CN104628649A - 一种2-(α-羟基戊基)苯甲酰胺衍生物及其制备方法、制剂与应用 - Google Patents

一种2-(α-羟基戊基)苯甲酰胺衍生物及其制备方法、制剂与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物及其制备方法、制剂与应用。所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物具有以下结构式：其中：R1为链接基团；R2为含有羧基的官能团。制备方法包括以下步骤：将原料丁苯酞开环反应得到中间产物a，与含有羧基的化合物缩合反应得到目标物。制剂为加入药学上接受的辅料制备成散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、蜜丸剂、冻干剂或水针剂。应用为在制备预防/治疗心脑缺血性疾病、心脑动脉阻塞疾病及抗帕金森氏病和抗老年痴呆药物中的应用。本发明通过酰胺键，将开环丁苯酞与奥扎格雷或氯吡格雷等具有抗血小板聚集作用的药物相连接，设计合成具有多重药理作用的丁苯酞前药。

Description

一种2-(α-羟基戊基)苯甲酰胺衍生物及其制备方法、制剂与应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物及其制备方法、制剂与应用。
背景技术
消旋3-正丁基苯酞（dl-NBP，商品名：恩必普）是我国自主研发的防治缺血性脑卒中的一类新药。药效学研究表明，dl-NBP作用于缺血性脑卒中所致脑损伤的多个病理环节，具有较强的抗脑缺血作用。2002年由国家食品药品监督管理局批准用于临床治疗轻﹑中度急性缺血性脑卒中等心脑血管疾病[J.Pharmacol.Exp.Ther.,2006,317:973 -979.]。近年的实验研究发现NBP除能抵抗缺血引起的脑损伤外，对于神经退行性病等其他神经系统损伤也显示出保护作用。诸多研究表明，NBP能改善脑内微循环、抑制血小板聚集、保护线粒体、调节能量代谢、减轻氧化应激损伤、减少细胞凋亡等[Org.Biomol.Chem., 2011, 9,5670-5681.]。但是，由于NBP的水溶性差，使得它的应用和疗效受到限制。有研究表明，NBP与其他抗血小板聚集等方面的药物连接能起到更好的治疗效果。
前体药物是将活性药物经过一系列的衍化转变为低活性或无活性的生物可逆性化合物，这类化合物在体内经过酶促反应或化学反应能重新释放出原来的活性药物，再发挥治疗作用。前药可以帮助改善很多活性药物的缺陷，如增加药物的脂水分配系数，提高药物的靶向性和稳定性，降低药物的毒副作用等。中国专利CN 1243541C公布了一种具有明显抗血小板聚集及改善微循环，并对心﹑脑缺血﹑心脑动脉阻塞具有药物活性的新型药物2-（α-羟基戊基）苯甲酸盐，其钾盐（2-（α-羟基戊基）苯甲钾（dl-PHPB））作为一种丁苯酞前药，其水溶性大大提高。大量的研究表明，dl-PHPB在生物体内能迅速转化为丁苯酞，其疗效较等量的丁苯酞相同或着更强。
2013年J.Med.Chem.杂志上[J.Med.Chem.,2013,56, 3078-3089]报道了将丁苯酞与利尿药异山梨醇通过酯键连接在一起，合成了一系列的新型丁苯酞前药。其研究表明，合成出的（S）-5e化合物在人工胃肠液中具有较好的稳定性,其抑制二磷酸腺苷（ADP）和花生四烯酸引发的血小板聚集的疗效是丁苯酞的10.0倍和8.4倍，而且，与丁苯酞相比，它具有合适的脂水分配系数使得它能够穿过血脑屏障发挥作用。
类似地，2011年Org.Biomol.Chem.杂志上[Org.Biomol.Chem.,2011,9, 5670-5681]报道了一种新型的一氧化碳释放型的丁苯酞前药。一氧化碳（NO）是一种广泛存在于人体内的信使分子，能抑制血小板聚集﹑提高脑血流量﹑促进血管生成，对血管性痴呆病人有良好的治疗效果，使得它与丁苯酞能协同发挥抗血小板聚集和抗血栓的疗效。其合成出的化合物7e能够抑制二磷酸腺苷（ADP）﹑凝血酶和花生四烯酸引发的血小板聚集，抗血小板聚集效果比丁苯酞和阿司匹林更强。而且，7e的水溶性较好，抗血栓效果也优于丁苯酞。
目前为止，还没有一种具有多重药理作用的丁苯酞前药，因此，开发一种具有多重药理作用的丁苯酞前药是非常必要的。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物；第二目的在于提供所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的制备方法；第三目的在于提供所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的制剂；第四目的在于提供所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物具有以下结构式：
其中：R1为链接基团；
      R2为含有羧基的官能团。
本发明的第二目的是这样实现的，包括以下步骤：
A、将原料丁苯酞溶于溶剂中，用碱调节pH值至10~14，加入反应摩尔量1倍以上的二胺，再加入催化剂于室温条件下搅拌反应24~48h得到中间产物a；
B、将得到的中间产物a与含有羧基的化合物在缩合剂的条件下缩合反应得到目标物。
本发明的第三目的是这样实现的，所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物中加入药学上接受的辅料制备成散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、蜜丸剂、冻干剂或水针剂。
本发明的第四目的是这样实现的，所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物在制备预防/治疗心脑缺血性疾病、心脑动脉阻塞疾病及抗帕金森氏病和抗老年痴呆药物中的应用。
本发明通过酰胺键，将开环丁苯酞与奥扎格雷或氯吡格雷等具有抗血小板聚集作用的药物相连接，设计合成具有多重药理作用的丁苯酞前药，即2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物，其主要特点在于采用酰胺键作为链接键，既具有较好的体外稳定性，又能在体内经酶代谢释放出原药。本发明合成的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺类化合物在人工胃液中可分解释放出原药丁苯酞、奥扎格雷或氯吡格雷等活性药物。因此可作为前药，用于治疗和预防缺血性脑卒中等心脑血管疾病，也可用于帕金森氏病和老年痴呆等神经退行性疾病的治疗和预防。
附图说明
图1为NBP的标准曲线；
图2为奥扎格雷的标准曲线；
图3为氯吡格雷得标准曲线；
图4为化合物1的标准曲线；
图5为化合物4的标准曲线；
图6为化合物7的标准曲线；
图7为化合物12的标准曲线；
图8为丁苯酞、奥扎格雷和氯吡格雷在人工胃液中的浓度变化曲线；
图9为化合物1在人工胃液中浓度变化曲线；
图10为化合物4在在人工胃液中浓度变化曲线；
图11为化合物7在在人工胃液中浓度变化曲线；
图12为化合物12在在人工胃液中浓度变化曲线；
图13为化合物1在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图14为化合物2在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图15为化合物3在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图16为化合物4在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图17为化合物5在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图18为化合物6在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图19为化合物7在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图20为化合物8在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图21为化合物9在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图22为化合物10在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图23为化合物11在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图24为化合物12在人工胃液中释放出丁苯酞的浓度变化曲线；
