CN104621556A - 一种具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂和鹿茸。本发明还公开了上述组合物在制备具有耐缺氧和抗疲劳功能的保健食品中的应用，本发明中的保健食品具有耐缺氧和抗疲劳、增进健康状况的作用。本发明中的保健食品是以天然中草药为主要原料制备，可长期服用，通过功能学试验，其结果证实本发明中的保健食品具有耐缺氧和抗疲劳作用，效果显著。

Description

一种具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物及其应用

技术领域

本发明属于食品技术领域，具体涉及一种以天然中草药为主要原料制备的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物及其应用。

背景技术

现代社会的竞争加剧，节奏加快，现代人长期处于紧张的生活环境，工作压力大及过度疲劳，通常伴随着以下现象，如四肢畏寒、腰膝酸软、须发早白或早秃、夜尿频多、性功能衰退、免疫功能低下等肾虚的表现。肾虚主要是由“三劳”—“体劳”、“神劳”和“房劳”造成的。身体疲劳，从事强度较大的工作、经常加班和熬夜都会导致机体陷入持续疲劳中，从而引发肾虚症状；其次是巨大的工作压力和生活压力导致精神无法放松，从而诱发肾虚；第三是在性生活方面过于频繁和放纵，导致精气不济，从而出现肾虚的症状。

因此，如何延缓疲劳的发生，迅速消除疲劳，恢复精力保持旺盛的精力是极为重要的，成为社会关注的热点问题之一。现有技术中，通过补肾改善疲劳状态的产品大都以金贵肾气丸、六味地黄丸、杞圆桂花膏、参苓白术散等传统中药为主，或者传统的补虚类中药材如淫羊藿、鹿茸、巴戟天、西洋参、红景天、黄芪、当归、黄精等改善肾虚疲劳的临床研究亦有报道，但这些产品都不能长期服用，否则产生副作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物的活性成分由多种天然中草药为原料制成，制成的组合物具有补肾耐缺氧和抗疲劳功能，且长期服用，无副作用。

本发明的目的还在于提供上述组合物在制备具有耐缺氧和抗疲劳功能的保健食品中的应用。

本发明的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂和鹿茸。

作为本发明的一种优选的技术方案，本发明中的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，其中各活性成分的质量份配比为：龙眼肉10～150、大枣10～150、熟地黄10～150、枸杞子10～150、核桃仁10～150、五味子3～50、肉桂3～50、鹿茸3～50。

各活性组分的质量份配比可进一步优选为：龙眼肉20～90、大枣20～90、熟地黄20～90、枸杞子20～90、核桃仁15～90、五味子5～20、肉桂3～20、鹿茸3～20。

各活性组分的质量份配比最佳为：龙眼肉25、大枣25、熟地黄20、枸杞子20、核桃仁15、五味子8、肉桂5、鹿茸5。

本发明具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物中的各活性组分，具有以下功效和特点：

龙眼肉始载于《神农本草经》，自古以来被视为珍贵补品，作为滋补药品及保健食品，已有一千多年的历史，具有补心益脾，养血安神之功效。历版《中国药典》均有收载。临床上常用于气血不足，心悸怔忡，健忘失眠，血虚萎黄。现代医学研究也表明，龙眼肉具有明显的抗氧化、抗衰老、提高免疫力等作用。

大枣食用历史悠久《伤寒论》、《金匮要略》、《本草纲目》中多有阐述。为补中益气，养血安神，缓和药性的常用中药。现代营养学研究表明，大枣含有蛋白质、糖类、有机酸、脂肪、人体所需的18种氨基酸以及铁、锌、磷、钙、硒等，同时还含有丰富的维生素A，B₂，C及多种生物活性成分。大枣多糖是大枣中重要的活性物质，有明显的补体活性和促进淋巴细胞增殖作用，可提高机体免疫力。大枣中的果糖、低聚糖、酸性多糖参与保肝护肝，大枣多糖可使四氯化碳性肝损伤症状减轻，而且使肝细胞再生速度快。同时大枣能提高体内单核细胞的吞噬功能，有保护肝脏、增强体力的作用。

