杂芳基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，且R4＝杂芳基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝1，且R4＝杂芳基，其任选地被一个或多个甲基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，n＝2，且R4＝杂芳基，其任选地被一个或多个甲基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，且R1是CH2NHC(＝O)R1’。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是卤素。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是苯基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，且R1``是低级烷基或环烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，且R1``是叔丁基或环丙基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是苯基，且R1``是叔丁基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是不饱和或部分不饱和单环杂芳基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，且R1`是不饱和或部分不饱和双环杂芳基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和单环杂芳基，且R1``是低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和双环杂芳基，且R1``是低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和单环杂芳基，R1``是低级烷基，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和双环杂芳基，R1``是低级烷基，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个R4`取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和单环杂芳基，R1``是低级烷基，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个甲基、羟基、氨基、CH2-CH2N(CH3)2、OC(＝O)CH2CH3、CH2C(＝O)OH、CH2CH2OH或C(＝O)OH取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和双环杂芳基，R1``是低级烷基，且R4是杂芳基，其任选地被一个或多个甲基取代。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和双环杂芳基，R1``是低级烷基，且R4是任选地被甲基取代的杂芳基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且另一个是F，R1`是不饱和或部分不饱和双环杂芳基，R1``是低级烷基，且R4是任选地被甲基取代的吡唑基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，且n＝1。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝1，且R1是卤素或低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝1，且R1是Cl、F或甲基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，且n＝2。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，且一个R1是卤素，且另一个是低级烷基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，且一个R1是Cl或F，且另一个是甲基。
本申请提供了式I的化合物，其中A是苯基，R2是H，n＝2，且两个R1均为甲基。
本申请提供了式I的化合物，其选自：
4-(4-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(2-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3-氟-4-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-对-甲苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3-氯-4-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-叔丁基-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺；
3-氯-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺；
2-(3-氯-苯基氨基)-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-乙酰胺；
4-叔丁基-N-[2-氟-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯；
4-(4-((4-叔丁基苯甲酰氨基)甲基)-3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸；
4-叔丁基-N-(2-氟-4-(6-(吗啉-4-羰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)苯甲酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸二甲基酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸甲基酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(2-二甲基氨基-乙基)-酰胺；
4-叔丁基-N-{1-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌啶-4-基甲基}-苯甲酰胺；
4-叔丁基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4-环丙基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4-异丙基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺；
4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
6-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-烟酰胺；
5-甲基-噻吩-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
4-叔丁基-N-(2-氟-4-{6-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-苄基)-苯甲酰胺；
4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-N-甲基-苯甲酰胺；
5-甲基-噻吩-2-甲酸{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-酰胺；
2-叔丁基-5-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯6-酮；
5-叔丁基-异噁唑-3-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-苯甲酰胺；
4-(氰基-二甲基-甲基)-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯甲酰胺；
3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
3-叔丁氧基-氮杂环丁烷-1-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
4-叔丁基-N-(4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基)-苯甲酰胺；
3-叔丁氧基-氮杂环丁烷-1-甲酸4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基酰胺；
1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基酰胺；
[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸乙酯；
[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸；
N-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺；
5-叔丁基-异噁唑-3-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
3-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯；和
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺。
本申请提供了治疗炎症和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了包含式I化合物的药物组合物。
本申请提供了药物组合物，其包含式I化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗炎症性障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗自身免疫障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
本申请提供了式I化合物在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物在治疗炎症和/或自身免疫病症的药物中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物在治疗类风湿性关节炎中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物在治疗哮喘中的用途。
本申请提供了如上所述的用于治疗炎症和/或自身免疫病症的化合物。
本申请提供了如上所述的用于治疗类风湿性关节炎的化合物。
本申请提供了如上所述的用于治疗哮喘的化合物。
本申请提供了如上所述的化合物、方法或组合物。
本申请提供了治疗炎症和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I’的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I’的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I’的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了抑制B-细胞增殖的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I’的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了抑制Btk活性的方法，包括施用式I’的任意一种的Btk抑制剂化合物，其中Btk抑制剂化合物在体外Btk活性生化测定中显示50微摩尔或以下的IC50。
在上述方法的一种变化形式中，Btk抑制剂化合物在体外Btk活性生化测定中显示100纳摩尔或以下的IC50。
在上述方法的另一种变化形式中，所述化合物在体外Btk活性生化测定中显示10纳摩尔或以下的IC50。
本申请提供了治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者共同施用治疗有效量的抗炎化合物与式I’的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者共同施用治疗有效量的抗炎化合物与式I’的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗淋巴瘤或BCR-ABL1+白血病细胞的方法，通过对有此需要的患者施用治疗有效量的式I’的Btk抑制剂化合物来进行。
本申请提供了药物组合物，其包含式I’的Btk抑制剂化合物与至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本申请提供了式I’化合物在制备用于治疗炎症性障碍的药物中的用途。
本申请提供了式I’化合物在制备用于自身免疫障碍的药物中的用途。
本申请提供了如上所述的化合物、方法或组合物。
化合物和制备
下表中提供了本发明包括的和本发明范围内的有代表性的化合物的实施例。提供这些实施例和制备能够使得本领域技术人员更清楚地理解和实施本发明。不应将它们视为限定本发明的范围，而仅是示例性的及其代表。
一般而言，本申请中使用的命名法基于AUTONOMTM v.4.0，即用于生成IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算化系统。如果在描述的结构与产生该结构的名称之间存在不一致，则描述的结构被赋予更多的权重。此外，如果结构或结构部分的立体化学未使用例如加粗或虚线表示，则该结构或结构部分被解释为包括其所有的立体异构体。
表I描述了式I化合物的实施例：
表I.
一般合成方案
可以通过本领域公知的方法制备本发明的化合物。用于合成这些化合物的适合的方法提供在实施例中。一般而言，可以根据下述合成路线之一制备本发明的化合物(方案1-5)。原料是商购的或可以通过本领域技术人员公知的方法合成。
方案1
可以根据方案1制备关注的式5和6的化合物，其中X是氟、氢或甲基，且R如上述式I的种类中所述。以商购的4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶1为原料，与硼酸酯2的Suzuki芳基-芳基偶合反应得到衍生物3。Suzuki芳基-芳基偶合反应条件综述在Modern Arene Chemistry 2002，53-106中。在进行该反应的过程中，可以使用Suzuki反应中常规的任意条件。一般而言，Suzuki偶合反应在过渡金属催化剂例如四(三苯膦)钯(0))、常规有机溶剂例如二甲氧基乙烷和弱无机碱例如碳酸钾的存在下进行。该反应在室温-约100℃的温度下进行1小时至几小时，条件是使用常规加热。该反应还可以通过微波照射进行，所述微波照射通常在较高温度下进行(例如160℃)，但时间较短(5-60min)。在反应过程中，还观察到甲苯磺酰基缺失。衍生物3中的叔丁氧基羰基(BOC)保护基易于在酸性条件下诸如三氟乙酸(TFA)和二氯甲烷(DCM)的混合物下被除去，生成游离胺衍生物4。该反应可以在室温下进行15分钟至3小时的反应时间。4与羧酸衍生物之间的偶合反应可以使用标准肽偶合试剂例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟-磷酸盐(HATU)、常规有机溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)和碱例如二异丙基乙胺(DIPEA)进行，得到化合物，例如5。还可以用于这种转化的偶合试剂清单可以在这种综述中确定(Chemical Review 2011，111，6557)。该反应可以在室温下进行1小时至几小时的反应时间。或者，可以使用1，1’-羰基二咪唑作为偶合试剂偶合游离胺4，以制备脲衍生物，例如6。该反应可以使用DMF在室温-90℃的温度下进行几小时。正如本领域技术人员所公知的，其它非甲苯磺酰基或BOC基团的保护基可以用于该方案(就主要参考文献而言，参见P.G.M.Wuts和T.W.Greene的Green’s Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley和Sons，2007)。
方案2
可以根据方案2制备关注的式13和14的化合物，其中X是氟、氢或甲基，且R如上述式I的种类中所述。如方案1中所述进行Suzuki芳基-芳基偶合。然而，使用较短的反应时间(30分钟)和在160℃在微波照射下加热，可以在那些条件下维持甲苯磺酰基保护基。在吡咯并嘧啶骨架的C-2上溴化可以使用1，2-二溴-四氯乙烷在强碱例如二异丙基氨基锂(LDA)的存在下进行，得到衍生物9。该反应可以在惰性溶剂例如四氢呋喃(THF)中在-78℃进行2小时至几小时的反应时间(WO2004/093812)。9与10之间的Suzuki偶合可以使用标准Suzuki条件进行。该反应在160℃在微波照射下使用更长的反应时间(60分钟)，在这种情况中，还除去了甲苯磺酰基保护基。制备衍生物13和14的随后的步骤如上所述。
方案3
方案3描述了例如23这样的化合物的合成。氨基甲酸酯15的氮上的甲基化可以使用强碱例如氢化钠(NaH)在碘甲烷和极性溶剂例如DMF的存在下进行。该反应在4℃至室温下进行2小时至几小时的反应时间。氨基甲酸酯16的钯催化的硼基化反应可以使用双(频哪酸)二硼17、适合的钯催化剂源例如1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯和乙酸钾进行(Journalof Organic Chemistry 1995，60，7508-7510)。该反应可以在适合的溶剂例如二噁烷、DMF或NMP中使用常规的加热或微波加热在90℃-150℃的温度下进行1小时至几小时。可以使用上述Suzuki偶合条件使4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶19与硼酸酯10偶合，得到衍生物20。类似地，使用相同标准条件进行18和20的偶合，得到21。制备衍生物23的随后的步骤如上所述。
方案4
可以根据方案4制备所关注的式33的化合物，其中R如对式I的种类中所定义。偶合配偶体27可以在2步中由商购原料制备。如上所述，可以使用标准偶合试剂在衍生物26中形成酰胺键。类似地，还可以使用标准条件在化合物27上引入硼酸酯官能团。衍生物30的合成已经描述在文献(WO2011/149827)中。27与30之间的Suzuki偶合可以在极性溶剂例如DME、二噁烷或DMF中在60℃-100℃的温度下使用常规加热方法进行1小时至几小时。微波加热可以相当地减少Suzuki偶合的反应时间(Current Organic Chemistry，2010，14，1050-1074)。通常，仅需要10-60分钟完成反应。化合物31上BOC基团的脱保护和随后的偶合反应在33上形成酰胺键如上所述。
方案5
可以根据方案5制备所关注的例如38这样的化合物。19与36之间的反应可以在极性质子溶剂例如乙醇中在碱例如DIPEA或三乙胺(TEA)的存在下进行。该反应可以在80℃下进行1小时至几小时的反应时间。随后导致制备化合物38的步骤如上所述。
药物组合物与施用
可以以广泛种类的口服施用剂型和载体配制本发明的化合物。口服施用可以是片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或混悬剂的形式。在其它施用途径中，当由包括持续(静脉内滴注)局部肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包含渗透增强剂)、含服、经鼻、吸入和栓剂施用的其它施用途径施用时，本发明的化合物是有效的。优选的施用方式通常是使用常规日服剂量方案进行口服，所述日服剂量方案可以根据痛苦的程度和患者对活性成分的反应进行调节。
本发明的一种化合物或多种化合物以及它们的药用盐，与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起可以被置于药物组合物和单位剂量的形式中。药物组合物和单位剂型可以包括常规比例的常用的成分，存在另外的活性化合物或要素，或不存在另外的活性化合物或要素，并且所述单位剂型可以包含与所意欲使用的日剂量范围相当的任何适合的有效量的活性成分。所述药物组合物可以以固体如片剂或填充胶囊、半固体、粉末剂、持续释放制剂或液体如溶液、混悬剂、乳剂、酏剂或填充胶囊使用，进行口服应用；或以用于直肠或阴道施用的栓剂形式使用；或以用于肠胃外使用的无菌可注射溶液的形式使用。典型的制剂包含约5％到约95％的一种活性化合物或多种活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”意欲包括活性化合物的固体和液体制剂并且本领域的技术人员将理解活性成分可以根据靶器官或组织并且根据需要的剂量和药物代谢动力学参数而以不同制剂存在。
术语“赋形剂”用于本文时指用于制备药物组合物的、通常是安全无毒并且没有生物学上或其它方面不适宜的化合物，并且包括可用于兽医使用以及人药物应用的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但是通常与一种或多种根据意欲施用的途径和标准的药物实践选择的适合的药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。
“药学上可接受的”是指其可以用于制备通常安全、无毒并且在生物学上和其它方面都没有不适宜的药物组合物，并且包括其对于兽医以及人类药物用途是可接受的。
