CN104597152A - 一种青风藤指纹图谱的测定方法 - Google Patents
一种青风藤指纹图谱的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104597152A CN104597152A CN201410852010.8A CN201410852010A CN104597152A CN 104597152 A CN104597152 A CN 104597152A CN 201410852010 A CN201410852010 A CN 201410852010A CN 104597152 A CN104597152 A CN 104597152A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- caulis sinomenii
- peak
- finger
- assay method
- reference substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims abstract description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 23
- INYYVPJSBIVGPH-QHRIQVFBSA-N Sinomenine Chemical compound C([C@@H]1N(CC2)C)C3=CC=C(OC)C(O)=C3[C@@]32[C@@H]1C=C(OC)C(=O)C3 INYYVPJSBIVGPH-QHRIQVFBSA-N 0.000 claims description 14
- INYYVPJSBIVGPH-VLXJIEOASA-N Cucoline Natural products C([C@H]1N(CC2)C)C3=CC=C(OC)C(O)=C3[C@@]32[C@@H]1C=C(OC)C(=O)C3 INYYVPJSBIVGPH-VLXJIEOASA-N 0.000 claims description 13
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 13
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 13
- YLRXAIKMLINXQY-ZDUSSCGKSA-O (S)-magnoflorine Chemical compound C1=C(OC)C(O)=C2C3=C(O)C(OC)=CC=C3C[C@@H]3[N+](C)(C)CCC1=C23 YLRXAIKMLINXQY-ZDUSSCGKSA-O 0.000 claims description 9
- KYEAXNAYHSCLMT-CVVGWEDFSA-N Magnoflorine Natural products C[C@H]1OC=C2[C@@H]3[C@@H]1CN4CCc5c([nH]c6ccccc56)[C@@H]4[C@@H]3OC2=O KYEAXNAYHSCLMT-CVVGWEDFSA-N 0.000 claims description 9
- FPJQGFLUORYYPE-UHFFFAOYSA-N epiberberine Chemical compound C1=C2C=C(C3=C(C=C(C(=C3)OC)OC)CC3)[N+]3=CC2=C2OCOC2=C1 FPJQGFLUORYYPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 5
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 3
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 abstract 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 abstract 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 abstract 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241001643409 Sinomenium acutum Species 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000345998 Calamus manan Species 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000012950 rattan cane Nutrition 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- INYYVPJSBIVGPH-UHFFFAOYSA-N 14-episinomenine Natural products C1CN(C)C2CC3=CC=C(OC)C(O)=C3C31C2C=C(OC)C(=O)C3 INYYVPJSBIVGPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238370 Sepia Species 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical group [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- RARWEROUOQPTCJ-RBUKOAKNSA-N cepharamine Natural products C1CC2=CC=C(OC)C(O)=C2[C@@]2(CCN3C)[C@]13C=C(OC)C(=O)C2 RARWEROUOQPTCJ-RBUKOAKNSA-N 0.000 description 1