熟地黄首载于《本草图经》，性味甘、微温。归肝、肾经。具有补血滋阴，益精填髓功效，对内分泌系统、心血管系统、免疫系统等均有调节作用，其中熟地黄粗多糖是熟地黄促进造血和免疫功能的主要成分，熟地黄粗多糖可显著改善模型小鼠的造血功能，同时对免疫系统也有较好改善和刺激作用。可显著提高血超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽(GSH-PX)活力，降低血浆、脑匀浆及肝匀浆中过氧化物脂质(LPO)水平，有很好的抗氧化作用，还具有促进造血、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力、抗突变、抑制肿瘤等作用。

枸杞子是我国传统的名贵中药材，素有“红宝”美称，富含植物多糖、蛋白质、维生素等营养成分。早在《神农本草经》中就指出：久服坚筋骨；《名医别录》谓枸杞擅长“补益精气”；《食疗本草》也记载枸杞“能益人，去虚劳”。枸杞在滋补肝肾、益精明目等方面的功效也为历代医家和食疗学家所推崇。枸杞子中的枸杞多糖是其重要的有效成分，经研究表明，枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，其对恶性肿瘤、艾滋病的预防与治疗也能起到积极的作用。另外其具有改善易疲劳、食欲不振和视力等症状，具有降血脂、抗脂肪肝、抗肿瘤、抗衰老等作用。

核桃仁在《本草纲目》中记载补气养血，润燥化痰，益命门的功效，被认为是补益气血、健脑益智、抗衰老的佳品。有大量相关实验报道称核桃仁具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、补肾壮阳的作用。核桃肉含有极丰富的脂肪，而其中的脂肪酸是人体必需的脂肪酸亚油酸，是细胞生物膜的重要成分，并具有良好的抗氧化功能。

五味子为传统中药材，应用历史悠久,始载于东汉《神农本草经》,位列上品。记载曰：本品益气、咳逆上气，劳伤赢瘦、补不足，强阴，益男子精。历代复有养五脏、除热，补虚劳，令人悦泽，明目等记载。现代药理研究表明五味子有增加中枢神经兴奋，增强人体精神、体力和心血管系统张力及心脏收缩力，降低病毒性肝炎患者血清谷丙氨酶等活性，对人体有多方面的有益作用。

肉桂性辛、甘、热，归肾、脾、心、肝经，为纯阳温补之品，具有补火助阳、散寒止痛、温经通脉之功效。临床上广泛用于肾阳不足、命门火衰、脾肾阳衰者，用于脘腹冷痛等证。现代药理研究表明肉桂对消化系统、心血管系统和免疫系统疾病具有良好的疗效,具有镇痛、抗菌和抗肿瘤等作用。

鹿茸，梅花鹿或马鹿雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，为我国传统名贵中药，已有2000多年的入药历史。古典医籍《神农本草经》对其功能和主治就有详细记载：“味甘、性温，主漏下恶血、寒热惊痫、益气强志、生齿不老”。明代李时珍在《本草纲目》中记载：“鹿茸，生精补髓，养血益阳，强筋健骨，治一切虚损，耳聋、目暗、眩晕、虚痢”。现代医学已证实鹿茸含有多种生物活性物质，并具有抗氧化和抗衰老作用，提高性功能、提高耐力,增强记忆力和增强机体免疫力，促进体内蛋白质合成等功效。

中医认为肾为先天之本，主骨、藏精、生髓。肾中水火为人体阴阳之根，是人体各项生命活动正常进行的保证。肾的强弱，直接关系人的精神和体力。肾藏精，是化生气血的根源，影响着人体的生长、发育、生殖等生命过程。《素问·上古天真论》中详细论述了随着肾精的充盛，人体生长、发育，精力旺盛，体力充沛；随着肾精的消耗，人体气血、经脉、五脏六腑衰损，故而出现“五藏皆衰，筋骨解堕”，疲劳不可避免的发生了。又如《灵枢·海论》记述了当肾精不足、髓海失充时，发生疲劳的情况。其云“髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧”。肾虚可以产生疲劳，疲劳也往往是肾虚的一个重要特点。《素问·平人气象论》：“尺脉缓涩，谓之解亦”。《类经·疾病类》：“身体解亦，谓不耐烦劳，形迹困倦也”。

