CN104622808A - 一种眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体及制备方法。通过制备矢车菊素及其糖苷脂质体混悬液，在混悬液中加入聚合物进行包覆，即得聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体混悬液，经喷雾干燥或冷冻干燥即可制得聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体固态粉剂。临用前根据需要水化重建。本发明的聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体利用包覆材料的长循环特性、生物黏附性及促透作用，在提高药物包封率、脂质体稳定性的同时延长微粒的体内滞留及循环时间、促进微粒细胞间跨膜转运，从而提高矢车菊素及其糖苷的眼用生物利用度，且制备为固态粉剂，更利于包装、贮存和运输，使用更加方便。

Description

一种眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体及制备方法

技术领域    

本发明属于医药技术领域，涉及一种眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体及制备方法。

背景技术    

白内障是世界首位致盲因素，同时也是我国第一位的致盲眼病。研究表明在白内障发生发展过程度中，自由基以及与其相关的氧化应激是导致晶状体生理功能改变、最终导致白内障的枢纽。

花色素苷是一类陆生植物色素，溶于水，无毒性，是广泛分布的植物多酚类黄酮化合物。研究证明花色素苷具有抗氧化及清除自由基功能、抗炎作用，抗肿瘤和抗突变活性，抑制胆固醇含量，同时还具有抗病原体和抗微生物等活性。花色素经由苯基丙酸路径和类黄酮生物合成途径生成，以天竺葵色素、矢车菊素、花翠素、芍药花苷配基、矮牵牛苷配基及锦葵色素六种非配糖体为主。矢车菊素作为其中分子结构最为简单的分子，其C3（或C3，C5）位上的羟基常与葡萄糖、半乳糖以及某些戊糖缩合成花色苷。矢车菊素及其糖苷具有富电子的羟基部分，是优良的氢或中子给予体，能通过清除过氧化物自由基、阻断脂质过氧化，达到抗肿瘤活性、抗炎、抗氧化的药理作用，然而其主要为被动转运，表观渗透系数低，体内生物利用度很低，因此目前研究仅限于体外的细胞作用实验。

脂质体制剂口服给药安全、生物利用度提高、患者顺应性强，包覆脂质体作为一种新型的膜修饰脂质体，优点在于通过囊泡间静电作用、空间阻力作用、亲水性等，增加了脂质体双层膜的稳定性，从而提高了脂质体的体内外稳定性；包覆层的存在使药物能够缓慢释放；包覆材料的选择可以达到延长脂质体体内滞留及循环时间、促进药物跨膜吸收的目的。将包覆脂质体混悬液制备为固态脂质体，不仅提高了脂质体的长期稳定性，而且在包装、贮存和运输中更为方便。

因此为更好的利用我国的丰富中药植物资源，开发矢车菊素及其糖苷的眼用药理作用，本发明设计并通过制备矢车菊素及其糖苷脂质体混悬液，在提高药物包封率、脂质体稳定性的同时延长微粒的体内滞留及循环时间、促进微粒细胞间跨膜转运，从而提高矢车菊素及其糖苷的眼用生物利用度，达到预防及治疗白内障的作用。

发明内容    

本发明的目的在于提供一种使矢车菊素及其糖苷体内滞留及循环时间延长、跨膜吸收提高、并且便于包装、贮存和运输的眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体及制备方法，使矢车菊素及其糖苷的眼用生物利用度提高，使用更方便。

本发明的技术方案是：一种眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体及制备方法，其特征是，所述制备方法包括以下步骤：

(1)                 制备药物脂质体混悬液：以磷脂、胆固醇、复合乳化剂溶于有机溶剂中作为油相，磷酸盐缓冲液作为水相（若后续采用冷冻干燥法制备冻干脂质体，在此处应加入冻干保护剂），矢车菊素及其糖苷根据水溶性高低，可溶解在相应油相或水相中，采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、复乳法或熔融法，在水浴条件下进一步乳化，方法包括高压均质机匀化乳化、高速剪切搅拌乳化、超声乳化或胶体磨乳化，制备药物的脂质体混悬液；

(2)                 制备眼用聚合物包覆脂质体混悬液：将(1)制得混悬液与聚合物的磷酸盐缓冲液相互混合，10℃搅拌混匀60min，即得聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体混悬液；

(3)                 采用喷雾干燥或冷冻干燥制备眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷固态粉剂，即将聚合物包覆脂质体混悬液经喷雾干燥（进风温度为140-220℃，出风温度为70-100℃）或冷冻干燥（预冻时间7-12h，预冻温度-70℃，冷冻干燥时间为24-38h，冷冻干燥温度-50℃）制备聚合物包覆矢车菊素及其糖苷固态脂质体。

(4)                 将喷干或冻干后制得的包覆矢车菊素及其糖苷固态脂质体根据需要，加入适量蒸馏水，经振荡、超声或搅拌水合后重新得到聚合物包覆脂质体混悬液。

