CN114858938A - 青风藤特征图谱的构建方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种青风藤特征图谱的构建方法，该特征图谱以青藤碱、木兰花碱和丁香树脂醇双葡萄糖苷为特征组分，通过高效的检测方法，确认不同基原青风藤样品的共有峰，构建特征图谱。该方法能够区分不同基原的样品，并且以青风藤含有的生物碱及木脂素为代表成分，可以较为全面地反映产品质量，适于对青风藤药材、饮片、提取物、标准汤剂、配方颗粒以及含有青风藤的经典名方的基准样品、制剂中间产品、成品进行快速、全面地质量控制，方法高效，操作便捷，适于连续化生产的质量监控。

Description

青风藤特征图谱的构建方法
技术领域
本发明涉及一种青风藤特征图谱的构建方法，尤其涉及一种能够甄别基原、高效、可靠的青风藤特征图谱的构建方法。
背景技术
青风藤为一味传统中药，中国药典收载青风藤为防己科植物青藤Sinomeniumacutum(Thunb.)Rehd.et Wils.和毛青藤Sinomeniumacutum(Thunh.)Rehd.etWils.var.cinereumRehd.et Wils.的干燥藤茎，具有祛风湿，通经络，利小便等功效，临床用于治疗风湿痹痛，关节肿胀，麻痹瘙痒等症。青藤中含有生物碱、甾醇、萜类等化学成分，对于免疫系统、心血管系统和神经系统有着多种药理作用，其中生物碱类成分为其代表性成分，多作为含量测定指标，如青藤碱和木兰花碱，而对于青风藤中的其它类成分控制较少。
单纯采用一个或者两个成分进行含量测定，无法全面地评价其质量，现有指纹图谱或特征图谱方法，流动相配制较为复杂、洗脱时间较长、成分指认仅有生物碱类化合物，无法在短时间内快速、全面地反映青风藤化学成分信息。此外，关于青风藤两种基原的比较研究，目前也仅从生药学的角度，对青藤和毛青藤的性状、显微和薄层层析等方法进行了比较，也仅说明了两种基原在化学成分上存在一定差异，并未对不同基原在指纹图谱或特征图谱层面进行深入研究。
发明内容
发明目的：针对现有青风藤质量控制方法存在的不能区分基原、质控成分有限、操作繁杂、检测效率低等不足，本发明旨在提供一种能够甄别基原、高效、可靠的青风藤特征图谱的构建方法。
技术方案：本发明的青风藤特征图谱的构建方法包含以下步骤：
(1)配制供试品溶液和参照物溶液：所述参照物包括对照药材和对照品，其中，对照品为青藤碱、木兰花碱和丁香树脂醇双葡萄糖苷；
(2)检测；
(3)对照参照物确认共有峰，构建特征图谱。
“对照品”和“对照药材”是指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。
该方法通过多批次供试品溶液的检测，选择共有峰，参照对照药材图谱验证各共有峰在对照药材中的存在情况，并结合对照品特征峰确认有效成分组成。
其中，所述检测的方法如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相：A相为乙腈或甲醇，B相为磷酸氢二钾水溶液、磷酸氢二钠水溶液、磷酸二氢钾水溶液或磷酸二氢钠水溶液；梯度洗脱程序：0min→3min→5min→10min→15min→20min，A相的体积百分比：8％→14％→17％→30％→30％；流速：0.20～0.55mL/min，柱温：10～40℃，检测器：紫外检测器、蒸发光散射检测器或电雾式检测器，检测波长：200nm～250nm。
进一步地，所述检测的方法如下：
色谱柱柱长：100mm，内径：2.1mm，填料粒径：1.7～1.9μm；流动相：A相为乙腈，B相为0.005mol/L磷酸二氢钾水溶液；流速：0.2～0.4mL/min、优选0.25～0.35mL/min，柱温：15～35℃、优选15～25℃，检测器：紫外检测器，检测波长：210nm。
在上述构建方法中，青风藤的基原为青藤和/或毛青藤。
一方面，当所述供试品为青藤基原的青风藤时，共有峰为6个，其中，峰3、峰4、峰5分别为青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰；以青藤碱特征峰为参照峰S1，峰1、峰2分别为相对保留时间在0.85(±10％)、0.89(±10％)的特征峰；以丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰为参照峰S2，峰6为相对保留时间在1.30(±10％)的特征峰。
另一方面，当所述供试品为毛青藤基原的青风藤时，共有峰为4个，其中，峰1、峰2、峰3分别为青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰；以丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰为参照峰S，峰4为相对保留时间在1.30(±10％)的特征峰。
具体地，上述供试品为青风藤的药材、饮片、提取物、标准汤剂、配方颗粒或者含有青风藤的经典名方的基准样品、制剂中间产品或成品。其中，“药材”或“生药”是指未经加工或未制成成品的中药原料。“饮片”是指中药根据需要，经过炮制处理而形成的供配方用的中药，或可直接用于中医临床的中药。“提取物”是指按规范化的生产工艺制得的符合一定质量标准的提取物，例如，醇(如甲醇、乙醇等)提物、水提物等。“标准汤剂”是指以中医理论为指导、临床应用为基础，参考现代提取方法，经标准化工艺制备而成的单味中药饮片水煎剂。“配方颗粒”是由单味中药饮片按传统标准炮制后经提取浓缩制成的、供中医临床配方用的颗粒。“经典名方物质基准”是指以古代医籍中记载古代经典名方制备方法为依据制备而得的中药药用物质，除成型工艺外，其余制备方法应与古代医籍记载基本一致。“经典名方成品颗粒”或“经典名方标准颗粒”是指由古代医籍中记载的古代经典名方经提取浓缩制成的、供中医临床配方用的颗粒。