本发明中鹿茸善治虚劳，益精血，保精神；肉桂温阳散寒，补火以鼓舞亏虚的肾中阳气，补命门之火，引火归源；再辅以熟地黄、枸杞子、五味子、滋补肾阴，促生阴液；大枣、龙眼肉、核桃仁补肾养血安神，阴阳并补，使得“阳得阴助，而生化无穷”。诸药合用，可收温补肾阳之功效。

本发明的第二个目的是通过以下技术方案来实现的：上述组合物在制备具有耐缺氧和抗疲劳功能的保健食品中的应用。

本发明上述同时具有耐缺氧和抗疲劳功能的保健食品，可以通过常规工艺(如水提取或醇提取等)制成药剂学上所说的多种剂型，如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、泡腾剂、饮料、合剂或口服液等。

本发明具有以下优点：

(1)本发明中的组合物是以鹿茸为君药，根据中医复方理论，辅以具有抗疲劳、耐缺氧等作用的枸杞子、熟地黄等多种传统中草药，整体调理，发挥最佳的保健功效，其不拘泥于古方而具有创新性；

(2)本发明中保健食品能够长期服用、安全有效；

(3)本发明在中医理论的指导下进行组方，并以小鼠常压耐缺氧存活时间为观察指标，评价本发明中的保健食品对实验动物常压耐缺氧能力的影响；以小鼠负重游泳时间为观察指标，评价小鼠的抗疲劳能力；并以小鼠运动后血中乳酸水平为观察指标，评价了小鼠有氧代谢及抗疲劳能力，结果显示，本发明保健食品可延长小鼠常压缺氧情况下存活时间，并可提高小鼠体内有氧代谢水平及抗疲劳作用；

(4)本发明中的组合物经功能学试验研究表明，其具有耐缺氧和抗疲劳功能作用。

下面通过具体实施方式及功能学研究结果对本发明作进一步说明。

具体实施方式

第一部分 具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物、保健食品及其制备方法

实施例1

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：

取龙眼肉100g、大枣150g、熟地黄150g、枸杞子100g、核桃仁150g、五味子30g、肉桂30g、鹿茸30g。

将上述原料按下列步骤制备成片剂：

将原料药龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂、鹿茸经水煮提取浓缩后，加适量纯化水，按常规工艺制成片剂，该产品可以作为保健食品服用。

实施例2

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：

取龙眼肉150g、大枣100g、熟地黄100g、枸杞子150g、核桃仁100g、五味子50g、肉桂30g、鹿茸50g。

将上述原料按下列步骤制备成胶囊剂：

将龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂、鹿茸经水煮提取浓缩后喷雾干燥，得中草药提取干粉，将预胶化淀粉加入中草药提取干粉中，混合，制粒，烘干，加入硬脂酸镁和滑石粉，填充硬胶囊，该产品可以作为保健食品服用。

实施例3

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：

取龙眼肉250g、大枣250g、熟地黄200g、枸杞子200g、核桃仁150g、五味子80g、肉桂50g、鹿茸50g。

将上述原料按下列步骤制备成口服液：

将龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂、鹿茸经水煮提取浓缩后，加适量纯化水，按常规工艺制成口服液，该产品可以作为保健食品服用。

实施例4

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：

取龙眼肉1200g、大枣1000g、熟地黄1200g、枸杞子1050g、核桃仁1200g、五味子300g、肉桂350g、鹿茸400g。

将上述原料按下列步骤制备成胶囊剂：

将龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂、鹿茸经水煮提取浓缩后喷雾干燥，得中草药提取干粉，将预胶化淀粉加入中草药提取干粉中，混合，制粒，烘干，加入硬脂酸镁和滑石粉，填充硬胶囊，该产品可以作为保健食品服用。