- BQFCCCIRTOLPEF-UHFFFAOYSA-N chembl1976978 Chemical compound CC1=CC=CC=C1N=NC1=C(O)C=CC2=CC=CC=C12 BQFCCCIRTOLPEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229930002966 sinomenine Natural products 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000011003 system suitability test Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种青风藤指纹图谱的测定方法，包括：(1)取青风藤药材粉碎成中粉，精密称定，加入甲醇，超声溶解，过滤并蒸干，残渣用初始流动相溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)制备对照品溶液；(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得青风藤指纹图谱。本发明对于指导在临床用药及生产过程中对于原料药有效的投料指导、确保质量的可靠具有积极作用；操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对中药材青风藤质量进行评价，结论较为客观、准确。
Description
技术领域
本发明属于中药指纹图谱领域，特别涉及一种青风藤指纹图谱的测定方法。
背景技术
青风藤为防己科植物青藤或毛青藤等的藤茎。6至7月割取藤茎，除去细茎枝叶，晒干；或用水润透，切段，晒干。亦可秋冬采老藤，切段，晒干。晒干后的青风藤呈长圆柱形，微弯曲，细茎弯绕成束，长20至70厘米或更长，直径0.5至2厘米。表面绿褐色至棕褐色，有细纵纹及皮孔。节稍膨大，有分枝痕。体轻，质硬而脆，易折断，断面不平坦，灰黄色或淡灰棕色，皮部窄，木部射线放射状排列；髓部小，淡黄白色或黄棕色，气微，味苦。以条均匀者为佳。
现有技术中青风藤含量测定的标准在中国药典2010版中规定内容如下：
色谱条件与系统适用性试验：十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸盐缓冲液(0.005mol/L磷酸氢二钠溶液，以0.005moI/L的磷酸二氢钠调节pH值至8.0，再以1％三乙胺调节pH值至9.0)(55：45)为流动相；检测波长为262mn。理论板数按青藤碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备：精密称取青藤碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70％乙醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率20kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含青藤碱(C19H23O4)不得少于0.50％。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种青风藤指纹图谱的测定方法，该方法在控制青风藤的质量，有效的指导临床和生产中使用、保证用药的有效、安全和可靠具有积极作用。
本发明的一种青风藤指纹图谱的测定方法，包括：
(1)取青风藤药材粉碎成中粉，精密称定，加入甲醇，超声溶解，过滤并蒸干，残渣用初始流动相溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)取木兰花碱对照品、青藤碱对照品、四氢表小檗碱对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；
(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得青风藤指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Waters Xselect CSH C18柱；柱温：30℃；检测波长：280nm；记录时间80min；进样体积：10μl；流速：1ml·min-1；流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：从5％B开始等度洗脱18min，再以线性洗脱的方式经7min达到8％B，以线性洗脱的方式经35min达到20％B，以线性洗脱的方式经25min达到30％B。
所述步骤(1)中的青风藤中粉与乙醇的比例为0.05g:20ml。
所述步骤(2)中的甲醇的体积百分数为5％。
所述步骤(2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含木兰花碱130ng、青藤碱80ng、四氢表小檗碱4ng的混合溶液。
所述步骤(3)中的Waters Xselect CSH C18柱的规格为4.6mm×250mm，填料粒度大小为5μm。
所述步骤(3)中的青风藤指纹图谱中11个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰3为青藤碱，峰7为木兰花碱，峰10为四氢表小檗碱。
有益效果