活性成分的“药学上可接受的盐”形式也可以在开始赋予活性成分需要的药物代谢动力学性质，所述药物代谢动力学性质在非盐形式中是缺乏的，并且就其体内治疗活性而论，可能甚至正面影响活性成分的药效学。短语化合物的“药学上可接受的盐”指药物学上可接受的并且具有母体化合物的需要的药理活性的盐。所述盐包括：(1)酸加成盐，与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡糖庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成；或(2)当在母体化合物中存在的酸质子被金属离子例如碱金属离子、碱土离子或铝离子替换时形成的盐；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位形成的盐。
固体形式制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在粉末中，所述载体通常是细碎固体，其是与细碎活性成分的混合物。在片剂中，活性成分通常与具有必要的结合能力的载体以适合比例混合，并且被压制成需要的形状和大小。适合的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除了活性成分之外，固体形式的制剂可以包含着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、人工和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、溶解剂等。
液体制剂也适合于口服施用，包括液体制剂，包括乳剂、糖浆、酏剂、水溶液、水性混悬剂。这些包括意欲在即将使用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以以溶液形式例如以丙二醇水溶液的形式制备或可以包含乳化剂，如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。可以通过将活性成分溶解在水中并加入适合的着色剂、香料、稳定剂和增稠剂来制备水溶液。可以通过将细碎的活性成分与粘性物质如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠及其它的熟知的悬浮剂一起分散在水中来制备水性混悬剂。
本发明的化合物可以配制用于肠胃外施用(例如通过注射例如推注，或连续输注)并且可以以单位剂型在安瓿、预装注射器、小体积的输注液中或在多剂量容器中与加入的防腐剂一起存在。所述组合物可以采用这样的形式，如混悬剂、溶液或在油性或水性赋形剂中的乳剂形式，例如在水性聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如油酸乙酯)，并且可以包含配制剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，所述活性成分可以以粉末形式存在，所述粉末通过无菌分离灭菌固体获得或通过从溶液中冻干获得，其在使用前用适合的赋形剂例如无菌的无热原的水进行重构。
可以配制本发明的化合物，作为软膏、乳膏或洗剂，或作为透皮贴片用于给表皮的局部施用。软膏和乳膏例如可以用水性或油性基质，在加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂的情况下配制。洗剂可以用水性或油性基质配制，并且通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适宜于口中局部施用的制剂包括：锭剂，其在调味基质中包含活性成分，所述的调味基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；软锭剂，其在惰性基质中包含活性成分，所述的惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶；以及漱口药，其在适宜液体载体中包含活性成分。
可以将本发明的化合物配制作为栓剂施用。首先将低熔点蜡，如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，并且例如通过搅拌均匀分散活性成分。接着，将融化的均匀混合物倾入适宜尺寸的模具中，使其冷却并且固化。
可以将本发明的化合物配制用于阴道施用。阴道栓剂、棉球、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂除了活性成分外，还包含如本领域已知是合适的载体。
可以配制本发明的化合物用于经鼻施用。由常规装置例如用滴管、吸管或喷雾器将溶液剂或混悬剂直接应用至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸管的后一种情况下，这可以通过患者施用适宜的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。在喷雾器的情况下，这可以通过例如计量的雾化喷雾泵来实现。
可以配制本发明的化合物用于气雾剂施用，特别是对呼吸道施用，并且包括鼻内施用。该化合物通常具有小的粒子大小，例如约五(5)微米或更小。这样的粒子大小可以通过本领域中已知的方式获得，例如通过微粉化获得。将活性成分提供在具有适宜推进剂的加压容器中，所述的推进剂如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其它适宜的气体。气雾剂还可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀来控制。备选地，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适宜粉末基质中的粉末混合物，所述的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式存在，例如在如明胶的胶囊或药筒中，或泡眼包装中，这些包装中的粉末剂可以通过吸入器施用。
当需要时，可以用适合于活性成分的持续或控制释放施用的肠溶衣制备制剂。例如，本发明的化合物可以在透皮或皮下药物递送装置中配制。当所述化合物的持续释放是需要的时并且当患者顺应治疗方案是重要的时，这些递送系统是有利的。在透皮递送系统中的化合物经常附着于皮肤粘附性固体支持物。目的化合物还可以与渗透增强剂例如月桂氮酮(1-十二烷基氮杂-环庚-2-酮)组合。将持续释放递送系统通过外科手术或注射皮下插入皮下层。皮下植入物在脂溶性膜例如硅橡胶或可生物降解的聚合物例如聚乳酸(polyactic acid)中包封化合物。
在雷明顿：药物科学和实践(Remington：The Science和Practice ofPharmacv 1995，由E.W.Martin编辑，Mack出版公司，第19版，Easton，宾夕法尼亚州)中描述了适合的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂。有经验的制剂科学家可以在本发明说明书教导的范围内改变制剂以提供多种制剂，其用于施用的具体途径，而不使本发明的组合物不稳定或有损它们的治疗活性。
使本发明的化合物在水或其它赋形剂中的溶解度增高的修饰，例如可以容易地通过较小的修饰实现(形成盐，酯化等)，这都在本领域普通技能的范围内。也在本领域普通技能范围内的是，改变施用途径和具体化合物的剂量方案从而使本发明化合物的药物代谢动力学在患者中获得最大的有益效果。
用于本文时，术语″治疗有效量″是指减轻个体中的疾病的症状所需要的量。将在每个具体病例中，根据个体需要调整剂量。取决于多种因素，该剂量可以在广泛范围内改变，所述因素如待治疗的疾病的严重性，患者的年龄和一般健康状况，治疗患者的其它药物，施用的途径和形式，和涉及的执业医生的偏好和经验。对于口服施用，在每天约0.01-约1000mg/kg体重之间的日剂量应该在单一治疗和/或组合治疗情况中是适合的。优选的日剂量在每天约0.1-约500mg/kg体重之间，更优选在每天0.1-约100mg/kg体重之间，最优选在每天1.0-约10mg/kg体重/天之间。因此，对于给70kg的人施用，剂量范围是约7mg-0.7g/天。日剂量可以以单一剂量或以分剂量进行施用，典型地在1-5个剂量/天。一般而言，用比化合物的最佳剂量少的较小剂量开始治疗。随后，通过小增量增加剂量直到达到个体患者的最佳效果。治疗本文所述疾病的本领域普通技术人员能够不经过过度实验和根据个人的知识经验和本申请的公开内容来确定本发明化合物对于给定疾病和患者的治疗有效量。
药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式下，将制剂再分成含有适宜量的活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，如小包片剂、胶囊和在管瓶或安瓿中的粉剂。此外，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适宜数量的包装形式的这些中的任何一种。
适应症和治疗方法
式I的化合物抑制酪氨酸激酶(Btk)。上游激酶活化Btk导致磷脂酶-Cγ活化，由此刺激促炎介体释放。式I的化合物用于治疗关节炎和其它抗炎和自身免疫疾病。因此，式I的化合物用于治疗关节炎。式I的化合物用于抑制细胞中的Btk并且调节B-细胞发育。本发明还包含药物组合物，其包含式I的化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
本文所述的化合物是激酶抑制剂，特别是Btk抑制剂。这些抑制剂可用于在哺乳动物中治疗一种或多种对激酶抑制有应答的疾病，包括对Btk抑制和/或B-细胞增殖有应答的疾病。不希望束缚于任何具体理论，据信本发明化合物与Btk的相互作用导致Btk活性的抑制，并因此带来这些化合物的药物效用。因此，本发明包括治疗患有对Btk活性的抑制作用和/或B-细胞增殖作用有应答的哺乳动物、例如人的方法，其包括给具有此类疾病的哺乳动物施用有效量的至少一种本文提供的化学实体。有效浓度可以试验确定，例如通过测定化合物的血液浓度，或理论上，提供计算生物利用度。除了Btk以外其它可能受影响的激酶包括但不限于，其它酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。
激酶在控制基本细胞过程如增殖、分化和死亡(细胞凋亡)的信号传导路径方面起着显著的作用。异常的激酶活性已经暗示于各种疾病中，所述的疾病包括多种癌症、自身免疫和/或炎性疾病和急性炎性反应。激酶在关键细胞信号传导路径中的多面性作用提供识别靶向激酶和信号传导路径的新药物的显著机会。
一个实施方案包括治疗具有自身免疫和/或炎性疾病或响应Btk活性和/或B细胞增殖的抑制的急性炎性反应的患者的方法。
使用根据本发明的化合物和组合物可以影响的自身免疫和/或炎性疾病包括但不限于：银屑病、变态反应、克罗恩病、肠易激综合征、舍格伦病、组织移植物排斥反应和移植器官的超急性排斥反应、哮喘、系统性红斑狼疮(和相关的肾小球肾炎)、皮肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎(ANCA-相关的和其它的血管炎)、自身免疫溶血性和血小板减少性症状、古德帕斯综合征(和相关的肾小球肾炎和肺出血)、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、慢性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、脓毒性休克和重症肌无力。
本文中包括的是治疗方法，其中将本文中提供的至少一种化学实体与抗炎药组合施用。抗炎药包括但不限于：NSAID、非特异性和COX-2特异性环氧合酶酶抑制剂、金化合物、皮质类固醇类、甲氨蝶呤、肿瘤坏死因子受体(TNF)受体拮抗剂、免疫抑制剂和甲氨蝶呤。
NSAID的实例包括但不限于，布洛芬、氟比洛芬、萘普生和萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠和米索前列醇的组合、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、非诺洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺吡啶、托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂如塞来考昔、伐地考昔、芦米考昔和/或艾托考昔。
在一些实施方案中，抗炎药是水杨酸酯或盐。水杨酸酯或盐包括但不限于乙酰基水杨酸或阿斯匹林、水杨酸钠以及水杨酸胆碱和水杨酸镁。
抗炎药还可以是皮质类固醇类。例如，皮质类固醇类可以是可的松、地塞米松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠或泼尼松。
在另外的实施方案中，抗炎药是金化合物如硫代苹果酸金钠或金诺芬。
本发明还包括其中抗炎药是代谢抑制剂如二氢叶酸还原酶抑制剂如甲氨蝶呤或二氢乳清酸盐脱氢酶抑制剂如来氟米特的实施方案。
本发明的其它实施方案涉及其中至少一种抗炎化合物是抗-C5单克隆抗体(如依库珠单抗或培克珠单抗)、TNF拮抗剂如依那西普(entanercept)或英利昔单抗的组合，所述英利昔单抗是一种抗-TNFα单克隆抗体。
本发明的其它的实施方案涉及其中至少一种活性药是免疫抑制剂化合物如选自甲氨蝶呤、来氟米特、环胞素、他克莫司、硫唑嘌呤和吗替麦考酚酯中的免疫抑制剂化合物的组合。
表达BTK的B-细胞和B-细胞前体已经暗示于B细胞恶性的病理学中，B细胞恶性包括但不限于B细胞淋巴瘤、淋巴瘤(包括何杰金和非何杰金淋巴瘤)、毛细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性和急性髓细胞源性白血病和慢性和急性淋巴细胞白血病。
已经表明BTK是在B-系淋巴样细胞中Fas/APO-1(CD-95)死亡诱导信号传导复合物(DISC)的抑制剂。白血病/淋巴瘤细胞的命运可能在于由DISC活化的半胱天冬蛋白酶的反向前细胞凋亡作用和包括BTK和/或其底物的上游抗细胞凋亡调节机理之间的平衡(Vassilev等人，J.Biol.Chem.1998，274，1646-1656)。
还发现BTK抑制剂可以用作化学敏化剂，因此可以用于与其它化学治疗药组合，所述的化学治疗药特别是诱导细胞凋亡的药。可以与化学敏化BTK抑制剂组合使用的其它化学治疗药的实例包括拓扑异构酶I抑制剂(喜树碱或托泊替康)、拓扑异构酶II抑制剂(如道诺霉素和依托泊苷)、烷化剂(如环磷酰胺、美法仑和BCNU)、微管蛋白导向的药物(如泰素和长春碱)和生物制剂(例如抗体如抗CD20抗体、IDEC 8、免疫毒素和细胞因子)。
Btk活性还与一些表达由部分染色体9和22的易位导致的bcr-abl融合基因的白血病相关。这种异常通常在慢性髓细胞源性白血病中观察到。Btk由bcr-abl激酶组成型磷酸化，这引发在bcr-abl细胞中防止细胞凋亡的下游生存信号(N.Feldhahn等人J.Exp.Med.2005201(11)：1837-1852)。
治疗方法
本申请提供了治疗炎症和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗炎症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗类风湿性关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。
本申请提供了治疗炎症和/或自身免疫病症的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗哮喘的方法，包括对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了抑制B-细胞增殖的方法，包含对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了抑制Btk活性的方法，包含施用式I的任意一种的Btk抑制剂化合物，其中Btk抑制剂化合物在体外Btk活性生化测定中显示50微摩尔或以下的IC50。
在上述方法的一种变化形式中，Btk抑制剂化合物在体外Btk活性生化测定中显示100纳摩尔或以下的IC50。
在上述方法的另一种变化形式中，Btk抑制剂化合物在体外Btk活性生化测定中显示10纳摩尔或以下的IC50。
本申请提供了治疗炎性病症的方法，包括对有此需要的患者共同施用治疗有效量的抗炎化合物与式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗关节炎的方法，包括对有此需要的患者共同施用治疗有效量的抗炎化合物与式I的Btk抑制剂化合物。
本申请提供了治疗淋巴瘤或BCR-ABL1+白血病细胞的方法，通过对有此需要的患者施用治疗有效量的式I的Btk抑制剂化合物来进行。
实施例
一般条件
可以从商购原料开始、通过使用本领域技术人员公知的常规合成技术和方法制备本发明的化合物。下面的概述是适合于制备这样的化合物的反应方案。另外的示例可以在具体实施例中确定。
制备实施例
具体缩写
一般实验详细描述
试剂购自Aldrich、Oakwood、Matrix或其他供应商并且无需进一步纯化使用。使用加热用的微波照射的反应使用Personal Chemistry EmrysOptimizer System或CEM Discovery System进行。多-毫克至多-克规模的纯化通过本领域技术人员已知的方法进行，例如硅胶柱洗脱；在一些情况中还通过实验一次性的预填充多克硅胶柱(RediSep)进行制备型快速柱纯化，所述的一次性的预填充多克硅胶柱(RediSep)用CombiFlash系统洗脱。BiotageTM和ISCOTM也是可以用于本发明纯化中间体的快速柱仪器。
为了判断化合物身份和纯度的目的，使用如下系统记录LC/MS(液相色谱法/质谱法)光谱。为了测定质谱，系统由Micromass Platform II分光光度计组成：正模式ES电离(质量范围：150-1200)。同时发生的色谱分离使用如下HPLC系统进行：ES Industries Chromegabond WR C-183u(3.2x 30mm)柱；流动相A：水(0.02％TFA)和相B：乙腈(0.02％TFA)；梯度10％B-90％B，3分钟；平衡时间1分钟；流速2mL/分钟。
还通过反相HPLC、使用本领域技术人员众所周知的方法纯化式1的许多化合物。在一些情况中，使用控制Gilson 215采集器的PE Sciex 150EXMass Spec进行制备型HPLC纯化，所述Gilson 215采集器连接Shimadzu制备型HPLC系统和Leap自动注射器。使用阳离子检测中的LC/MS检测从洗脱流中采集化合物：使用适合的线性梯度模式在10分钟内从C-18柱上洗脱化合物(以20mL/min 2.0X 10cm洗脱)，溶剂(A)0.05％TFA/H2O和溶剂(B)0.035％TFA/乙腈。为了注射在HPLC系统上，将粗样品溶于甲醇、乙腈和DMSO的混合物。
通过1H-NMR、使用Bruker 400MHz NMR分光光度计表征化合物。
可以根据公知技术合成本发明的化合物。提供下列实施例和参考是为了有助于理解本发明。然而，这些实施例不预以限定本发明，其确切范围如待批权利要求中所举出。实施例中的终产物的名称使用Isis AutoNom2000生成。
制备实施例
实施例I-1
4-(4-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在10mL微波试管中，在2mL水中合并4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(200mg，1.3mmol，Eq：1.00)、4-氯苯基硼酸(204mg，1.3mmol，Eq：1.00)和碳酸钾(720mg，5.21mmol，Eq：4.00)与DME(4.00ml)。加入Pd(PPh3)4(78mg，0.068mmol)。将该反应混合物在160℃在微波中照射60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后蒸发。用DCM溶解粗物质，过滤。得到标题化合物，为绿色固体(90mg，30％收率)。LC/MS：m/z计算值C12H8ClN3([M+H]+)：230.6，测定值：230.1。
实施例I-2
4-(3-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
按照与实施例1类似的方法，使用3-氯苯基硼酸，可以得到标题化合物。
实施例I-3
4-(2-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
按照与实施例1类似的方法，使用2-氯苯基硼酸，可以得到标题化合物。
实施例I-4
4-(3-氟-4-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
按照与实施例1类似的方法，使用3-氟-4-甲基苯基硼酸，可以得到标题化合物。
实施例I-5
4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在10mL可密封微波试管中，在2mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(210mg，0.681mmol，Eq：1.00)、2，4-二甲基苯基硼酸(112mg，0.749mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(376mg，2.72mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(PPh3)4(79mg，0.068mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。
得到标题化合物，为固体(51mg，34％收率)。LC/MS：m/z计算值C14H13N3([M+H]+)：224.2，测定值：224.2。
实施例I-6
4-(3，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在10mL可密封微波试管中，在2mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(210mg，0.681mmol，Eq：1.00)、3，4-二甲基苯基硼酸(112mg，0.749mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(376mg，2.72mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(PPh3)4(79mg，0.0681mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为固体(17mg，11％收率)。LC/MS：m/z计算值C14H13N3([M+H]+)：224.2，测定值：224.2。
实施例I-7
4-对-甲苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在10mL可密封微波试管中，在2mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(210mg，0.681mmol，Eq：1.00)、对-甲苯基硼酸(102mg，0.749mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(376mg，2.72mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(PPh3)4(79mg，0.0681mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液，得到标题化合物，为固体(60mg，42％收率)。LC/MS：m/z计算值C13H11N3([M+H]+)：210.2，测定值：210.2。
实施例I-8
4-(3-氯-4-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在10mL可密封微波试管中，在2mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(210mg，0.681mmol，Eq：1.00)、3-氯-4-甲基苯基硼酸(128mg，0.749mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(376mg，2.72mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(PPh3)4(79mg，0.068mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在加热160℃60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。将粗物质与DCM一起研磨。过滤固体。得到标题化合物，为固体(14mg，8％收率)。LC/MS：m/z计算值C13H10ClN3([M+H]+)：244.7，测定值：244.2。
实施例I-9
4-叔丁基-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺
步骤1：[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯
在20mL可密封微波试管中，合并4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(500mg，3.26mmol，Eq：1.00)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(1.6g，4.8mmol，Eq：1.47)和碳酸钾(1.8g，13.0mmol，Eq：4.00)与DME(10mL)和水(5mL)。加入Pd(PPh3)4(376mg，0.326mmol，Eq：0.1)，将该反应混合物在150℃加热60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为固体(545mg，52％收率)。LC/MS：m/z计算值C18H20N4O2([M+H]+)：325.3，测定值：325.2。
步骤2：4-叔丁基-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，用2mL DCM和2mL TFA溶解4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.617mmol，Eq：1.00)。将该反应混合在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。用DMF(4mL)溶解粗物质。加入4-叔丁基苯甲酸(121mg，0.678mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.43mL，2.47mmol，Eq：4.00)和HATU(258mg，0.678mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。用EtOAc和水稀释该反应混合物，然后在室温搅拌30分钟。用盐水洗涤得到的溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。将粗物质与DCM一起研磨，过滤得到的固体，得到标题化合物，为固体(65mg，27％收率)。LC/MS：m/z计算值C24H24N4O([M+H]+)：385.4，测定值：385.1。
实施例I-10
3-氯-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺
按照与实施例9步骤2类似的方法，使用3-氯苯甲酸(96.5mg，0.617mmol，Eq：1.00)，得到标题化合物，为固体(45mg，20％收率)。LC/MS：m/z计算值C20H15ClN4O([M+H]+)：363.8，测定值：363.0。
实施例I-11
2-(3-氯-苯基氨基)-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-乙酰胺
步骤1：(3-氯-苯基氨基)-乙酸甲酯
在250mL圆底烧瓶中，合并溴乙酸甲酯(1.66g，1mL，10.9mmol，Eq：1.00)、3-氯苯胺(1.66g，1.4mL，13.0mmol，Eq：1.2)和DIPEA(1.9mL，10.9mmol，Eq：1.00)与DMF(20mL)，得到淡黄色溶液。将该反应混合物在60℃加热过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂，得到标题化合物(2.1g，97％收率)。LC/MS：m/z计算值C9H10ClNO2([M+H]+)：200.6，测定值：200.0。
步骤2：(3-氯-苯基氨基)-乙酸
在20mL闪烁小瓶中，在5mL H2O中合并(3-氯-苯基氨基)-乙酸甲酯(500mg，2.5mmol，Eq：1.00)和NaOH(500mg，12.5mmol，Eq：4.99)与EtOH(8mL)，得到淡黄色溶液。将该反应混合物在60℃加热4小时。用EtOAc稀释该反应混合物，用10％HCl水溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压蒸发，得到标题化合物，为棕色固体。LC/MS：m/z计算值C8H8ClNO2([M+H]+)：186.0，测定值：186.0。
步骤3：2-(3-氯-苯基氨基)-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-乙酰胺
按照与实施例9步骤2类似的方法、使用4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基氨基甲酸叔丁酯(345mg，1.06mmol，Eq：1.00)、2-(3-氯苯基氨基)乙酸(217mg，1.17mmol，Eq：1.1)、DIPEA(740mg，1mL，5.73mmol，Eq：5.38)和HATU(445mg，1.17mmol，Eq：1.1)，得到标题化合物，为固体(71mg，17％收率)。LC/MS：m/z计算值C21H18ClN5O([M+H]+)：392.8，测定值：392.1。
实施例I-12
4-叔丁基-N-[2-氟-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺
步骤1：[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯
在压力试管中，合并4-溴-2-氟苄基氨基甲酸叔丁酯(5g，16.4mmol)、双(频哪酸)二硼(6.26g，24.7mmol)和乙酸钾(4.84g，49.3mmol)与NMP(75.0mL)，得到淡黄色溶液。在氮气气氛中给该反应混合物脱气10分钟。加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯-钯(II)(722mg，0.986mmol)。将该反应混合物在100℃加热20小时。用水使该反应混合物猝灭，用DCM(3X100mL)萃取。用水、盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，120g，0％-30％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯(5.8g，100％)，为黄色油状物。
步骤2：[2-氟-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯
在10mL可密封微波试管中，在2mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(157mg，0.511mmol，Eq：1.00)、[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯(197mg，0.562mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(282mg，2.04mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(Ph3P)4(59.0mg，0.051mmol，Eq：0.1)，将该反应混合物在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释得到的溶液，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为固体(75mg，43％收率)。LC/MS：m/z计算值C18H19FN4O2([M+H]+)：343.3，测定值：343.3。
步骤3：4-叔丁基-N-[2-氟-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，用2mL DCM和2mL TFA溶解[2-氟-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶4-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.134mmol，Eq：1.00)。将该反应混合在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。用DMF(4mL)溶解粗物质。加入4-叔丁基苯甲酸(26mg，0.148mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.047mL，0.269mmol，Eq：4.00)和HATU(56mg，0.148mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。用EtOAc和水稀释该反应混合物，然后在室温搅拌30分钟。用盐水洗涤得到的溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。将粗物质与DCM一起研磨，过滤得到的固体，得到标题化合物，为固体(32mg，59％收率)。LC/MS：m/z计算值C24H23FN4O([M+H]+)：403.4，测定值：403.2。
实施例I-13
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯
步骤1：4-氯-5-羟基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯
向4，6-二氯嘧啶-5-甲醛(2g，11.3mmol，Eq：1.00)在EtOH(50mL)中的混悬液中加入2-氨基乙酸叔丁酯(1.48g，11.3mmol，Eq：1.00)，然后加入三乙胺(2.86g，3.94mL，28.3mmol，Eq：2.5)，在r.t.搅拌48h。减压除去溶剂。用二氯甲烷稀释粗物质，用水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，10-90％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(634mg，21％收率)，为白色固体。LC/MS：m/z计算值C11H14ClN3O([M+H]+)：272.7，测定值：272.1。
步骤2：4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯
在0℃向4-氯-5-羟基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(634mg，2.33mmol，Eq：1.00)在DMF(10mL)中的溶液中加入氢化钠(93.3mg，2.33mmol，Eq：1.00)，然后在r.t.搅拌1h。用水使反应停止，然后用NH4Cl和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-35％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(417mg，70.4％收率)，为白色固体。LC/MS：m/z计算值C11H12ClN3O([M+H]+)：254.6，测定值：254.1。
步骤3：N-(4-溴-2-氟-苄基)-4-叔丁基-苯甲酰胺
向冷却至0℃的(4-溴-2-氟苯基)甲胺(1.5g，7.35mmol，Eq：1.00)在DCM(25mL)中的溶液中加入4-叔丁基苯甲酰氯(1.45g，7.35mmol，Eq：1.00)、三乙胺1.49g，2.05mL，14.7mmol，Eq：2.00)在DCM(5mL)中的溶液。将该反应混合物温至r.t.1hr。通过柱色谱法纯化该反应混合物(硅胶，5-40％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(2.59g，7.11mmol，96.7％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.74(d，J＝8.0Hz，2H)，7.48(d，J＝8.5Hz，2H)，7.35(t，J＝7.5Hz，1H)，6.48(s，1H)，4.67(d，J＝5.7Hz，2H)，1.36(s，9H)。
步骤4：4-叔丁基-N-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-苯甲酰胺
向在搅拌下在N2气氛中的N-(4-溴-2-氟苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(600mg，1.65mmol，Eq：1.00)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(627mg，2.47mmol，Eq：1.5)、乙酸钾(485mg，4.94mmol，Eq：3)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(121mg，165μmol，Eq：0.1)的混合物中加入NMP(12mL)，加热至100℃16h。用EtOAc稀释该反应混合物，用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，15-60％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(545mg，80％收率)，为黄白色固体。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.74(d，J＝8.3Hz，2H)，7.75(d，J＝7.4Hz，1H)，7.51(d，J＝10.4Hz，1H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H)，7.44(t，J＝7.0Hz，1H)，6.46(s，1H)，4.74(d，J＝5.9Hz，2H)，1.37(s，12H)，1.36(s，9H)。
步骤5：4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯
向4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(100mg，0.394mmol，Eq：1.00)、4-叔丁基-N-(2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基)苯甲酰胺(162mg，0.394mmol，Eq：1.00)、四(三苯膦)钯(0)(46mg，0.04mmol，Eq：0.1)和碳酸钾(163mg，1.18mmol，Eq：3.00)的混合物中加入DME(1mL)和水(500μL)，在微波中在150℃加热30min。通过硅藻土垫过滤该反应混合物，用二氯甲烷稀释。通过柱色谱法纯化该溶液(硅胶，15-60％乙酸乙酯的己烷溶液，然后是0-30％[10％甲醇/二氯甲烷]的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物(80mg，40％收率)，为黄白色固体。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 10.93(s，1H)，9.18(s，1H)，7.94(t，J＝9.3Hz，2H)，7.80(d，J＝8.5Hz，2H)，7.68(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，1H)，7.39(s，1H)，6.67(t，J＝5.9Hz，1H)，4.83(d，J＝5.8Hz，2H)，1.69(s，9H)，1.37(s，9H)；LC/MS：m/z计算值C29H31FN4O3([M+H]+)：503.5，测定值：503.3。
实施例I-14
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸
向4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(55mg，0.109mmol，Eq：1.00)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入三氟乙酸(843μL，10.9mmol，Eq：100)，在r.t.搅拌2h。真空浓缩从甲醇除去溶剂(3x)，得到标题化合物(43mg，88％收率)，为浅棕色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.05(s，1H)，9.10(t，J＝5.9Hz，1H)，8.98(s，1H)，8.06(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝11.2Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，2H)，7.59(t，J＝7.6Hz，1H)，7.54(m，3H)，4.64(d，J＝5.6Hz，2H)，1.33(s，9H)；LC/MS：m/z计算值C25H23FN4O3([M+H]+)：447.4，测定值：447.2。
实施例I-15
4-叔丁基-N-(2-氟-4-(6-(吗啉-4-羰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)苯甲酰胺
向4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(50mg，0.112mmol，Eq：1.00)、HBTU(42.5mg，0.112mmol，Eq：1.00)和DIPEA(59μl，0.336mmol，Eq：3)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入吗啉(19.5mg，0.224mmol，Eq：2.00)，在室温搅拌16h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-5％甲醇的二氯甲烷溶液，然后是50-100％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(26mg，45％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.96(s，1H)，7.74(m，2H)，7.71(d，J＝8.4Hz，2H)，7.58(t，J＝8.2Hz，1H)，7.41(d，J＝8.4Hz，1H)，6.91(s，1H)，4.71(s，1H)，3.81(br.s，4H)，3.72(br.s，4H)，1.27(s，9H)。
实施例I-16
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸二甲基酰胺
向4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(50mg，0.112mmol，Eq：1.00)、HBTU(42.5mg，0.112mmol，Eq：1.00)和DIPEA(59μl，0.336mmol，Eq：3.00)在DMF(1mL)中的溶液中加入二甲胺的THF溶液(112μl，0.224mmol，Eq：2.00)，在室温搅拌16h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，50-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度)，得到标题化合物(18mg，34％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δppm 12.78(s，1H)，9.10(t，J＝5.8Hz，1H)，8.92(s，1H)，8.04(d，J＝8.0Hz，1H)，7.96(d，J＝11.6Hz，1H)，7.89(d，J＝8.6Hz，2H)，7.56(t，J＝7.9Hz，1H)，7.53(d，J＝8.3Hz，2H)，7.23(s，1H)，4.62(s，2H)，3.26(br.s，3H)，3.06(br.s，3H)，1.32(s，9H)；LC/MS：m/z计算值C27H28FN5O2([M+H]+)：474.5，测定值：474.3。
实施例I-17
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]-6-甲酸甲基酰胺
向4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(50mg，0.112mmol，Eq：1.00)、HBTU(42.5mg，0.112mmol，Eq：1.00)和DIPEA(43mg，59μl，0.336mmol，Eq：3.00)在DMF(1.00mL)中的溶液中加入甲胺的THF溶液(112μl，0.224mmol，Eq：2.00)，在室温搅拌16h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，50-100％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(25mg，48.6％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.82(s，1H)，9.11(t，J＝5.7Hz，1H)，8.92(s，1H)，8.70(d，J＝4.8Hz，1H)，8.01(d，J＝7.8Hz，1H)，7.93(d，J＝11.6Hz，1H)，7.89(d，J＝8.7Hz，2H)，7.61(s，1H)，7.59(t，J＝8.1Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，2H)，4.64(d，J＝5.4Hz，2H)，2.84(d，J＝4.5Hz，3H)，1.32(s，9H)；LC/MS：m/z计算值C26H26FN5O2([M+H]+)：460.5，测定值：460.3。
实施例I-18
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
向4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(50mg，0.112mmol，Eq：1.00)、HBTU(42.5mg，0.112mmol，Eq：1.00)和DIPEA(59μl，0.336mmol，Eq：3.00)在DMF(1.00mL)中的溶液中加入2-氨基乙醇(14mg，0.224mmol，Eq：2.00)，在室温搅拌16h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，50-100％乙酸乙酯的己烷溶液，然后是包含NH4OH的0-10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物(16mg，29％收率)，为黄白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.80(s，1H)，9.10(t，J＝5.6Hz，1H)，8.92(s，1H)，8.73(t，J＝6.4Hz，1H)，8.03(d，J＝8.6Hz，1H)，7.95(d，J＝11.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，2H)，7.69(s，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.53(d，J＝8.2Hz，2H)，4.64(d，J＝6.0Hz，2H)，3.55(t，J＝5.2Hz，2H)，3.38(m，2H)，1.32(s，9H)；LC/MS：m/z计算值C27H28FN5O3([M+H]+)：490.5，测定值：490.4。
实施例I-19
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(2-二甲基氨基-乙基)-酰胺
向冷却至0℃的4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(50mg，0.112mmol，Eq：1.00)、N1，N1-二甲基乙-1，2-二胺(10mg，0.112mmol，Eq：1.00)和DIPEA(49μl，0.280mmol，Eq：2.5)在DMF(1.00mL)中的溶液中加入1-丙膦酸环酸酐(80μl，0.134mmol，Eq：1.2)，温至r.t.4h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(包含NH4OH的0-15％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物(25mg，43％收率)，为黄白色固体。1H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δppm8.93(s，1H)，7.97(d，J＝8.1Hz，1H)，7.91(d，J＝11.0Hz，1H)，7.86(d，J＝8.5Hz，2H)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.56(d，J＝8.5Hz，2H)，4.76(s，2H)，3.75(t，J＝6.1Hz，2H)，3.22(m，2H)，2.84(s，6H)，1.38(s，9H)；LC/MS：m/z计算值C29H33FN6O2([M+H]+)：517.6，测定值：517.4。
实施例I-20
4-叔丁基-N-{1-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌啶-4-基甲基}-苯甲酰胺
步骤1：4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，4.67mmol，Eq：1.00)在DCM(16.7ml)中的溶液中加入4-叔丁基苯甲酰氯(918mg，4.67mmol，Eq：1.00)、三乙胺(361μl，4.67mmol，Eq：1.00)在DCM(5mL)中的溶液。将该反应混合物温至r.t.1h。通过柱色谱法纯化该反应混合物(30-70％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(1.75g，4.67mmol，100％收率)，为无色粘性油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.73(d，J＝8.5Hz，2H)，7.48(d，J＝8.1Hz，2H)，6.21(s，1H)，4.15(d，J＝12.9Hz，2H)，3.39(t，J＝6.0Hz，2H)，2.72(t，J＝14.7Hz，2H)，1.83(m，1H)，1.76(d，J＝14.3Hz，2H)，1.48(s，9H)，1.36(s，9H)。
步骤2：4-叔丁基-N-哌啶-4-基甲基-苯甲酰胺
向4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.75g，4.67mmol，Eq：1.00)在DCM(35mL)中的溶液中加入三氟乙酸(7.2mL，93.5mmol，Eq：20)，在r.t.搅拌4h。减压除去溶剂，真空干燥，得到标题化合物(2.92g，124％收率)，为粘性无色油状物。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.72(br.s，3H)，7.71(d，J＝8.5Hz，2H)，7.49(d，J＝8.5Hz，2H)，6.81(t，J＝6.7Hz，1H)，3.56(d，J＝12.8Hz，2H)，3.46(t，J＝6.4Hz，2H)，3.01(q，J＝11.7Hz，2H)，2.02(d，J＝14.3Hz，2H)，1.69(q，J＝14.1Hz，2H)，1.36(s，9H)。
步骤3：N-[1-(7-苯磺酰基-6-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌啶-4-基甲基]-4-叔丁基-苯甲酰胺
向4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(200mg，0.477mmol，Eq：1.00)在EtOH(3.00mL)中的混悬液中加入4-叔丁基-N-哌啶-4-基甲基-苯甲酰胺(185mg，477μmol，Eq：1.00)和三乙胺(332μl，2.38mmol，Eq：5.00)，加热至80℃2h。将该反应混合物冷却至r.t.。形成沉淀，过滤出来。通过柱色谱法纯化滤液(硅胶，20-80％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(159mg，51％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.37(s，1H)，8.25(d，J＝8.21Hz，2H)，7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.63(t，J＝8.1Hz，1H)，7.54(t，J＝7.6Hz，2H)，7.47(d，J＝8.5Hz，2H)，6.96(s，1H)，6.28(s，1H)，4.61(d，J＝12.4Hz，2H)，3.40(t，J＝6.3Hz，2H)，3.09(t，J＝13.3Hz，2H)，2.03(m，1H)，1.91(d，J＝13.3Hz，2H)，1.36(s，9H)。
步骤4：N-{1-[7-苯磺酰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌啶-4-基甲基}-4-叔丁基-苯甲酰胺
向N-[1-(7-苯磺酰基-6-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-哌啶-4-基甲基]-4-叔丁基-苯甲酰胺(159mg，0.242mmol，Eq：1.00)、1-甲基-1H-吡唑-4-基硼酸(36.5mg，0.290mmol，Eq：1.2)、Pd(PPh3)4(28mg，0.024mmol，Eq：0.1)和碳酸钾(100mg，0.725mmol，Eq：3.00)的混合物中加入DME(1.29ml)/水(322μl)，在微波中加热至150℃1h。用DCM稀释该反应混合物，用水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，30-100％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物(85mg，58％收率)，为白色固体。LC/MS：m/z计算值C33H37N7O3S([M+H]+)：612.7，测定值：612.4。
步骤5：4-叔丁基-N-{1-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌啶-4-基甲基}-苯甲酰胺
向N-{1-[7-苯磺酰基-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌啶-4-基甲基}-4-叔丁基-苯甲酰胺(85mg，0.139mmol，Eq：1.00)在THF(926μl)/MeOH(463μl)中的溶液中加入碳酸铯(136mg，0.417mmol，Eq：3.00)，在r.t.搅拌16h。通过柱色谱法纯化该反应混合物(硅胶，包含NH4OH的1-6％甲醇的DCM溶液)，得到标题化合物(45mg，68.7％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.95(s，1H)，8.45(t，J＝5.4Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.93(s，1H)，7.80(d，J＝7.9Hz，2H)，7.49(d，J＝7.9Hz，2H)，6.75(s，1H)，4.71(d，J＝13.8Hz，2H)，3.88(s，3H)，3.20(t，J＝6.2Hz，2H)，3.06(t，J＝12.8Hz，2H)，1.97(m，1H)，1.82(d，J＝13.3Hz，2H)，1.31(s，9H)，1.23(d，J＝14.3Hz，2H)；LC/MS：m/z计算值C27H33N7O([M+H]+)：472.6，测定值：472.4。
实施例I-21
4-叔丁基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
步骤1：4-[7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在20mL可密封微波试管中，在5mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1g，3.25mmol，Eq：1.00)、4-((叔丁氧基羰基氨基)甲基)苯基硼酸(1.22g，4.87mmol，Eq：1.5)和碳酸钾(1.8g，13.0mmol，Eq：4.00)与DME(10mL)。加入Pd(PPh3)4(375mg，0.325mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在150℃加热30分钟。用EtOAc和盐水洗涤该溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为白色固体(700mg，45％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H26N4O4S([M+H]+)：479.5，测定值：479.3。
步骤2：4-[6-溴-7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在100mL圆底烧瓶中，将4-[7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.04mmol，Eq：1.00)溶于THF(10mL)，冷却至-78℃。在-78C在氮气气氛中加入LDA 2M的庚烷/THF/乙苯溶液(1.31mL，2.61mmol，Eq：2.5)，得到深棕色溶液。将该反应混合物在-78℃搅拌1hr 30分钟。加入在5mL THF中的1，2-二溴-1，1，2，2-四氯乙烷(851mg，2.61mmol，Eq：2.5)，将该反应混合物在-78C搅拌2小时。加入水。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后蒸发。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为白色固体(450mg，77％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H25BrN4O4S([M+H]+)：558.4，测定值：558.8。
步骤3：{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在10mL可密封微波试管中，在水(1mL)中合并4-[6-溴-7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.359mmol，Eq：1.00)、1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(192mg，0.923mmol，Eq：2.57)和碳酸钾(198mg，1.44mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(PPh3)4(42mg，0.036mmol，Eq：0.1)，密封该反应混合物，在微波中在150℃加热60分钟。用EtOAc稀释该反应混合物，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂。将粗物质与DCM一起研磨，然后过滤，得到标题化合物，为黄色固体(32mg，22％收率)。LC/MS：m/z计算值C22H24N6O2([M+H]+)：405.4，测定值：405.2。
步骤4：4-叔丁基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.074mmol，Eq：1.00)与1mL DCM和1mL TFA。将该溶液在室温搅拌1小时。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(2mL)。加入4-叔丁基苯甲酸(14.5mg，0.082mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.052mL，0.297mmol，Eq：4.00)和HATU(31.0mg，0.082mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将得到的固体与DCM一起研磨，过滤得到的固体。得到标题化合物，为固体(11mg，32％收率)。LC/MS：m/z计算值C28H28N6O([M+H]+)：465.5，测定值：465.2。
实施例I-22
4-环丙基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
按照与实施例21步骤4类似的方法，使用4-环丙基苯甲酸(12.0mg，0.074mmol，Eq：1.00)，得到标题化合物，为固体(16mg，48％收率)。LC/MS：m/z计算值C27H24N6O([M+H]+)：449.5，测定值：449.2。
实施例I-23
4-异丙基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
按照与实施例21步骤4类似的方法，使用4-异丙基苯甲酸(13.4mg，0.082mmol，Eq：1.1)，得到标题化合物，为固体(5mg，15％收率)。LC/MS：m/z计算值C27H26N6O([M+H]+)：451.5，测定值：451.3。
实施例I-24
N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺
步骤1：4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酸甲酯
在20mL可密封微波小瓶中，合并4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(978mg，5.44mmol，Eq：2.0)、trand-2-氨基环己醇盐酸盐(50mg，0.326mmol，Eq：0.12)和碘化镍(102mg，0.326mmol，Eq：0.12)与异丙醇(8mL)，得到白色混悬液。加入NaHMDS(997mg，5.44mmol，Eq：2.0)。给该反应混合物反填充氩气，搅拌5分钟。加入3-碘氧杂环丁烷(0.5g，2.72mmol，Eq：1.00)。密封该反应混合物，然后在80℃在微波中加热20分钟。此后，TLC显示2种可能的产物斑点，Rf彼此接近。用异丙醇稀释该反应混合物，然后通过滤纸过滤。浓缩溶剂，得到黄色油状物。将该产物溶于二氯甲烷，用硅胶浓缩该溶液。使硅胶支持的粗产物上40克硅胶柱。进行快速色谱(5％乙酸乙酯-己烷变换至10％乙酸乙酯-己烷)。分离标题化合物，为油状物(118mg，23％收率)。分离的其它副产物相当于4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酸异丙酯(77mg，13％收率)。
步骤2：4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酸
在100mL梨形烧瓶中，合并4-(氧杂环丁烷-3-基)苯甲酸甲酯(118mg，0.614mmol，Eq：1.00)和一水合氢氧化锂(40mg，0.953mmol，Eq：1.55)与THF(2.5mL)，得到无色溶液。加入水(2.5mL)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。在早晨，TLC显示少量剩余的原料。再加入40mg一水合LiOH，再将该反应混合物在室温搅拌过夜。减压除去溶剂。然后用10mL水稀释水性残余物，用20mL 1：1己烷-乙酸乙酯萃取该溶液。然后用几滴4N HCl水溶液酸化水相，得到白色混悬液。用乙酸乙酯萃取该混悬液。用无水硫酸钠干燥有机萃取物，减压除去溶剂。得到标题化合物，为白色固体(88mg，80％收率)。将产物不经进一步纯化使用。
步骤3：N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.099mmol，Eq：1.00)与3mL DCM和3mL TFA。将该溶液在室温搅拌1小时。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酸(18mg，0.099mmol，Eq：1.00)、DIPEA(0.069mL，0.396mmol，Eq：4.00)和HATU(38mg，0.099mmol，Eq：1.00)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mLEtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将得到的固体与DCM一起研磨，过滤得到的固体。得到标题化合物，为固体(3mg，7％收率)。LC/MS：m/z计算值C27H24N6O2([M+H]+)：465.5，测定值：465.2。
实施例I-25
4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
步骤1：4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-苯甲酸
在250mL 3-颈烧瓶中，合并3-(4-溴苯基)-3-甲基氧杂环丁烷(1.05g，4.62mmol)与THF(35mL)，得到无色溶液。将该溶液在干冰-丙酮浴中冷却至-78℃。向冷溶液中滴加1.6M nBuLi的己烷溶液(3.32mL，5.32mmol)。在10分钟期限内再滴加。将该反应混合物在-78℃搅拌1小时。此后，将在与干冰分离的烧瓶中生成的二氧化碳气体通过长针头加入到反应混合物中。该反应混合物快速变成淡黄色。二氧化碳在低温下再起泡20分钟。此后，该反应混合物为白色混悬液。将该反应混合物温至室温，然后缓慢地用水猝灭。蒸发出有机溶剂。用乙酸乙酯和己烷的1∶1溶液萃取得到的混合物。然后通过添加4N HCl水溶液使水相达到酸性pH。使用布氏漏斗真空过滤得到的白色混悬液。用真空漏斗进一步干燥采集的白色固体，然后在真空烘箱中进一步干燥，得到4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-苯甲酸(456mg，51％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(br.s.，1H)，7.93(d，J＝8.48Hz，2H)，7.36(d，J＝8.67Hz，2H)，4.81(d，J＝5.84Hz，2H)，4.56(d，J＝6.03Hz，2H)，1.64(s，3H)。
步骤2：4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.148mmol，Eq：1.00)与3mL DCM和3mL TFA。将该溶液在室温搅拌1小时。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酸(31mg，0.163mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.104mL，0.593mmol，Eq：4.00)和HATU(62mg，0.163mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mLEtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将得到的固体与DCM一起研磨，过滤得到的固体。得到标题化合物，为黄色固体(15mg，21％收率)。LC/MS：m/z计算值C28H26N6O2([M+H]+)：479.5，测定值：479.2。
实施例I-26
4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.099mmol，Eq：1.00)与3mL DCM和3mL TFA。将该溶液在室温搅拌1小时。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸(20mg，0.109mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.069mL，0.396mmol，Eq：4.00)和HATU(41mg，0.109mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为固体(17mg，37％收率)。LC/MS：m/z计算值C26H24N6OS([M+H]+)：469.5，测定值：469.2。
实施例I-27
4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
步骤1：{2-氟-4-[7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在20mL可密封微波试管中，在5mL水中合并4-氯-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1g，3.25mmol，Eq：1.00)、[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯(1.14g，3.25mmol，Eq：1.00)和碳酸钾(1.8g，13.0mmol，Eq：4.00)与DME(10mL)。加入Pd(PPh3)4(375mg，0.325mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在150℃加热30分钟。用EtOAc和盐水洗涤该溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为白色固体(950mg，59％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H25FN4O4S([M+H]+)：497.5，测定值：497.2。
步骤2：{4-[6-溴-7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在100mL圆底烧瓶中，将{2-氟-4-[7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(2g，4.03mmol，Eq：1.00)溶于THF(40mL)，冷却至-78℃。在-78C在氮气气氛中加入LDA 2M的庚烷/THF/乙苯溶液(5.03mL，10.1mmol，Eq：2.5)，得到深棕色溶液。将该反应混合物在-78℃搅拌1hr 30分钟。加入在10mL THF中的1，2-二溴-1，1，2，2-四氯乙烷(3.28g，10.1mmol，Eq：2.5)，将该反应混合物在-78C搅拌2小时。加入盐水。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后蒸发。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为浅褐色固体(1.2g，52％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H24BrFN4O4S([M+H]+)：576.4，测定值：577.1。
步骤3：{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在20mL可密封微波试管中，在水(3mL)中合并{4-[6-溴-7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(400mg，0.695mmol，Eq：1.00)、1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(226mg，1.09mmol，Eq：1.6)和碳酸钾(384mg，2.78mmol，Eq：4.00)与DME(6mL)。加入Pd(PPh3)4(80mg，0.069mmol，Eq：0.1)，密封该反应混合物，在微波中在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释该反应混合物，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂。将粗物质与DCM一起研磨，然后过滤，得到标题化合物，为棕色固体(75mg，26％收率)。LC/MS：m/z计算值C22H23FN6O2([M+H]+)：423.4，测定值：423.3。
步骤4：4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.094mmol，Eq：1.00)与1mL DCM和1mL TFA。将该溶液在室温搅拌1小时。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(2mL)。加入4-叔丁基苯甲酸(19mg，0.104mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.066mL，0.379mmol，Eq：4.00)和HATU(40mg，0.104mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将得到的固体与DCM一起研磨，过滤得到的固体。得到标题化合物，为固体(17mg，37％收率)。LC/MS：m/z计算值C28H27FN6O([M+H]+)：483.5，测定值：483.2。
实施例I-28
6-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-烟酰胺
步骤1：6-叔丁基-烟酸
向烟酸(2g，16mmol，Eq：1.00)在水中的混悬液中加入浓硫酸(1mL，18.8mmol，Eq：1.2)，将该混合物在氮气气氛中搅拌以形成澄清溶液。加入新戊酸(1.83g，17.9mmol，Eq：1.1)，在氩气气氛中在环境温度下持续搅拌10分钟。加入硝酸银(125mg，0.736mmol)，然后加入过硫酸铵(295mg，1.29mmol，Eq：0.08)，用铝箔缠绕烧瓶以避光，将该混合物在氮气气氛中加热至90℃。2小时后将该反应混合物冷却至环境温度，保持静置过夜。用乙酸乙酯萃取该反应混合物，难以得到任何大量的预计产物。LC/MS确实显示在水层中存在产物。真空浓缩水性混合物，得到无色固体。将该固体与THF一起研磨，过滤，真空浓缩滤液。将残余物再与甲醇一起研磨，过滤，然后真空浓缩滤液。通过反相色谱法纯化浓缩的滤液，使用85g C-18柱、从10％乙腈水溶液-100％乙腈梯度洗脱。合并包含期望的产物的级分，浓缩，得到无色水性混悬液(～5mL体积)。再加入水(～20mL)以形成澄清溶液，冻干该混合物，得到标题化合物，为无色无定形冻干固体(139mg，5％收率)。LC/MS：m/z计算值C10H14NO2[(M+H)+]：180.2，483.5，测定值：180.1。
步骤2：6-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-烟酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(56mg，0.133mmol，Eq：1.00)与2mL DCM和2mL TFA。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(2mL)。加入6-叔丁基-烟酸(40mg，0.233mmol，Eq：1.7)、DIPEA(0.093mL，0.53mmol，Eq：4.00)和HATU(55mg，0.146mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将得到的固体与DCM一起研磨，过滤。得到标题化合物，为黄色固体(40mg，62％收率)。LC/MS：m/z计算值C27H26FN7O([M+H]+)：484.5，测定值：483.3。
实施例I-29
5-甲基-噻吩-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
按照与实施例28步骤2类似的方法，使用5-甲基噻吩-2-甲酸(22mg，0.156mmol，Eq：1.1)，得到标题化合物，为固体(42mg，66％收率)。LC/MS：m/z计算值C23H19FN6OS([M+H]+)：447.5，测定值：447.2。
实施例I-30
4-叔丁基-N-(2-氟-4-{6-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-苄基)-苯甲酰胺
步骤1：N-[4-(6-溴-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-2-氟-苄基]-4-叔丁基-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{4-[6-溴-7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.348mmol，Eq：1.00)与1mL DCM和1mL TFA。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(2mL)。加入4-叔丁基-苯甲酸(68mg，0.382mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.243mL，1.39mmol，Eq：4.00)和HATU(145mg，0.382mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mLEtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。将粗物质储存在室温下过夜。将得到的固体与DCM一起研磨，过滤。得到标题化合物，为固体(96mg，57％收率)。LC/MS：m/z计算值C24H22BrFN4O([M+H]+)：482.3，测定值：483.0。步骤2：4-叔丁基-N-(2-氟-4-{6-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-苄基)-苯甲酰胺
在20mL可密封微波试管中，在水(1mL)中合并N-[4-(6-溴-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-2-氟-苄基]-4-叔丁基-苯甲酰胺(90mg，0.187mmol，Eq：1.00)、2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙醇(49.0mg，0.206mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(103mg，0.748mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(PPh3)4(22mg，0.019mmol，Eq：0.1)，密封该反应混合物，在微波中在150℃加热30分钟。用EtOAc稀释该反应混合物，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂。将粗物质与DCM一起研磨，然后过滤，得到标题化合物，为棕色固体(22mg，23％收率)。LC/MS：m/z计算值C29H29FN6O2([M+H]+)：513.5，测定值：513.2。
实施例I-31
4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-N-甲基-苯甲酰胺
步骤1：(4-溴-2-氟-苄基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯
在100mL圆底烧瓶中，在0℃合并4-溴-2-氟苄基氨基甲酸叔丁酯(2g，6.58mmol，Eq：1.00)、碘甲烷(0.7mL，11.2mmol，Eq：1.7)和NaH的60％油混悬液(395mg，16.5mmol，Eq：2.5)与DMF(40mL)。搅拌该反应混合物，温热至室温3小时。用MeOH使反应停止。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-40％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为油状物(1.8g，86％收率)。
步骤2：[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-甲基-氨基甲酸叔丁酯
在250mL圆底烧瓶中，合并(4-溴-2-氟-苄基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.8g，5.66mmol，Eq：1.00)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(2.15g，8.49mmol，Eq：1.5)和乙酸钾(1.67g，17.0mmol，Eq：3.00)与NMP(40mL)。在氮气气氛中给该溶液脱气10分钟。加入1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(414mg，0.566mmol，Eq：0.1)，将该反应混合物在100℃加热24小时。冷却该反应混合物，然后用水和EtOAc稀释。合并有机相，然后用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，通过柱色谱法纯化得到的粗物质(硅胶，5-40％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为油状物(1.01g，49％收率)。
步骤3：7-苯磺酰基-4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
在20mL闪烁小瓶中，合并在5mL水中的4-氯-6-碘-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1g，2.38mmol，Eq：1.00)、碳酸钾(1.32g，9.53mmol，Eq：4.00)和1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(744mg，3.57mmol，Eq：1.5)与DME(10mL)。加入Pd(PPh3)4(275mg，0.238mmol，Eq：0.1)，将该反应混合物90℃在加热6小时。将该反应混合物在室温静置过夜。形成沉淀，真空过滤，得到标题化合物，为浅褐色固体(194mg，22％收率)。LC/MS：m/z计算值C16H12ClN5O2S([M+H]+)：374.8，测定值：374.1。
步骤4：{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯
在20mL闪烁小瓶中，在3mL水中合并7-苯磺酰基-4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(150mg，0.401mmol，Eq：1.00)、[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-甲基-氨基甲酸叔丁酯(161mg，0.441mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(222mg，1.61mmol，Eq：4.00)与DME(6mL)。加入Pd(PPh3)4(46.4mg，0.04mmol，Eq：0.1)，将该反应混合物在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂，通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-70％乙酸乙酯的己烷溶液)。得到标题化合物，为固体(74mg，42％收率)。LC/MS：m/z计算值C23H25FN6O2([M+H]+)：437.4，测定值：437.3。
步骤5：4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-N-甲基-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.092mmol，Eq：1.00)与DCM(3mL)和TFA(3mL)。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入4-叔丁基-苯甲酸(18mg，0.101mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.1mL，0.573mmol，Eq：6.25)和HATU(38mg，0.101mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为固体(38mg，84％收率)。LC/MS：m/z计算值C29H29FN6O([M+H]+)：497.5，测定值：497.4。
实施例I-32
5-甲基-噻吩-2-甲酸{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.069mmol，Eq：1.00)与DCM(3mL)和TFA(3mL)。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入5-甲基噻吩-2-甲酸(11mg，0.076mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.05mL，0.275mmol，Eq：4.00)和HATU(29mg，0.076mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为固体(14mg，44％收率)。LC/MS：m/z计算值C24H21FN6OS([M+H]+)：461.5，测定值：461.2。
实施例I-33
2-叔丁基-5-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮
步骤1：3-甲基-噻吩-2-甲酸甲酯
在1L圆底烧瓶中，合并3-甲基噻吩-2-甲酸(15g，106mmol)与甲醇(211mL)，得到黄白色混悬液。将该混合物在冰-水浴中冷却至0℃。将浓硫酸(6ml，113mmol)滴加到冷混悬液中。将该反应混合物逐步温热至室温。将该反应混合物在室温搅拌3天以上。此后，TLC显示原料完全转化成极性较低的产物。浓缩该反应混合物以除去甲醇。使剩余的浅棕色油状物分配在乙酸乙酯与饱和碳酸氢钠水溶液之间。用Na2SO4干燥有机相，过滤，浓缩，得到棕色油状物，基于1H NMR积分，其包含期望的甲酯(84％)和原料(16％)的混合物。将粗产物再溶于乙酸乙酯，用1M NaOH水溶液洗涤该溶液。用MgSO4干燥有机相，过滤，浓缩，得到3-甲基-噻吩-2-甲酸甲酯(13.6g，82％)，为浅棕色油状物。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm7.39(d，J＝5.09Hz，1H)，6.92(d，J＝5.20Hz，1H)，3.87(s，3H)，2.57(s，3H)。
步骤2：5-叔丁基-3-甲基-噻吩-2-甲酸甲酯
在500mL圆底烧瓶中，合并三氯化铝(17.3g，130mmol)与DCM(20mL)，得到黄白色混悬液。给该混合物反填充氩气，然后在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃。在5分钟内滴加3-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(13.5g，86.4mmol)在10mL DCM中的溶液。将该反应混合物在-78℃搅拌5分钟。在30分钟内将2-氯-2-甲基丙烷(9.87mL，90.7mmol)在10mL DCM中的溶液滴加到冷反应混合物中。将该反应混合物在1个周末内在回流冷凝器下使用干冰/丙酮浴搅拌，逐步熔化，将反应烧瓶温至室温。将该反应混合物倾入冰水。冰熔化后，分离有机相，然后用Na2SO4干燥。过滤有机相，然后浓缩，得到棕色油状物。将该油状物直接上330克硅胶柱。快速色谱(0-5％EtOAc-己烷)用于分离5-叔丁基-3-甲基-噻吩-2-甲酸甲酯(7.05g，38％)，为黄色油状物。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δppm 6.68(s，1H)，3.84(s，3H)，2.50(s，3H)，1.38(s，9H)。
步骤3：3-溴甲基-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸甲酯
在1L梨形烧瓶中，合并5-叔丁基-3-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(6.06g，28.5mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(6.1g，34.3mmol)和偶氮二异丁腈(234mg，1.43mmol)与四氯化碳(80mL)，得到橙色混悬液。将该混合物在90℃加热过夜。在早晨，将该反应混合物冷却至室温，然后过滤，以除去沉淀的固体。浓缩滤液，得到棕色油状物。将该产物直接上120克硅胶柱。进行快速色谱(5％EtOAc-己烷)，仅得到部分纯化的产物。合并包含纯产物的级分，得到3-溴甲基-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸甲酯(2.65g，32％)，为黄色油状物。将来自上述的不纯级分上第二个柱，再使用120g硅胶和5％EtOAc-己烷)。得到另一批纯化的3-溴甲基-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸甲酯(2.54g，30％)。1HNMR(300MHz，氯仿-d)δppm 6.93(s，1H)，4.87(s，2H)，3.88(s，3H)，1.39(s，8H)。
步骤4：3-[(4-溴-2-氟-苄基氨基)-甲基]-5-叔丁基-噻吩2-甲酸甲酯
在250mL圆底烧瓶中，合并4-溴-2-氟-苄基胺(5.34g，26.2mmol)、3-溴甲基-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸甲酯(2.54g，8.72mmol)和碳酸铯(3.73g，11.4mmol)与乙腈(50mL)，得到白色混悬液。将该反应混合物在室温搅拌过周末。过滤该反应混合物，然后用旋转蒸发器浓缩滤液。将粗产物直接上120克硅胶柱。进行快速色谱(5-25％EtOAc-己烷)，得到3-[(4-溴-2-氟-苄基氨基)-甲基]-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸甲酯(1.88g，52％)，为淡黄色油状物。LC/MS：m/z计算值C18H22BrFN([M+H]+)：414和416，测定值：416.0。
步骤5：3-[(4-溴-2-氟-苄基氨基)-甲基]-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸
在1L梨形烧瓶中，合并3-[(4-溴-2-氟-苄基氨基)-甲基]-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸甲酯(1.85g，4.47mmol)和一水合氢氧化锂(1.87g，44.7mmol)与THF(12mL)和水(12mL)，得到无色混悬液。将该混合物在室温搅拌过夜。在早晨，LCMS显示大部分原料和少量产物。加入甲醇(5mL)，将该反应混合物在50℃加热20小时。将该反应混合物冷却至室温，用旋转蒸发器浓缩至干。将得到的黄白色固体部分溶于水，然后加入4N HCl水溶液，直到该混合物变成白色混悬液为止。用乙酸乙酯萃取该混悬液。干燥有机相(Na2SO4)，过滤，然后浓缩，得到3-[(4-溴-2-氟-苄基氨基)-甲基]-5-叔丁基-噻吩-2-甲酸(1.77g，99％)，为黄白色泡沫体。LC/MS：m/z计算值C17H20BrFNO([M+H]+)：400和402，测定值：402.0。
步骤6：5-(4-溴-2-氟-苄基)-2-叔丁基-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮
在1L圆底烧瓶中，合并3-((4-溴-2-氟苄基氨基)甲基)-5-叔丁基噻吩-2-甲酸(1.77g，4.42mmol)与二氯甲烷(80mL)，得到淡黄色溶液。给反应烧瓶中反充氩气，然后在5分钟内滴加亚硫酰氯(1.96g，1.2mL，16.4mmol)。将该反应混合物在室温在氩气气氛中搅拌18小时。此后，LCMS显示原料和产物的混合物。再向该反应混合物中加入1.5mL亚硫酰氯，将该反应混合物在室温再搅拌24小时。此后，LCMS显示反应完成。浓缩该反应混合物，得到浅黄色油状物。将粗产物溶于二氯甲烷，用硅胶浓缩得到的溶液。将硅胶支持的粗产物上120克硅胶柱。进行快速色谱(5-25％EtOAc-己烷)，得到5-(4-溴-2-氟-苄基)-2-叔丁基-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮(1.22g，72％)，为淡黄色油状物。LC/MS：m/z计算值C17H18BrFNOS([M+H]+)：382和384，测定值：384.0。
步骤7：2-叔丁基-5-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮
在250mL圆底烧瓶中，合并双(频哪酸)二硼(1.15g，4.53mmol)、5-(4-溴-2-氟-苄基)-2-叔丁基-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮(1.07g，2.8mmol)和乙酸钾(825mg，8.41mmol)与二噁烷(9mL)，得到深棕色混悬液。向该混合物中加入1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物二氯甲烷复合物(185mg，227μmol)。将该反应混合物在110℃加热8小时。此后，将该反应混合物冷却至室温，蒸发出二噁烷。将粗产物溶于二氯甲烷，然后将该溶液倾入水(30mL)。分离有机相，然后用MgSO4干燥，过滤，用硅胶浓缩。将硅胶支持的粗产物上120g硅胶柱。进行快速色谱(5-25％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到2-叔丁基-5-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮(0.72g，60％)，为白色粉末。LC/MS：m/z计算值C23H30BFNO3S([M+H]+)：430，测定值：430.2。
步骤8：2-叔丁基-5-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮
在10mL微波试管中，在2mL水中合并7-苯磺酰基-4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(150mg，0.401mmol，Eq：1.00)、2-叔丁基-5-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮(190mg，0.441mmol，Eq：1.1)和碳酸钾(222mg，1.61mmol，Eq：4.00)与DME(4mL)。加入Pd(Ph3P)4(46mg，0.04mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在160℃加热60分钟。用EtOAc稀释该溶液，然后用盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相和减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为淡黄色固体(17mg，9％收率)。LC/MS：m/z计算值C27H25FN6OS([M+H]+)：501.6，测定值：501.3。
实施例I-34
5-叔丁基-异噁唑-3-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.178mmol，Eq：1.00)与DCM(3mL)和TFA(3mL)。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入5-叔丁基异噁唑-3-甲酸(18mg，0.195mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.124mL，0.710mmol，Eq：4.00)和HATU(74mg，0.195mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(35mg，42％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H24FN7O2([M+H]+)：474.5，测定值：474.3。
实施例I-35
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-苯甲酰胺
在10mL可密封试管中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(65mg，0.155mmol，Eq：1.00)与DCM(3mL)和TFA(3mL)。将该溶液在室温搅拌60分钟。减压除去溶剂，真空干燥。将粗物质溶于DMF(5mL)。加入4-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)苯甲酸(59.6mg，0.31mmol，Eq：2.00)、DIPEA(0.14mL，0.78mmol，Eq：5.00)和HATU(118mg，0.31mmol，Eq：2.00)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。用EtOAc稀释得到的溶液，用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机相。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为固体(44mg，57％收率)。LC/MS：m/z计算值C28H25FN6O2([M+H]+)：497.5，测定值：497.2。
实施例I-36
4-(氰基-二甲基-甲基)-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
按照与实施例35类似的方法，使用4-(2-氰基丙-2-基)苯甲酸(58.7mg，0.310mmol，Eq：2.00)，得到标题化合物，为固体(43mg，53％收率)。LC/MS：m/z计算值C28H24FN7O([M+H]+)：494.5，测定值：494.2。
实施例I-37
4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
按照与实施例35类似的方法，使用4，5，6，7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酸(57mg，0.31mmol，Eq：2.00)，得到标题化合物，为固体(53mg，63％收率)。LC/MS：m/z计算值C26H23FN6OS([M+H]+)：487.5，测定值：487.2。
实施例I-38
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯甲酰胺
步骤1：4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯甲酸
在500mL圆底烧瓶中，合并4-异丙基苯甲酸(1.0g，6.09mmol)与5mL10％KOH水溶液，得到浑浊混悬液。加入KOH的水溶液(96mL，19.2mmol)和高锰酸钾(1.92g，12.2mmol)的100mL水溶液。将该反应混合物在70℃加热1小时。向该反应混合物中加入5滴甘油。将该反应混合物冷却至0℃。通过硅藻土垫过滤固体残余物。用乙醚将滤液洗涤2次。用盐水冲洗合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，干燥过夜。采集产物4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯甲酸，为白色固体(870mg，79％)，将其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.80(br.s，1H)，7.83-7.89(m，2H)，7.55-7.60(m，2H)，5.15(s，1H)，1.43(s，6H)。
步骤2：N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯甲酰胺
按照与实施例35类似的方法，使用4-(2-羟基丙-2-基)苯甲酸(41.4mg，0.230mmol，Eq：2.00)，得到标题化合物，为固体(46mg，82％收率)。LC/MS：m/z计算值C27H25FN6O2([M+H]+)：485.5，测定值：485.4。
实施例I-39
3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
步骤1：3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸甲酯
向新戊醛(1.0g，11.6mmol)在1∶1叔丁醇/水(40mL)中的溶液中加入羟基胺盐酸盐(807mg，11.6mmol)和氢氧化钠(464mg，11.6mmol)。将该混合物在室温搅拌30分钟，然后在5分钟内分部分加入氯胺-T(5.49g，23.4mmol)，然后加入硫酸铜(II)(327mg，1.3mmol)和铜粉(73.8mg，1.16mmol)和丙炔酸甲酯(976mg，11.6mmol)。回流加热该反应混合物，其中将其维持2h。此后，将该混合物冷却至室温，倾入冰/水(50g)。加入氢氧化铵(10mL)，用DCM(3x200mL)萃取该溶液。合并有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，减压浓缩。通过快速色谱法纯化粗物质(硅胶，40g，0％-10％EtOAc的己烷溶液)，得到3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸甲酯(427mg，20％)，为无色油状物。LC/MS：m/z计算值C9H13NO3[(M+H)+]184，测定值：184.1。
步骤2：3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸
向3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸甲酯(425mg，2.32mmol)在甲醇(4mL)中的溶液中加入1N NaOH水溶液(11.6ml，11.6mmol)。将该反应混合在室温搅拌2小时，然后浓缩，用1N盐酸(10mL)中和。用乙酸乙酯萃取该混合物，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸(318mg，81％)，为白色半固体。LC/MS：m/z计算值C8H11NO3[(M+H)+]170，测定值：170。
步骤3：3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
按照与实施例35类似的方法，使用3-叔丁基异噁唑-5-甲酸(39mg，0.230mmol，Eq：2.00)，得到标题化合物，为固体(39mg，71％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H24FN7O2([M+H]+)：474.5。测定值：474.3。
实施例I-40
3-叔丁氧基-氮杂环丁烷-1-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
在20mL可密封微波试管中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(65mg，0.155mmol，Eq：1.00)与DCM(3mL)和TFA(3mL)。将该溶液在室温搅拌60分钟。减压除去溶剂，真空干燥。将粗物质溶于DMF(4mL)。将二(1H-咪唑-1-基)甲酮(50.3mg，0.31mmol，Eq：2.00)和DIPEA(0.14mL，0.78mmol，Eq：5.00)加入到该反应混合物中，得到淡黄色溶液。将该反应在室温搅拌2hrs。加入3-叔丁氧基氮杂环丁烷(40mg，0.310mmol，Eq：2.00)，在室温搅拌过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(32mg，43％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H28FN7O2([M+H]+)：478.5，测定值：478.6。
实施例I-41
1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
按照与实施例40类似的方法，使用异二氢吲哚(37.0mg，0.31mmol，Eq：2.00)，得到标题化合物，为固体(43mg，59％收率)。LC/MS：m/z计算值C26H22FN7O([M+H]+)：468.5，测定值：468.1。
实施例42
4-叔丁基-N-(4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基)-苯甲酰胺
步骤1：N，N-二甲基-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)-乙胺
在250mL圆底烧瓶中，合并2-氯-N，N-二甲基乙胺(998mg，9.28mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.2g，6.18mmol)和碳酸铯(4.03g，12.4mmol)与乙腈(20mL)，得到白色混悬液。将该反应混合物在100℃加热过夜。在早晨，将该反应混合物冷却至室温，过滤，浓缩滤液得到标题化合物(1.26g，77％收率)，为无色油状物。将粗产物不经进一步纯化用于随后的反应。
步骤2：(4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟苄基)-氨基甲酸叔丁酯
在20mL可密封微波试管中，合并4-(6-溴-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-2-氟苄基氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.434mmol，Eq：1.00)、N，N-二甲基-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙胺(319mg，1.2mmol，Eq：2.77)和Pd(PPh3)4(50mg，0.043mmol，Eq：0.1)与DME(4ml)，得到浅棕色混悬液。加入水(1mL)，然后加入碳酸钾(240mg，1.74mmol，Eq：4.00)。将该反应混合物在150℃微波加热1hr。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水和水洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(62mg，29％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H30FN7O2([M+H]+)：480.6，测定值：480.3。
步骤3：(2-{4-[4-(4-氨基甲基-3-氟-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基]-吡唑-1-基}-乙基)-二甲基-胺
在100mL圆底烧瓶中，合并4-(6-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-2-氟苄基氨基甲酸叔丁酯(62mg，0.129mmol，Eq：1.00)与DCM(8mL)，得到淡黄色混悬液。加入TFA(4mL，51.9mmol，Eq：402)，在室温搅拌1hr。减压除去溶剂。用高度真空干燥粗物质2hrs。将残余物不经进一步纯化用于下一步。LC/MS：m/z计算值C20H22FN7([M+H]+)：380.4，测定值：380.2。
步骤4：4-叔丁基-N-(4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基)-苯甲酰胺
在10mL可密封试管中，合并(2-{4-[4-(4-氨基甲基-3-氟-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基]-吡唑-1-基}-乙基)-二甲基-胺(48mg，0.127mmol，Eq：1.00)、4-叔丁基苯甲酸(45mg，0.253mmol，Eq：2.00)和HATU(96mg，0.253mmol，Eq：2.00)与DMF(4mL)，得到黄色溶液。将该反应混合物搅拌5分钟，然后加入DIPEA(0.110ml，0.630mmol，Eq：5.00)，在室温搅拌过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为固体(49mg，71％收率)。LC/MS：m/z计算值C31H34FN7O([M+H]+)：540.6，测定值：540.3。
实施例I-43
3-叔丁氧基-氮杂环丁烷-1-甲酸4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基酰胺
在20mL可密封微波试管中，合并(2-{4-[4-(4-氨基甲基-3-氟-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基]-吡唑-1-基}-乙基)-二甲基-胺(22mg，0.056mmol，Eq：1.00)、二(1H-咪唑-1-基)甲酮(19mg，0.116mmol，Eq：2.00)和DIPEA(51μl，0.290mmol，Eq：5.00)与DMF(2mL)，得到淡黄色溶液。将该反应在室温搅拌2hrs。加入3-叔丁氧基氮杂环丁烷(15.0mg，0.116mmol，Eq：2.00)，在室温搅拌过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水和水洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(18mg，58％收率)。LC/MS：m/z计算值C28H35FN8O2([M+H]+)：535.6。测定值：535.4。
实施例I-44
1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基酰胺
按照与实施例43类似的方法、使用异二氢吲哚(14mg，0.116mmol，Eq：2.00)，得到标题化合物，为黄色固体(20mg，63％收率)。LC/MS：m/z计算值C29H29FN8O([M+H]+)：525.6，测定值：525.3。
实施例I-45
[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸乙酯
步骤1：(4-{4-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-3-氟-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基}-吡唑-1-基)-乙酸乙酯
在20mL可密封微波试管中，合并4-(6-溴-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-2-氟苄基氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.434mmol，Eq：1.00)、2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(365mg，1.3mmol，Eq：3)和Pd(PPh3)4(50mg，0.043mmol，Eq：0.1)与DMF(10mL)，得到浅棕色混悬液。加入碳酸钾(240mg，1.74mmol，Eq：4.00)。将该反应混合物在155℃微波加热1hr。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水和水洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，5-60％EtOAc的己烷溶液)。得到标题化合物，为固体(72mg，33％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H27FN6O4([M+H]+)：495.5，测定值：495.3。
步骤2：{4-[4-(4-氨基甲基-3-氟-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基]-吡唑-1-基}-乙酸乙酯
在50mL圆底烧瓶中，合并(4-{4-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-3-氟-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基}-吡唑-1-基)-乙酸乙酯(72mg，0.146mmol，Eq：1.00)与DCM(8mL)，得到黄色溶液。加入TFA(4mL，51.9mmol，Eq：357)，在室温搅拌1hr。减压除去溶剂，再用真空干燥3hrs。将残余物不经进一步纯化用于下一步。LC/MS：m/z计算值C20H19FN6O2([M+H]+)：395.4，测定值：395.2。
步骤3：[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸乙酯
在50mL圆底烧瓶中，合并{4-[4-(4-氨基甲基-3-氟-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基]-吡唑-1-基}-乙酸乙酯(52mg，0.132mmol，Eq：1.00)、4-叔丁基苯甲酸(47.0mg，0.264mmol，Eq：2.00)和HATU(100mg，0.264mmol，Eq：2.00)与DMF(4mL)，得到黄色溶液。将该反应混合物搅拌5分钟，然后加入DIPEA(115μl，659μmol，Eq：5.00)，在室温搅拌过夜。用EtOAc稀释该反应混合物，用盐水和水洗涤。合并有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为固体(52mg，69％收率)。LC/MS：m/z计算值C31H31FN6O3([M+H]+)：555.6，测定值：555.4。
实施例46
[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-
在50mL圆底烧瓶中，合并[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸乙酯(47mg，0.085mmol，Eq：1.00)与THF(5mL)，得到黄色混悬液。加入NaOH 1M溶液(0.135ml，0.135mmol，Eq：1.59)，在室温搅拌过夜。通过添加1N HCl酸化该反应。减压除去溶剂。通过HPLC纯化残余物，得到标题化合物，为黄色固体(34mg，76％收率)。LC/MS：m/z计算值C29H27FN6O3([M+H]+)：527.6，测定值：527.3。
实施例47
N-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺
步骤1：N-(4-溴-2-氟苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺
将在DMF(3.15ml)中的(4-溴-2-氟苯基)甲胺(193mg，945μmol，Eq：1.00)、4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酸(157mg，945μmol，Eq：1.00)、HBTU(358mg，945μmol，Eq：1.00)和DIPEA(366mg，495μl，2.83mmol，Eq：3)在r.t.搅拌16h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机层。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化得到的粗物质(硅胶，10-65％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到N-(4-溴-2-氟苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺(178mg，54％收率)，为无色油状物。LC/MS：m/z计算值C15H15BrFN3O([M+H]+)：353.2，测定值：354.1。步骤2：N-(2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺
将在NMP(3mL)中的N-(4-溴-2-氟苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺(178mg，505μmol，Eq：1.00)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(193mg，758μmol，Eq：1.5)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(37.0mg，50.5μmol，Eq：0.1)和乙酸钾(149mg，1.52mmol，Eq：3)加热至100℃16h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用水和盐水洗涤。用无水硫酸钠干燥合并的有机层，减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化得到的粗物质(硅胶，30-100％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到N-(2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺(74mg，37％收率)，为白色固体。LC/MS：m/z计算值C21H27BFN3O3([M+H]+)：400.2，测定值：400.2。
步骤3：N-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺
在DME(1.48ml)/水(371μl)中将4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7-(苯基磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(69.3mg，185μmol，Eq：1.00)、N-(2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺(74mg，185μmol，Eq：1.00)、四(三苯膦)钯(0)(21.4mg，18.5μmol，Eq：0.1)和碳酸钾(76.8mg，556μmol，Eq：3)在微波中加热至150℃45min。通过柱色谱法纯化(硅胶，0-100％乙酸乙酯的[10％MeOH/乙酸乙酯]溶液)，然后通过HPLC纯化，得到N-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺(5.7mg，7％收率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δppm 12.63(s，1H)，8.79(s，1H)，8.73(t，J＝5.8Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.11(s，1H)，8.04(d，J＝7.8Hz，1H)，7.94(d，J＝11.5Hz，1H)，7.52(t，J＝8.2Hz，1H)，7.15(s，1H)，6.43(s，1H)，4.56(d，J＝6.2Hz，2H)，4.15(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(s，3H)，2.80(t，J＝5.0Hz，2H)，2.01(br.s，2H)，1.82(br.s，2H)；LC/MS：m/z计算值C25H23FN8O([M+H]+)：471.5，测定值：471.2。
实施例48
5-叔丁基-异噁唑-3-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.178mmol，Eq：1.00)与2mL DCM和2mL TFA。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(2mL)。加入5-叔丁基异噁唑-3-甲酸(33.0mg，0.195mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.124mL，0.71mmol，Eq：4.00)和HATU(74mg，0.195mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mLEtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化得到的固体(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(35mg，42％收率)。LC/MS：m/z计算值C25H24FN7O2([M+H]+)：474.5，测定值：474.3。
实施例49
3-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.355mmol，Eq：1.00)与3mL DCM和3mL TFA。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(4mL)。加入3-叔丁基-1，2，4-噁二唑-5-甲酸(66.5mg，0.391mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.25mL，1.42mmol，Eq：4.00)和溴三吡咯烷-1-基磷(Pybrop)(182mg，0.391mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。对得到的固体进行制备型HPLC(10-100％乙腈-水)。得到标题化合物，为黄色固体(20mg，12％收率)。LC/MS：m/z计算值C24H23FN8O2([M+H]+)：475.5，测定值：475.2。
实施例50
{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯
在20mL可密封微波试管中，在5mL水中合并7-苯磺酰基-4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(500mg，1.34mmol，Eq：1.00)、[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苄基]-氨基甲酸叔丁酯(541mg，1.61mmol，Eq：1.2)和碳酸钾(739mg，5.35mmol，Eq：4.00)与DME(10mL)。加入Pd(PPh3)4(375mg，0.325mmol，Eq：0.1)。将该反应混合物在微波中在160℃加热60分钟。用EtOAc和盐水洗涤该溶液。用无水硫酸钠干燥合并的有机相，然后减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化粗物质(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(150mg，27％收率)。LC/MS：m/z计算值C22H23FN6O2([M+H]+)：423.4，测定值：423.2。
实施例51
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺
在20mL闪烁小瓶中，合并{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.237mmol，Eq：1.00)与2mL DCM和2mL TFA。将该溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂。将粗物质溶于DMF(2mL)。加入苯甲酸(32mg，0.26mmol，Eq：1.1)、DIPEA(0.165mL，0.95mmol，Eq：4.00)和HATU(99mg，0.26mmol，Eq：1.1)。将该反应混合物搅拌过夜。用10mL水和5mL EtOAc稀释得到的溶液。将该溶液在室温再搅拌30分钟。萃取有机相，用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂。通过柱色谱法纯化得到的固体(硅胶，0-10％MeOH的DCM溶液)。得到标题化合物，为黄色固体(8mg，8％收率)。LC/MS：m/z计算值C24H19FN6O([M+H]+)：427.5，测定值：427.1。
生物学实施例
酪氨酸激酶(Btk)抑制测定
该测定是通过过滤捕获放射性33P磷酸化产物。Btk、生物素化的SH2肽底物(Src同源性)与ATP的相互作用导致肽底物的磷酸化。生物素化的产物是结合的链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠。所有结合的、放射性标记的产物通过闪烁计数器检测。
测定的板是96-孔聚丙烯(Greiner)和96孔1.2μm亲水性PVDF过滤板(Millipore)。在此处报道的浓度是最终测定浓度：在DMSO(Burdick和Jackson)中的10-100μM化合物、5-10nM Btk酶(His-标记的，全长)、30μM肽底物(生物素-Aca-AAAEEIYGEI-NH2)、100μM ATP(西格玛(Sigma))、8mM咪唑(西格玛，pH7.2)、8mM甘油-2-磷酸(西格玛)、200μM EGTA(罗氏诊断(Roche Diagnostics))、1mM MnCl2(西格玛)、20mM MgCl2(西格玛)、0.1mg/ml BSA(西格玛)、2mM DTT(西格玛)、1μCi33P ATP(Amersham)、20％链霉抗生物素蛋白琼脂糖珠(Amersham)、50mM EDTA(Gibco)、2MNaCl(Gibco)、2M NaCl w/1％磷酸(Gibco)、microscint-20(铂尔金爱尔默(Perkin Elmer)。
使用从标准的96孔板测定模板产生的数据，从每个化合物的10个数据点计算IC50测定值。在每个板上测试一种对照化合物和七种未知抑制剂，每个板进行两次。典型地，以半对数(half-log)稀释化合物，从100μM开始并且以3nM结束。对照化合物是星形孢菌素。在不存在肽底物时计数背景。在存在肽底物时，测定总活性。使用下列方案来测定Btk抑制。
1)样品制备：将测试化合物以半对数增量在测定缓冲液(咪唑、甘油-2-磷酸、EGTA、MnCl2、MgCl2、BSA)中稀释。
2)珠制备
a.)通过在500g离心漂洗珠
b.)用PBS和EDTA重构所述珠，产生20％珠的浆状物
3)在30℃预温育不含底物的反应混合物(测定缓冲液、DTT、ATP、33P ATP)和具有底物的混合物(测定缓冲液、DTT、ATP、33P ATP、肽底物)达15分钟。
4)为了起始测定，在室温预温育10μL在酶缓冲液(咪唑、甘油-2-磷酸、BSA)中的Btk和10μL的测试化合物达10分钟。
5)将30μL不含有或含有底物的反应混合物加入到Btk和化合物中。
6)在30℃温育50μL的总测定混合物达30分钟。
7)将40μL的测定物转移到过滤板中的150μL珠浆状物中来终止反应。
8)在30分钟后，用下列步骤洗涤过滤板：
a.3x250μL NaCl
b.3x250μL NaCl，其包含1％磷酸
c.1x250μL H2O
9)在65℃干燥板1小时或在室温干燥板过夜。
10)加入50μL microscint-20并在闪烁计数器上计数33P cpm。
从以cpm表示的原始数据计算百分比活性
百分比活性＝(样品-bkg)/(总活性-bkg)x100
使用一位点(one-site)剂量反应S形曲线模型从百分比活性计算IC50
y＝A+((B-A)/(1+((x/C)D))))
x＝化合物(cmpd)浓度，y＝％活性，A＝min，B＝max，C＝IC50，D＝1(希尔(hill)斜率))
酪氨酸激酶(BTK)抑制TR-FRET(时间分辨FRET)测定
这种BTK竞争性测定使用FRET(/Fluorescence ResonanceEnergy Transfer)技术测定了化合物在失活态的酪氨酸激酶中的效能(IC50)。将BTK-Eu复合物在冰上温育1小时，然后以50nMBTK-BioeaseTm：10nM Eu-链霉抗生物素(Perkin-Elmer Catalog#AD0062)的起始浓度使用。测定缓冲液由20mM HEPES(pH 7.15)、0.1mMDTT、10mM MgCl2、0.5mg/ml BSA与3％激酶稳定剂(FremontBiosolutions，Catalog#STB-K02)组成。1h后，用测定缓冲液将来自上述的反应混合物稀释10倍，制成5nM BTK：1nM Eu-链霉抗生物素复合物(供体荧光团)。然后将0.11nM BTK-Eu和0.11nM激酶示踪物178(Invitrogen，Catalog#PV5593，)与单独的作为无阴性对照的BTK-Eu的18μl混合物调配入384-孔平底板(Greiner，784076)。将测定中测试的化合物制备成10x浓度并且在DMSO中进行半-对数递增连续稀释，以便生成10个点的曲线。为了启动FRET反应，将用DMSO制成10x储备溶液的化合物加入到板中，并且将板在14℃温育18-24h。
温育后，用BMG Pherastar Fluorescent平板读出器(或等效物)读取板并且用于测定来自铕供体荧光团(620nm发射)和FRET(665nm发射)的发射能量。求阴性对照孔值的平均值，得到最小平均值。求阳性“无抑制剂”对照孔的平均值，得到最大平均值。使用如下等式计算最大FRET百分比：％max FRET＝100x[(FSR化合物-FSR最小平均值)/(FSR最大平均值-FSR最小平均值)]其中FSR＝FRET信号比。用Activity Base(Excel)绘制％Max FRET曲线，测定IC50(％)、希尔斜率z，和％CV。平均值IC50和标准偏差使用Microsoft Excel来源于一式两份曲线(来自2次独立稀释的单态抑制曲线)。
该测定的有代表性的化合物数据如下表II中所示。
表II.
化合物 FRET IC50(μM) HWB IC50(μM)
I-1 34.7
I-2 ＞100
I-3 ＞100
I-4 16.3
I-5 33.1
I-6 10.4
I-7 16.4
I-8 ＞100
I-9 0.481
I-10 5.68
I-11 12.2
I-12 0.121
I-13 ＞100
I-14 0.129
I-15 1.53
I-16 0.687
I-17 0.098 16.2
I-18 0.137
I-19 0.137
I-20 0.062 3
I-21 0.007 1.4
I-22 0.008 5.48
I-23 0.007 1.4
I-24 0.065
I-25 0.044 28.9
I-26 0.001 0.608
I-27 0.002 0.812
I-28 0.004 2.54
I-29 0.003 0.47
I-30 0.0007 1.04
I-31 0.02 6.05
I-32 0.008
I-33 0.001 0.129
I-34 0.0002 0.076
I-35 0.008 5.5
I-36 0.004 6.74
I-37 0.0003 0.655
I-38 0.003 3.27
I-39 0.0002 0.028
I-40 0.0006 0.052
I-41 0.0006 0.154
I-42 0.0005 0.23
I-43 0.0006 0.276
I-44 0.00052 0.188
I-45 0.0006 0.222
I-46 0.001 ＞50
I-47 0.0032 0.674
I-48 0.00019 0.076
I-49 0.00011 0.002
I-50 1.49
I-51 0.026
根据CD69表达测定的全血中B细胞活化的抑制
用于测试Btk抑制剂抑制在人血液中B细胞的B细胞受体介导的活化的能力的程序如下：
人全血(HWB)获自健康志愿者，满足以下限制：24hr不用药，不吸烟者。通过静脉穿刺将血液收集到用肝素钠抗凝化的Vacutainer管中。测试化合物在PBS中稀释至10倍所需初始药物浓度(20x)，接着在10％的在PBS中的DMSO中三倍系列稀释，得到9点的剂量响应曲线。将5.5μl的每种化合物稀释液一式两份添加到2mi 96孔V型底的板(Analytical Salesand Services，#59623-23)上；向对照和无刺激孔中添加5.5μl的10％在PBS中的DMSO。向每孔添加HWB(100μl)，在混合后将板在37C、5％CO2、100％湿度温育30分钟。在搅拌下向每孔(无刺激孔除外)添加羊F(ab’)2抗人IgM(Southern Biotech，#2022-14)(10μl的500μg/ml溶液，50μg/ml最终浓度)，并且将板温育另外20小时。
在20小时温育结束时，将样品与荧光探针标记的抗体(15μl PE小鼠抗人CD20，BD Pharmingen，#555623，和/或20μl APC小鼠抗人CD69，BD Pharmingen#555533)在37C、5％CO2、100％湿度温育30分钟。包括用于补偿调节和初始电压设置的诱导对照、未染色的和单染色剂。然后将样品用1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer(BD Pharmingen#555899)裂解，并且将板在1800rpm离心5分钟。通过抽吸除去上清液，将残留的团粒用另外1ml的1X Pharmingen Lyse Buffer再次裂解，并且将板如前离心(spundown)。吸出上清液，将残留的团粒在FACs缓冲液(PBS+I％FBS)中洗涤。在最后旋转后，除去上清液，并且将团粒重悬浮在180μl的FACs缓冲液中。将样品转移至适于在BD LSR II流式细胞计数器的HTS 96孔体系上运行的96孔板。
采用适合所用荧光团的激发和发射波长，获取数据并且采用Cell QuestSoftware获得百分比阳性细胞值。结果最初用FACS分析软件(Flow Jo)分析。测试化合物的IC50定义为使CD69阳性细胞的百分比下降50％的浓度，所述CD69阳性细胞在用抗IgM刺激后也是CD20阳性的(8个对照孔的平均，在扣除8个无刺激背景的孔的平均值后)。IC50值是使用XLfit软件版本3，公式201计算的。
B-细胞活化的抑制-在Ramos细胞中的B细胞FLIPR测定
通过测定测试化合物对于抗-IgM刺激的B细胞应答的影响，证明本发明的化合物对B细胞活化的抑制。
B细胞FLIPR测定是测定潜在抑制剂对于由抗-IgM抗体刺激导致的细胞内钙增加的影响的、基于细胞的功能方法。将Ramos细胞(人Burkitt’s淋巴瘤细胞系。ATCC-No.CRL-1596)培养在生长培养基(下述)中。在测定前一天，将Ramos细胞重悬浮在新鲜的生长培养基(与上相同)中并且以0.5x106/mL的浓度放置在组织培养瓶中。在测定当天，对细胞计数并且将其以1x106/mL的浓度放入在组织培养瓶中补充了1μM FLUO-3AM(TefLabs目录号0116，在无水DMSO和10％嵌段聚醚酸(Pluronic acid)中制备)的生长培养基中，并且在37℃(4％CO2)温育1小时。为了去除细胞外染料，通过离心(5分钟，1000rpm)收集细胞，并以1x106细胞/mL重新悬浮在FLIPR缓冲液(下述)中，接着以1x105细胞/孔分配在96-孔聚-D-赖氨酸包被的黑色/透明的板(BD目录号356692)中。加入从100μM到0.03μM范围内的各个浓度(7个浓度，下面详述)的测试化合物，并且使其与细胞一起在室温温育30分钟。通过加入10μg/mL抗-IgM(SouthernBiotech，目录号2020-01)刺激Ramos细胞Ca2+信号传导并且在FLIPR(Molecular Devices，使用具有在480nM激发的氩激光器的CCD照相机捕获96孔板的图像)上测量。
介质/缓冲液：
生长培养基：RPMI 1640培养基，其含有L-谷氨酰胺(Invitrogen，目录号61870-010)，10％胎牛血清(FBS，Summit Biotechnology目录号FP-100-05)；1mM丙酮酸钠(Invitrogen目录号11360-070)。
FLIPR缓冲液：HBSS(Invitrogen，目录号141175-079)，2mM CaCl2(西格玛，目录号C-4901)，HEPES(Invitrogen，目录号15630-080)，2.5mM丙磺舒(西格玛，目录号P-8761)，0.1％BSA(西格玛，目录号A-7906)，11mM葡萄糖(西格玛，目录号G-7528)。
化合物稀释细节：
为了获得100μM的最高最终测定浓度，将24μL的10mM化合物贮存溶液(在DMSO中制备)直接加入到576μL的FLIPR缓冲液中。将测试化合物稀释在FLIPR缓冲液中(使用Biomek 2000自动移液器)得到下列稀释方案：溶剂，1.00x10-4M，1.00x10-5，3.16x10-6，1.00x10-6，3.16x10-7，1.00x10-7，3.16x10-8。
测定和分析：
使用最大-最小统计(使用Molecular Devices FLIPR对照和统计输出软件，从由加入所述刺激抗体导致的峰减去静止的基线)报道钙的细胞内增加。使用非线性曲线拟合(GraphPad Prism软件)确定IC50。
小鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(mCIA)
在第0天，将小鼠用II型胶原蛋白在完全弗氏佐剂(CFA)中的乳剂注射，在尾巴基部或在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在胶原免疫之后，动物将在约21至35天出现关节炎。关节炎的发作通过在第21天系统施用在不完全弗氏佐剂(IFA；i.d.)中的胶原蛋白而同步(增强)。在第20天之后每天检查动物轻微关节炎(1或2分；参考下面的评分描述)的任何发作，这是增强的信号。在增强后，将小鼠评分并且将候选的治疗剂以预定的时间(典型地2-3周)和给药频率给药，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
大鼠胶原蛋白-诱导的关节炎(rCIA)
在第0天，将大鼠用II型牛胶原蛋白在不完全弗氏佐剂(IFA)中的乳剂注射，在背部上的几个位置皮内注射(i.d.)。在约第7天在尾巴基部或背部的备选位点提供胶原蛋白乳剂的加强注射(i.d.)。在初始胶原蛋白注射之后的12-14天通常观察到关节炎。从第14天起，如下面所述(关节炎的评价)可以评价动物的关节炎的进展。将动物用候选的治疗剂以预防的方式，开始于二次激发时给药，并且以预定的时间(典型地2-3周)和给药频率给药，每天一次(QD)或每天两次(BID)。
关节炎的评价：
在两种模型中，使用评分系统对爪和肢关节的炎症发展进行定量，所述的评分系统包括按照下面所述的标准对4个爪的评估：
评分：1＝爪或一个趾的肿胀和/或发红。
2＝两个或更多个关节肿胀。
3＝爪的总体肿胀，涉及多于两个关节。
4＝整个爪和趾的严重关节炎。
如下进行评估：在第0天进行基线测量，在第一个征候或肿胀时再次开始，每周可达三次，直至实验结束。通过将四个单爪评分加和来获得每只小鼠的关节炎指数，每只动物的最大分数为16。
大鼠体内哮喘模型
将雄性棕挪威(Brown-Norway)大鼠用在0.2ml明矾中的100μgOA(卵清蛋白)每周i.p.致敏一次，致敏三周(第0、7和14天)。在第21天(最后致敏后一周)，将大鼠用溶剂或化合物制剂皮下q.d.给药，0.5小时后进行OA气雾剂激发(1％OA，历时45分钟)并且在激发4或24小时后终止。在处死时，从所有动物收集血清和血浆用于分别进行血清学研究和PK。插入气管套管并且将肺用PBS灌洗3X。分析BAL流体的总白细胞数和差别白细胞计数。细胞等份试样(20-100μl)中的总白细胞数是通过库尔特计数器确定的。对于差别白细胞计数，将50-200μl样品在Cytospin中离心并且用Diff-Quik将载玻片染色。采用标准形态学标准，在光学显微镜下计数单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性白细胞和淋巴细胞的比例，并且用百分比表示。Btk的代表性抑制剂显示：OA致敏的和攻击的大鼠的BAL中总白细胞计数与对照水平相比下降。
已经通过举例说明和实施例的方式比较详细地描述了上述发明，以用于阐述和理解的目的。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在后附权利要求的范围内进行改变和改进。因此，应该理解上述说明意在是举例说明性的而不是限制性的。因此，本发明的范围不应该参考上述说明书而确定，而应该参考下列后附的权利要求以及由权利要求授权的等价物的全部范围而确定。
将本申请中引用的全部专利、专利申请和出版物的全部内容通过引用并入本文作为参考以满足全部目的到这样的程度，就如同每个专利、专利申请或出版物是分别指明的一样。

Claims (22)

1.式I化合物，
其中：
A是苯基或哌啶基；
R1各自独立地是卤素、低级烷基、CH2NHC(＝O)R1’、CH2N(CH3)C(＝O)R1’、CH2NHC(＝O)CH2NHR1’、CH2R1’或CH2NHR1’；
n是0、1或2；
R1’是苯基、不饱和或部分不饱和双环或单环杂芳基或杂环烷基，其任选地被一个或多个R1”取代；
R1”各自独立地是低级烷基、卤素、环烷基、杂环烷基、低级烷基杂环烷基、氧代、氰基低级烷基、羟基低级烷基或低级烷氧基；
R2是H、R3或R4；
R3是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’；
R3’是H、低级烷基、杂环烷基、氨基或OH；
R4是低级烷基或杂芳基，其任选地被一个或多个R4’取代；且
R4’是甲基、羟基、氨基、CH2-CH2N(CH3)2、OC(＝O)CH2CH3、CH2C(＝O)OH、CH2CH2OH或C(＝O)OH；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中A是苯基，R2是H，且n是1。
3.权利要求1或2的化合物，其中R1是卤素。
4.权利要求1的化合物，其中R2是H，且n是2。
5.权利要求4的化合物，其中一个R1是卤素或低级烷基。
6.权利要求1-5任意一项的化合物，其中R1是CH2NHC(＝O)R1’、CH2NHC(＝O)CH2NHR1’或CH2NHR1’。
7.权利要求1-6任意一项的化合物，其中n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R2是C(＝O)OR3’、C(＝O)R3’或C(＝O)NH(CH2)2R3’。
8.权利要求1-7任意一项的化合物，其中n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’。
9.权利要求1-8任意一项的化合物，其中n是2，一个R1是CH2NHC(＝O)R1’，且R2是低级烷基或杂芳基。
10.权利要求1-9任意一项的化合物，中R1’是叔丁基或卤素。
11.权利要求1-10任意一项的化合物，其中一个R1是氟，且R1’是叔丁基。
12.权利要求1-11任意一项的化合物，选自：
4-(4-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(2-氯-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3-氟-4-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-对-甲苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-(3-氯-4-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；
4-叔丁基-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺；
3-氯-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺；
2-(3-氯-苯基氨基)-N-[4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-乙酰胺；
4-叔丁基-N-[2-氟-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苄基]-苯甲酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯；
4-(4-((4-叔丁基苯甲酰氨基)甲基)-3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸；
4-叔丁基-N-(2-氟-4-(6-(吗啉-4-羰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)苯甲酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸二甲基酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸甲基酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺；
4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酸(2-二甲基氨基-乙基)-酰胺；
4-叔丁基-N-{1-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-哌啶-4-基甲基}-苯甲酰胺；
4-叔丁基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4-环丙基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4-异丙基-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺；
4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-N-{4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
6-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-烟酰胺；
5-甲基-噻吩-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
4-叔丁基-N-(2-氟-4-{6-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-苄基)-苯甲酰胺；
4-叔丁基-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-N-甲基-苯甲酰胺；
5-甲基-噻吩-2-甲酸{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-甲基-酰胺；
2-叔丁基-5-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4，5-二氢-噻吩并[2，3-c]吡咯-6-酮；
5-叔丁基-异噁唑-3-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)-苯甲酰胺；
4-(氰基-二甲基-甲基)-N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺；
4，5，6，7-四氢-苯并[b]噻吩-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯甲酰胺；
3-叔丁基-异噁唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
3-叔丁氧基-氮杂环丁烷-1-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
4-叔丁基-N-(4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基)-苯甲酰胺；
3-叔丁氧基-氮杂环丁烷-1-甲酸4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基酰胺；
1，3-二氢-异吲哚-2-甲酸4-{6-[1-(2-二甲基氨基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-2-氟-苄基酰胺；
[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸乙酯；
[4-(4-{4-[(4-叔丁基-苯甲酰基氨基)-甲基]-3-氟-苯基}-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基)-吡唑-1-基]-乙酸；
N-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酰胺；
5-叔丁基-异噁唑-3-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
3-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-5-甲酸2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基酰胺；
{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-氨基甲酸叔丁酯；和
N-{2-氟-4-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-苄基}-苯甲酰胺。
13.治疗炎性和/或自身免疫病症的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-12的任意一项的化合物。
14.治疗炎性病症的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-12的任意一项的化合物。
15.治疗类风湿性关节炎的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-12的任意一项的化合物。
16.治疗哮喘的方法，包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-12的任意一项的化合物。
17.药物组合物，其包含权利要求1-12的任意一项的化合物与至少一种药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。
18.权利要求1-12的任意一项化合物作为治疗活性物质的用途。
19.权利要求1-12的任意一项化合物用于制备治疗炎性和/或自身免疫病症药物的用途。
20.权利要求1-12的任意一项化合物用于治疗炎性和/或自身免疫病症的用途。
21.权利要求1-12的任意一项化合物，其用于治疗炎性和/或自身免疫病症。
22.如上所述的发明。
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