以矢车菊素及其糖苷为模型药，试验结果表明包封率可达20%-70%，生物利用度得到显著提高。

本发明所述的聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体的组分及其质量百分比为：矢车菊素及其糖苷0.01%-20%、包覆材料0.2%-20%、磷脂2%-85%、胆固醇5%-25%、复合乳化剂0%-5%、冻干保护剂0%-10%。

本发明所述聚合物包覆材料为聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯醇、环糊精、壳聚糖、壳寡糖、羧甲基壳聚糖、三甲基壳聚糖中的一种或几种。

本发明所述矢车菊素及其糖苷选自矢车菊素、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3,5-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-槐糖苷、矢车菊素-3-桑布双糖苷中的一种或几种。

本发明所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油或磷脂酰胆碱中的一种或几种。

本发明所述聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体，其特征是所述复合乳化剂为吐温85、吐温80、吐温60、苄泽、卖泽、司盘80、司盘60、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或几种。

本发明所述聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体，其特征是所述冻干保护剂为甘露醇、乳糖、山梨醇、海藻糖、葡萄糖、氯化钠、右旋糖苷、环糊精、蔗糖、麦芽糖、果糖中的一种或几种。

本发明的有益效果是：眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体除具有普通脂质体的优点外，还具有以下优点：（1）包覆脂质体提高了药物的稳定性，克服了普通脂质体聚集、沉降和渗漏等不稳定现象；（2）延长了制剂的体内滞留时间、循环时间，促进药物的跨膜吸收；（3）所述包覆脂质体显著提高眼用矢车菊素及其糖苷的生物利用度，该矢车菊素及其糖苷固态粉剂便于包装、贮存和运输，使用更方便。

具体实施方式    

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

实施例 1  一种眼用聚合物包覆矢车菊素脂质体及制备方法，它包括如下步骤：

采用乙醇注入法，取矢车菊素50mg、大豆卵磷脂2g、胆固醇0.5g、吐温80 0.01g溶于乙醇中作为油相，使药物与脂质完全溶解，快速滴入到恒温搅拌下的甘露醇磷酸盐缓冲液50ml中（5%，w/v，pH6.8），持续恒温（50±2℃）搅拌至乙醇挥发完全。在冰水浴条件下超声处理（超声功率80%，超声时间4min），即得矢车菊素脂质体混悬液。将制得混悬液缓慢滴入季铵度65%的三甲基壳聚糖的磷酸盐缓冲液（1%，w/v）50ml中，10℃搅拌混匀60min，即得三甲基壳聚糖包覆矢车菊素脂质体混悬液，采用NaCl调节至等渗混悬液。采用喷雾干燥（进风温度为140-220℃，出风温度为70-100℃）制备固态三甲基壳聚糖包覆脂质体，包封率为35.5%，临用前根据需要，加入适量蒸馏水，即得三甲基壳聚糖包覆矢车菊素脂质体混悬液。

实施例 2   一种眼用聚合物包覆矢车菊素-3-O-葡萄糖苷脂质体及制备方法，它包括如下步骤：

采用薄膜分散法，取大豆卵磷脂4.1g、胆固醇2g溶于氯仿中作为油相，使用旋转蒸发仪55℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋转保持真空继续抽吸2h后停止，加入含有泊洛沙姆188 0.07g、吐温80 0.06g及矢车菊素-3-O-葡萄糖苷120mg的右旋糖酐的磷酸盐缓冲液50ml中（5%，w/v，pH6.8），剧烈振摇40min，洗膜后在4℃条件下高压均质机匀化（均质压力80Mpa，循环次数5次），即得矢车菊素-3-O-葡萄糖苷脂质体混悬液。将制得混悬液缓慢滴入壳寡糖的磷酸盐缓冲液（1%，w/v）50ml中，10℃搅拌混匀60min，即得壳寡糖包覆矢车菊素-3-O-葡萄糖苷脂质体混悬液，采用NaCl调节至等渗混悬液。采用喷雾干燥（进风温度为140-220℃，出风温度为70-100℃）制备固态壳寡糖包覆脂质体，包封率为55.3%，临用前根据需要，加入适量蒸馏水，即得壳寡糖包覆矢车菊素-3-O-葡萄糖苷脂质体混悬液。

实施例 3   一种眼用聚合物包覆矢车菊素脂质体及制备方法，它包括如下步骤：

采用逆相蒸发法，取蛋黄卵磷脂3.5g、胆固醇0.9g溶于乙醚中作为油相，加入3.1ml乳糖、甘露醇（1：1，w/w）的混合磷酸盐缓冲液，超声5min得到乳浊液，使用旋转蒸发仪25℃除去乙醚至胶态，加入含有0.2g矢车菊素的乙醇溶液7ml，35℃旋转蒸发至干，停止旋转保持真空继续抽吸2h后停止，加入乳糖、甘露醇（1：1，w/w）的混合磷酸盐缓冲液50ml中（5%，w/v，pH6.8），剧烈振摇40min，洗膜后在冰水浴条件下超声处理（超声功率80%，超声时间4min），即得矢车菊素脂质体混悬液。将制得混悬液缓慢滴入环糊精的磷酸盐缓冲液（7%，w/v）50ml中，10℃搅拌混匀60min，即得环糊精包覆矢车菊素脂质体混悬液，采用NaCl调节至等渗混悬液。采用冷冻干燥（预冻时间7-12h，预冻温度-70℃，冷冻干燥时间为24-38h）制备环糊精包覆冻干脂质体，包封率为47.2%，临用前根据需要，加入适量蒸馏水，即得环糊精包覆矢车菊素脂质体混悬液。

实施例 4   一种眼用聚合物包覆矢车菊素-3-O-半乳糖苷脂质体及制备方法，它包括如下步骤：

采用薄膜分散法，取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.75g溶于氯仿中作为油相，使用旋转蒸发仪55℃蒸干成膜，除去氯仿，停止旋转保持真空继续抽吸2h后停止，加入含有泊洛沙姆188 0.07g、吐温80 0.06g及矢车菊素-3-O-半乳糖苷100mg的甘露醇的磷酸盐缓冲液50ml中（5%，w/v，pH6.8），剧烈振摇40min，洗膜后在4℃条件下高压均质机匀化（均质压力80Mpa，循环次数5次），即得矢车菊素-3-O-半乳糖苷脂质体混悬液。将制得混悬液缓慢滴入壳寡糖的磷酸盐缓冲液（1%，w/v）50ml中，10℃搅拌混匀60min，即得壳寡糖包覆矢车菊素-3-O-半乳糖苷脂质体混悬液，采用NaCl调节至等渗混悬液。采用冷冻干燥（预冻时间7-12h，预冻温度-70℃，冷冻干燥时间为24-38h）制备壳寡糖包覆冻干脂质体，包封率为62.7%，临用前根据需要，加入适量蒸馏水，即得壳寡糖包覆矢车菊素-3-O-半乳糖苷脂质体混悬液。

Claims (9)

1.一种眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体，其特征是，含有矢车菊素及其糖苷、包覆材料、磷脂、胆固醇、复合乳化剂、冻干保护剂组分，各组分的质量百分比为矢车菊素及其糖苷0.01%-20%、包覆材料0.2%-20%、磷脂2%-85%、胆固醇5%-25%、复合乳化剂0%-5%、冻干保护剂0%-10%。

2.如权利要求1所述给药体系，其特征是，所述聚合物包覆材料为聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙烯醇、环糊精、壳聚糖、壳寡糖、羧甲基壳聚糖、三甲基壳聚糖中的一种眼用或几种。

3.如权利要求1所述给药体系，其特征是，矢车菊素及其糖苷选自矢车菊素、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3,5-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-槐糖苷、矢车菊素-3-桑布双糖苷中的一种或几种。

4.如权利要求1所述给药体系，其特征是，磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油或磷脂酰胆碱中的一种或几种。

5.如权利要求1所述给药体系，其特征是，所述复合乳化剂为吐温85、吐温80、吐温60、苄泽、卖泽、司盘80、司盘60、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或几种。

6.如权利要求1所述给药体系，其特征是，所述冻干保护剂为甘露醇、乳糖、山梨醇、海藻糖、葡萄糖、氯化钠、右旋糖苷、环糊精、蔗糖、麦芽糖、果糖中的一种或几种。

7.如权利要求1所述眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体，其特征是，所述制备方法包括以下步骤：

制备药物脂质体混悬液：以磷脂、胆固醇、复合乳化剂溶于有机溶剂中作为油相，磷酸盐缓冲液作为水相（若后续采用冷冻干燥法制备冻干脂质体，在此处应加入冻干保护剂），矢车菊素及其糖苷根据水溶性高低，可溶解在相应油相或水相中，采用薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、复乳法或熔融法，在水浴条件下进一步乳化，方法包括高压均质机匀化乳化、高速剪切搅拌乳化、超声乳化或胶体磨乳化，制备药物的脂质体混悬液；

制备眼用聚合物包覆脂质体混悬液：将(1)制得混悬液与聚合物的磷酸盐缓冲液相互混合，10℃搅拌混匀60min，即得聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体混悬液；

采用喷雾干燥或冷冻干燥制备眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷固态粉剂，即将聚合物包覆脂质体混悬液经喷雾干燥（进风温度为140-220℃，出风温度为70-100℃）或冷冻干燥（预冻时间7-12h，预冻温度-70℃，冷冻干燥时间为24-38h，冷冻干燥温度-50℃）制备聚合物包覆矢车菊素及其糖苷固态脂质体。

8.将喷干或冻干后制得的包覆矢车菊素及其糖苷固态脂质体根据需要，加入适量蒸馏水，经振荡、超声或搅拌水合后重新得到聚合物包覆脂质体混悬液。

9.如权利要求7所述聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体的制备方法，其特征是所述眼用聚合物包覆矢车菊素及其糖苷脂质体中矢车菊素及其糖苷含量为0.01%-20%，聚合物包覆材料的含量为0.2%-20%。