本发明特对药材指纹图谱进行了研究，建立了液相指纹图谱测定条件，并进行了方法学考察，根据多批大生产样品，制订了青风藤液相指纹图谱标准，在生产过程中可有效的指导投料、规范生产操作，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠，对所测得的指纹图谱的辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对药材指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
附图说明
图1为10个批次青风藤指纹图谱；
图2为青风藤标准指纹图谱；其中，3为青藤碱；7为木兰花碱；10为四氢表小檗碱。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
1、名称、汉语拼音
名称：青风藤；汉语拼音：Qingfengteng
2、供试品来源：由上海黄海制药有限责任公司提供。
3、供试品溶液的制备
将青风藤粉碎成中粉，称取0.05g，精密加入20ml甲醇，超声溶解，过滤并蒸干，残渣用初始流动相溶解并定容至10ml，滤膜过滤，取续滤液，即得；
4、参照物溶液的制备
青风藤主要有效成分为青藤碱(Sinomenine)、木兰花碱、四氢表小檗碱等，经过试验研究，选择出峰时间稳定且峰面积适中的青藤碱作为参照物，由中国生物制品检定所提供(批号：110774-200507，供含量测定用)。
5、检测方法的建立
5.1仪器、试剂和色谱条件
仪器：Agilent 1200液相色谱；Agilent LC色谱工作站。
试剂：乙腈、甲醇为色谱纯(Spectrum)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
色谱柱：Waters Xselect CSH C18(4.6mm×250mm，5μm)；测定波长：254nm、280nm、264nm、268nm；柱温：30℃；流速：1ml·min-1；进样10μl。
5.2流动相的选择
经比较、筛选，发现(A)0.1％甲酸水-(B)甲醇系统以线性梯度洗脱，所得液相色谱图基线较平稳、色谱峰峰形对称、分离度较好，因此选择0.1％甲酸水-甲醇系统为流动相。
5.3梯度洗脱程序的优化
经系统摸索、优化、现发现如下线性梯度洗脱程序既能较全面的检出药材中的化学成分，又可使这些成分获得较为理想的分离效果：洗脱程序为从5％B开始等度洗脱18min，再以线性洗脱的方式经7min达到8％B，以线性洗脱的方式经35min达到20％B，以线性洗脱的方式经25min达到30％B，记录时间为5～80min。
5.4最佳测定波长的确定
经液相色谱—紫外光谱三维图谱的比较分析，发现各个谱图中，40min左右处色谱峰和20min左右处色谱峰的峰高均为两个主色谱峰；254nm下的谱图各峰峰高均较低；280nm下各色谱峰较平均，效果最好；264nm、268nm下的色谱图中峰高两极分化大，且色谱峰数量不及280nm下的色谱图，不能全面反映制剂的成分。综合考虑色谱峰的数目、基线及信号相应强弱，确定280nm为制剂指纹图谱的最佳检测波长。
5.5青风藤液相色谱指纹图谱中主要色谱峰的指认
根据与标准品的保留时间、UV谱对照，可指认成品色谱图中主要色谱峰：确定S(峰3)为青藤碱，是青风藤的主要有效成分；峰7为木兰花碱，峰10为四氢表小檗碱。在该指纹图谱测定条件下，所测得的药材指纹图谱能够反映青风藤的主要有效成分。
指纹图谱至少包含10个特征峰和1个参照峰，各特征峰相对于参照峰(S)的相对保留时间的波动范围符合下表的规定。
青风藤标准指纹图谱相对保留时间波动范围
6、检测方法的验证
6.1滞后峰检测
为了验证最佳线性梯度洗脱程序是否能较全面的检出制剂中的化学成分，延长测试时间至2h，即：洗脱程序为从5％B开始等度洗脱18min，再以线性洗脱的方式经7min达到8％B，以线性洗脱的方式经35min达到20％B，以线性洗脱的方式经25min达到30％B，记录时间为120min，结果80min之后未见滞后峰出现。说明最佳线性梯度洗脱程序能较全面的检出青风藤中的化学成分。
6.2专属性试验
空白试验用初始流动相进样分析，结果空白没有干扰峰。
6.3系统适应性试验
不同的仪器，由于梯度曲线质量和滞后时间的不同，可能影响方法的重现性及选择性，通常可通过调整进样和梯度起始时间减少这种影响，必要时可调整梯度程序。所以测定了系统梯度滞后时间，方法如下：用一零死体积连接器代替色谱柱，以甲醇为溶剂A，含0.1％丙酮的甲醇为溶剂B，检测波长为260nm，运行0～100％B的线性梯度，梯度时间20min，流速0.8ml·min-1，记录梯度图形，测定梯度曲线中间点的时间，减去10min，即得。
检测结果为0.8min，可见Agilent 1200HPLC系统梯度滞后时间较小，基本不影响方法的重现性。
6.4仪器精密度试验
取同一产地批次(产地为河北批号为120913)的青风藤，按正文方法(指按本发明技术方案中所述的方法，下同)制备供试品溶液，连续进样6次，考察色谱峰的相对保留时间、相对峰面积比值的一致性，从而考察仪器的精密度，试验结果如表1、表2所示。
表1青风藤液相指纹图谱精密度考察结果
(主要峰的相对保留时间)
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(％) |
| 峰1 | 0.221 | 0.221 | 0.224 | 0.222 | 0.222 | 0.221 | 0.428 |
| 峰2 | 0.250 | 0.250 | 0.253 | 0.252 | 0.251 | 0.251 | 0.472 |
| 峰3 | 0.459 | 0.460 | 0.462 | 0.461 | 0.459 | 0.459 | 0.193 |
| 峰4 | 0.688 | 0.688 | 0.689 | 0.689 | 0.689 | 0.688 | 0.078 |