图25为化合物1在人工胃液中释放出奥扎格雷的浓度变化曲线；
图26为化合物2在人工胃液中释放出奥扎格雷的浓度变化曲线；
图27为化合物3在人工胃液中释放出奥扎格雷的浓度变化曲线；
图28为化合物4在人工胃液中释放出氯吡格雷的浓度变化曲线；
图29为化合物5在人工胃液中释放出氯吡格雷的浓度变化曲线；
图30为化合物6在人工胃液中释放出氯吡格雷的浓度变化曲线；
图31为化合物7在人工胃液中释放出奥扎格雷的浓度变化曲线；
图32为化合物8在人工胃液中释放出奥扎格雷的浓度变化曲线；
图33为化合物9在人工胃液中释放出奥扎格雷的浓度变化曲线；
图34为化合物10在人工胃液中释放出氯吡格雷的浓度变化曲线；
图35为化合物11在人工胃液中释放出氯吡格雷的浓度变化曲线；
图36为化合物12在人工胃液中释放出氯吡格雷的浓度变化曲线。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物具有以下结构式：
其中：R1为链接基团；
      R2为含有羧基的官能团。
所述的链接基团为CH2CH2，CH2CH2CH2，CH2CH2CH2CH2，CH2（CH2）5CH2或CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2；所述的含有羧基的官能团为奥扎格雷、氯吡格雷、水杨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸。
本发明所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
A、将原料丁苯酞溶于溶剂中，用碱调节pH值至10~14，加入反应摩尔量1倍以上的二胺，再加入催化剂于室温条件下搅拌反应24~48h得到中间产物a；
B、将得到的中间产物a与含有羧基的化合物在缩合剂的条件下缩合反应得到目标物。
A步骤中所述的溶剂为极性溶剂或非极性溶剂中的一种。
A步骤中所述的溶剂为甲醇、乙醇、二甲亚砜DMF、N-甲基吡咯烷酮NMP、二氯甲烷、四氢呋喃THF中的一种。
A步骤中所述的碱为无机碱或有机碱。
A步骤中所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、三乙胺、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、二异丙基乙胺、吡啶或吡咯中的一种。
A步骤中所述的二胺为乙二胺、丙二胺、丁二胺、庚二胺或1,2-双（2-氨基乙氧基）乙烷中的一种。
A步骤中所述的催化剂为吡啶或其衍生物中的一种。
A步骤中所述的催化剂为4-二甲氨基-吡啶DMAP或吡啶。
B步骤中所述的羧基化合物为奥扎格雷、氯吡格雷、水杨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸等氨基酸；所述的缩合剂为二环乙基碳二亚胺DCC、1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺EDCI或苯并三氮唑- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐HBTU中的一种，或者本领域公知的缩合剂。
本发明的制剂为所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物中加入药学上接受的辅料制备成散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、蜜丸剂、冻干剂或水针剂。
本发明的应用为所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物在制备预防/治疗心脑缺血性疾病、心脑动脉阻塞疾病及抗帕金森氏病和抗老年痴呆药物中的应用。
本发明的制备方法具体实现有以下两种方法：
第一种方法是：
(1)在碱性条件下，使丁苯酞胺解开环
(2)将丁苯酞的碱性开环产物，在缩合剂的条件下，直接与奥扎格雷缩合或游离出羧基的氯吡格雷缩合。
具体的合成路线为：
第二种方法步骤如下：
(1)将氨基酸甲酯（如L-亮氨酸甲酯）与含有羧基的官能团（如奥扎格雷或游离出羧酸的氯吡格雷）在缩合剂存在的条件下缩合。
(2)将上步得到的产物在氢氧化锂的作用下水解酯键。
(3)将上述产物溶于有机溶剂，在缩合剂存在条件下，与丁苯酞胺解开环产物缩合。
具体的合成路线为：
下面以实施例对本发明作进一步说明，以下所有实施例中化合物鉴定中，核磁共振谱用Varian Mercury 400和600核磁共振仪记录，化学位移以δ（ppm）表示；质谱用Bruker ESQUIRE-3000型质谱仪记录，电喷雾电离（ESI）；分离用硅胶未说明的均为200-300目。
实施例1   (E)-N-(4-(3-(4- ((1H-咪唑基)甲基)苯基)丙烯酰胺基)丁基)-2-(1-羟基戊基）苯甲酰胺（化合物1）的合成
(1)N-(4-氨基丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸的合成
在50.0mL圆底烧瓶中，将丁苯酞（0.19g,1mmol）溶入10mL二氯甲烷中，加入二异丙基乙基胺（0.44mL,2.5mmol）和4-二甲氨基吡啶（0.0366g,催化量），室温搅拌一会后，滴加入1,4-丁二胺（0.42 mL,5mmol）。室温搅拌24小时以上后，TLC检测反应完毕后，过滤除去白色固体不溶物，母液直接浓缩，得油状物，硅胶柱色谱分离（二氯甲烷：甲醇=20:1），得油状物（0.2380g, 90.1%）
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:8.34(s,1H),7.55(d,J=7.74Hz,1H),7.40(m, 1H),7.25(m,2H),4.88(m,1H),3.20(m,2H),2.55(t,2H),1.60(m,1H),
1.49(m,3H),1.36(m,2H),1.24(m,3H),0.84(t,3H).
13C NMR(150MHz,CDCl3):169.41,144.59,135.69,127.02,126.39,
129.40,69.01,41.64,39.45,39.17,38.92,30.64,27.86,26.52,22.01,13.96.
ESI-MS:279.2(M+H+)
（2）化合物1的合成
在50mL圆底烧瓶中，取奥扎格雷（0.2283g,1mmol）溶于15mL二氯甲烷，冰盐浴，加入EDCI（0.2300g,1.2mmol）和HOBT（0.1621g,1.2mmol），冰浴搅拌1小时后，缓慢滴入N-(4-氨基丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（0.2782g,1mmol），恢复室温搅拌，室温搅拌5小时，反应结束。加水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。硅胶柱色谱分离（二氯甲烷：甲醇=20:1），得白色固体（0.22g,45%）
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.32(t,J=5.48Hz,1H), 8.11(t,J=5.45 Hz,1H),7.74(s,1H),7.53(t,J=8.81,3H),7.38(t,2H),7.24(dd,J=7.30,J=14.56,4H),7.17(s,1H),6.90(s,1H),6.60(d,J=15.79,1H),5.20(s,2H),5.10(d,1H),3.21(m,4H),1.57(m,6H),1.32(m,1H),1.22(m,4H),0.80(t,3H).