关于供试品溶液与对照药材参照物溶液：
上述供试品以水、醇或醇-水溶液50～250mL/1g供试品或对照药材，提取。
其中，供试品溶液的制备方法如下：
取青风藤样品粉末，精密称定，置容器中，精密加入提取溶剂，密塞，称定重量，提取后，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
进一步地，所述醇或醇-水溶液为乙醇或乙醇-水溶液，其中，乙醇-水溶液的乙醇体积分数不高于70％，具体可以为0％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％；为了进一步提高提取效率，并使色谱峰的峰型更佳，优选所述提取溶剂的浓度以乙醇的体积分数计为30％～50％。
青风藤样品粉末与提取溶剂的质量体积比为1g:(50～250mL)，具体可以为1g:50mL、1g:100mL、1g:150mL、1g:200mL或1g:250mL等；为了进一步优化提取效果和物料用量，优选为1g:250mL。供试品浓度太小不利于色谱峰的检出，浓度太大则色谱柱超载导致色谱峰峰形不佳。
提取采用超声、加热回流或振摇的方式进行，为了使提取操作简便，优选采用超声处理的方式，超声的功率、频率对本发明影响不大。在一些优选的实施方式中，所述超声处理的功率为250W，频率为40kHz。
提取处理的时间为5～60min，具体可以为5min、10min、15min、30min、45min或60min；为了进一步优化提取效果和处理周期，优选提取处理的时间为10～60min。
更具体地，上述供试品溶液的制备方法如下：
取青风藤样品粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水或者浓度为30％～70％的乙醇-水溶液，密塞，称定重量，超声或加热或振摇提取10～60min后，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；其中，所述青风藤样品粉末与所述水或者浓度为30％～70％的乙醇-水溶液的质量体积比为1g:(50～250mL)。
其中，上述对照药材参照物溶液的制备方法如下：
取对照药材，精密称定，置容器(例如具塞锥形瓶)中，精密加入提取溶剂，密塞，称定重量，提取(例如超声、加热回流或振摇)后，放冷，再称定重量，用所述提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
为了简化实操步骤，制备对照药材参照物溶液所使用的提取溶剂可以与制备供试品溶液所使用的提取溶剂相同，所述提取溶剂的浓度以乙醇的体积分数计为0％～70％，具体可以为水或30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％乙醇；优选所述提取溶剂的浓度以乙醇的体积分数计为30％～50％。
对照药材与水或者浓度为30％～70％的乙醇-水溶液的质量体积比为1g:(50～250mL)，优选1g:62.5mL。
更具体地，对照药材参照物溶液的制备方法具体如下：
取对照药材0.4g，置具塞锥形瓶中，加入水25mL，加热回流30min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。
关于对照品参照物溶液：
上述对照品以水、醇或醇-水溶液溶解。
上述对照品参照物溶液的制备方法如下：
取对照品适量，精密称定，加入溶剂，混匀至溶清，即得。
进一步地，上述醇或醇-水溶液为甲醇、乙醇、甲醇-水溶液或乙醇-水溶液，其中，甲醇-水溶液的甲醇体积分数不低于30％，具体可以为30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％；优选提取溶剂的浓度以甲醇的体积分数计为50％～100％。乙醇-水溶液的乙醇体积分数不高于95％，具体可以为0％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％；优选提取溶剂的浓度以乙醇的体积分数计为30％～95％。
具体地，所述青藤碱对照品溶液浓度为0.3mg/mL，木兰花碱对照品溶液浓度为50μg/mL，丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品溶液浓度为50μg/mL。
作为优选，在上构建方法中，色谱柱选自HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，流速：0.25～0.35mL/min。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
(1)该方法构建的特征图谱能够区分不同基原的样品，并且以青风藤含有的生物碱及木脂素为代表成分，可以较为全面地反映产品质量；
(2)方法高效，操作便捷，适于连续化生产的质量监控，并且适用广泛，可用于青风藤药材、饮片、提取物、标准汤剂、配方颗粒以及含有青风藤的经典名方的基准样品、制剂中间产品及成品的质量控制。
附图说明
图1为对青风藤(青藤)对照药材、代表成分对照品与青风藤(青藤)标准汤剂的液相色谱图；其中，图1A为青风藤(青藤)对照药材的液相色谱图，图1B为青藤碱对照品的液相色谱图，图1C为木兰花碱照品的液相色谱图，图1D为丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的液相色谱图，图1E为青风藤(青藤)标准汤剂的特征图谱；
图2为18批青风藤(青藤)标准汤剂特征图谱的叠加图；
图3为专属性试验的液相色谱图；其中，图3A为空白溶剂的液相色谱图，图3B为青风藤(青藤)标准汤剂的特征图谱；
图4为18批青风藤(青藤)药材特征图谱的叠加图；
图5为18批青风藤(青藤)饮片特征图谱的叠加图；
图6为3批青风藤(青藤)配方颗粒特征图谱的叠加图；
图7为5批青风藤(毛青藤)药材特征图谱的叠加图；
图8为5批青风藤(毛青藤)饮片特征图谱的叠加图；
图9为5批青风藤(毛青藤)标准汤剂特征图谱的叠加图；
图10为青风藤(青藤)与青风藤(毛青藤)药材特征图谱的对比图；图10A中，峰3(S1)：青藤碱，峰4：木兰花碱，峰5(S2)：丁香树脂醇双葡萄糖苷；图10B中，峰1：青藤碱，峰2：木兰花碱，峰3(S)：丁香树脂醇双葡萄糖苷；
图11为青风藤(青藤)与青风藤(毛青藤)标准汤剂特征图谱的对比图；
图11A中，峰3(S1)：青藤碱，峰4：木兰花碱，峰5(S2)：丁香树脂醇双葡萄糖苷；图11B中，峰1：青藤碱，峰2：木兰花碱，峰3(S)：丁香树脂醇双葡萄糖苷。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
仪器、试剂与样品
Agilent Technologies 1290Infinity超高效液相色谱仪，OpenLAB CDS工作站(Agilent公司)；KQ-250B超声清洗机(昆山超声仪器有限公司)；METTLER TOLEDO XP6百万分之一天平(梅特勒-托利多(上海)仪器有限公司)；ME204E/02型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；纯水系统(Sartorius公司)；GKC114型控温水浴锅(南通华泰实验仪器有限公司)；AS165W型离心机(亚速旺(上海)商贸有限公司)。乙腈(色谱纯，ThermoFisher公司)；甲醇(色谱纯，Thermo Fisher公司)；磷酸二氢钾(色谱纯，aladdin公司)；其它试剂均为分析纯。
木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品、购自上海源叶生物科技有限公司，批号分别为B20882、B20303。青风藤对照药材(批号：121251-201002)、青藤碱对照品(批号：110774-200507)均购于中国食品药品检定研究院。青风藤标准汤剂由江阴天江药业有限公司提供。
实施例1：青风藤(青藤)标准汤剂特征图谱的构建
1、参照物溶液的制备
取青风藤对照药材约0.4g，置具塞锥形瓶中，加入水25ml，煎煮30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。另取青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml含青藤碱0.3mg、木兰花碱50μg、丁香树脂醇双葡萄糖苷50μg的溶液，作为对照品参照物溶液。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(青藤)标准汤剂适量，研细。取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，以乙腈为流动相A，以0.005mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3mL；柱温为20℃；检测波长为210nm，理论板数按青藤碱峰计算应不低于3000。
Figure BDA0003618106730000061
(2)检测及结果
分别精密吸取各参照物溶液及供试品溶液1μL，注入液相色谱仪，结果见图1。
结论：结果显示，检测基线平稳，目标成分分离度良好，20分钟内可完成分析。
实施例2：供试品前处理提取溶剂的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(青藤)标准汤剂约0.1g，平行5份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，计算供试品总峰面积与称样量的比值，结果见表1。
表1不同提取溶剂的比较
Figure BDA0003618106730000071
结论：采用水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇作为提取溶剂时，发现以水、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇为提取溶剂时，色谱峰峰形较好，以95％乙醇为提取溶剂时，峰1、峰2的峰形较差，其中采用50％乙醇为提取溶剂时6个色谱峰的峰面积总和与称样量的比值较高，因此选择50％乙醇作为提取溶剂。
实施例3：多批次青风藤(青藤)标准汤剂特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤(青藤)标准汤剂特征图谱，结果见表2、图2。
表2不同批次青风藤(青藤)标准汤剂测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000081
结论：不同批次青风藤(青藤)标准汤剂中均能够稳定出现峰1～峰6，其中峰3、峰4、峰5分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。该方法除了指认出常见的青藤碱、木兰花碱等生物碱成分之外，还增加了木脂素类的成分——丁香树脂醇双葡萄糖苷，说明该方法进一步丰富了青风藤的质量评价内容。
根据多批次青风藤(青藤)标准汤剂的测定结果，规定青风藤(青藤)标准汤剂色谱中应呈现6个特征峰，其中峰3、峰4、峰5应分别与青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的保留时间相对应。与青藤碱参照物相应的峰为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：0.85(峰1)、0.89(峰2)。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰6)。
实施例4：供试品稳定性的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别每隔2小时精密吸取各参照物溶液及供试品溶液1μL，注入液相色谱仪，以峰3青藤碱(S1)、峰5丁香树脂醇双葡萄糖苷(S2)所对应的峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表3～4。
表3稳定性实验结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000091
表4稳定性实验结果(相对峰面积)
Figure BDA0003618106730000092
结论：供试品溶液在12小时内稳定性良好(RSD％＜2.0％)。
实施例5：专属性试验
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取、空白溶剂及供试品溶液1μL，注入液相色谱仪，结果见图3。
结论：由结果可知，空白溶剂对青风藤(青藤)标准汤剂特征图谱的测定无干扰，该方法专属性强。
实施例6：流动相流速的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
流动相流速分别设置为0.25mL/min、0.30mL/min、0.35mL/min，其余相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各参照物溶液及供试品溶液1μL，流动相流速分别设置为0.25mL/min、0.30mL/min、0.35mL/min，注入液相色谱仪，计算各特征峰的相对保留时间，结果见表5。
表5流速对分离效果的影响(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000101
结论：流速0.25mL/min～0.35mL/min之间，各特征峰的分离效果较好，且相对保留时间基本一致，耐用性良好。
实施例7：色谱柱柱温的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
色谱柱柱温分别设置为15℃、20℃、25℃，其余相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各参照物溶液及供试品溶液1μL，色谱柱柱温分别设置为15℃、20℃、25℃，注入液相色谱仪，计算各特征峰的相对保留时间，结果见表6。
表6柱温对分离效果的影响(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000111
结论：柱温在15℃～25℃之间，各特征峰的分离效果较好，且相对保留时间基本一致，耐用性良好。
实施例8：多批次青风藤(青藤)药材特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(青藤)药材约0.4g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤标(青藤)药材特征图谱，结果见表7、图4。
表7样品测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000121
结论：从结果来看，不同批次青风藤(青藤)药材中均能够稳定出现峰1～峰6，图中保留时间13.5分钟左右的色谱峰在S3～S5这三批样品中均不含有，因此不列为共有峰。经过与对照品指认，峰3、峰4、峰5分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。该方法除了指认出常见的青藤碱、木兰花碱等生物碱成分之外，还增加了木脂素类的成分——丁香树脂醇双葡萄糖苷，说明该方法进一步丰富了青风藤药材的质量评价内容。
根据多批次青风藤(青藤)药材的测定结果，规定青风藤(青藤)药材的色谱中应呈现6个特征峰，其中峰3、峰4、峰5应分别与青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的保留时间相对应。与青藤碱参照物相应的峰为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：0.85(峰1)、0.89(峰2)。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰6)。
实施例9：多批次青风藤(青藤)饮片特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(青藤)饮片约0.4g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤(青藤)饮片特征图谱，结果见表8、图5。
表8样品测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000131
结论：从结果来看，不同批次青风藤(青藤)饮片中均能够稳定出现峰1～峰6，其中峰3、峰4、峰5分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。该方法除了指认出常见的青藤碱、木兰花碱等生物碱成分之外，还增加了木脂素类的成分——丁香树脂醇双葡萄糖苷，说明该方法进一步丰富了青风藤饮片的质量评价内容。
根据多批次青风藤(青藤)饮片的测定结果，规定青风藤(青藤)饮片的色谱中应呈现6个特征峰，其中峰3、峰4、峰5应分别与青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的保留时间相对应。与青藤碱参照物相应的峰为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：0.85(峰1)、0.89(峰2)。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰6)。
实施例10：多批次青风藤(青藤)配方颗粒特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(青藤)配方颗粒约0.1g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤(青藤)配方颗粒特征图谱，结果见表8、图6。
表9样品测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000141
结论：从结果来看，不同批次青风藤(青藤)配方颗粒中均能够稳定出现峰1～峰6，其中峰3、峰4、峰5分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。与青藤碱参照物相应的峰为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：0.85(峰1)、0.89(峰2)。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰6)。该方法为青风藤配方颗粒的质量评价提供了参考。
实施例11：多批次青风藤(毛青藤)药材特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(毛青藤)药材约0.4g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤标(毛青藤)药材特征图谱，结果见表10、图7。
表10样品测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000151
结论：从结果来看，不同批次青风藤(毛青藤)药材中均能够稳定出现峰1～峰4，其中峰1、峰2、峰3分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S峰，计算峰4与S峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰4)。
实施例12：多批次青风藤(毛青藤)饮片特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(毛青藤)饮片约0.4g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤(毛青藤)饮片特征图谱，结果见表11、图8。
表11样品测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000161
结论：从结果来看，不同批次青风藤(毛青藤)饮片中均能够稳定出现峰1～峰4，其中峰1、峰2、峰3分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S峰，计算峰4与S峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰6)。
实施例13：多批次青风藤(毛青藤)标准汤剂特征图谱的考察
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
取青风藤(毛青藤)标准汤剂约0.1g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，再将谱图数据导入国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，以3号峰(经对照品指认为青藤碱)为S1峰，计算峰1、峰2与S1峰的相对保留时间，与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S2峰，计算峰6与S2峰相对保留时间，建立青风藤(毛青藤)标准汤剂特征图谱，结果见表12、图9。
表12样品测定结果(相对保留时间)
Figure BDA0003618106730000171
结论：从结果来看，不同批次青风藤(毛青藤)标准汤剂中均能够稳定出现峰1～峰4，其中峰1、峰2、峰3分别对应青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为S峰，计算峰4与S峰相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内，规定值为：1.30(峰6)。
实施例13：青风藤(青藤)与青风藤(毛青藤)药材的特征图谱比较
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
分别取青风藤(青藤)药材、青风藤(毛青藤)药材约0.4g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，其特征图谱比较结果见图10。
结论：青风藤(青藤)样品特征图谱包含6个共有峰，其中峰3、峰4、峰5应分别与青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的保留时间相对应。与青藤碱参照物相应的峰为参照(即S1峰)，相对保留时间为0.85(±10％)、0.89(±10％)的两个峰分别为峰1和峰2。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为参照(即S2峰)，相对保留时间为1.30(±10％)的峰为峰6。
青风藤(毛青藤)样品特征图谱包含4个共有峰，其中峰1、峰2、峰3应分别与青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的保留时间相对应。与丁香树脂醇双葡萄糖苷参照物相应的峰为参照(即S峰)，相对保留时间为1.30(±10％)的峰为峰4。
综上所述，本发明提供的方法可以很好地区分两种基原的青风藤药材。
实施例14：青风藤(青藤)与青风藤(毛青藤)标准汤剂的特征图谱比较
1、参照物溶液的制备
相关方法同实施例1。
2、供试品溶液的制备
分别取青风藤(青藤)标准汤剂、青风藤(毛青藤)标准汤剂约0.1g，其余相关方法同实施例1。
3、特征图谱的构建
(1)色谱条件
相关方法同实施例1。
(2)检测及结果
分别精密吸取各供试品溶液及参照物溶液1μL，注入液相色谱仪，其特征图谱比较结果见图11。
结论：从结果来看，青风藤(青藤)样品特征图谱包含6个共有峰，青风藤(毛青藤)样品特征图谱包含4个共有峰，两种基原均含有相同的4个特征峰，其中3个峰分别与青藤碱对照品、木兰花碱对照品、丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品的保留时间相对应。
青藤基原的青风藤标准汤剂比毛青藤基原的青风藤标准汤剂多2个共有峰。
综上所述，本发明提供的方法可以很好地区分两种基原的青风藤标准汤剂。

Claims (13)

1.一种青风藤特征图谱的构建方法，其特征在于，包含以下步骤：
(1)配制供试品溶液和参照物溶液：所述参照物包括对照药材和对照品，其中，对照品为青藤碱、木兰花碱和丁香树脂醇双葡萄糖苷；
(2)检测；
(3)对照参照物确认共有峰，构建特征图谱。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述检测的方法如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相：A相为乙腈或甲醇，B相为磷酸氢二钾水溶液、磷酸氢二钠水溶液、磷酸二氢钾水溶液或磷酸二氢钠水溶液；梯度洗脱程序：0min→3min→5min→10min→15min→20min，A相的体积百分比：8％→14％→17％→30％→30％；流速：0.20～0.55mL/min，柱温：10～40℃，检测器：紫外检测器、蒸发光散射检测器或电雾式检测器，检测波长：200nm～250nm。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述检测的方法如下：
色谱柱柱长：100mm，内径：2.1mm，填料粒径：1.7～1.9μm；流动相：A相为乙腈，B相为0.005mol/L磷酸二氢钾水溶液；流速：0.2～0.4mL/min，柱温：15～35℃，检测器：紫外检测器，检测波长：210nm。
4.根据权利要求1～3任一所述的构建方法，其特征在于，所述青风藤的基原为青藤和/或毛青藤。
5.根据权利要求1～3任一所述的构建方法，其特征在于，当所述供试品为青藤基原的青风藤时，共有峰为6个，其中，峰3、峰4、峰5分别为青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰；以青藤碱特征峰为参照峰S1，峰1、峰2分别为相对保留时间在0.85(±10％)、0.89(±10％)的特征峰；以丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰为参照峰S2，峰6为相对保留时间在1.30(±10％)的特征峰。
6.根据权利要求1～3任一所述的构建方法，其特征在于，当所述供试品为毛青藤基原的青风藤时，共有峰为4个，其中，峰1、峰2、峰3分别为青藤碱、木兰花碱、丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰；以丁香树脂醇双葡萄糖苷特征峰为参照峰S，峰4为相对保留时间在1.30(±10％)的特征峰。
7.根据权利要求1～3任一所述的构建方法，其特征在于，所述供试品为青风藤的药材、饮片、提取物、标准汤剂、配方颗粒或者含有青风藤的经典名方的基准样品、制剂中间产品或成品。
8.根据权利要求1～3任一所述的构建方法，其特征在于，所述供试品或对照药材以水、醇或醇-水溶液50～250mL/1g供试品或对照药材，提取。
9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述醇或醇-水溶液为乙醇或乙醇-水溶液；其中，乙醇-水溶液的乙醇体积分数不高于70％。
10.根据权利要求9所述的构建方法，其特征在于，所述对照药材以水、醇或醇-水溶液62.5mL/1g对照药材，提取。
11.根据权利要求1～3任一所述的构建方法，其特征在于，所述对照品以水、甲醇、乙醇、甲醇-水溶液或乙醇-水溶液溶解；其中，甲醇-水溶液的甲醇体积分数不低于30％，乙醇-水溶液的乙醇体积分数不高于95％。
12.根据权利要求11所述的构建方法，其特征在于，所述青藤碱对照品溶液浓度为0.3mg/mL，木兰花碱对照品溶液浓度为50μg/mL，丁香树脂醇双葡萄糖苷对照品溶液浓度为50μg/mL。
13.根据权利要求2～3任一所述的构建方法，其特征在于，所述色谱柱选自HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，流速：0.25～0.35mL/min。
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