| 峰5 | 0.717 | 0.717 | 0.719 | 0.718 | 0.718 | 0.718 | 0.119 |
| 峰6 | 0.786 | 0.786 | 0.788 | 0.788 | 0.787 | 0.787 | 0.118 |
| 峰7 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.000 |
| 峰8 | 1.149 | 1.149 | 1.148 | 1.148 | 1.149 | 1.149 | 0.034 |
| 峰9 | 1.189 | 1.190 | 1.187 | 1.187 | 1.188 | 1.188 | 0.091 |
| 峰10 | 1.659 | 1.659 | 1.657 | 1.658 | 1.659 | 1.658 | 0.049 |
表2青风藤液相指纹图谱精密度考察结果
(主要峰的相对峰面积)
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(％) |
| 峰1 | 0.044 | 0.044 | 0.044 | 0.044 | 0.044 | 0.044 | 0.430 |
| 峰2 | 0.025 | 0.026 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 2.786 |
| 峰3 | 0.742 | 0.742 | 0.751 | 0.752 | 0.751 | 0.749 | 0.617 |
| 峰4 | 0.085 | 0.084 | 0.086 | 0.087 | 0.086 | 0.086 | 1.154 |
| 峰5 | 0.159 | 0.160 | 0.160 | 0.161 | 0.160 | 0.160 | 0.408 |
| 峰6 | 0.039 | 0.040 | 0.041 | 0.041 | 0.042 | 0.042 | 2.845 |
| 峰7 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.000 |
| 峰8 | 0.065 | 0.066 | 0.064 | 0.063 | 0.065 | 0.064 | 1.943 |
| 峰9 | 0.190 | 0.189 | 0.187 | 0.187 | 0.190 | 0.189 | 0.698 |
| 峰10 | 0.028 | 0.028 | 0.028 | 0.028 | 0.028 | 0.028 | 0.935 |
结果表明，各共有色谱峰的保留时间及主要峰(占总峰面积5％以上)的峰面积基本一致(RSD<3％)，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照，用中药指纹图谱相似度评价系统计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度均符合指纹图谱的技术要求，Agilent 1200HPLC液相色谱仪的精密度良好。
6.5样品稳定性试验
取同一产地批次(产地为河北批号为120913)的青风藤，按正文方法制备供试品溶液，连续进样6次，分别于0h、4h、8h、12h、16h、24h考察稳定性，共测6次，考察色谱峰的相对保留时间、相对峰面积比值的一致性，从而考察仪器的精密度，试验结果如表3、表4所示。
表3青风藤液相指纹图谱稳定性考察结果
(主要峰的相对保留时间)
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(％) |
| 峰1 | 0.225 | 0.225 | 0.225 | 0.226 | 0.225 | 0.225 | 0.222 |
| 峰2 | 0.255 | 0.254 | 0.254 | 0.256 | 0.255 | 0.255 | 0.272 |
| 峰3 | 0.463 | 0.462 | 0.462 | 0.464 | 0.462 | 0.463 | 0.146 |
| 峰4 | 0.690 | 0.689 | 0.690 | 0.691 | 0.690 | 0.690 | 0.067 |
| 峰5 | 0.719 | 0.718 | 0.718 | 0.720 | 0.719 | 0.719 | 0.102 |
| 峰6 | 0.788 | 0.787 | 0.787 | 0.789 | 0.787 | 0.788 | 0.102 |
| 峰7 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.000 |
| 峰8 | 1.148 | 1.148 | 1.149 | 1.148 | 1.148 | 1.148 | 0.026 |
| 峰9 | 1.187 | 1.188 | 1.189 | 1.186 | 1.188 | 1.187 | 0.081 |
| 峰10 | 1.657 | 1.658 | 1.659 | 1.655 | 1.658 | 1.656 | 0.076 |
表4青风藤液相指纹图谱稳定性考察结果
(主要峰的相对峰面积)
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(％) |
| 峰1 | 0.044 | 0.045 | 0.045 | 0.044 | 0.045 | 0.045 | 0.511 |
| 峰2 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 0.028 | 0.028 | 0.029 | 2.589 |
| 峰3 | 0.761 | 0.759 | 0.756 | 0.761 | 0.761 | 0.762 | 0.282 |