实施例5

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下活性组分制成：

取龙眼肉1500g、大枣1500g、熟地黄1500g、枸杞子1500g、核桃仁1000g、五味子500g、肉桂500g、鹿茸500g。

将上述原料按下列步骤制备成片剂：

将龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂、鹿茸经水煮提取浓缩后喷雾干燥，得中草药提取干粉。将微晶纤维素、预胶化淀粉、CMS-Na加入中草药提取干粉中，混合，制粒，烘干，整粒，加入硬脂酸镁，压片，该产品可以作为保健食品服用。

实施例6

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下质量份配比的活性组分制成：龙眼肉10、大枣150、熟地黄10、枸杞子150、核桃仁10、五味子50、肉桂3、鹿茸50。

实施例7

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下质量份配比的活性组分制成：龙眼肉150、大枣10、熟地黄150、枸杞子10、核桃仁150、五味子3、肉桂50、鹿茸3。

实施例8

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下质量份配比的活性组分制成：龙眼肉20、大枣90、熟地黄20、枸杞子90、核桃仁15、五味子20、肉桂3、鹿茸20。

实施例9

本实施例提供的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，该组合物由以下质量份配比的活性组分制成：龙眼肉90、大枣20、熟地黄90、枸杞子20、核桃仁90、五味子5、肉桂20、鹿茸3。

以上所采用的原料药及辅料，如未特意指出均为市售。实施例6-9中的组合物可通过常规制剂工艺制成药剂学上所说的多种剂型，如口服液、胶囊剂、片剂、粉剂、饮料、合剂或颗粒剂等，作为保健食品使用。

第二部分 本发明保健食品的功能学研究

本发明提供的耐缺氧和缓解体力疲劳的保健食品，本申请发明人使用按上述实施例3制备得到的口服液(以下称为本发明口服液)进行了功能学试验，经广州暨南生物医药研究开发基地有限公司进行功能学试验研究，证明其具有耐缺氧和缓解体力疲劳的功能。

2.1耐缺氧功效动物实验

2.1.1动物分组

每个实验均分为四组：空白对照组(蒸馏水)，高、中、低剂量实验组。每组随机分配10只小鼠。各组小鼠连续灌胃给药30d，实验期间自由饮食。每6天秤体重一次，记录，并根据体重变化调整给药量。

2.1.2受试物制备

小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，待检产品0.134mL/只/天为低剂量，0.268mL/只/天为中剂量，0.402mL/只/天为高剂量。连续等体积灌胃受试物30d后，测定各项指标。

2.1.3检测指标

除体重变化外，分别检测常压、亚硝酸钠中毒和急性脑缺血3种不同缺氧状态下动物死亡所需要的时间(精确到0.1秒)。

2.1.4实验方法

2.1.4.1常压耐缺氧实验

各组小鼠均连续灌胃给药30d，空白对照组给与等量溶剂。末次给药1h后，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶内(每瓶1只)，用凡士林封瓶口，使之不漏气，立即按秒表计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧致死所需要的时间。

2.1.4.2亚硝酸钠中毒存活实验

各组小鼠均连续灌胃给药30d，空白对照组给予等量溶剂。末次给药1h后，各组小鼠按照200～240mg/kg剂量腹腔注射亚硝酸钠，注射完毕后立即计时，记录小鼠中毒后存活时间。

2.1.4.3急性脑缺血性缺氧实验

各组小鼠均连续灌胃给药30d，空白对照组给与等量溶剂。末次给药1h后，各组小鼠逐只自颈部快速断头，立即计时，记录小鼠自断头至张口喘气停止的时间。

2.1.5统计学分析

用SPSS13.0软件进行数据转化和统计分析。分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用LSD法或者Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计，若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不需方差齐性的Tamhane’sT2检验进行两两比较。结果以均数和标准差(X±S)来进行各组对比。