13C NMR(150MHz, CDCl3):169.19,164.75,144.43,138.94,137.80, 137.44,135.30,134.40,129.15,128.73,127.90,127.72,126.74,126.11,126.09,122.48,119.56,68.72,54.87,49.10,38.60,38.42,27.82,26.62,26.54,21.99,13.94.
ESI-MS:489.28(M+H+)。
实施例2   (E)-N-(2-(2-(3-(4-((1H-咪唑基)甲基)苯基)丙烯酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物2）的合成
（1）N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸的合成
在50.0mL圆底烧瓶中，将丁苯酞（0.19g,1mmol）溶入10mL二氯甲烷中，加入二异丙基乙基胺（0.44mL,2.5mmol）和4-二甲氨基吡啶（0.0366g,催化量），室温搅拌一会后，滴加入1,2-双（2-氨基乙氧基）乙烷（0.73 mL,5mmol）。TLC检测，室温搅拌24小时以上。反应结束后，母液直接浓缩，得油状物，硅胶柱色谱分离（二氯甲烷：甲醇=20:1），得油状物（0.2980g, 88.1%）
1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:8.40(s,1H),7.58(d,J=7.77Hz,1H)), 7.43(m,1H),7.29(dd,J=7.66Hz,J=14.94Hz,2H),4.92(dd,1H),3.56(m,6H),3.40(m,4H),2.66(t,2H),1.63(m,1H),1.52(m,1H),1.32(m,4H),0.88(dd,3H).
13C NMR(150MHz,CDCl3):169.34,144.47,135.09,129.25,126.80, 126.16,126.11,72.93,69.58,69.54,68.80,68.54,41.26,38.90,38.56,7.80,22.02,13.97.
ESI-MS:339.2(M+H+)
(2)化合物2的合成
在50mL圆底烧瓶中，取奥扎格雷（0.2283g,1mmol）溶于15mL二氯甲烷，冰盐浴，加入EDCI（0.2300g,1.2mmol）和HOBT（0.1621g,1.2mmol），冰浴搅拌1小时后，缓慢滴入N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（0.3382g,1mmol），恢复室温搅拌，室温搅拌5小时，反应结束。加水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=20:1）分离，得白色固体（0.0828g,15.1%）
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:8.32(t,J=5.57Hz,1H),8.16(t,J=6.61Hz, 1H),7.74(s,1H),7.53(dd,J=8.14Hz,J=11.15Hz,3H),7.38(m,2H),7.24(m,4H),7.17(s,1H),6.90(s,1H),6.63(d,J=15.79Hz,1H),5.20(s,2H),5.08(d,1H),4.87(m,1H),3.54(s,4H),3.51(m,2H),3.48(m,2H),3.32(m,4H),1.57(m,1H),1.47(m,1H),1.25(m,4H),0.81(t,3H).
13C NMR(150MHz,CDCl3):169.33,164.91,144.42,138.99,138.02,
137.43,135.03,134.34,129.25,128.71,127.90,127.76,126.78,126.13,126.11,122.32,119.55,69.55,69.52,69.13,68.78,68.66,49.09,38.86,38.73,38.52,27.77,21.99,13.94.
ESI-MS:549.30(M+H+)。
实施例3   （E）-N-(7-(3-(4-(1H-咪唑基)甲基)苯基)丙烯酰胺基)庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物3）的合成
（1）N-(7-氨基庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸的合成
在50.0mL圆底烧瓶中，将丁苯酞（0.19g,1mmol）溶入10mL二氯甲烷中，加入二异丙基乙基胺（1.75mL,10mmol）和4-二甲氨基吡啶（0.0366g,催化量），室温搅拌一会后，滴加入1,7-二氨基庚烷（0.76 mL,5mmol）。TLC检测，室温搅拌24小时以上。反应结束后，过滤除去白色固体不溶物，母液直接浓缩，得油状物，硅胶柱色谱（二氯甲烷：甲醇=20:1）分离，得油状物（0.2862g,89.3%）
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:8.30(d,J=5.45Hz,1H),7,55(d,J=7.74Hz, 1H),7.39(dd,J=4.44Hz,J=9.51Hz,1H),7.24(m,2H),4.88(dd,1H),3.19(m,2H),1.59(m,1H),1.48(m,3H),1.28(m,14H),0.83(t,3H).
13C NMR(150MHz,CDCl3):169.15,144.38,135.43,129.07,126.71,
126.10,126.07,68.72,41.51,38.87,38.63,33.03,29.00,28.74,27.89,26.49,26.44,26.38,22.04,13.94.
(2)化合物3的合成
在50mL圆底烧瓶中，取奥扎格雷（0.2283g,1mmol）溶于15mL二氯甲烷，冰盐浴，加入EDCI（0.2300g,1.2mmol）和HOBT（0.1621g,1.2mmol），冰浴搅拌1小时后，缓慢滴入N-(7-氨基庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（0.3205g,1mmol），恢复室温搅拌，室温搅拌5小时，反应结束。加水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=20:1）分离，得油状物(0,228g,42.9%)
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.32(t,J=5.55,1H),8.11(t,J=5.59,1H), 7.74(s,1H),7.53(s,1H),7.38(m,2H),7.24(dd,J=7.23,J=9.78,4H),7.17(s,1H),6.90(s,1H),6.58(d,J=15.79,1H),5.20(s,2H),5.10(d,1H),4.86(m,1H),3.23(m,1H),3.14(m,3H),1.57(m,1H),1.49(m,5H),1.26(s,7H),1.19(m,3H),0.81(t,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ) :169.13,164.66,144.35,138.93,137.74, 137.44,135.39,134.40,129.09,128.73,127.89,127.72,126.70,126.08,122.52,119.5568.70,49.09,38.85,38.62,29.10,28.98,28.50,27.85,26.43,26.42,22.01,13.94.
ESI-MS:531.33(M+H+)。
实施例4   N-(4-(2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酰胺基)丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物4）的合成
(1)2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酸
在250mL圆底烧瓶中，取硫酸氢氯吡格雷（30mmol,12.597g）溶于70ml无水乙醇，室温搅拌。然后加入氢氧化钠（4.8g,120mmol）的水溶液（30ml）,室温搅拌10h。反应结束，用1M HCl酸化，再浓缩除去乙醇，过滤，得白色固体（8.834g,95.7%）.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:12.96(s,1H),7.63(dd,J=1.77 Hz, J= 7.57Hz,1H),7.49(dd,J=1.35Hz,J=7.35Hz,1H),7.37(dtd,J=1.48Hz,J=7.35Hz,J=16.93Hz,2H),7.27(d,J=5.11Hz,1H),6.77(d,J=5.13Hz,1H),4.70(s,1H),
3.67(d,1H),3.59(d,1H),2.86(m,1H),2.80(m,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):171.24,134.58,133.66,133.47.132.62, 129.88,129.47,127.31,125.47,123.08,67.73,59.71,50.00,47.67,24.99,20.73,14.05.
(2)化合物4的合成
在100mL圆底烧瓶中，取2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酸（1.539g,5mmol）溶于20ml二氯甲烷，加入HOBT(0.743g,5.5mmol),常温搅拌1h后，滴加入实施例1中得到的N-(4-氨基丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（1.739g,5mmol）的二氯甲烷溶液（10ml），最后加入EDCI（1.054g,5.5mmol），室温搅拌5h后，用水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=70:1）分离，得白色固体（0.993g,35%）。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:8.29(dt,J=5.60Hz,J=11.62 Hz,2H), 7.70(dd,J=1.75 Hz,J=7.69 Hz,1H),7.54(d,J=7.73 Hz,1H),7.45(dd,J=1.73 Hz,J=7.85 Hz,1H),7.36(dddd,J=1.92 Hz,J=6.75 Hz,J=15.04 Hz,J=15.38 Hz,3H),7.24(m,3H),6.74(d,J=5.13Hz,1H),5.08(d,1H),4.87(m,1H),4.58(s,1H),3.48(m,2H),3.31(s,2H),3.20(m,2H),3.10(d,2H),2.74(m,4H),2.49(m,1H),1.58(m,1H),1.48(m,5H),1.35(m,1H),1.23(m,3H),0.81(t,3H).
13C NMR(150MHz,CDCl3):169.15,169.06,144.44,135.30,134.95, 133.64,133.59,132.80,130.38,129.32,129.22,129.16,127.10,126.76,126.13,126.08,125.52,123.04,68.82,68.72,54.87,50.30,48.41,38.57,38.30,27.81,26.46,26.43,25.04,22.00,13.94.
ESI-MS:568.23(M+H+)。
实施例5   N-(2-(2-(2-(2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物5）的合成
在100mL圆底烧瓶中，将实施例4中得到的2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酸（1.539g,5mmol）溶于20ml二氯甲烷，加入HOBT(0.743g,5.5mmol),常温搅拌1h后，滴加入实施例2中得到的N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（1.5911g,5mmol）的二氯甲烷溶液（10ml），最后加入EDCI（1.054g,5.5mmol），室温搅拌5h后，用水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=80:1）分离，得油状物（1.159g,36.9%）。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.31(t,J=5.58 Hz,1H),8.24(t,J=5.79 Hz,1H),7.68(dd,J=1.96Hz,J=7.59Hz,1H),7.54(d,J=7.62Hz,1H),7.45(dd,J=1.47Hz,J=7.75Hz,1H),7.35(m,3H),7.24(m,3H),6.73(d,J=5.13Hz,1H),5.74(s,1H),5.07(d,1H),4.88(m,1H),4.60(s,1H),3.48(m,11H),3.35(m,4H),3.24(m,2H),2.75(m,4H),2.49(m,1H),1.56(m,2H),1.26(m,4H),0.81(t,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):169.36,169.32,144.44,135.03,134.69, 133.78,133.59,132.80,130.36,129.36,129.29,129.26,127.13,126.80,126.14,126.11,125.47,123.05,69.53,69.42,68.78,68.75,68.73,68.66,54.87,50.25,48.43,38.83,38.52,38.41,27.78,25.05,22.00,13.95.
ESI-MS:628.26(M+H+)。
实施例6   N-(7-(2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酰胺基)庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物6）的合成
将实施例4中得到的2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二羟基噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酸（0.4611g,1.5mmol）溶于15ml二氯甲烷，加入HOBT(0.223g,1.65mmol),常温搅拌1h后，滴加入实施例3中得到的N-(7-氨基庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（0.4611g,1.5mmol）的二氯甲烷溶液（3ml），最后加入EDCI（0.316g,1.65mmol），室温搅拌5h后，用水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=80:1）分离，得油状物（0.112g,12.3%）
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.29(t,J=5.62 Hz,1H),8.24(t,J=5.68 Hz,1H),7.72(dd,J=1.56Hz,J=7.68Hz,1H),7.54(d,J=7.75Hz,1H),7.45(d,J=7.79Hz,1H),7.38(m,3H),7.25(m,3H),6.74(d,J=5.12Hz,1H),5.11(d,1H),4.88(m,1H),4.56(s,1H),3.49(m,2H),3.17(m,1H),3.08(m,3H),2.73(m,4H),1.58(m,1H),1.46(m,6H),1.32(m,9H),0.84(t,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):169.13,168.94,144.38,135.39,135.04, 133.58,132.80,130.35,129.31,129.20,129.11,127.09,126.72,126.09,125.47,123.08,68.88,68.71,54.88,50.31,48.38,38.86,38.62,38.46,28.95,28.85,28.44,27.87,26.43,26.30,25.02,22.02,13.95.
ESI-MS:610.28(M+H+)。
实施例7    (E)-N-(4-(2-(3-(4-((1H-咪唑基)甲基)苯基)丙烯酰胺基)4-甲基戊胺)丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物7）的合成
（1）(E)-2-(3-(4-((1H-咪唑-1)甲基)苯基)丙烯酰胺基)-4-甲基戊酸的合成
在50mL圆底烧瓶中，取L-亮氨酸甲酯盐酸盐（0.1817g,1mmol）溶于15mL二氯甲烷，冰盐浴搅拌，待温度稳定在0℃以后滴加三乙胺（0.42ml,3mmol），反应液中出现白色固体，测PH在7-8之间。搅拌10min后，加入奥扎格雷（0.2283g,1mmol）和HOBT（0.1621g,1.2mmol）。继续搅拌10min后，再加入EDCI（0.2300g,1.2mmol），冰浴搅拌半小时后，恢复室温搅拌5小时后，加水洗涤，二氯甲烷萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩得油状物。然后将其溶于5mlTHF/2.5ml H2O,冰盐浴搅拌，再加入一水合LiOH﹒H2O(0.0839g,2mmol),冰浴搅拌半小时后，恢复室温搅拌2小时，反应结束。浓缩除去THF，加入5ml乙酸乙酯，用稀盐酸缓慢调至中性，过滤，得白色固体（0.145g,42.5%）。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:12.64(s,1H),8.36(d,J=7.92 Hz,1H), 7.79(s,1H),7.58(d,J=8.17 Hz,2H),7.43(d,J=15.81 Hz,1H),7.30(d,J=8.17 Hz,2H),7.23(s,1H),6.94(s,1H),6.73(d,J=15.82Hz,1H),5.22(s,2H),4.34(m,1H),1.64(m,1H),1.55(m,2H),0.91(d,3H),0.86(d,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ) :174.07,164.78,139.11,138.50,137.45, 134.26,128.72,127.90,127.81,121.95,119.58,50.42,49.09,40.13,24.36,22.83,21.28.
（2）化合物7的合成
在50mL圆底烧瓶中，取(E)-2-(3-(4-((1H-咪唑基)甲基)苯基)丙烯酰胺基)-4-甲基戊酸（0.3414g,1mmol）溶于10mlDMF中，冰盐浴搅拌。待温度稳定在0℃后，加入HOBT（0.1621g,1.2mmol），冰浴搅拌1h后，再缓慢滴入实施例1中得到的N-(4-氨基丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（0.2782g,1mmol），最后加入EDCI（0.2300g,1.2mmol）。恢复室温反应5h后，用水洗涤，乙酸乙酯萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩，柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=20:1）分离，得白色固体（0.141g,23.4%）。
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.31(m,J=4.32Hz,J=6.86 Hz,1H), 8.19(d,J=8.43Hz,1H),8.05(t,J=5.58Hz,1H),7.76(s,1H),7.53(m,2H),7.38(m,2H),7.25(m,4H),7.19(s,1H),6.91(s,1H),6.75(d,J=15.81Hz,1H),5.21(s,2H),5.10(d,1H),4.87(m,1H),4.41(m,1H),3.20(m,2H),3.06(m,2H),1.60(m,2H),1.50(m,6H),1.34(m,1H),1.27(m,3H),0.88(d,3H),0.85(d,3H),0.81(t,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):171.75,169.15,164.53,144.43,139.01, 138.16,137.45,135.29,134.38,129.13,128.73,127.90,127.74,126.74,126.11,12607,122.37,119.57,79.14,68.70,59.71,51.12,49.10,41.40,38.57,38.22,27.80,26.47,26.40,24.30,22.91,21.98,21.69,14.05,13.94.
ESI-MS:602.36(M+H+)。
实施例8   (E)-N-(15-(4-((1H-咪唑基)甲基)苯基)-11-异丁基-10,13-二羰基-3,6-二氧-9,12-)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物8）的合成
在50mL圆底烧瓶中，将实施例7中得到的(E)-2-(3-(4-((1H-咪唑-1)甲基)苯基)丙烯酰胺基)-4-甲基戊酸（0.683g,2mmol）溶于10mlDMF中，冰盐浴搅拌。待温度稳定在0℃后，加入HOBT（0.297g,2.2mmol），冰浴搅拌1h后，滴加入实施例2中得到的N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（0.676g,2mmol），最后加入EDCI（0.422g,2.2mmol）。恢复室温反应5h后，用水洗涤，乙酸乙酯萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=20:1）分离，得油状物(0.342g,27.2%).
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.33(t, J=5.43Hz,1H),8.20(dd, J= 7.93Hz,J=11.60Hz,1H),8.08(t,J=5.51Hz,1H),7.77(d,J=6.38Hz,1H),7.53(d,J=8.78Hz,3H),7.40(m,2H),7.26(m,4H),7.20(s,1H),6.92(s,1H),6.74(d,J=15.90Hz,1H),5.21(s,2H),5.09(d,1H),4.88(t,1H),4.42(m,1H),3.52(m,6H),3.37(m,6H),3.19(m,2H),1.58(m,2H),1.48(m,3H),1.27(m,4H),0.88(d,2H),0.85(d,2H),0.82(t,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):172.06,169.32,164.54,144.43,138.98, 138.22,137.42,135.02,134.37,129.25,128.60,127.91,127.76,126.79,126.11,122.31,119.61,106.87,69.49,68.89,68.78,68.65,51.04,49.13,41.32,38.85,38.52,37.74,27.77,24.26,22.93,21.99,21.83,21.65,13.95.
ESI-MS:662.39(M+H+)。
实施例9  (E)-N-(7-(2-(3-(4-((1H-咪唑基)甲基)苯基)丙烯酰胺基)-4-甲基)庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酰胺（化合物9）的合成
在100mL圆底烧瓶中，将实施例7中得到的(E)-2-(3-(4-((1H-咪唑-1)甲基)苯基)丙烯酰胺基)-4-甲基戊酸（1.707g,5mmol）溶于20mlDMF中，冰盐浴搅拌。待温度稳定在0℃后，加入HOBT（0.743g,5.5mmol），冰浴搅拌1h后，再缓慢滴入实施例3中得到的N-(7-氨基庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（1.602g, 5mmol）,最后加入EDCI（1.054g,5.5mmol）,恢复室温搅拌5h后，用水洗涤，乙酸乙酯萃取4次，无水硫酸镁干燥有机相，过滤，浓缩。柱硅胶色谱（二氯甲烷：甲醇=30:1）分离，得白色固体（0.757g,23.5%）.
1H NMR (600 MHz, CDCl3)δ:8.28(t, J=5.55Hz,1H),8.16(d, J= 8.41Hz,1H),8.00(t,J=5.54Hz,1H),7.74(s,1H),7.52(t,J=7.50Hz,3H),7.37(m,2H),7.24(dd,J=5.80Hz,J=13.56Hz,4H),7.18(s,1H),6.90(s,1H),6.72(d,J=15.81Hz,1H),5.20(s,2H),4.86(m,1H),4.38(m,1H),3.15(m,2H),2.99(m,2H),2.06(m,1H),1.69(m,1H),1.58(m,2H),1.47(m,5H),1.26(m,10H),0.88(d,3H),0.85(d,3H),0.82(t,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):171.64,169.12,164.49,144.16,139.01, 138.15,137.44,135.38,134.37,129.14,129.08,128.72,127.90,127.74,126.70,126.07,125.25,124.84,122.38,119.57,81.06,68.70,51.11,49.09,41.41,33.46,28.95,28.45,27.86,26.39,26.27,24.30,22.88,22.00,21.82,21.74,13.94,13.76.
ESI-MS:644.41(M+H+)。
实施例10  N-(4-(2-(2-(2-氯苯基)-2-（6,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-5(4H)基)乙酰胺基)-4-甲基戊酰胺基）丁基)-2-（1-羟基戊基）苯酰胺（化合物10）的合成
(1)2-(2-(2-氯苯基)-2-（6,7-二氢噻吩-[3,2-c]吡啶-（4H）基）乙酰胺基)-4-甲基戊酸的合成
将L-亮氨酸甲酯盐酸盐（2.236g,13mmol）溶于30m无水二氯甲烷中，冰盐浴，当稳定到达0℃以后，加入三乙胺（5.4 mL）,搅拌约计10分钟后，加入实施例4中得到的2-(2-氯苯基)-2-(4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(7H)基)乙酸（13mmol,4g）和HOBT(13mmol,1.756g)。继续搅拌10分钟，最后加入EDCI（13mmol,2.492g）。低温搅拌一会儿后，缓慢恢复室温搅拌，TLC检测，反应5小时后，用水洗涤，二氯甲烷萃取，用无水硫酸镁干燥有机相，浓缩。不做进一步纯化，直接将得到的油状物粗品溶于14 mL THF/7 mL H2O中，冰盐浴搅拌，待温度到达0℃以后，加入一水合氢氧化锂（26mmol,1.09g）。冰盐浴搅拌1h后，缓慢恢复室温搅拌2h，TLC检测，反应结束后，浓缩除去四氢呋喃，加入乙酸乙酯，再用1MHCl缓慢酸化至弱酸性。用乙酸乙酯萃取3次，用无水硫酸镁干燥有机相，浓缩。硅胶柱色谱分离（用二氯甲烷：甲醇=20:1），得白色固体(4.823g,产率88.1%)。
1H NMR (600 MHz, CDCl3)δ:12.53(s,1H),8.53(d, J=7.9Hz,1H), 7.72(dd,J=7.5Hz,J=1.7Hz,1H),7.46(s,1H),7.33(ddd,J=9.6Hz,J=6.3Hz,J=2.0Hz,2H),7.25(d,J=5.1Hz,1H),6.71(dd,J=5.1Hz,1H),4.67(d,J=11.4Hz,1H),4.18(m,1H),3.56(m,2H),2.83(m,3H),1.58(m,3H),0.85(d,3H),0.79(d,3H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):173.82,169.31,134.83,133.74,133.50, 132.77,130.59,129.20,126.96,125.41,125.33,123.07,68.19,50.33,50.26,48.40,48.31,25.09,24.34,22.90,20.93.
（2）化合物10的合成
在100ml圆底烧瓶中，将化合物2-(2-(2-氯苯基)-2-（6,7-二氢噻吩-[3,2-c]吡啶-（4H）基）乙酰胺基)-4-甲基戊酸（5mmol,2.105g）溶于20ml的无水二氯甲烷，冰盐浴搅拌，待温度稳定在0℃后，加入HOBT(0.7432g,5.5mmol)，继续冰盐浴搅拌1h，之后缓慢滴加入N-(4-氨基丁基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（5mmol），最后加入EDCI(1.054g,5.5mmol)，低温搅拌10分钟后，缓慢恢复室温反应，TLC检测，反应5小时后，水洗，二氯甲烷萃取，浓缩，无水硫酸镁干燥有机相。硅胶柱色谱分离（二氯甲烷：甲醇=60:1），得油状物（0.2217g，产率6.5%）
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.3(t,1H),8.221(dd,1H),7.93(tt.1H), 7.69(m,1H),7.58(t,J=7.5Hz,1H),7.54(d,J=7.7Hz,1H),7.45(td,J=6.8Hz,J=1.7Hz,1H),7.38(t,J=7.3Hz,1H),7.32(m,2H),7.24(m,3H),6.71(dd,J=5.1Hz,J=1.7Hz,1H),5.63(m,1H),5.08(d,1H),4.87(m,1H),4.68(d,1H),4.32(t,1H),3.51(t,2H),2.77(m,4H),1.34(m,16H),0.81(m,9H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):171.58,169.16,168.92,144.45,135.27, 134.66,134.41,134.29,133.68,132.77,132.73,130.38,129.14,127.02,126.75,126.12,126.07,124.84,123.13,122.53,81.06,68.69,38.58,38.20,33.46,27.81,26.45,26.42,26.39,26.33,24.32,22.93,21.99,21.82,21.56,21.44,13.94,13.76.
ESI-MS:681.32(M+H+)。
实施例11  N-(1-(2-氯苯基)-1-(6,7-二氢苯并噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)基)-4-异丁基-2,5-二氧-9,12-二氧杂-3,6-二氧杂十四烷基-14-基)-2-（1-羟戊基)苯酰胺（化合物11）的合成
在100ml圆底烧瓶中，将实施例10中得到的化合物2-(2-(2-氯苯基)-2-（6,7-二氢噻吩-[3,2-c]吡啶-(4H)基）乙酰胺基)-4-甲基戊酸（5mmol,2.105g）溶于20ml的无水二氯甲烷，冰盐浴搅拌，待温度稳定在0℃后，加入HOBT(0.7432g,5.5mmol)，继续冰盐浴搅拌1h，之后缓慢滴加入N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（5mmol），最后加入EDCI(1.054g,5.5mmol)，低温搅拌10分钟后，缓慢恢复室温反应，TLC检测，反应5小时后，水洗，二氯甲烷萃取，浓缩，无水硫酸镁干燥有机相。硅胶柱色谱分离（二氯甲烷：甲醇=60:1），得油状物（0.7674g，产率20.7%）.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.32(t,1H),8.23(dd,1H),7.99(m,1H), 7.66(m,2H),7.54(d,J=7.7Hz,1H),7.45(td,J=7.0Hz,J=1.9Hz,1H),7.39(m,1H),7.32(m,2H),7.25(m,3H),6.71(dd,J=5.1Hz,J=2.4Hz,1H),5.63(m,1H),5.0(d,1H),4.87(m,1H),4.68(d,1H),4.30(t,1H),3.50(t,8H),3.38(t,4H),2.82(t,4H),1.30(t,10H),0.84(m,9H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):171.85,169.32,168.93,144.34,135.02, 133.69,133.57,132.77,132.72,130.38,129.25,129.14,127.02,126.78,126.13,126.10,125.38,123.11,122.53,81.06,69.50,69.48,54.87,51.10,38.84,38.52,33.45,27.77,26.39,25.14,25.09,24.27,22.93,21.99,21.82,21.53,21.42,13.95,13.75.
ESI-MS:741.34(M+H+)。
实施例12  N-(7-(2-(2-(2-氯苯基)-2-（6,7-二氢苯并噻吩[3,2-c]吡啶-5（4H）基）乙酰胺基)-4-甲基苯酰胺)庚基)-2-（1-羟戊基）苯酰胺（化合物12）的合成
在100ml圆底烧瓶中，将实施例10中得到的化合物2-(2-(2-氯苯基)-2-（6,7-二氢噻吩-[3,2-c]吡啶-（4H）基）乙酰胺基)-4-甲基戊酸（5mmol,2.105g）溶于20ml的无水二氯甲烷，冰盐浴搅拌，待温度稳定在0℃后，加入HOBT(0.7432g,5.5mmol)，继续冰盐浴搅拌1h，之后缓慢滴加入N-(7-氨基庚基)-2-(1-羟基戊基)苯甲酸（5mmol），最后加入EDCI(1.054g,5.5mmol)，低温搅拌10分钟后，缓慢恢复室温反应，TLC检测，反应5小时后，水洗，二氯甲烷萃取，浓缩，无水硫酸镁干燥有机相。硅胶柱色谱分离（二氯甲烷：甲醇=60:1），得油状物（0.706g，产率18.4%）.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ:8.29(s,1H),8.20(m,1H),7.86(m,1H), 7.66(m,1H),7.53(d,J=7.7,1H),7.45(m,1H),7.38(ddd,J=14.4,J=7.5,7=4.8,1H),7.32(m,2H),7.24(m,3H),6.71(d,J=5.1,1H),5.10(d,1H),4.86(m,1H),4.67(d,1H),4.33(m,1H),3.49(m,2H),3.05(m,2H),2.98(m,2H),2.75(m,4H),1.54(m,6H),1.37(m,12H),0.82(m,9H).
13C NMR (150 MHz, CDCl3 ):171.48,169.14,169.89,144.37,135.38, 134.44,133.86,133.69,133.58,130.36,129.48,129.37,129.11,127.02,126.71,126.10,125.41,125.34,123.15,68.71,68.45,68.29,28.98,28.90,28.46,27.87,26.41,26.23,25.16,25.10,24.32,22.92,22.02,22.61,21.50,18.53,13.95.
ESI-MS:723.40(M+H+)。
实施例13  原药体外实验测定
用HPLC法测定原药即丁苯酞﹑奥扎格雷和氯吡格雷在人工胃液中的稳定性
（1）人工胃液的配制
①配制1mol/L的稀盐酸（按体积比1:12配制）：取浓盐酸20mL,加纯水240mL，即得。
②人工胃液：取1mol/L 的稀盐酸 16.4mL,加800mL蒸馏水和10g胃蛋白酶，摇匀，加水稀释至1000mL，即得。
（2）标准曲线的绘制
用HPLC法测定相应药物的标准曲线
①测定方法：分别精密称取丁苯酞，奥扎格雷，氯吡格雷10mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释定容至刻度，摇匀；从中分别量取0.1ml, 0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.6ml,1.2ml,2ml于2ml的容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，配制成0.05,0.1,0.15,0.2,0.3,0.6,1ml/mg的一系列标准样品，用0.23μm的滤膜过滤，每次进样10μl,用甲醇为空白对照组，在254nm和230nm处测定吸收度，每个样品分别测定3次，取平均值。以峰面积对浓度做性回归，得标准曲线。
②标准曲线绘制结果
液相色谱条件：
仪器：岛津高效液相色谱仪
色谱柱： C18 (5μm ,4.6×250mm)
检测波长：254nm,230nm
进样量：10μL
流动相：甲醇与水
流速：1.0 mL/min
标准曲线见图1~3。其中，绘制丁苯酞所用的流动相比例为：甲醇：水=8:2，线性方程为y=-6.10×104+3.02×106x（R2= 0.9977 ）。绘制奥扎格雷和氯吡格雷的流动相比例为:甲醇：水=7:3，奥扎格雷线性方程为y=-1.63×104+3.45×107x（R2=0.9984）；氯吡格雷线性方程为y=-6.61×104+1.77×106x（R2=0.9915）
（3）体外实验方案
一般操作步骤：取待测样品10mg，精密称定，置于两支玻璃小瓶中，分别加入人工胃液10 mL,摇匀使其溶解，置37℃水浴上温育，每个样品分别做3组平行实验；分别在0min,10min,20min,30min,60min, 90min, 2h, 5h,10h,20h精密取样，每次0.5mL,置于2 mL容量瓶中，再用甲醇稀释定容至2mL,用0.23μm的滤膜过滤，每次进样10μl，每个待测样品分别进样3次，分别记录峰面积和出峰时间。
（4）体外实验结果与讨论
液相色谱条件：
仪器：岛津高效液相色谱仪
色谱柱：C18 (5μm ,4.6×250mm)
检测波长：254nm,230nm
进样量：10μL
流动相：甲醇与水
流速：1.0 mL/min
根据测定的标准曲线方程，将记录的各组峰面积转化为浓度，然后用浓度对时间做曲线。结果如图8所示。
在探究原药化合物在人工胃液中的降解时发现，丁苯酞﹑奥扎格雷和氯吡格雷在人工胃液中首先是保持浓度不变，随后，随着时间的延长，浓度急剧降低，推测是此时原药被胃蛋白酶分解代谢的过程，最后浓度达到一个平衡值。
实施例14   化合物1,4,7,12体外降解实验测定
分别选取不同类型的化合物1、化合物4、化合物7和化合物12，用HPLC法测定它们在人工胃液中的稳定性
（1）人工胃液的配制
①配制1mol/L的稀盐酸（按体积比1:12配制）：取浓盐酸20mL,加纯水240mL，即得。
②人工胃液：取1mol/L 的稀盐酸 16.4mL,加800mL蒸馏水和10g胃蛋白酶，摇匀，加水稀释至1000mL，即得。
③空白人工胃液：除不含胃蛋白酶外，其余配方和人工胃液相同。
（2）标准曲线的绘制
用HPLC法测定相应药物的标准曲线
①测定方法：分别精密称取1,4,7,12三种化合物各10mg于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释定容至刻度，摇匀；从中分别量取0.1ml, 0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.6ml,1.2ml,2ml于2ml的容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，配制成0.05,0.1,0.15,0.2,0.3,0.6,1ml/mg的一系列标准样品，用0.23μm的滤膜过滤，每次进样10μl,用甲醇为空白对照组，在254nm和230nm处测定吸收度，每个样品分别测定3次，取平均值。以峰面积对浓度做性回归，得标准曲线。
②标准曲线绘制结果
液相色谱条件：
仪器：岛津高效液相色谱仪
色谱柱： C18 (5μm ,4.6×250mm)
检测波长：254nm,230nm
进样量：10μL
流动相：甲醇与水
流速：1.0 mL/min
标准曲线见图4~7。其中，化合物4所用的流动相比例为：甲醇：水=8:2，线性方程为y=1.38×105+2.95×106x（R2= 0.9941）。化合物1、化合物7 和化合物12的流动相比例为:甲醇：水=7:3，化合物1的线性方程为y=-1.76×106+5.88×107x（R2=0.9958）；化合物7的线性方程为y=-2.10×105+1.39×107x（R2= 0.9993）；化合物12的线性方程为y=-5.53×106+8.29×105x(R2=0.9958).