| 峰4 | 0.090 | 0.089 | 0.089 | 0.089 | 0.089 | 0.090 | 0.526 |
| 峰5 | 0.163 | 0.164 | 0.164 | 0.166 | 0.162 | 0.163 | 0.718 |
| 峰6 | 0.043 | 0.043 | 0.042 | 0.042 | 0.042 | 0.042 | 1.083 |
| 峰7 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.000 |
| 峰8 | 0.063 | 0.063 | 0.064 | 0.063 | 0.063 | 0.063 | 0.571 |
| 峰9 | 0.192 | 0.191 | 0.192 | 0.191 | 0.192 | 0.190 | 0.406 |
| 峰10 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 0.027 | 1.035 |
结果表明，供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及主要峰(占总峰面积5％以上)的相对峰面积基本一致(RSD<3％)，又以第1次进样所得的指纹图谱作为参照，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算后5次进样所得的指纹图谱的相似度，结果相似度符合指纹图谱的技术要求，供试品溶液在48h内测定时稳定的。
6.6方法重复性试验
取同一产地批次(产地为河北批号为120913)的青风藤，按正文方法平行制备6份供试品溶液，依法测定，结果见表5、6。
表5青风藤液相指纹图谱重复性考察结果
(主要峰的相对保留时间)
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(％) |
| 峰1 | 0.225 | 0.225 | 0.227 | 0.226 | 0.225 | 0.225 | 0.371 |
| 峰2 | 0.255 | 0.254 | 0.257 | 0.256 | 0.255 | 0.255 | 0.417 |
| 峰3 | 0.463 | 0.462 | 0.466 | 0.463 | 0.462 | 0.463 | 0.310 |
| 峰4 | 0.690 | 0.690 | 0.693 | 0.691 | 0.690 | 0.690 | 0.175 |
| 峰5 | 0.720 | 0.718 | 0.722 | 0.720 | 0.719 | 0.719 | 0.183 |
| 峰6 | 0.789 | 0.787 | 0.791 | 0.789 | 0.788 | 0.788 | 0.188 |
| 峰7 | 1.000 | 1.000 | 1.003 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.113 |
| 峰8 | 1.147 | 1.148 | 1.151 | 1.148 | 1.148 | 1.148 | 0.116 |
| 峰9 | 1.185 | 1.188 | 1.190 | 1.186 | 1.187 | 1.188 | 0.125 |
| 峰10 | 1.652 | 1.658 | 1.659 | 1.656 | 1.657 | 1.658 | 0.149 |
表6青风藤液相指纹图谱重复性考察结果
(主要峰的相对峰面积)
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD(％) |
| 峰1 | 0.044 | 0.044 | 0.043 | 0.043 | 0.044 | 0.043 | 0.902 |
| 峰2 | 0.026 | 0.026 | 0.026 | 0.027 | 0.026 | 0.027 | 1.934 |
| 峰3 | 0.750 | 0.752 | 0.731 | 0.753 | 0.755 | 0.745 | 1.159 |
| 峰4 | 0.084 | 0.085 | 0.085 | 0.086 | 0.086 | 0.084 | 1.118 |
| 峰5 | 0.154 | 0.158 | 0.157 | 0.159 | 0.159 | 0.157 | 1.172 |
| 峰6 | 0.040 | 0.039 | 0.039 | 0.039 | 0.040 | 0.038 | 1.710 |
| 峰7 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.000 |
| 峰8 | 0.063 | 0.064 | 0.061 | 0.064 | 0.062 | 0.062 | 1.483 |
| 峰9 | 0.183 | 0.184 | 0.184 | 0.185 | 0.187 | 0.186 | 0.770 |
| 峰10 | 0.026 | 0.028 | 0.027 | 0.026 | 0.027 | 0.027 | 2.264 |
结果表明，供试品溶液中各共有峰的相对保留时间及主要峰(占总峰面积5％以上)的相对峰面积基本一致(RSD<3％)，又以第1次进样所得的指纹图谱作为参照，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算后5次进样所得的指纹图谱的相似度，结果相似度符合指纹图谱的技术要求，表明本方法的重复性良好。
以上方法学考察结果表明，用本方法测定青风藤的指纹图谱，样品稳定性、仪器精密度、方法重复性均较好，能准确测定该制剂的指纹图谱。
7、青风藤标准指纹图谱的获得及相似限度的确定
7.1十批青风藤的测定和标准指纹图谱的获得
收集的多产地不同批次青风藤均来源于防己科植物青藤Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.及毛青藤S.acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥根茎。详细信息如表7所示。
表7青风藤信息表
| 编号 | 产地 | 批号 | 来源 |
| 1 | 广西 | 120801 | 黄山徽药饮片有限公司 |
| 2 | 安徽 | 281258 | 安徽省亳州市兄弟药业 |
| 3 | 江苏 | 20121027 | 河北安国药材批发市场 |
| 4 | 湖北 | 20111001-1 | 河北祁新中药颗粒饮片有限公司 |
| 5 | 安徽 | 121001 | 河北安国药材批发市场 |
| 6 | 河南 | 20110901 | 安国市冷背中药材公司 |
| 7 | 安徽 | DH2011012207 | 上海德华国药制品有限公司 |
| 8 | 湖北 | 121001 | 河北安国药材批发市场 |
| 9 | 河北 | 120913 | 安国中药养生会馆 |
| 10 | 湖北 | 120801 | 亳州市中药饮片厂 |
按正文方法制备供试品溶液，依法测定，十批药材的液相指纹图谱叠加图谱；用中药色谱指纹图谱相似度评价系统以十批成品指纹图谱为基础获得标准指纹图谱。
7.2青风藤相似度限度的确定
以相似度计算软件生成的青风藤标准指纹图谱为参照，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算每批成品指纹图谱的相似度，结果相似度除了2个产地批次(编号为5产地为湖北批号为20111001-1、编号为7产地为河南批次为20110901)的以外，其余均在0.9以上(见表8)。根据大生产实际，为了有效、全面控制产品质量，规定青风藤指纹图谱与标准指纹图谱经相似度软件计算，相似度应大于0.90。
表8十批青风藤指纹图谱相似度考察结果
| 编号 | 产地 | 批号 | 相似度 |
| 1 | 广西 | 120801 | 0.988 |
| 2 | 安徽 | 281258 | 0.988 |
| 3 | 江苏 | 20121027 | 0.999 |
| 4 | 湖北 | 20111001-1 | 0.833 |
| 5 | 安徽 | 121001 | 0.922 |
| 6 | 河南 | 20110901 | 0.868 |
| 7 | 安徽 | DH2011012207 | 0.998 |
| 8 | 湖北 | 121001 | 0.993 |
| 9 | 河北 | 120913 | 0.993 |
| 10 | 湖北 | 120801 | 0.976 |
Claims (6)
1.一种青风藤指纹图谱的测定方法，包括：
(1)取青风藤药材粉碎成中粉，精密称定，加入甲醇，超声溶解，过滤并蒸干，残渣用初始流动相溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)取木兰花碱对照品、青藤碱对照品、四氢表小檗碱对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；
(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得青风藤指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Waters Xselect CSH C18柱；柱温：30℃；检测波长：280nm；记录时间80min；进样体积：10μl；流速：1ml·min-1；流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：从5％B开始等度洗脱18min，再以线性洗脱的方式经7min达到8％B，以线性洗脱的方式经35min达到20％B，以线性洗脱的方式经25min达到30％B。
2.根据权利要求1所述的一种青风藤指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的青风藤中粉与乙醇的比例为0.05g:20ml。
3.根据权利要求1所述的一种青风藤指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中的甲醇的体积百分数为5％。
4.根据权利要求1所述的一种青风藤指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含木兰花碱130ng、青藤碱80ng、四氢表小檗碱4ng的混合溶液。
5.根据权利要求1所述的一种青风藤指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中的Waters Xselect CSH C18柱的规格为4.6mm×250mm，填料粒度大小为5μm。
6.根据权利要求1所述的一种青风藤指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中的青风藤指纹图谱中11个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰3为青藤碱，峰7为木兰花碱，峰10为四氢表小檗碱。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410852010.8A CN104597152B (zh) | 2014-12-30 | 2014-12-30 | 一种青风藤指纹图谱的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410852010.8A CN104597152B (zh) | 2014-12-30 | 2014-12-30 | 一种青风藤指纹图谱的测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104597152A true CN104597152A (zh) | 2015-05-06 |
| CN104597152B CN104597152B (zh) | 2016-01-20 |
Family
ID=53123072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410852010.8A Active CN104597152B (zh) | 2014-12-30 | 2014-12-30 | 一种青风藤指纹图谱的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104597152B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109655535A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-04-19 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 七味通痹口服液的检测方法 |
| CN109884222A (zh) * | 2019-01-17 | 2019-06-14 | 贵阳中医学院 | 一种小花清风藤的hplc指纹图谱建立方法 |
| CN113466355A (zh) * | 2021-06-03 | 2021-10-01 | 山东宏济堂制药集团股份有限公司 | 一种青风藤高效液相特征图谱方法的构建 |
| CN114252522A (zh) * | 2021-11-03 | 2022-03-29 | 湖南正清制药集团股份有限公司 | 一种盐酸青藤碱原料药的杂质指纹图谱分析方法 |
| CN114689777A (zh) * | 2021-11-07 | 2022-07-01 | 湖南正清制药集团股份有限公司 | 一种青风藤特征图谱及含量测定方法 |
| CN114858938A (zh) * | 2022-04-27 | 2022-08-05 | 江阴天江药业有限公司 | 青风藤特征图谱的构建方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060110468A1 (en) * | 2004-11-24 | 2006-05-25 | Liang Liu | Herbal formulations for arthritis |
| CN1790014A (zh) * | 2004-12-13 | 2006-06-21 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种治疗癌性疼痛中药组合物的质量控制方法及应用 |
-
2014
- 2014-12-30 CN CN201410852010.8A patent/CN104597152B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060110468A1 (en) * | 2004-11-24 | 2006-05-25 | Liang Liu | Herbal formulations for arthritis |
| CN1790014A (zh) * | 2004-12-13 | 2006-06-21 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种治疗癌性疼痛中药组合物的质量控制方法及应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| SANO, TOMOKO; MATSUMURA, IKUE; NAKAMURA, RIE: "Genetic and chemical comparison of Boi (Sinomeni Caulis et Rhizoma) and Seifuto (Caulis Sinomenii)", 《JOURNAL OF NATURAL MEDICINES》 * |
| ZHAO, ZZ; LIANG, ZT; ZHOU, H: "Quantification of sinomenine in Caulis sinomenii collected from different growing regions and wholesale herbal markets by a modified HPLC method", 《BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN》 * |
| 国家药典委员会: "《中华人民共和国药典-2010版一部》", 1 October 2010, 中国医药科技出版社 * |
| 瞿发林 等: "不同产地青风藤中青藤碱的含量比较", 《中国药业》 * |
| 阎红，马云淑 等: "云南地不容指纹图谱和主要成分定量分析方法研究", 《云南中医学院学报》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109655535A (zh) * | 2018-11-20 | 2019-04-19 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 七味通痹口服液的检测方法 |
| CN109884222A (zh) * | 2019-01-17 | 2019-06-14 | 贵阳中医学院 | 一种小花清风藤的hplc指纹图谱建立方法 |