2.1.6结果判定

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)，根据以下标准判定受试样品具有缺氧耐受功能。

常压耐缺氧试验、亚硝酸钠中毒存活试验和急性脑缺血性缺氧试验任意二项实验结果具有统计学意义。

2.1.6.1常压耐缺氧实验，结果如下表1中所示：小鼠存活时间的均数相对与空白组是较高的，并且随浓度升高，小鼠存活时间的均值也呈升高趋势，尤其是高剂量组较空白对照升高明显。经方差分析(方差齐)得知，F常＝1.335，P常＝0.264，P>0.05，各组小鼠因缺氧致死所需要的时间差别不存在差异性，可能存在的原因是：(1)在给药时间不变的情况下，提高小鼠灌胃浓度可能会提高结果的显著性；(2)在给药浓度设置不变的情况下，适当延长灌胃时间(如45d)，可能不同剂量组小鼠的存活时间差异会具有显著性，明确的剂量-效应关系可能显现。

表1各组小鼠因缺氧致死所需时间

2.1.6.2亚硝酸钠中毒存活实验，结果如下表2中所示：本发明口服液高、中、低三个剂量组与空白组比较得知，实验组小鼠喘气呼吸时间均数均高于空白组(P值均＜0.05)，样品三种梯度浓度下的小鼠存活时间相对于空白组小鼠的存活时间都有显著性提高，而且从低剂量到高剂量随着给药浓度的升高，喘气呼吸时间均数也呈升高趋势，呈现浓度-效应的对应关系。结果经方差分析(方差齐)得知，F亚硝酸钠＝2.588，P亚硝酸钠＝0.036<0.05(α＝0.05)，说明本实验中检测样品在提高小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间方面与空白组之间的差异有统计学意义。实验组动物给药剂量与中毒存活时间呈现剂量-效应关系，高剂量组存活时间升高显著。

表2各组小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间

2.1.6.3急性脑缺血性缺氧实验，结果如下表3中所示：本发明口服液高、中、低三个剂量组与空白组比较，各组小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间有统计学意义。实验组动物给药剂量与脑缺血性缺氧的喘气时间呈现明显的剂量-效应关系，高剂量组效果显著。结果经方差分析(方差齐)得知，F急性＝17.743，P急性<0.01，显示该急性脑缺血性缺氧实验模型整体具有统计学意义，意味着该试验中各组小鼠自断头至张口喘气停止的时间(后简称喘气时间)有显著性差异。说明待检样品能减少脑耗能、耗氧，可能与提高钠钾三磷酸腺苷酶活性有关。而且从低剂量到高剂量随着给药浓度的升高，喘气时间均数也呈升高趋势，呈现一定程度的浓度-效应的对应关系。

表3各实验组自断头至张口喘气停止时间的对比

综上所述，在本实验室条件下，分别经口灌胃连续给予蒸馏水、待检样品、各30天，本次保健品耐缺氧实验的三个分实验中亚硝酸钠中毒存活实验和急性脑缺血性缺氧实验喘气时间各组有显著性差异，呈现较明显的剂量-效应关系，且以高剂量组效果显著。

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)，本动物实验研究结论为受试样品具有提高缺氧耐受力功能的作用。

2.2缓解体力疲劳功能实验结果

西医认为疲劳是机体生理过程不能维持其机能在一特定水平上和(或)不能维持预定的运动强度。运动后机体处于缺氧状态，体内蓄积大量的致疲劳物质，主要是乳酸、血氨和血尿素氮。短期的疲劳经过休息可以得到有效缓解，但如果疲劳长期累积、不能消除，就会发展成为过度疲劳，进而导致脑细胞缺氧和神经系统功能紊乱，一定程度上危害人体的健康。

疲劳最客观的表现是运动耐力的下降，而力竭游泳时间是反映运动耐力的重要指标。糖原是大强度运动的主要能量来源，糖原的含量能说明疲劳发生的快慢或程度。如果受试物组肝糖原明显高于对照组，且差异有统计学意义，说明该受试物能够通过增加肝糖原储备为机体提供更多的能量达到抗疲劳的目的。血清尿素氮是蛋白质代谢产物，当肌肉运动能量代谢平衡遭到破坏后蛋白质、氨基酸及其他含氮化合物会被降解，脱下的氨基会形成尿素，这种含氮化合物分解越强，血液中尿素含量就越高，就易发生疲劳。

长时间的运动将导致机体相对缺氧、糖酵解加快进而产生大量的乳酸使肌肉组织内的值下降，导致疲劳，因此血乳酸水平也是反映机体有氧代谢能力和疲劳程度的重要指标，以游泳时间作为检测小鼠疲劳的指标，游泳时间的长短可反映动物运动耐力的大小，运动耐力的提高是抗疲劳能力加强的最直接表现。具有抗疲劳效能的药物可使动物游泳时间延长。

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)，进行负重游泳实验、血清尿素氮测定、肝糖原含量测定和血清乳酸脱氢酶测定实验，其中负重游泳实验结果具有统计学意义；血清尿素氮测定、血清LDH测定和肝膅原测定任意二项实验结果具有统计学意义，判定受试样品具有缓解体力疲劳功效。

本发明口服液三个剂量组四个实验中负重游泳时间、肝糖原实验、乳酸脱氢酶试验各组指标有显著性差异，呈现较明显的剂量-效应关系，且以高剂量组效果显著。本动物实验研究结论为受试样品具有缓解体力疲劳功效。

2.2.1动物分组

每个实验均分为四组：空白对照组(蒸馏水)，高、中、低剂量实验组。每组随机分配10只小鼠。各组小鼠连续灌胃给药30d，实验期间自由饮食。每6天秤体重一次，记录，并根据体重变化调整给药量。

2.2.2受试物制备

小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，待检产品0.134mL/只/天为低剂量，0.268mL/只/天为中剂量，0.402mL/只/天为高剂量。连续等体积灌胃受试物30d后，测定各项指标。

2.2.3检测指标

除给药期间体重变化外，实验检测4个指标，分别为负重游泳时间、血清尿素氮测定、血清LDH测定和肝膅原测定。

2.2.4实验方法

2.2.4.1负重游泳实验

各组小鼠均连续灌胃给药30d，空白对照组给与等量溶剂。末次给药30min后，将尾根部负荷5％体重铁丝的小鼠置于游泳箱中游泳，水深30cm±2cm，水温25℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间，精确到秒。

2.2.4.2血清尿素氮测定实验

小鼠连续灌胃给药30d，空白对照组给予等量溶剂。末次给药30min后，在温度为30℃±1℃的水中不负重游泳90min，休息60min后，摘眼球采血。血凝后离心取血清。全自动血液生化分析仪检测血清尿素氮含量。

2.2.4.3血清乳酸脱氢酶测定实验

小鼠连续灌胃给药30d，对照组给与等量溶剂。末次给药30min后，不负重在水温度30℃±1℃水中游泳10min后，摘眼球采血。血凝固后离心取血清。全自动血液生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶含量。

2.2.4.4肝糖原测定

各组小鼠均连续灌胃给药30d。末次给药30min后处死小鼠，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg制备肝糖原，检测肝糖原含量。

2.2.5统计学分析

用SPSS13.0软件进行数据转化和统计分析。分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用LSD法或者Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计，若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不需方差齐性的Tamhane’sT2检验进行两两比较。结果以均数和标准差(X±S)来进行各组对比。

2.2.6结果判定

根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)，根据以下标准判定受试样品具有缓解体力疲劳功效。

负重游泳实验结果具有统计学意义；

血清尿素氮测定、血清LDH测定和肝膅原测定任意二项实验结果具有统计学意义。

2.2.6.1负重游泳实验，结果如下表4中所示：本发明口服液高、中、低三个剂量组与空白组比较，实验组动物给药剂量与游泳时间均值呈现剂量-效应关系。高剂量组小鼠负重游泳存活时间增加显著，具有统计学意义。从负重该试验结果看出，经方差分析(方差齐)得知，F游泳时间＝2.596，P游泳时间＝0.036，<0.05，说明各组的小鼠服用受试物后负重游泳时间存在明显差异，表明灌胃受试物可引起动物游泳时间明显延长。表明待测样品具有延长小鼠负重游泳时间的作用。

表4各组小鼠负重游泳时间比较

2.2.6.2血清尿素氮含量实验，结果如下表5中所示：本发明口服液高、中、低三个剂量组与空白组比较，低剂量组、高剂量组二个实验组的小鼠尿素氮含量水平均数低于空白组，而中剂量组与空白组相比变化不明显。三个受试物组之间尿素氮水平没有呈现出浓度-效应关系。推测受试物对小鼠尿素氮的影响存在一个较适合的摄取量范围，试验方案所设计的给药剂量并不在此范围内。也可能是由于给药时间较短的关系，虽然实验组有使尿素氮减少的趋势，但尚未出现使尿素氮水平下降呈现明显的剂量-效应关系。

表5各组小鼠血清尿素氮含量比较

2.2.6.3乳酸脱氢酶活性实验：本发明口服液高、中、低三个剂量组与空白组比较，低剂量与空白组相比无统计学意义，说明低剂量对小鼠提高乳酸脱氢酶活性作用不明显。中剂量组、高剂量组与空白组相比，差异显著，表明中剂量、高剂量对小鼠提高乳酸脱氢酶活性作用明显，从低剂量到高剂量随着给药浓度的升高，乳酸脱氢酶的升高也呈增加趋势，呈现浓度-效应的对应关系。

表6小鼠乳酸脱氢酶含量

2.2.6.4肝糖原试验：本发明口服液高、中、低三个剂量组与空白组比较，各实验组小鼠肝糖原含量均数均高于空白组的小鼠肝糖原含量均数，高剂量组小鼠肝糖原含量的差别有统计学意义。表明该受试物可减少肝糖原损耗，提高肝糖原含量的作用。从低剂量到高剂量随着给药浓度的升高，肝糖原的含量也呈增加趋势，呈现浓度-效应的对应关系。

表7小鼠肝糖原含量比较

综上所述，在本实验室条件下，分别经口灌胃连续给予蒸馏水、待检样品各30天，本次保健品抗疲劳实验的四个分实验中负重游泳时间、肝糖原实验、乳酸脱氢酶试验各组指标有显著性差异，且呈现较明显的剂量-效应关系，且以高剂量组效果显著。尿素氮实验各组间差异无统计学意义。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)，本动物实验研究结论为受试样品具有缓解体力疲劳功效。

因此，本发明中的保健食品，该保健食品的活性成分由天然中草药为原料制成，制成的保健食品同时具备耐缺氧和抗疲劳功能。

上面列举一部分具体实施例对本发明进行说明，有必要在此指出的是以上具体实施例只用于对本发明作进一步说明，不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，其特征是该组合物由以下活性组分制成：龙眼肉、大枣、熟地黄、枸杞子、核桃仁、五味子、肉桂和鹿茸。

2.根据权利要求1所述的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，其特征是各活性组分的质量份配比为：龙眼肉10～150、大枣10～150、熟地黄10～150、枸杞子10～150、核桃仁10～150、五味子3～50、肉桂3～50、鹿茸3～50。

3.根据权利要求2所述的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，其特征是各活性组分的质量份配比为：龙眼肉20～90、大枣20～90、熟地黄20～90、枸杞子20～90、核桃仁15～90、五味子5～20、肉桂3～20、鹿茸3～20。

4.根据权利要求3所述的具有耐缺氧和抗疲劳功能的组合物，其特征是各活性组分的质量份配比为：龙眼肉25、大枣25、熟地黄20、枸杞子20、核桃仁15、五味子8、肉桂5、鹿茸5。

5.权利要求1-4任一项所述的组合物在制备具有耐缺氧和抗疲劳功能的保健食品中的应用。

6.根据权利要求5所述的组合物在制备具有耐缺氧和抗疲劳功能的保健食品中的应用，其特征是：所述的保健食品的剂型为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、泡腾剂、饮料、合剂或口服液。