CN104593310A - 一种生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌及其应用 - Google Patents

一种生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌，该菌株命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A/△gdh，菌株已于2014年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 2014559。本发明还公开了所述工程菌在制备meso-2,3-丁二醇中的应用。实验证实，利用本发明给出工程菌发酵生产获得的meso-2,3-丁二醇最高浓度可达88.14克/升，生产强度可达1.63克/升/小时，纯度大于99％，有望实现meso-2,3-丁二醇工业化高效生产。

Description

一种生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌及其应用
技术领域
本发明涉及一种生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌及其应用。
背景技术
2,3-丁二醇广泛应用于化工、食品、燃料及航天航空等多个领域(Appl Microbiol Biotechnol,2001,55(1):10-18)。因其热值较高(27,200kJ/kg)，同乙醇(29,100kJ/kg)相当，可用作燃料添加剂；可代替1,4-丁二醇，用于聚酯和聚亚安酯的合成。2,3-丁二醇存在meso-，(2R,3R)-，(2S,3S)-三种构型；其中meso-2,3-丁二醇可与呋喃-2,5-二甲酸二甲酯聚合生产新型聚合物(J.Polym.Sci.2013,51,890–898；Prog.Org.Coat.2014,77:277-284)，该聚合物具有较好的热稳定性，可用于生产热灌装瓶，同时还可用作溶剂型或粉末型涂料，具有广阔的应用前景。
目前已报道的2,3-丁二醇发酵菌株所产2,3-丁二醇多为两种或三种立体异构体的混合物(Biotechnol Adv.2011,29:351-64)，例如肺炎克雷伯氏菌，产酸克雷伯氏菌、粘质沙雷氏菌所产2,3-丁二醇主要为meso-2,3-丁二醇，还有少量(2S,3S)-2,3-丁二醇；地衣芽孢杆菌等所产2,3-丁二醇为meso-2,3-丁二醇与(2R,3R)-2,3-丁二醇的混合物(Biotechnol Biofuels.2013,6:123)。
利用来源于肺炎克雷伯氏菌的2,3-丁二醇合成基因簇构建的大肠杆菌工程菌生产meso-2,3-丁二醇，其产量能达到为17.7克/升，生产速率0.31克/升/小时(J.Ferment.Bioeng.1997,84:185-189)，产物浓度较低；利用其他菌株来源的2,3-丁二醇合成基因簇，也实现了meso-2,3-丁二醇的生产(Appl.Biochem.Biotechnol.2012,166:1801-1813；Appl.Microbiol.Biotechnol.2010,87:2001-2009；Biotechnol.J.2010,5:274-284)，如利用阴沟肠杆菌2,3-丁二醇合成基因簇构建的大肠杆菌工程菌，meso-2,3-丁二醇的最高产量为73.8g/L，纯度为96％(Metab Eng.2014,23:22-33)，难以满足聚合的要求。基于此，迫切需要寻找生产高纯度meso-2,3-丁二醇的菌株，以实现meso-2,3-丁二醇的高效生产。经检索，利用专用地衣芽孢杆菌工程菌生产meso-2,3-丁二醇的文献或专利还未见报道。
发明内容
针对现有meso-2,3-丁二醇生产方法中的技术难点及存在问题，本发明的目的是提供一种生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌及其应用。
本发明所述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌，其特征在于：该菌株命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A/△gdh，菌株已于2014年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，中国.武汉.武汉大学)，保藏号为：CCTCC NO:M2014559。
上述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌是敲除地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)10-1-A甘油脱氢酶gdh基因的工程菌株，其中，所述地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)10-1-A申请人已于2011年11月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为：CGMCCNO.5461。所述甘油脱氢酶gdh基因的核苷酸序列见GenBank:KF250430。
上述地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株形态为棒杆状，长1.5μm～3.0μm，直径0.6μm～0.7μm，菌落颜色为红色或白色，产芽孢，VP反应呈阳性，可利用葡萄糖、蔗糖、果糖产酸，可水解酪蛋白、明胶、吐温80，可利用柠檬酸盐，可在含100g/L NaCl的培养基中生长，可在42～60℃条件下生长。
上述地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株的16S rDNA序列与其他已知不同种的地衣芽孢杆菌的16S rDNA序列有99％以上的相似性。
上述地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株可以在高糖(糖150克/升)LB培养基中生长。
本发明所述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌的构建方法。
以地衣芽孢杆菌10-1-A基因组为模板，PCR获得包含gdh基因上下游同源序列的重组片段，连接至pKVM1后经双亲杂交转入地衣芽孢杆菌10-1-A，经抗性筛选单交换转化子；温度诱导发生双交换后，PCR筛选获得gdh基因成功敲除菌株。
本发明所述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌在制备meso-2,3-丁二醇中的应用。
其中：所述工程菌株生产meso-2,3-丁二醇的方法是：以50±1℃、搅拌培养18～60小时为发酵条件，以葡萄糖为底物发酵上述地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559，由发酵液得到meso-2,3-丁二醇。
上述发酵条件具体为：培养温度为50±1℃，培养方式为搅拌培养，搅拌转速为200～500转/分钟，旋转半径为33±1毫米，通气量为0.5vvm～1.0vvm，培养时间为18～60小时，发酵培养基组成为：葡萄糖50～80克/升，酵母粉12克/升，无水乙酸钠6.5克/升，柠檬酸铵1克/升，磷酸氢二钾2克/升，七水硫酸镁0.25克/升，金属离子母液10毫升/升，余量为水；pH为6～7。
其中，上述金属离子母液配方是：硫酸亚铁2.25克/升，硫酸锌0.75克/升，硫酸锰0.38克/升。
上述应用中，底物葡萄糖的检测方法是：样品进行合适的稀释后，采用生物传感分析仪SBA-40D(山东省科学院生物研究所)测定。测定原理为利用固定化葡萄糖氧化酶膜专一性测定葡萄糖含量。
上述应用中，发酵产物meso-2,3-丁二醇的检测方法是：
每500毫升乙酸乙酯中加入0.7毫升异戊醇，作为萃取剂；利用该萃取剂，对发酵液中发酵产物样品进行等体积萃取，利用涡旋振荡器对萃取的样品震荡30秒，然后静置，取上层样品进行气相检测。具体的气相检测条件如下：
所用气相色谱仪的型号为Agilent 6820，氮气作为载气，进样器和检测器的温度均设为280℃；毛细管柱为SupelcoBeta-DexTM120(内径0.25毫米，长度30米)；检测过程的柱温设定为：40℃保持3分钟，然后以每分钟1.5℃的速率升温到80℃，以每分钟0.5℃的速率升温到86℃，以每分钟30℃的速率升温到200℃。进样量1.0微升，进行气相检测。
本发明的特点和突出效果是：
(1)本发明提供的地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559是高产meso-2,3-丁二醇的生物安全菌株，所产meso-2,3-丁二醇纯度99.37％；
(2)利用本发明提供的工程菌株以葡萄糖为底物，在本发明给出发酵条件下获得的meso-2,3-丁二醇最高浓度可达88.14克/升，生产强度可达1.63克/升/小时；
(3)本发明提供的生产meso-2,3-丁二醇的方法充分利用高温发酵过程的优势，污染杂菌的机率小，同时实现了产量高，生产强度大的目标。
附图说明
本发明所述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌菌株命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A/△gdh，该菌株已于2014年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国.武汉.武汉大学)，保藏号为：CCTCC NO:M 2014559。
本发明所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A已于2011年11月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为：CGMCC NO.5461。
图1地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559发酵生产meso-2,3-丁二醇过程曲线。
其中：●，葡萄糖；■，生物量；◆，meso-2,3-丁二醇；▼，乙偶姻。
图2地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559发酵产物的气相色谱图。
其中：A：标准品气相色谱图，B：发酵产物的气相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的实质作进一步阐述，但本发明所保护的内容不仅限于此。
实施例1：构建生产meso-2,3-丁二醇的工程菌——地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A/△gdh
出发菌株选地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A，该菌申请人已于2011年11月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.5461。
采用常规的方法制备B.licheniformis 10-1-A的基因组DNA，该过程参考科学出版社出版的《精编分子生物学指南》中细菌基因组的小量制备的方法，提取地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)10-1-A的基因组DNA；使用合成的引物Kgdh1-f和Kgdh1-r从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A基因组DNA中PCR扩增得到甘油脱氢酶基因gdh(GenBank:KF250430)的前段。使用合成的引物Kgdh2-f和Kgdh2-r从地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)10-1-A基因组中PCR扩增得到甘油脱氢酶基因的后段，分别利用BglII和EcoRI以及EcoRI和BamHI酶切与经过BglII和BamHI进行双酶切的pKVM1质粒进行连接重组转化，使重组后的基因缺失中间部分。
其中，扩增重组引物设计如下：
Kgdh1-f:5’-ATTTAGATCTAACAAGCCGCGTCATTCAAG携带一个BglII位点
Kgdh1-r:5’-CGTTCCAAAATGAATTCATCGCAAA携带一个EcoRI位点
Kgdh2-f:5’-AAAGAATTCTGTCGAAGAAGAATGGCG携带一个EcoRI位点
Kgdh2-r:5’-GGAGTACCGTGGATCCGCTTTAAG携带一个BamHI位点。
1)接种携带敲除质粒的大肠杆菌S17-1λpir以及地衣芽孢杆菌10-1-A，在37℃下培养菌株至OD600＝1.2。将4～7毫升大肠杆菌菌液与1毫升地衣芽孢杆菌在6000转/分钟离心5分钟，用50毫摩尔pH 7.5的磷酸盐缓冲液洗两遍，将其混合后重悬并离心，然后用LB培养基重悬并滴在LB平板上，在30℃过夜培养。用30℃预热的LB液体培养基收集细胞后，稀释10-4和10-5涂布于添加红霉素和多粘菌素B的LB固体平板，30℃培养48～72小时。
2)挑转化子至加红霉素抗性LB培养基，37℃培养6～12小时，然后用LB培养基洗一遍后转接至新鲜LB培养基中42℃培养6～12小时，然后系列稀释至红霉素LB平板，42℃过夜培养，挑转化子42℃培养，挑取生长的单菌落，利用上下游引物进行PCR验证，得到可同时PCR出长片段和短片段的正确单交换目的菌。
3)挑转化子至LB培养基，30℃无抗性培养并转接两代，稀释10-5和10-6涂平板至LB，37℃培养12小时后，挑白色转化子50℃培养并进行分子验证，利用上下游引物进行PCR验证，双交换的目的菌，能PCR出短片段(构建的上下游同源臂)，挑选正确的双交换菌，进行表型验证，得到正确的敲除地衣芽孢杆菌10-1-A甘油脱氢酶gdh基因的工程菌株，该菌株命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A/△gdh；，菌株已于2014年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，中国.武汉.武汉大学)，保藏号为：CCTCCNO:M 2014559。
其中，上述步骤中所述的LB培养基配方为：1升蒸馏水中含：蛋白胨10克，酵母粉5克，氯化钠10克，121℃灭菌15分钟。
实施例2：制备地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株的细胞液体培养物
1、平板培养：将实施例1中所得B.licheniformis 10-1-A/△gdh划线到含有质量体积比为1.5％琼脂的LB平板上，50℃培养12小时；
2、种子培养：在无菌的条件下，用无菌的牙签挑取步骤(1)平板上的一个单菌落，然后接种到LB培养基中，50℃摇床震荡培养12小时；
3、摇瓶培养：在无菌条件下，取步骤(2)所培养的菌液以体积比1～3％的接种量，接种到30～150毫升含有60克/升葡萄糖种子培养基中，50±1℃摇床震荡培养11～13小时；即制得地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株的细胞液体培养物。
其中，上述种子培养基配方是：葡萄糖50～70克/升，酵母粉8克/升，无水乙酸钠6.5克/升，柠檬酸铵1克/升，磷酸氢二钾2克/升，七水硫酸镁0.25克/升，金属离子母液10毫升/升，余量为水；pH为6～7。
其中，上述金属离子母液配方是：硫酸亚铁2.25克/升，硫酸锌0.75克/升，硫酸锰0.38克/升。
实施例3：利用地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株以发酵培养基在5L发酵罐中发酵生产meso-2,3-丁二醇
将通过实施例2获得的地衣芽孢杆菌CCTCC NO:M 2014559菌株的细胞液体培养物以体积百分比10％的接种量接种在装有已经灭菌的4升发酵培养基的5升发酵罐中，在50℃条件下，发酵罐搅拌转速500转/分钟，通气量为0.5vvm～1.0vvm，发酵60小时。
发酵中每隔3小时取样，样品以8,000×g离心10分钟，检测上清中meso-2,3-丁二醇和葡萄糖的浓度，根据葡萄糖浓度补加葡萄糖干粉，使葡萄糖浓度维持在20～50克/升；对上清进行气相色谱分析测定发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度，当meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，停止发酵。
54小时后检测结果显示：meso-2,3-丁二醇的浓度达到88.14克/升。
上述发酵培养基组成为：葡萄糖50～80克/升，酵母粉12克/升，无水乙酸钠6.5克/升，柠檬酸铵1克/升，磷酸氢二钾2克/升，七水硫酸镁0.25克/升，金属离子母液10毫升/升，余量为水；pH为6～7。
其中，上述金属离子母液配方是：硫酸亚铁2.25克/升，硫酸锌0.75克/升，硫酸锰0.38克/升。

Claims (3)

1.一株生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌，其特征在于：该菌株命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)10-1-A/△gdh，菌株已于2014年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M 2014559。
2.权利要求1所述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌在制备meso-2,3-丁二醇中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述生产meso-2,3-丁二醇的专用地衣芽孢杆菌工程菌的发酵条件为：培养温度为50±1℃，培养方式为搅拌培养，搅拌转速为200～500转/分钟，旋转半径为33±1毫米，通气量为0.5vvm～1.0vvm，培养时间为18～60小时，发酵培养基组成为：葡萄糖50～80克/升，酵母粉12克/升，无水乙酸钠6.5克/升，柠檬酸铵1克/升，磷酸氢二钾2克/升，七水硫酸镁0.25克/升，金属离子母液10毫升/升，余量为水；pH为6～7；其中，所述金属离子母液配方是：硫酸亚铁2.25克/升，硫酸锌0.75克/升，硫酸锰0.38克/升。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105200068A (zh) * 2015-09-23 2015-12-30 江南大学 一种meso-2,3-丁二醇脱氢酶编码基因、重组酶及其制备方法和应用
CN109486871A (zh) * 2018-12-07 2019-03-19 山东大学深圳研究院 一种利用地衣芽孢杆菌工程菌株发酵生产乙偶姻的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104046586A (zh) * 2014-07-02 2014-09-17 山东大学 一株基因工程菌及其在生产(2r,3r)-2,3-丁二醇中的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104046586A (zh) * 2014-07-02 2014-09-17 山东大学 一株基因工程菌及其在生产(2r,3r)-2,3-丁二醇中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PING XU: "A newly isolated Bacillus licheni form isstrain thermophilically produces 2,3-butanediol", 《BIOMED CENTRAL》 *
PINGXU: "Glycerol Dehydrogenase Plays a Dual Role in Glycerol Metabolism and 2,3-Butanediol Formation in Klebsiella pneumoniae", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105200068A (zh) * 2015-09-23 2015-12-30 江南大学 一种meso-2,3-丁二醇脱氢酶编码基因、重组酶及其制备方法和应用
CN109486871A (zh) * 2018-12-07 2019-03-19 山东大学深圳研究院 一种利用地衣芽孢杆菌工程菌株发酵生产乙偶姻的方法

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