（3）体外降解实验方案
一般操作步骤：取待测样品10mg，精密称定，置于两支玻璃小瓶中，分别加入空白人工胃液和人工胃液10 mL,记为空白对照组和实验组，摇匀使其溶解，置37℃水浴上温育，每个样品分别做3组平行实验；分别在0min,10min,20min, 30min,60min,90min, 2h, 5h,10h,20h精密取样，每次0.5mL,置于2 mL容量瓶中，再用甲醇稀释定容至2mL,用0.23μm的滤膜过滤，每次进样10μl，每个待测样品分别进样3次，分别记录峰面积和出峰时间。
（4）体外实验结果与讨论
液相色谱条件：
仪器：岛津高效液相色谱仪
色谱柱：C18 (5μm ,4.6×250mm)
检测波长：254nm,230nm
进样量：10μL
流动相：甲醇与水
流速：1.0 mL/min
根据测定的标准曲线方程，将记录的各组峰面积转化为浓度，然后用浓度对时间做曲线。结果如图9~12所示。
在实验的过程中，我们在同类型化合物中分别选取了化合物1、化合物4、化合物7和化合物12，以他们为代表，探究这四类化合物在人工胃液中浓度的变化情况。研究发现，化合物1和化合物7在人工胃液中浓度呈现逐渐减低的趋势，推测是这两种化合物在胃蛋白酶或是胃酸条件下逐渐分解代谢，使得浓度逐渐减低；而化合物4和化合物12是在一个极短的时间内达到浓度最大值后再逐渐减低，推测是首先在人工胃液中有一个溶解的过程，在开始的一段时间内，主要是化合物4和化合物12在人工胃液中逐渐溶解，此时溶解速率远大于分解速率，使得浓度逐渐升高；当大部分化合物溶解后，随后主要是化合物4化合物12在胃蛋白酶或是胃酸条件下逐渐分解代谢，使得浓度逐渐减低。
另一方面，我们同时检测了这四种化合物在空白人工胃液中的稳定性。研究发现，它们的浓度变化趋势和在人工胃液中的变化趋势相差不大，不论是达到最大浓度的时间，还是浓度变化量的趋势都大体一致。由于空白人工胃液中的主要成分就是稀盐酸，故推测，酸性环境也可促使化合物分解。这四种前药本身在结构上具有二个或三个酰胺键，酰胺键在酸性条件下容易断裂。 以上这些数据都表明，化合物1、化合物4、化合物7和化合物12在人工胃液中能够逐渐被分解代谢，各物质的分解速率存在一定的差异性，并且，酸性环境是其分解代谢的主要条件，同时推测具有相似结构的其他几种化合物也具有类似性质。
实施例15  化合物1-12释放出丁苯酞的体外降解实验测定
用HPLC法测定化合物1-12在人工胃液中释放出丁苯酞的速率，实验方案同实施例14
体外实验结果与讨论
液相色谱条件同实施例14
探究了具有结构通式的化合物1-12在人工胃液中释放出丁苯酞的速率，结果见图13~24。通过对比图谱发现，这十二种化合物在人工胃液中均能有效地释放出原药丁苯酞，浓度变化大致上呈现先升高后降低的趋势，推测是在开始的一段时间内，化合物1-12释放出原药的速率大于此时原药被胃蛋白酶或是胃酸的分解速率，使得在一段时间内浓度呈现逐步升高的趋势，最后释放出的丁苯酞的浓度达到一个最大值；随后大量的丁苯酞被胃蛋白酶或是胃酸逐渐分解，故呈现逐渐减低的过程。通过数据比较和图谱分析，可以确证具有结构通式的化合物在体内可以顺利地分解释放出丁苯酞而发挥作用。
实施例16   化合物1-12释放出奥扎格雷或氯吡格雷的体外实验测定
用HPLC法测定化合物1-12在人工胃液中释放出奥扎格雷或氯吡格雷的速率，具体实施方法同实施例14
体外实验结果与讨论
液相色谱条件同实施例14
探究了具有本发明2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物结构通式化合物在人工胃液中释放出奥扎格雷的速率，结果见图25~36。通过对比图谱发现，这十二种化合物在人工胃液中均能有效地释放出原药奥扎格雷或氯吡格雷，浓度变化大致上呈现先升高后降低的趋势，与释放出的丁苯酞曲线类似。也就是说这十二种化合物在人工胃液中可以顺利地分解释放出奥扎格雷或氯吡格雷而发挥作用。

Claims (10)

1.一种2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物，其特征在于所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物具有以下结构式：
其中：R1为链接基团；
      R2为含有羧基的官能团。
2.根据权利要求1所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物，其特征在于所述的链接基团为CH2CH2，CH2CH2CH2，CH2CH2CH2CH2，CH2（CH2）5CH2或CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2；所述的含有羧基的官能团为奥扎格雷、氯吡格雷、水杨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸。
3.一种权利要求1或2所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A、将原料丁苯酞溶于溶剂中，用碱调节pH值至10~14，加入反应摩尔量1倍以上的二胺，再加入催化剂于室温条件下搅拌反应24~48h得到中间产物a；
B、将得到的中间产物a与含有羧基的化合物在缩合剂的条件下缩合反应得到目标物。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的溶剂为甲醇、乙醇、二甲亚砜DMF、N-甲基吡咯烷酮NMP、二氯甲烷、四氢呋喃THF中的一种。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、三乙胺、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、二异丙基乙胺、吡啶或吡咯中的一种。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的二胺为乙二胺、丙二胺、丁二胺、庚二胺或1,2-双（2-氨基乙氧基）乙烷中的一种。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述的催化剂为4-二甲氨基-吡啶DMAP或吡啶。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的羧基化合物为奥扎格雷、氯吡格雷、水杨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；所述的缩合剂为二环乙基碳二亚胺DCC、1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺EDCI或苯并三氮唑- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐HBTU中的一种。
9.一种权利要求1或2所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的制剂，其特征在于所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物中加入药学上接受的辅料制备成散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、蜜丸剂、冻干剂或水针剂。
10.一种权利要求1或2所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物的应用，其特征在于所述的2-（α-羟基戊基）苯甲酰胺衍生物在制备预防/治疗心脑缺血性疾病、心脑动脉阻塞疾病及抗帕金森氏病和抗老年痴呆药物中的应用。
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