| CN109884222B (zh) * | 2019-01-17 | 2021-07-13 | 贵州中医药大学 | 一种小花清风藤的hplc指纹图谱建立方法 |
| CN113466355A (zh) * | 2021-06-03 | 2021-10-01 | 山东宏济堂制药集团股份有限公司 | 一种青风藤高效液相特征图谱方法的构建 |
| CN114252522A (zh) * | 2021-11-03 | 2022-03-29 | 湖南正清制药集团股份有限公司 | 一种盐酸青藤碱原料药的杂质指纹图谱分析方法 |
| CN114252522B (zh) * | 2021-11-03 | 2023-12-26 | 湖南正清制药集团股份有限公司 | 一种盐酸青藤碱原料药的杂质指纹图谱分析方法 |
| CN114689777A (zh) * | 2021-11-07 | 2022-07-01 | 湖南正清制药集团股份有限公司 | 一种青风藤特征图谱及含量测定方法 |
| CN114858938A (zh) * | 2022-04-27 | 2022-08-05 | 江阴天江药业有限公司 | 青风藤特征图谱的构建方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104597152B (zh) | 2016-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104597152B (zh) | 一种青风藤指纹图谱的测定方法 | |
| CN104597153B (zh) | 一种川芎指纹图谱的测定方法 | |
| CN103149300B (zh) | 黄芪颗粒指纹图谱的测定方法及其特征指纹图谱 | |
| CN104713957A (zh) | 一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法 | |
| CN104237440A (zh) | 独一味的hplc检测方法及指纹图谱检测技术 | |
| CN106370763B (zh) | 检测葛根及葛根提取物和含葛根制剂成分的uplc方法 | |
| CN104820049B (zh) | 淫羊藿破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法 | |
| CN104374844A (zh) | 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 | |
| CN102539607B (zh) | 一种芪麝丸制剂的中药指纹图谱检测方法 | |
| CN110441413B (zh) | 千柏鼻炎片hplc指纹图谱的构建方法和检测方法 | |
| CN102944634B (zh) | 一种红花逍遥片的检测方法 | |
| CN103969355B (zh) | 一种黄芪药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| CN102636589B (zh) | 一种吐根药材及其制剂中盐酸吐根酚碱和盐酸吐根碱的hplc定量方法 | |
| CN104374841A (zh) | 羚羊感冒片质量控制参照品及用途 | |
| CN103969356B (zh) | 一种丹参药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| CN110274970A (zh) | 融差指纹图谱的建立方法及其在益血生胶囊质控中的应用 | |
| CN104569200A (zh) | 一种防己指纹图谱的测定方法 | |
| CN102759582B (zh) | 川麦冬药材中黄酮类成分的测定方法 | |
| CN104849384A (zh) | 建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用 | |
| CN104807932A (zh) | 胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法 | |
| CN103837619B (zh) | 中药肝炎灵注射液及其原料药材的指纹图谱检测方法 | |
| CN107976494B (zh) | 康肤酊标准特征图谱的构建及其质量检测方法 | |
| CN101008632A (zh) | 五味子水煎液的hplc标准指纹图谱及其建立方法 | |
| CN105628798A (zh) | 苁蓉总苷胶囊指纹图谱检测方法 | |
| CN104458956B (zh) | 一种抗肿瘤中药组合物的指纹图谱检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: Room 3301-3302, No. 1027, Changning Road, Changning District, Shanghai 200050 Patentee after: Shanghai Baiyang Pharmaceutical Co.,Ltd. Patentee after: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Address before: Room 3301-3302, No. 1027, Changning Road, Changning District, Shanghai 200050 Patentee before: Shanghai Sundise Chinese Medicine Technology Development Co.,Ltd. Patentee before: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine |