CN104651335B - 一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法 - Google Patents

一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104651335B
CN104651335B CN201410718814.9A CN201410718814A CN104651335B CN 104651335 B CN104651335 B CN 104651335B CN 201410718814 A CN201410718814 A CN 201410718814A CN 104651335 B CN104651335 B CN 104651335B
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
enzyme
malt
amylase
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410718814.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104651335A (zh
Inventor
李洪兵
李海清
张锦杰
朱永明
胡永明
向左东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Xinhongying Bioengineering Co ltd
Original Assignee
Hunan Xinhongying Bioengineering Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan Xinhongying Bioengineering Co ltd filed Critical Hunan Xinhongying Bioengineering Co ltd
Priority to CN201410718814.9A priority Critical patent/CN104651335B/zh
Publication of CN104651335A publication Critical patent/CN104651335A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104651335B publication Critical patent/CN104651335B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2425—Beta-amylase (3.2.1.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/2488—Mannanases
    • C12N9/2491—Beta-mannosidase (3.2.1.25), i.e. mannanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01011—Pectinesterase (3.1.1.11)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03002—Acid phosphatase (3.1.3.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01001—Alpha-amylase (3.2.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01002—Beta-amylase (3.2.1.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01025—Beta-mannosidase (3.2.1.25), i.e. mannanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01067—Galacturan 1,4-alpha-galacturonidase (3.2.1.67)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
    • C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
    • C12Y402/02002—Pectate lyase (4.2.2.2)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Non-Alcoholic Beverages (AREA)

Abstract

本发明公开了一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法，属于酶制剂加工领域。以浓缩麦芽酶和浓缩麦汁粉为主要原料，科学复配高活力真菌α‑淀粉酶等食品级酶制剂、植物提取物、抗氧化剂、保护剂、激活剂等；制得一种蛋白酶系全、酶活力高、不易失活、麦芽香味浓、可为麦汁提供丰富氮源的啤酒复合酶，其中，真菌α‑淀粉酶制备过程中发酵液真菌α‑淀粉酶酶活力为17000‑21000U/mL。复合酶在0℃和40℃条件下储存12个月，复合酶中单酶酶活损失分别为0.50％和0.72％，有效防止在包装、储存、运输、使用等环节因环境改变、操作方法不当而造成酶的失活，尤其可防止高温造成的酶失活。

Description

一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法
技术领域
本发明属于酶制剂制备技术领域，具体是一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法。
背景技术
啤酒营养丰富，酒精含量低，以其特有的泡沫和特殊的香味，深受广大消费者喜爱，啤酒中含有人体必需的维生素、氨基酸和碳水化合物等营养物质，适量的饮用啤酒有利于人体健康，故啤酒享有“液体面包”的美名。
我国啤酒业发展迅速，啤酒产量已连续几年位居世界首位，但遗憾的是，国产大麦的发展却出现了徘徊不前的窘况。其根本原因是受土质、气候、品种、发芽方法、工艺条件等的制约，国产麦芽的品质一直较低。大的啤酒集团不惜高价进口一类澳麦和法麦为啤酒生产原料，国产大麦由于受诸多因素影响，本身的淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、磷酸酯酶、氧化还原酶等在发芽过程中分泌不足，导致啤酒麦芽中β-葡聚糖、半纤维素、蛋白质等含量过高，造成糖化后麦汁质量和产量双低，不能生产高端啤酒。
随着各种啤酒原料价格的不断上涨，特别是进口麦芽、大米价格的直线上扬，直接导致了啤酒生产成本的大幅上升。为维持企业的生存和发展，各个啤酒厂都在积极应对此项问题，通过技术创新和提高辅料比例来消化成本上升的压力，在这种形势下，原料中添加小麦芽及淀粉质辅料成为啤酒企业的主要选择。
在大麦芽质量较差以及添加淀粉质辅料较多的情况时，酶制剂的添加成为一种必要。目前，酶制剂市场啤酒复合酶种类较多，按照添加工序来划分，可以分为糖化工序、发酵工序、过滤工序及灌装工序啤酒复合酶，以糖化工序添加的复合酶较多，其主要的复配原则是以啤酒麦芽酶系为基础进行淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、磷酸酯酶、氧化还原酶等酶制剂的优化组合，成功解决了因为麦芽质量差或辅料添加量高而引起的糖化不完全、浸出率低，麦汁粘度大、过滤困难，蛋白质溶解不充分、α–氨基氮含量低等麦汁制造难题。
但是，当啤酒酿造过程中为了降低生产成本，提高辅料使用比例时，虽然添加外加酶制剂糖化可有效改善啤酒口味，降低色度、总酚，延长啤酒保质期，但同时也会产生许多负面影响，如氮源不足、过滤困难、非生物稳定性降低等，造成酿制出的啤酒氨基酸水平低、营养价值不高，啤酒的泡沫性能差、泡沫不丰富，麦芽香味不足等质量缺陷，失去了传统啤酒的本质口感和风味，称不上真正意义的啤酒。为此大多数啤酒生产厂家通过添加不同的食品添加剂试图解决上述质量问题但效果仍不理想。中国专利CN103242996 B公开了一种啤酒复合酶及其制备方法，所述啤酒复合酶以天然浓缩麦芽酶为主要原料，科学复配混合酶，不仅补充了充足的酶源，更重要的是在保护剂和激活剂协同作用下，其酶活力更足、保存性能更优越、氮源更丰富、麦芽香味更足，常温保存2年酶活损失在3％以下；中国专利CN103865701 A公开了一种含中性蛋白酶的啤酒复合酶及其制备方法，所述啤酒复合酶中的中性蛋白酶是由产强热稳定性中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌1398-2-12为出发菌株经特定发酵条件下的液体深层发酵而制备的，发酵液中性蛋白酶酶活力为5500-7000U/mL；上述已经公开的啤酒复合酶虽然在啤酒酿造中发挥了重要的作用，但啤酒复合酶中真菌α-淀粉酶的酶活力、热稳定性有待继续提高、复合酶酶系不全、啤酒复合酶组分没有添加消除自由基并提高酶活力的抗氧化剂，存在一定的缺陷。
发明内容
本发明所解决的技术问题是克服了现有啤酒复合酶中真菌α-淀粉酶热稳定性差、酶活力低、酶系不全，复合酶抗氧化能力低、酶活力损失大等缺陷，以浓缩麦芽酶和浓缩麦汁粉为主要原料，科学复配耐高温、高活力真菌α-淀粉酶等食品级酶制剂、植物提取物、抗氧化剂、保护剂、激活剂等；制得一种酶活力高、不易失活、麦芽香味浓、可为麦汁提供丰富氮源的啤酒复合酶。
为了达到上述目的，本发明采取以下技术方案：
一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，由以下重量份数的原料组成：
浓缩麦芽酶48-52份，淀粉酶32-38份，蛋白酶20-30份，半纤维素酶15-30份，植物提取物16-18份，浓缩麦汁粉15-17份，酯酶5-10份，保护剂3-5份，激活剂3-5份，抗氧化剂1.5-2.5份；
所述植物提取物中含有淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、酯酶、氧化还原酶等多种植物酶；
所述植物提取物中还含有植物多糖和单糖、植物淀粉、植物蛋白等营养物质，不仅可为啤酒复合酶提供全面、丰富的植物酶，还可作为制备真菌α-淀粉酶的发酵培养基成分，提高淀粉酶活力和微生物产酶能力；
所述植物提取物采用超声清洗、微波辅助超声提取和高压脉冲电场提取、超滤浓缩等低温提取技术，有效提高了原料利用率、植物酶活性和产率；有效保证了植物提取物的食品安全性；
所述植物提取物的制备方法为：将大麦芽、小麦芽和焦香麦芽按质量比3-5:2-3:1-2均匀混合，粉碎至粒度0.5-1mm,得粉碎麦芽；然后将木瓜、菠萝、无花果分别于超声波清洗机中在功率200W、频率30KHz条件下超声清洗5-10min，沥干，室温下破碎至粒度0.5-1mm，并按质量比3-5:3-5:1-3均匀混合，加入混合物质量2.0-2.5倍的粉碎麦芽得原料混合物，加入原料混合物1-3倍的水，用柠檬酸调节pH值为3-4，在功率150-300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间60-80s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，控制温度20-35℃，如此辐照10次，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；保温1-3h,然后，在功率200-400W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间90-105s,进行间隔式辐照：辐照15s，间隔10s，控制温度40-60℃，如此辐照10次，同时在功率300-500W,频率40-50KHz条件下进行超声波辅助提取，最后自然降温至室温，于电场强度25-35kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场(PEF)提取15-20min；提取液过滤得第一滤液，加滤渣2倍的水漂洗、过滤得第二滤液，将第一滤液和第二滤液按质量比1:1-2均匀混合，混合液超滤浓缩、冷冻干燥、低温粉碎即得植物提取物；
优选地，所述超声波清洗机中清洗液为0.55-0.65％的碳酸氢钠溶液。
所述淀粉酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：40％糖化酶，30％真菌α-淀粉酶，15％普鲁兰酶，10％β-淀粉酶，5％中温α-淀粉酶；
所述真菌α-淀粉酶是由里氏木霉(Trichoderma reesei)901-18经培养基和发酵工艺优化液体深层发酵而制备，该菌株已于2013年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2013602，分类命名为：里氏木霉901-18Trichoderma reesei901-18；
所述里氏木霉901-18是由一株分离自湖南省津市市河堤食用菌培植基地土壤样本的里氏木霉菌株经紫外线-氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变筛选获得，所述菌株特点如下：该菌株在PDA固体培养基上生长，形成的菌落特征为菌落呈棉絮状、淡绿色，菌落扁平，高0.2-0.8mm，菌落边缘白色，整齐；生长速度快，48h菌落直径达1.5-8.5mm,72h达30-55mm；菌丝白色，有隔膜，菌丝壁光滑，直径在2-5μm。分生孢子梗从菌丝的短侧枝发生，侧枝上对生。该菌株产α-淀粉酶的最适pH 3.0-6.5；最适温度为27-30℃；
优选地，所述真菌α-淀粉酶的制备方法包括以下步骤：保存完好的里氏木霉CCTCCNO:M 2013602的菌种经斜面菌种活化、一级、二级、三级液体种子扩大培养至种子罐，将种子罐液体种子以6％接种量接入发酵罐培养基，培养温度27-30℃，搅拌速度120-180r/m，通风量1-3vvm,培养时间10-15h；然后以1-2℃/h降温速率缓慢降温至10-15℃，搅拌速度250-300r/m，通风量1-2vvm,恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h降温速率缓慢降温至2-5℃，此时，将种子罐液体种子以4％接种量追加接入发酵罐，恒温培养20-30h；最后以1-2℃/h升温速率缓慢升温至10-15℃，搅拌速度200-400r/m，通风量1-2vvm,恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h升温速率缓慢升温至27-30℃，恒温培养15-20h；发酵液经过滤、浓缩、调配、精滤、干燥得固体真菌α-淀粉酶；
所述真菌α-淀粉酶制备过程中发酵结束，发酵液α-淀粉酶酶活力高达17000-21000u/ml；酶温度适应范围较宽，为50-75℃之间，最适作用温度在65℃，70℃下保存3h仍具有80％以上酶活，具有较好的热稳定性和保存活性；该酶最适反应pH值为5.5，在pH值4.5-7.0之间酶活保持在70％以上，比现有的真菌α-淀粉酶酶活力高，酶作用最适pH值范围宽泛，耐温度高；
所述斜面培养基组成为：葡萄糖20g，琼脂20g，中草药提取物5-10g,酵母膏4g，磷酸氢二钾2g，氯化镁0.6g，氯化钾0.8g，蒸馏水l000mL，pH值5.8，121℃灭菌20min。
所述一级、二级、三级种子培养基组成为：麸皮60-80g,玉米粉50-60g，豆饼粉35-40g，海藻糖10-15g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙5-10g，中草药提取物5-10g，硫酸镁2-4g，磷酸氢二钾1-3g，纯净水l000mL，pH值5-7，121℃灭菌20min；
所述种子罐培养基组成为：麸皮60-80g,玉米粉50-60g，豆饼粉35-40g，海藻糖10-15g，中草药提取物10-15g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙5-10g，硫酸镁2-4g，磷酸氢二钾1-3g，纯净水l000mL，pH值5-7，121℃灭菌20min；
所述种子罐发酵液菌体浓度为7.0x108-8.0x108个/ml；
所述发酵罐培养基组成为：麸皮60-80g,玉米粉50-60g，植物提取物40-60g，豆饼粉35-40g，中草药提取物20-30g，海藻糖10-30g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙5-10g，硫酸镁2-4g，磷酸氢二钾1-3g，硝酸钾1-2g,硫酸锌0.1-0.2g,纯净水l000mL，pH值5-7，121℃灭菌20min；
所述中草药提取物的制备方法如下：
按重量份数计，称取黄芪50-60份，当归40-50份，党参35-45份，甘草35-45份，鱼腥草25-35份，神曲20-30份，柴胡10-15份，黄芩10-15份；将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70℃-90℃保持2-4h，然后降温至45-60℃，加入混合物料总重量5-10％的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比为1:1.5，控制温度至60℃-78℃保持3-4h，过滤，得第一滤液；添加滤渣1-3倍重量的水，控制温度85℃-95℃保持1-3h，然后降温至25-35℃，过滤，得第二滤液；将第一滤液和第二滤液按照质量比2-4:1-3合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物；
所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:4:2:1均匀混合。
所述浓缩麦芽酶重量百分比组成为：原麦芽酶65-75％，香味麦芽酶25-35％。
所述原麦芽酶制备方法如下：
(1)高压脉冲电场(PEF)浸泡处理：将麦芽在预浸槽中用3-6倍20-50℃温水浸泡10-20min，使麦芽水分含量达到25-35％，同时进行高压脉冲电场(PEF)处理，电场强度20-40kV/cm，脉冲时间150-200μs,脉冲频率200-300Hz；
(2)粉碎：将步骤(1)中处理好的麦芽与浸泡水加入麦芽粉碎机带水粉碎，调整辊间距为0.5mm,转速为250rpm,得到麦芽浆液；
(3)超声、PEF提取：将麦芽浆液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度0.6A/25W-1.5A/275W条件下进行超声提取10-15min；然后进行高压脉冲电场(PEF)提取15-20min，电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz；
(4)过滤：将提取液于室温用500-800目滤布预涂粒度为100目-300目硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24MPa；
(5)超滤浓缩：采用截留分子量<100000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液酶含量为超滤前的10-15倍；
(6)干燥：向浓缩液中加入浓缩液重量3-5％的本发明保护剂，然后用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度150-160℃，排风温度75-85℃,干燥时间5-15s，产品水分＜5％，即得原麦芽酶；
所述香味麦芽酶制备方法如下：
(1)麦芽回潮：用麦芽重量3-4％，温度为40-50℃温水均匀喷雾麦芽粒表面，置混合机中均匀混合3-5min；
(2)烘焙：将回潮麦芽装入转筒式炒炉，在10-15min内温度升至170-200℃，保温10-15min，然后降温至100-110℃，保温20-30min,最后取出摊凉，得到香味麦芽；
(3)粉碎：将香味麦芽加入麦芽粉碎机粉碎，调整辊间距为0.5mm,转速为250rpm,得到香味麦芽粉；
(4)超声、PEF提取：将香味麦芽粉置于配料缸中，加入3-6倍的水，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度0.6A/25W-1.5A/275W条件下进行超声提取10-15min；然后进行高压脉冲电场(PEF)提取15-20min，电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz；
(5)过滤：将提取液于室温用500-800目滤布采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24MPa；
(6)超滤浓缩：采用截留分子量<100000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液酶含量为超滤前的10-15倍；
(7)干燥：向浓缩液中加入浓缩液重量3-5％的本发明保护剂，然后用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度150-160℃，排风温度75-85℃,干燥时间5-15s，产品水分＜5％，即得香味麦芽酶；
所述浓缩麦汁粉制备方法如下：
(1)将麦芽粉碎，加入4-5倍的温水，用乳酸调节pH值为4.5-5.5，加入复配酶进行分段酶解，45-55℃蛋白休止90min，62-66℃糖化60min；
(2)待糖化完全，将糖化醪液于74-76℃用500-800目滤布预涂粒度为100目-300目硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24MPa，过滤得原麦汁；
(3)将原麦汁采用截留分子量<100000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液浓度为超滤前的10-15倍；
(4)将浓缩液用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度150-160℃，排风温度75-85℃,干燥时间5-15s，产品水分＜5％，即得浓缩麦汁粉；
所述复配酶是由如下质量份数的酶制剂均匀混合而成：糖化酶20-30份，普鲁兰酶20-30份，β-淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份，菠萝蛋白酶10-15份，无花果蛋白酶10-15份，蘑菇蛋白酶10-15份，内β-葡聚糖酶5-10份，外β-葡聚糖酶5-10份，木聚糖酶5-10份，戊聚糖酶5-10份，超氧化物歧化酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份。
所述蛋白酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：中性蛋白酶55％，酸性蛋白酶35％，脯氨酸蛋白酶10％。
所述半纤维素酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：45％耐温β-葡聚糖复合酶，30％β-葡聚糖复合酶，10％甘露聚糖酶，10％的木聚糖酶，5％的戊聚糖酶。
所述酯酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：45％酸性磷酸酶，30％脂肪酶，25％磷酸酯酶。
所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌35-45份，氯化钙15-25份，硫酸钠10-20份，氯化镁5-10份。
所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖30-40份，灵芝多糖25-35份，NaCl10-15份，(NH4)2SO4 8-12份，半胱氨酸8-10份。
所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物中的任意一种或几种组合；
优选地，所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比6-8:5-7:2-4均匀混合；
所述葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物均为市购商品。
上述含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法：
首先将所述保护剂、激活剂超微粉碎，随后立即依次加入淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、酯酶、植物提取物、浓缩麦芽酶均匀混合，最后加入浓缩麦汁粉及抗氧化剂，混合均匀后密封包装即得啤酒复合酶。
使用方法：
糖化阶段将本发明啤酒复合酶制剂加入糖化锅；
添加量：根据麦芽质量的不同和酿造辅料的比例高低，添加量为麦芽干重的0.04-0.06％；
作用条件：最适pH值4.5-5.5；最适温度35-65℃；最佳料水质量比1:4.5-5.5。
首先准确称量啤酒复合酶，加入5倍的50-60℃糖化用水于不锈钢容器内，充分搅拌溶解5min，在糖化锅投料前5-10min加入糖化锅，然后开启糖化锅搅拌10min，进行正常糖化工艺。
有益效果：
1.本发明植物提取物以含植物酶丰富、酶系全面的大麦麦芽、小麦麦芽、焦香麦芽、木瓜、菠萝、无花果为原料，采用超声清洗、微波辅助超声提取和高压脉冲电场提取、超滤浓缩等低温提取技术，有效提高了原料利用率、植物酶活性和产率；有效保证了植物提取物的食品安全性；制备的植物提取物中含有蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶、氧化还原酶等多种植物酶系；所述植物提取物中还含有植物多糖和单糖、植物淀粉、植物蛋白等营养物质，不仅可为啤酒复合酶提供全面、丰富的植物酶，还可作为制备真菌α-淀粉酶的发酵培养基成分，提高α-淀粉酶活力和微生物产酶能力。
2.本发明的真菌α-淀粉酶以高产真菌α-淀粉酶的菌株里氏木霉CCTCC NO:M2013602为出发菌株，根据其最适生长温度和最适产酶温度，细化了孢子增殖和发酵产酶阶段的工艺参数，采用梯度降温和梯度升温的发酵工艺，同时予以追加接种，尤其是梯度降温和梯度升温的发酵工艺显著提高了出发菌株的抗应激能力，致使菌种的产酶能力最大限度地显现。并且本发明对培养基组成实施全程优化，添加了具有抗热应激原作用的黄芩、柴胡，添加了具有调整和修复机体功能、增强机体的免疫功能、具有微生态调节功能的黄芪、党参等，进一步增强了微生物在同一发酵环境下的机体功能性、传代适应性和共同协作性，进而增强了微生物的代谢功能，使得本发明所产真菌α-淀粉酶活力高、耐受温度较高、稳定性强、适于工业化生产。
3.本发明真菌α-淀粉酶制备过程中发酵培养基植物提取物的添加，使得发酵液α-淀粉酶酶活力大幅度提高，由12000-15000U/mL提高至17000-21000U/mL，发酵液粗酶液温度适应范围较宽，为50-75℃之间，最适作用温度在65℃，70℃下保存3h仍具有80％以上酶活，具有较好的热稳定性和保存活性；该酶最适反应pH值为5.5，在pH值4.5-7.0之间酶活保持在70％以上，比现有的真菌α-淀粉酶酶活力高，酶作用最适pH值范围宽泛，耐温度高；更加适合啤酒酿造，能够彻底分解麦芽及辅料中的淀粉大分子，提高啤酒产量和非生物稳定性，延长啤酒的保质期。
4.本发明啤酒复合酶抗氧化剂的科学复配，可有效防止复合酶酶分子结构氧化而造成酶活性损失，提高酶活力稳定性。在0℃和40℃条件下储存12个月，复合酶中单酶酶活损失分别为0.50％和0.72％，比对比例分别降低7.41％和60％，有效防止在包装、储存、运输、使用等环节因环境改变、操作方法不当而造成酶的失活，尤其可防止高温造成的酶失活。
5.本发明啤酒复合酶中的浓缩麦芽酶以优质进口麦芽为原料，采用超声波、高压脉冲电场技术(pulsed electric field简称“PEF”)等方法最大限度的提取麦芽酶系酶源，是一种天然的啤酒复合酶，其酶源品种及单酶特性100％来自啤酒麦芽，酶解效果、风味和糖化后的麦汁组成远远优于采用微生物发酵制得的单酶及其组合；其中的香味麦芽酶不仅可以提供酶源，最主要的是其浓郁、独特的麦芽香味为高比例辅料外加酶制剂酿造啤酒提供了最天然、纯正的麦芽香味。
6.本发明啤酒复合酶中的浓缩麦汁粉，将纯正麦汁浓缩，为高比例辅料外加酶制剂酿造啤酒提供了丰富的麦汁氮源。
7.本发明啤酒复合酶中保护剂科学复配，有效减缓了香味麦芽酶及复合酶制剂的回潮；同时可增强复合酶的耐冻、耐热性能，保持相同的酶活力，其耐热温度可提高20-30℃，耐冷冻温度可降低10-15摄氏度，有效防止了复合酶在运输、保存和使用过程中酶活力的损失，延长了复合酶的保质期，达到同样的酶活力，同类产品保质期可延长2-3年。
8.本发明啤酒复合酶添加无机盐作为激活剂，创造了酶催化作用的最佳条件，充分发挥了麦芽中自带酶和外加酶的活力，彻底有效的分解了麦芽中淀粉、蛋白质、半纤维素、脂肪等大分子物质，使得糖化麦汁组分更科学、更合理，不但提高了啤酒的产量，而且大大提高了啤酒的非生物稳定性，同时也促进了酵母的发酵性能。
9.本发明的啤酒复合酶以天然浓缩麦芽酶为主要原料，科学复配混合酶，不仅补充了充足的酶源，更重要的是在保护剂和激活剂协同作用下，其酶活力更足、保存性能更优、氮源更丰富、麦芽香味更足，为高辅料比例进行外加酶制剂糖化，降低啤酒生产成本，生产出营养价值丰富、口感和风味天然纯正的优质传统啤酒奠定了坚实的基础。
10.麦芽中的麦芽酶系绝大多数存在于麦芽胚乳细胞的糊粉层，高压脉冲电场(pulsed electric field简称“PEF”)产生磁场，这种脉冲电场和脉冲磁场交替作用，使胚乳细胞膜及糊粉层透性增加，振荡加剧，胚乳细胞膜及糊粉层强度减弱，因而胚乳细胞膜及糊粉层被破坏，胚乳细胞膜及糊粉层内大量麦芽源酶容易流出，提高了麦芽源酶的浸出率，同时高压脉冲电场可通过电离作用和交替作用杀死提取过程中的杂菌，有效防止麦芽汁变质。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
实施例1原料制备
1.植物提取物的制备
所述植物提取物的制备方法为：将大麦芽、小麦芽、焦香麦芽按质量比4:2.5:1.5均匀混合，粉碎至粒度0.8mm,得粉碎麦芽；然后将木瓜、菠萝、无花果分别置装有0.6％的碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中在功率200W、频率30KHz条件下超声清洗8min，沥干，室温下破碎至粒度0.8mm，并按质量比4:4:2均匀混合，加入混合物质量2.2倍的粉碎麦芽得原料混合物，加入原料混合物2倍的水，用柠檬酸调节pH值为3.5，在功率200W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间70s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，控制温度30℃，如此辐照10次，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；保温2h,然后，在功率300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间100s,进行间隔式辐照：辐照15s，间隔10s，控制温度50℃，如此辐照10次，同时在功率400W,频率45KHz条件下进行超声波辅助提取，最后自然降温至室温，于电场强度30kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场提取18min；提取液过滤得第一滤液，加滤渣2倍的水漂洗、过滤得第二滤液，将第一滤液和第二滤液按质量比1:1.5均匀混合，混合液超滤浓缩、冷冻干燥、低温粉碎即得植物提取物。
2.真菌α-淀粉酶的制备
所述真菌α-淀粉酶的制备方法包括如下步骤：
(1)菌种活化
将保存完好的里氏木霉CCTCC NO:M 2013602的斜面菌种接种于斜面培养基，30℃培养40h进行菌种活化，如此活化3次；
(2)液体种子扩大培养
①一级种子培养：将步骤(1)活化后斜面菌种以无菌水洗下孢子，接入500毫升摇瓶中，液体种子培养基装量100毫升，30℃、100rpm摇床培养40h；
②二级种子培养：将一级种子按照10％的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；
③三级种子培养：将二级种子以8％接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，液体培养基装量1000毫升，30℃、100rpm摇床培养40h；
④种子罐培养：将三级种子以8％接种量接入总容积为150L的一级种子罐，种子罐培养基装量100L，控制pH值为6，培养温度29℃，搅拌速度300rpm，通风量(V/V)1:1,培养时间40h；
所述种子罐发酵液菌体浓度为8.0x108个/ml；
(3)发酵罐发酵
将步骤(2)中种子罐液体种子以6％接种量接入发酵罐培养基，培养温度28℃，搅拌速度150r/m，通风量2vvm,培养时间12h；然后以2℃/h降温速率缓慢降温至12℃，搅拌速度280r/m，通风量1.5vvm,恒温培养18h；继续以2℃/h降温速率缓慢降温至4℃，此时，将种子罐液体种子以4％接种量追加接入发酵罐，恒温培养25h；最后以2℃/h升温速率缓慢升温至12℃，搅拌速度300r/m，通风量1.5vvm,恒温培养18h；继续以2℃/h升温速率缓慢升温至28℃，恒温培养18h；
(4)发酵液经过滤、浓缩、调配、精滤、干燥得固体真菌α-淀粉酶。
经上述方法制备的真菌α-淀粉酶在室温下保存12个月后酶活损失为1.6％，发酵液α-淀粉酶酶活力可达21000U/mL。
所述斜面培养基组成为：葡萄糖20g，琼脂20g，中草药提取物7g,酵母膏4g，磷酸氢二钾2g，氯化镁0.6g，氯化钾0.8g，蒸馏水l000mL，pH值5.8，121℃灭菌20min。
所述一级、二级、三级种子培养基组成为：麸皮70g,玉米粉55g，豆饼粉38g，海藻糖12g，鱼粉8g，氯化铵11g，氯化钙8g，中草药提取物8g，硫酸镁3g，磷酸氢二钾2g，纯净水l000mL，pH值6，121℃灭菌20min；
所述种子罐培养基组成为：麸皮70g,玉米粉55g，豆饼粉38g，海藻糖12g，中草药提取物12g，鱼粉8g，氯化铵11g，氯化钙8g，硫酸镁3g，磷酸氢二钾2g，纯净水l000mL，pH值6，121℃灭菌20min；
所述发酵罐培养基组成为：麸皮70g,玉米粉55g，植物提取物50g，豆饼粉38g，中草药提取物25g，海藻糖20g，鱼粉8g，氯化铵11g，氯化钙8g，硫酸镁3g，磷酸氢二钾2g，硝酸钾2g,硫酸锌0.2g,纯净水l000mL，pH值6，121℃灭菌20min；
所述中草药提取物的制备方法如下：按重量份数计，称取黄芪55份，当归45份，党参40份，甘草40份，鱼腥草30份，神曲25份，柴胡12份，黄芩12份；将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水，控制温度80℃保持3h，然后降温至52℃，加入混合物料总重量8％的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为6.2，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比为1:1.5，控制温度至70℃保持4h，过滤，得第一滤液；添加滤渣2倍重量的水，控制温度90℃保持2h，然后降温至30℃，过滤，得第二滤液；将第一滤液和第二滤液按照质量比2.5:1.5合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物；
所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:4:2:1均匀混合。
3.浓缩麦芽酶的制备
所述浓缩麦芽酶重量百分比组成为：原麦芽酶70％，香味麦芽酶30％；
所述原麦芽酶制备方法如下：
(1)高压脉冲电场(PEF)浸泡处理：将麦芽在预浸槽中用5倍35℃温水浸泡15min，使麦芽水分含量达到30％，同时进行高压脉冲电场(PEF)处理，电场强度30kV/cm，脉冲时间180μs,脉冲频率250Hz；
(2)粉碎：将步骤(1)中处理好的麦芽与浸泡水加入麦芽粉碎机带水粉碎，调整辊间距为0.5mm,转速为250rpm,得到麦芽浆液；
(3)超声、PEF提取：将麦芽浆液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度1.5A/275W条件下进行超声提取12min；然后进行高压脉冲电场(PEF)提取18min，电场强度30kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率250Hz；
(4)过滤：将提取液于室温用500目滤布预涂粒度为100目硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.20MPa；
(5)超滤浓缩：采用截留分子量85000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液酶含量为超滤前的12倍；
(6)干燥：向浓缩液中加入浓缩液重量4％的本发明实施例2保护剂，然后用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度160℃，排风温度85℃,干燥时间10s，产品水分3％，即得原麦芽酶。
所述香味麦芽酶制备方法如下：
(1)麦芽回潮：用麦芽重量4％，温度为45℃温水均匀喷雾麦芽粒表面，置混合机中均匀混合4min。
(2)烘焙：将回潮麦芽装入转筒式炒炉，在12min内温度升至180℃，保温12min，然后降温至105℃，保温25min,最后取出摊凉，得到香味麦芽；
(3)粉碎：将香味麦芽加入麦芽粉碎机粉碎，调整辊间距为0.5mm,转速为250rpm,得到香味麦芽粉；
(4)超声、PEF提取：将香味麦芽粉置于配料缸中，加入5倍的水，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度1.5A/275W条件下进行超声提取12min；然后进行高压脉冲电场(PEF)提取18min，电场强度30kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率250Hz；
(5)过滤：将提取液于室温用500目滤布采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.20MPa；
(6)超滤浓缩：采用截留分子量85000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液酶含量为超滤前的12倍；
(7)干燥：向浓缩液中加入浓缩液重量4％的本发明实施例2保护剂，然后用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度160℃，排风温度80℃,干燥时间10s，产品水分3％，即得香味麦芽酶。
4.浓缩麦汁粉的制备
所述浓缩麦汁粉制备方法如下：
(1)将麦芽粉碎，加入5倍的温水，用乳酸调节pH值为5.4，加入复配酶进行分段酶解，50℃蛋白休止90min，66℃糖化60min。
(2)待糖化完全，将糖化醪液于75℃用600目滤布预涂粒度为200目硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.20MPa，过滤得原麦汁；
(3)将原麦汁采用截留分子量85000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液浓度为超滤前的12倍；
(4)将浓缩液用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度160℃，排风温度80℃,干燥时间10s，产品水分3％，即得浓缩麦汁粉；
所述复配酶是由如下质量份数的酶制剂均匀混合而成：糖化酶25份，普鲁兰酶25份，β-淀粉酶12份，中性蛋白酶12份，菠萝蛋白酶12份，无花果蛋白酶12份，蘑菇蛋白酶12份，内β-葡聚糖酶8份，外β-葡聚糖酶8份，木聚糖酶8份，戊聚糖酶8份，超氧化物歧化酶8份，葡萄糖氧化酶8份，酸性磷酸酶8份。
实施例2一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，由以下重量份数的原料组成：
浓缩麦芽酶50份，淀粉酶35份，蛋白酶25份，半纤维素酶22份，植物提取物17份，浓缩麦汁粉16份，酯酶8份，保护剂4份，激活剂4份，抗氧化剂2份；
所述淀粉酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：40％糖化酶，30％真菌α-淀粉酶，15％普鲁兰酶，10％β-淀粉酶，5％中温α-淀粉酶；
所述蛋白酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：中性蛋白酶55％，酸性蛋白酶35％，脯氨酸蛋白酶10％；
所述半纤维素酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：45％耐温β-葡聚糖复合酶，30％β-葡聚糖复合酶，10％甘露聚糖酶，10％的木聚糖酶，5％的戊聚糖酶；
所述酯酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：45％酸性磷酸酶，30％脂肪酶，25％磷酸酯酶；
所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌40份，氯化钙20份，硫酸钠15份，氯化镁8份；
所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖35份，灵芝多糖30份，NaCl 12份，(NH4)2SO4 10份，半胱氨酸9份；
所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比7:6:3均匀混合；
所述浓缩麦芽酶、真菌α-淀粉酶、植物提取物、浓缩麦汁粉均为实施例1制备；
上述含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法：
首先将所述保护剂、激活剂超微粉碎，随后立即依次加入淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、酯酶、植物提取物、浓缩麦芽酶均匀混合，最后加入浓缩麦汁粉及抗氧化剂，混合均匀后密封包装即得啤酒复合酶。
实施例3一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，由以下重量份数的原料组成：
浓缩麦芽酶48份，淀粉酶32份，蛋白酶20份，半纤维素酶15份，植物提取16份，浓缩麦汁粉15份，酯酶5份，保护剂3份，激活剂3份，抗氧化剂1.5份；
所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌35份，氯化钙15份，硫酸钠10份，氯化镁5份；
所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖30份，灵芝多糖25份，NaCl 10份，(NH4)2SO4 8份，半胱氨酸8份；
所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比6:5:2均匀混合；
所述蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶质量百分比组成同实施例2；
所述浓缩麦芽酶、真菌α-淀粉酶、植物提取物、浓缩麦汁粉均为实施例1制备；
含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法同实施例2。
实施例4一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，由以下重量份数的原料组成：
浓缩麦芽酶52份，淀粉酶38份，蛋白酶30份，半纤维素酶30份，植物提取物18份，浓缩麦汁粉17份，酯酶10份，保护剂5份，激活剂5份，抗氧化剂2.5份；
所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌45份，氯化钙25份，硫酸钠20份，氯化镁10份；
所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖40份，灵芝多糖35份，NaCl 15份，(NH4)2SO4 12份，半胱氨酸10份；
所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比8:7:4均匀混合；
所述蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶质量百分比组成同实施例2；
所述浓缩麦芽酶、真菌α-淀粉酶、植物提取物、浓缩麦汁粉均为实施例1制备；
含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法同实施例2。
实施例5一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，由以下重量份数的原料组成：
浓缩麦芽酶48份，淀粉酶38份，蛋白酶20份，半纤维素酶30份，植物提取物16份，浓缩麦汁粉17份，酯酶5份，保护剂5份，激活剂5份，葡萄籽原花青素1.5份；
所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌45份，氯化钙25份，硫酸钠10份，氯化镁5份；
所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖40份，灵芝多糖25份，NaCl 10份，(NH4)2SO4 8份，半胱氨酸8份；
所述蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶、酯酶质量百分比组成同实施例2；
所述浓缩麦芽酶、真菌α-淀粉酶、植物提取物、浓缩麦汁粉均为实施例1制备；
含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法同实施例2。
实施例6真菌α-淀粉酶酶学性质的测定
(1)温度对酶活性的影响以及酶的热稳定性
将实施例1真菌α-淀粉酶发酵粗酶液于40-80℃下分别测定该淀粉酶酶活力，结果表明该酶在50-75℃之间具有82％以上的酶活性，说明该酶的温度适应范围较宽。且热稳定实验表明，该酶在70℃保温3h后，于60℃，pH值5.5条件下仍然具有80％以上酶活，温度高于75℃，酶活损失严重。
(2)pH对酶活性的影响
将实施例1真菌α-淀粉酶发酵粗酶液在pH值3-8.5下分别测该酶酶活，结果表明该酶在pH值4.5-7时酶活性保持在70％以上，且pH值5.5时达到最大值。
实施例7植物提取物对真菌α-淀粉酶酶活力的影响
采用本发明实施例1中真菌α-淀粉酶的制备方法，其它工艺条件、工艺参数、培养基等发酵条件完全相同，唯一区别是发酵培养基不加植物提取物，形成对比例，发酵完毕，采用同一检测方法测定发酵液α-淀粉酶活力，检测结果如表1：
表1发酵液α-淀粉酶活力
项目 实施例1 对比例 差异 增幅
发酵液α-淀粉酶活力 21000U/mL 15000U/mL 6000U/mL 40％
以上结果表明：本发明制备的植物提取物含有较高的α-淀粉酶活力，发酵培养基中添加植物提取物，发酵液α-淀粉酶活力可从15000U/mL提高至21000U/mL，提高40％，同时也表明：本发明啤酒复合酶中科学复配植物提取物，可提供丰富、全面的植物酶系。
实施例8抗氧化剂对啤酒复合酶酶活力的影响
采用本发明实施例2制备的含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，其它原料、原料组分、制备方法完全相同，唯一区别是原料组分不含抗氧化剂，形成对比例，分别于0℃和40℃条件下储存12个月，采用《GB8726-2006食品添加剂糖化酶制剂》中检测方法测定糖化酶的酶活力，计算酶活损失率，酶活损失率是指实际检测的酶活力与产品标注酶活力的差值占标注酶活力的百分率，结果如表2
表2储存期复合酶中糖化酶酶活力损失率
以上结果表明，在0℃和40℃条件下储存12个月，实施例2中的糖化酶比对比例中的糖化酶酶活损失分别降低7.41％和60％，说明抗氧化剂的科学复配，显著提高了复合酶中各组分酶的活力，酶活损失大幅降低，尤其在高温条件下效果更加显著。
实施例9本发明啤酒复合酶使用效果试验
1.使用方法：
(1)原料重量百分比组成：甘肃景泰一级啤酒麦芽40％，大米20％，碎米40％。
(2)啤酒复合酶选用本发明实施例2制备的含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶和市售客户反映应用效果最好的啤酒复合酶。
(3)糖化阶段将啤酒复合酶加入糖化锅：首先准确称量啤酒复合酶，加入5倍的50℃糖化用水于不锈钢容器内，充分搅拌溶解5min，在糖化锅投料前10min加入糖化锅，然后开启糖化锅搅拌10min，进行正常糖化工艺。
(4)添加量：添加量为麦芽干重的0.05％。
(5)工艺条件：麦芽醪最适PH值5.2；蛋白休止温度50℃、时间90min；最佳料水质量比1:5。混合糖化醪(麦芽醪与糊化醪混合)最适PH值5.4；糖化温度66℃；糖化时间60min。
2.使用效果：
表3：酿造10°淡爽型啤酒糖化阶段效果对照表
注：普通酶—市售普通啤酒复合酶 复合酶—本发明啤酒复合酶
从表中数据分析：在高辅料比例(60％)酿造啤酒时，人员、设备、原料、工艺、水质等生产条件相同情况下，本发明啤酒复合酶与普通啤酒复合酶相比过滤时间平均缩短30.26％，原麦汁浓度平均提高5.55％，麦汁浊度平均降低61.30％，α–氨基氮含量平均提高22.98％，麦汁产量平均提高4.61％，麦汁产量和质量明显提高。
表4：酿造10°淡爽型啤酒发酵阶段效果对照表
注：普通酶—市售普通啤酒复合酶 复合酶—本发明啤酒复合酶
从表中数据分析：在高辅料比例(60％)酿造啤酒时，人员、设备、原料、工艺、水质等生产条件相同情况下，本发明啤酒复合酶与普通啤酒复合酶相比挥发酸平均降低71.67％，醛类平均降低55.09％，双乙酰平均降低58.93％，发酵度平均提高7.08％，回收酵母死亡率平均降低60％，发酵液质量明显提高，酵母生长及繁殖性能明显改善。
表5：酿造10°淡爽型啤酒成品效果对照表
注：A—市售普通啤酒复合酶 B—本发明啤酒复合酶
从表中数据分析：高辅料比例(60％)酿造出的成品啤酒，本发明啤酒复合酶与普通啤酒复合酶相比麦芽香味与酒花香味明显、柔和协调；色度适中；泡沫性能优良，泡持性时间延长21.86％；浊度较低，降低了50％；双乙酰含量较低，降低了50％；发酵良好，酒精度较高，提高了8.33％。成品啤酒无论是感官指标还是理化指标都远远优先于普通啤酒复合酶，达到或超过了国家现行啤酒优级标准，显示出了啤酒良好的非生物稳定性。

Claims (7)

1.一种含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，由以下重量份数的原料组成：浓缩麦芽酶48-52份，淀粉酶32-38份，蛋白酶20-30份，半纤维素酶15-30份，植物提取物16-18份，浓缩麦汁粉15-17份，酯酶5-10份，保护剂3-5份，激活剂3-5份，抗氧化剂1.5-2.5份；
所述淀粉酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：40％糖化酶，30％真菌α-淀粉酶，15％普鲁兰酶，10％β-淀粉酶，5％中温α-淀粉酶；
所述蛋白酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：中性蛋白酶55％，酸性蛋白酶35％，脯氨酸蛋白酶10％；
所述半纤维素酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：45％耐温β-葡聚糖复合酶，30％β-葡聚糖复合酶，10％甘露聚糖酶，10％的木聚糖酶，5％的戊聚糖酶；
所述酯酶是由以下质量百分比组成的酶制剂均匀混合而成：45％酸性磷酸酶，30％脂肪酶，25％磷酸酯酶；
所述激活剂是由如下质量组份的无机盐均匀混合而成：氯化锌35-45份，氯化钙15-25份，硫酸钠10-20份，氯化镁5-10份；
所述保护剂由以下重量份数的原料组成:海藻糖30-40份，灵芝多糖25-35份，NaCl 10-15份，(NH4)2SO4 8-12份，半胱氨酸8-10份；
所述植物提取物的制备方法为：将大麦芽、小麦芽和焦香麦芽按质量比3-5:2-3:1-2均匀混合，粉碎至粒度0.5-1mm,得粉碎麦芽；然后将木瓜、菠萝、无花果分别于盛有0.55-0.65％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中在功率200W、频率30KHz条件下超声清洗5-10min，沥干，室温下破碎至粒度0.5-1mm，并按质量比3-5:3-5:1-3均匀混合，加入混合物质量2.0-2.5倍的粉碎麦芽得原料混合物，加入原料混合物1-3倍的水，用柠檬酸调节pH值为3-4，在功率150-300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间60-80s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，控制温度20-35℃，如此辐照10次，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；保温1-3h,然后，在功率200-400W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间90-105s,进行间隔式辐照：辐照15s，间隔10s，控制温度40-60℃，如此辐照10次，同时在功率300-500W,频率40-50KHz条件下进行超声波辅助提取，最后自然降温至室温，于电场强度25-35kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场提取15-20min；提取液过滤得第一滤液，加滤渣2倍的水漂洗、过滤得第二滤液，将第一滤液和第二滤液按质量比1:1-2均匀混合，混合液超滤浓缩、冷冻干燥、低温粉碎即得植物提取物；
所述真菌α-淀粉酶的制备方法包括以下步骤：保存完好的里氏木霉CCTCC NO:M2013602的菌种经斜面菌种活化、一级、二级、三级液体种子扩大培养至种子罐，将种子罐液体种子以6％接种量接入发酵罐培养基，培养温度27-30℃，搅拌速度120-180r/m，通风量1-3vvm,培养时间10-15h；然后以1-2℃/h降温速率缓慢降温至10-15℃，搅拌速度250-300r/m，通风量1-2vvm,恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h降温速率缓慢降温至2-5℃，此时，将种子罐液体种子以4％接种量追加接入发酵罐，恒温培养20-30h；最后以1-2℃/h升温速率缓慢升温至10-15℃，搅拌速度200-400r/m，通风量1-2vvm,恒温培养15-20h；继续以1-2℃/h升温速率缓慢升温至27-30℃，恒温培养15-20h；发酵液经过滤、浓缩、调配、精滤、干燥得固体真菌α-淀粉酶；
所述发酵罐培养基组成为：麸皮60-80g,玉米粉50-60g，植物提取物40-60g，豆饼粉35-40g，中草药提取物20-30g，海藻糖10-30g，鱼粉6-10g，氯化铵10-12g，氯化钙5-10g，硫酸镁2-4g，磷酸氢二钾1-3g，硝酸钾1-2g,硫酸锌0.1-0.2g,纯净水l000mL，pH值5-7；
所述中草药提取物的制备方法如下：按重量份数计，称取黄芪50-60份，当归40-50份，党参35-45份，甘草35-45份，鱼腥草25-35份，神曲20-30份，柴胡10-15份，黄芩10-15份；将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70℃-90℃保持2-4h，然后降温至45-60℃，加入混合物料总重量5-10％的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比为1:1.5，控制温度至60℃-78℃保持3-4h，过滤，得第一滤液；添加滤渣1-3倍重量的水，控制温度85℃-95℃保持1-3h，然后降温至25-35℃，过滤，得第二滤液；将第一滤液和第二滤液按照质量比2-4:1-3合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物；
所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:4:2:1均匀混合。
2.如权利要求1所述的含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，其特征在于，所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物中的任一一种或几种组合。
3.如权利要求2所述的含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶，其特征在于，所述抗氧化剂为葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏叶提取物按质量比6-8:5-7:2-4均匀混合。
4.如权利要求1-3任一所述含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法，其特征在于，首先将所述保护剂、激活剂超微粉碎，随后立即依次加入淀粉酶、蛋白酶、半纤维素酶、酯酶、植物提取物、浓缩麦芽酶均匀混合，最后加入浓缩麦汁粉及抗氧化剂，混合均匀后密封包装即得啤酒复合酶。
5.如权利要求4所述含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法，其特征在于，所述浓缩麦芽酶重量百分比组成为：原麦芽酶65-75％，香味麦芽酶25-35％；
所述原麦芽酶制备方法如下：
(1)高压脉冲电场浸泡处理：将麦芽在预浸槽中用3-6倍20-50℃温水浸泡10-20min，使麦芽水分含量达到25-35％，同时进行高压脉冲电场处理，电场强度20-40kV/cm，脉冲时间150-200μs,脉冲频率200-300Hz；
(2)粉碎：将步骤(1)中处理好的麦芽与浸泡水加入麦芽粉碎机带水粉碎，调整辊间距为0.5mm,转速为250rpm,得到麦芽浆液；
(3)超声、PEF提取：将麦芽浆液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度0.6A/25W-1.5A/275W条件下进行超声提取10-15min；然后进行高压脉冲电场提取15-20min，电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz；
(4)过滤：将提取液于室温用500-800目滤布预涂粒度为100目-300目硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24MPa；
(5)超滤浓缩：采用截留分子量<100000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液酶含量为超滤前的10-15倍；
(6)干燥：向浓缩液中加入浓缩液重量3-5％的所述保护剂，然后用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度150-160℃，排风温度75-85℃,干燥时间5-15s，即得原麦芽酶。
6.如权利要求5所述含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法，其特征在于，所述香味麦芽酶制备方法如下：
(1)麦芽回潮：用麦芽重量3-4％，温度为40-50℃温水均匀喷雾麦芽粒表面，置混合机中均匀混合3-5min；
(2)烘焙：将回潮麦芽装入转筒式炒炉，在10-15min内温度升至170-200℃，保温10-15min，然后降温至100-110℃，保温20-30min,最后取出摊凉，得到香味麦芽；
(3)粉碎：将香味麦芽加入麦芽粉碎机粉碎，调整辊间距为0.5mm,转速为250rpm,得到香味麦芽粉；
(4)超声、PEF提取：将香味麦芽粉置于配料缸中，加入3-6倍的水，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度0.6A/25W-1.5A/275W条件下进行超声提取10-15min；然后进行高压脉冲电场提取15-20min，电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz；
(5)过滤：将提取液于室温用500-800目滤布采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24MPa；
(6)超滤浓缩：采用截留分子量<100000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液酶含量为超滤前的10-15倍；
(7)干燥：向浓缩液中加入浓缩液重量3-5％的所述保护剂，然后用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度150-160℃，排风温度75-85℃,干燥时间5-15s，即得香味麦芽酶。
7.如权利要求4所述含真菌α-淀粉酶的啤酒复合酶的制备方法，其特征在于，所述浓缩麦汁粉制备方法如下：
(1)将麦芽粉碎，加入4-5倍的温水，用乳酸调节pH值为4.5-5.5，加入复配酶进行分段酶解，45-55℃蛋白休止90min，62-66℃糖化60min；
(2)待糖化完全，将糖化醪液于74-76℃用500-800目滤布预涂粒度为100目-300目硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24MPa，过滤得原麦汁；
(3)将原麦汁采用截留分子量<100000道尔顿的超滤膜循环浓缩，直至浓缩液浓度为超滤前的10-15倍；
(4)将浓缩液用酶制剂专用喷雾干燥机干燥，进风温度150-160℃，排风温度75-85℃,干燥时间5-15s，即得浓缩麦汁粉；
所述复配酶是由如下质量份数的酶制剂均匀混合而成：糖化酶20-30份，普鲁兰酶20-30份，β-淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份，菠萝蛋白酶10-15份，无花果蛋白酶10-15份，蘑菇蛋白酶10-15份，内β-葡聚糖酶5-10份，外β-葡聚糖酶5-10份，木聚糖酶5-10份，戊聚糖酶5-10份，超氧化物歧化酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份。
CN201410718814.9A 2014-12-01 2014-12-01 一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法 Active CN104651335B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410718814.9A CN104651335B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410718814.9A CN104651335B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104651335A CN104651335A (zh) 2015-05-27
CN104651335B true CN104651335B (zh) 2018-02-09

Family

ID=53242982

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410718814.9A Active CN104651335B (zh) 2014-12-01 2014-12-01 一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104651335B (zh)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104962479A (zh) * 2015-06-11 2015-10-07 天津中天精科科技有限公司 一种杏鲍菇液体菌种及其发酵方法
CN104988072A (zh) * 2015-06-11 2015-10-21 天津中天精科科技有限公司 一种液体菌种发酵培养基
CN104988075A (zh) * 2015-06-11 2015-10-21 天津中天精科科技有限公司 一种改进的杏鲍菇液体菌种发酵培养基
CN104988070A (zh) * 2015-06-11 2015-10-21 天津中天精科科技有限公司 一种菌丝球小且多的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法
CN108668783A (zh) * 2015-06-11 2018-10-19 天津中天精科科技有限公司 一种菌丝球分布均匀的杏鲍菇液体菌种的发酵方法
CN104926479A (zh) * 2015-06-11 2015-09-23 天津中天精科科技有限公司 一种高活性杏鲍菇液体菌种发酵培养基
CN104920069B (zh) * 2015-06-11 2018-03-30 宁夏天绿健知识产权运营有限公司 一种高密度液体菌种及其发酵方法
CN104988073A (zh) * 2015-06-11 2015-10-21 天津中天精科科技有限公司 一种生物转化率高的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法
CN104988071A (zh) * 2015-06-11 2015-10-21 天津中天精科科技有限公司 一种改进的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法
CN104962478A (zh) * 2015-06-11 2015-10-07 天津中天精科科技有限公司 一种高活性杏鲍菇液体菌种及其发酵方法
CN104988074A (zh) * 2015-06-11 2015-10-21 天津中天精科科技有限公司 一种杏鲍菇液体菌种发酵培养基
CN107916231A (zh) * 2015-06-11 2018-04-17 天津中天精科科技有限公司 一种菌丝健壮的杏鲍菇液体菌种的发酵方法
CN108260475A (zh) * 2015-06-11 2018-07-10 天津中天精科科技有限公司 一种液体菌种及其发酵方法
CN104946540A (zh) * 2015-06-11 2015-09-30 天津中天精科科技有限公司 一种防止栽培时杂菌感染的杏鲍菇液体菌种及其发酵方法
CN104946541A (zh) * 2015-06-11 2015-09-30 天津中天精科科技有限公司 一种高密度液体菌种发酵培养基
CN105112384A (zh) * 2015-09-24 2015-12-02 青岛黄海制药有限责任公司 一种复合磷酸酯酶的提取和干燥方法
CN109628244B (zh) * 2018-11-30 2020-05-15 江苏华稼食品科技有限公司 一种啤酒用澄清麦精的生产方法
CN114365843B (zh) * 2022-01-27 2023-09-08 天津市宝恒生物科技有限公司 一种富含氨基酸的五谷酵粉及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103242996A (zh) * 2013-04-25 2013-08-14 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种啤酒复合酶
CN103255012A (zh) * 2013-05-13 2013-08-21 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种可提高啤酒泡沫性能的啤酒复合酶
CN103266032A (zh) * 2013-05-13 2013-08-28 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种全效啤酒复合酶
CN103865701A (zh) * 2013-12-13 2014-06-18 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种含中性蛋白酶的啤酒复合酶
CN104099312A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种用于啤酒酿造的液体复配酶及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103242996A (zh) * 2013-04-25 2013-08-14 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种啤酒复合酶
CN103255012A (zh) * 2013-05-13 2013-08-21 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种可提高啤酒泡沫性能的啤酒复合酶
CN103266032A (zh) * 2013-05-13 2013-08-28 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种全效啤酒复合酶
CN103865701A (zh) * 2013-12-13 2014-06-18 湖南鸿鹰生物科技有限公司 一种含中性蛋白酶的啤酒复合酶
CN104099312A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种用于啤酒酿造的液体复配酶及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104651335A (zh) 2015-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104651335B (zh) 一种含真菌α‑淀粉酶的啤酒复合酶及其制备方法
CN103865701B (zh) 一种含中性蛋白酶的啤酒复合酶
CN105316299A (zh) 一种含酸性蛋白酶的啤酒复合酶及其制备方法
CN103242996B (zh) 一种啤酒复合酶
CN104099312B (zh) 一种用于啤酒酿造的液体复配酶及其制备方法
CN108823016A (zh) 一种玫瑰鲜花啤酒酿造工艺
CN104799204B (zh) 一种黄豆酱的生产方法
CN101838597A (zh) 一种燕麦红曲啤酒及其酿造方法
CN104745392A (zh) 纯种液态发酵酿造薏米葛根黄酒的方法
CN105524905A (zh) 一种含酸性蛋白酶的酱油复合酶及其制备方法
KR20120003569A (ko) 잡곡 막걸리 제조방법
KR101324811B1 (ko) 식물섬유소화 효소가 증강된 액체국의 제조방법, 상기방법에 의해 제조되는 액체국, 및 그 액체국의 용도
CN104987972B (zh) 一种酿造用液体红曲的制备方法
CN104844354B (zh) 一种高密度杏鲍菇液体菌种发酵培养基
CN108441367A (zh) 一种板栗啤酒酿造工艺
CN108251313A (zh) 一种高密度液体菌种的发酵方法
CN108251314A (zh) 一种液体菌种及其发酵方法
CN103255012B (zh) 一种可提高啤酒泡沫性能的啤酒复合酶
CN105018262A (zh) 一种蛹虫草纯生啤酒及其酿造工艺
CN103266032B (zh) 一种全效啤酒复合酶
CN105230850A (zh) 一种灵芝茶的生产方法
CN108077886A (zh) 高盐稀态黑豆酱油酿造制备方法及其黑豆酱油
CN105861272B (zh) 麦芽醋的制备方法
CN105524772A (zh) 一种含酸性蛋白酶的酒精复合酶及其制备方法
KR20110050135A (ko) 버섯 균사체를 이용한 막걸리 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant