CN104546913B - 一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法，包括以下过程：⑴、用接血瓶接收新生牛的血液，在血液流入接血瓶六分之一至四分之一承装体积时，开始用搅拌端带突起的玻璃棒搅拌血液，110～140转/min；⑵、血液达到接血瓶的承装体积时，停止搅拌，密封接血瓶；⑶、在160～200转/min转速下搅拌2～4min，停止搅拌，静置3～4min；在110～140转/min搅拌5～8min，停止搅拌，取出玻璃棒及缠绕在所述搅拌端上的纤维蛋白。本发明稳定性强，均一化程度高；实现了自动化搅拌、避免人为因素干扰；可实现标准化操作和工业化生产；纤维蛋白去除较完全，而且不需要过滤，省时省力，也不需要换瓶，接血瓶即为不凝固原血的保存瓶；原血回收率高，平均为93%。

Description

一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法。

背景技术

在现有的生产工艺中有一些去除血液中纤维蛋白的方法，但是并没有形成规模化、自动化生产，其方法大致分为两种：

第一种是利用机械搅拌带动玻璃珠和血液混合、旋转，使玻璃珠与血液充分接触激活纤维蛋白的析出，大致过程如下：在采血之前先将干净的玻璃容器中加入一定量的玻璃珠，直径在0.5～0.7cm之间，随后通过活体动物的颈动脉进行采血，血液接入玻璃容器一定量之后人工开始对容器进行旋转、颠倒混合，使血液和玻璃珠充分接触，让血液中的纤维蛋白原变为纤维蛋白后析出，析出的蛋白达到一定量就会沉淀下来。通过过滤去除沉淀的纤维蛋白，血液就不在凝固了。

该方法有以下缺点：

1、在批量生产过程中会大量使用玻璃珠，而且玻璃珠长期使用过程中由于相互摩擦、碰撞后将产生玻璃粉末及碎片，如果过滤不完全将影响血液质量。

2、该方法还没有实现自动化，主要靠人工进行摇动震荡，大量生产过程中能以保证稳定性和均一性，而且耗费大量人工。

3、人工摇动震荡过程中，如果力度和速度控制不当，析出的纤维蛋白很容易将玻璃珠包埋起来，最后形成大的凝血块，降低原血的出品率。

4、纤维蛋白、玻璃珠及非凝血液只有通过过滤才能实现有效的分离，操作较繁琐。

第二种是利用人工用玻璃棒对血液进行搅拌，使玻璃棒带动血液在烧杯中旋转，从而促使纤维蛋白析出，该方法主要用于少量的血液去除纤维蛋白，常适用于实验室研究用去纤维蛋白原血的制备。大致过程是从动物的颈动脉取新鲜血液，将血接入到烧杯或三角瓶内，随后用玻璃棒不停搅拌，使纤维蛋白原转变成纤维蛋白（血液凝固必须有纤维蛋白原），搅拌3-5min后纤维蛋白聚集成多聚体后沉淀下来，通过过滤将纤维蛋白和血液分离开来，失去了纤维蛋白血液就不能凝固了。

该方法缺点如下：

1、该方法不适合大量或规模化生产。

2、在搅拌过程中由于烧杯或三角瓶不易封口或封口不严容易造成污染。

3、长时间的人工搅拌很难确保搅拌的均一性，易出现去纤维蛋白不完全现象。

4、该方法比较随意，没有统一标准，在实际操作过程中，由于操作个体及手法的不同，直接影响结果的稳定性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提出一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法，操作简单，效果好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法，包括以下过程：

⑴、用接血瓶接收新生牛的血液，在血液流入接血瓶六分之一至四分之一承装体积时，开始用搅拌端带突起的玻璃棒搅拌血液，110～140转/min；

⑵、血液达到接血瓶的承装体积时，停止搅拌，密封接血瓶；

⑶、在160～200转/min转速下搅拌2～4min，停止搅拌，静置3～4min；在110～140转/min搅拌5～8min，停止搅拌，取出玻璃棒及缠绕在所述搅拌端上的纤维蛋白。

进一步地，所述新生牛为出生12小时内的未进食未进水的健康新生牛。

进一步地，所述接血瓶为设置在摇床中进行搅拌的。

进一步地，所述接血瓶带有密封瓶塞，所述玻璃棒穿插在所述瓶塞上。

进一步地，所述瓶塞上均匀设有三根所述玻璃棒。

进一步地，所述瓶塞上穿设有接血管和排气管。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1）该方法是通过血液运动碰撞特殊设计的玻璃棒来实现搅拌的目的（在摇床的带动下，以接血瓶为参照物，瓶内的三根有突起的玻璃棒是静止的，而血液运动的）；第一部分中提到的两种分离方法是通过搅拌棒的搅拌带动血液运动来实现搅拌目的的（以接血瓶为参照物，搅拌棒或玻璃棒是运动的，同时带动血液也是运动的）。

2）该方法稳定性强，均一化程度高。

3）该方法实现了自动化搅拌、避免人为因素干扰。

4）可实现标准化操作和工业化生产。

5）纤维蛋白去除较完全，而且不需要过滤，省时省力，也不需要换瓶，接血瓶即为不凝固原血的保存瓶。

6）原血回收率高，平均为93%。

附图说明

图1为本发明接血瓶的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。

一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产，采用的工作原理为：通过摇床和如图1所示的接血瓶装置，对纤维蛋白进行分离，接血瓶放到摇床上和摇床同步摇动，这样接入的血液就会在瓶中旋转运动，而接血瓶中的几根玻璃棒相对于接血瓶是不动的，这种搅拌是通过血液运动来实现的，血液运动会不停地碰到玻璃棒及玻璃棒上的小突起，而且时刻都在破坏血液自身运动的平衡状态，使血液处于无规则旋转运动，增加血液与玻璃棒及玻璃棒上突起的接触概率，从而提高搅拌效果，实现有效的刺激一系列凝血因子的作用，刺激后的凝血因子被激活，使大量的凝血酶原变成凝血酶，凝血酶会在特定的位点对可溶性纤维蛋白原进行切割，切掉蛋白原的特定部分，剩下部分就是纤维蛋白，在均匀的搅拌下，纤维蛋白不断析出。在析出过程中纤维蛋白与玻璃棒频繁接触，最终缠绕到玻璃棒上，血液中就失去了纤维蛋白，血液因此不能凝固，从而得到去纤维蛋白的原血。

图1所示的接血瓶1，带有相应的密封瓶塞2，在密封瓶塞2上穿设有三根玻璃棒3，玻璃棒3为均匀分布且固定连接在密封瓶塞2上，玻璃棒3的下端伸入接血瓶1内，伸入接血瓶1内的部分玻璃棒3上设有突起31；密封瓶盖2还穿设有采血管4和排气管5。

新生牛去纤维蛋白原血主要是为制药企业生产小牛血去蛋白提取物及其眼膏制剂提供原料，去纤维的具体操作过程如下：

1、新生牛的采购

由于新生牛、小牛及成年牛的血液当中蛋白含量差异较大，在去除纤维蛋白过程中相关的技术参数存在一定的差异，因此，本发明方法仅适用于新生牛血液如何去除纤维蛋白。对新生牛采购标准为：牛源必须来自非疫区；出生12小时之内的未进食进水新生牛；畜体健康无外伤。

2、接血设备及操作过程

2.1、接血人员用75%酒精消毒双手和手臂，带上无菌手套，0.2%柠檬酸擦拭消毒工作台面、平板摇床及穿管孔。

2.2、接血容器为1000mL（高15cm，直径10cm）的灭菌PET广口瓶，瓶内起搅拌功能的结构为如下设计：与瓶盖相连的3根玻璃棒均匀分布在瓶盖的内边缘，每根玻璃棒长15cm，与瓶盖固定为一体，伸入瓶内的长度为14cm，从玻璃棒底端1cm处开始，每隔4cm有一个垂直于玻璃棒的小突起，约3.0cm长，每根玻璃棒上有3个突起，每两个突起的平面夹角为120度。瓶盖的近中央有两根直径0.5cm的PET管，垂直穿过瓶盖，一长一短，长管用于接采血管，短管顶部稍有弯曲，用于排气。

2.3、解剖人员准备完毕，采血人员打开采血管外包装，迅速将一头套上消毒布套传递给解剖人，另一头用75%酒精擦拭后与接血瓶瓶盖上方的长管相连。血液经采血管流入接血瓶。

2.4、接血瓶编号与新生牛编号一致，经传递窗传递给分离纤维蛋白的操作人员。

3、凝血酶原激活

当血液流入接血瓶约五分之一后，启动摇床（120转/min），让血液沿着PET瓶内壁旋转，旋转过程中，血液与玻璃棒不停的接触，而且玻璃棒上的小突起时刻在改变血液的运动方向，这样可以更好地激活血液中的凝血因子发生作用，使大量的凝血酶原变成凝血酶，使其具有活性。

4、纤维蛋白析出

当血液中的凝血酶被激活后，凝血酶会在特定的位点对可溶性纤维蛋白原进行切割，切掉蛋白原的特定部分，剩下部分就是纤维蛋白，纤维蛋白在搅拌过程中不断聚集，从血液中析出。

5、去除纤维蛋白

接1000mL新生牛血液大约需要5-6min，当血液达到要求数量后，停止摇床，一手掐住采血管另一手迅速将采血管拔下并连接到一新的采血瓶上，按3）重新操作。用锡箔纸包好接满血的PET瓶的排气孔和接血孔，之后转移到另一摇床继续摇动3min，转速增加到180转/min；然后停止摇床静置3-4min，让纤维蛋白充分聚集析出；再次启动摇床，120转/min继续摇动5-8min，这个过程会将所有析出的纤维蛋白全部缠绕到有小突起的玻璃棒上，缓慢停止摇床，取下瓶盖及玻璃棒，同时缠绕在玻璃棒上的所有纤维蛋白也被去除，剩下的血液将不再凝固，换上新的瓶盖后编号记录并放到-20℃冰箱储存待用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种新生牛血液去纤维蛋白原血的生产方法，包括以下过程：

⑴、用接血瓶接收新生牛的血液，在血液流入接血瓶六分之一至四分之一承装体积时，开始启动摇床，使血液在位于摇床上的接血瓶中旋转，从而使搅拌端带突起的玻璃棒搅拌血液，110～140转/min；

⑵、血液达到接血瓶的承装体积时，停止摇动摇床，从而停止对血液的搅拌，密封接血瓶；

⑶、利用摇床在160～200转/min转速下搅拌血液2～4min，停止摇动摇床，从而停止对血液的搅拌，静置3～4min；再次启动摇床，在110～140转/min搅拌5～8min，停止摇动摇床，从而停止对血液的搅拌，取出玻璃棒及缠绕在所述搅拌端上的纤维蛋白。

2.如权利要求1所述生产方法，其特征在于：所述新生牛为出生12小时内的未进食未进水的健康新生牛。

3.如权利要求1所述生产方法，其特征在于：所述接血瓶带有密封瓶塞，所述玻璃棒穿插在所述瓶塞上。

4.如权利要求3所述生产方法，其特征在于：所述瓶塞上均匀设有三根所述玻璃棒。

5.如权利要求3或4所述生产方法，其特征在于：所述瓶塞上穿设有接血管和排气管。