CN104546896B - 一种生物活性透明质酸凝胶制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生物活性透明质酸凝胶制剂，包括具有抗炎活性的生物活性透明质酸，以及与所述生物活性透明质酸有增效协同作用的卡波姆。本发明的凝胶制剂可促进皮肤健康、防治皮肤炎症。

Description

一种生物活性透明质酸凝胶制剂

技术领域

本发明涉及皮肤护理及皮炎药物领域，具体地，涉及一种生物活性透明质酸凝胶制剂。

背景技术

皮肤炎症性疾病即皮肤炎症引起的皮肤疾病，包括简单的皮肤红斑、皮肤过敏等肉眼可见的皮肤红肿痒痛。皮肤炎症性疾病(皮炎)和湿疹常作为同义词用来指一种皮肤炎症，代表皮肤对于化学制剂、蛋白、细菌与真菌等种种物质的变应性反应。例如，阴囊皮炎的发病原因非常复杂，简单的分为内在因素和外在因素，外因如化学制剂、化妆品、动物毒素、鱼虾、花粉、尘埃、日晒、搔抓等，内因包括遗传因素、精神因素、机体的免疫因素、代谢因素，以及越来越受到重视的心理因素。在目前治疗皮肤炎症的药物中，含皮质激素的药物对多种皮炎的疗效是肯定的，但如果长期频繁或大量使用含皮质类激素药物，将产生一些不良的副作用。

最近国外的研究表明，细胞外基质大分子透明质酸被透明质酸酶活化成生物活性透明质酸，生物活性透明质酸与细胞外CD44和TLR4受体结合，可以促进皮肤粘膜分泌防卫素2，进而抑制炎症和拮抗内毒素的炎症刺激作用，因此，发展一种安全有效的生物活性透明质酸，并将其制成皮肤外用制剂，可望提供一种促进皮肤保健、缓解或治疗皮肤炎症性疾病的途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种生物活性透明质酸凝胶制剂，具有高效的抗炎活性，可有效促进皮肤健康、防治皮肤炎症。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种生物活性透明质酸凝胶制剂，包括具有抗炎活性的生物活性透明质酸，以及与所述生物活性透明质酸有增效协同作用的卡波姆。

进一步地，所述具有抗炎活性的生物活性透明质酸是分子量为0.7KD-100KD的生物活性透明质酸片段。

进一步地，所述生物活性透明质酸片段是使用CHO细胞生产的有糖化的重组人透明质酸酶PH20切割大分子透明质酸获得，且所述透明质酸片段至少有一端是使用能识别透明质酸正常结构的重组人透明质酸酶切割的末端。

进一步地，所述生物活性透明质酸的重量百分含量为0.6-3％、所述卡波姆的重量百分含量为1.5-3％。

进一步地，所述生物活性透明质酸的重量百分含量为3％、所述卡波姆的重量百分含量为2％。

进一步地，所述凝胶制剂还包括：水、甘油、氯化钠、香精、苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油。

由于采用上述技术方案，本发明至少具有以下优点：

本发明的凝胶制剂可有效促进皮肤健康和防治皮肤炎症，是安全有效的皮肤炎症控制手段。

本发明的凝胶辅料卡波姆与生物活性透明质酸具有协同增效作用，能够增加生物活性透明质酸的的生物活性和人体治疗效果。

具体实施方式

凝胶剂指药物与能形成凝胶的辅料制成的混悬或乳状液型的稠厚液体或半固体制剂，凝胶剂主要用于皮肤及体腔如鼻腔、阴道，凝胶辅料包括羟丙甲纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、聚乙二醇、海藻酸钠等。发明人通过大量的实验研究发现，有些辅料不仅不会增加生物活性透明质酸的人体生物活性，甚至会降低生物活性透明质酸的人体生物活性，抑制治疗疗效。而凝胶辅料卡波姆不但没有降低生物活性透明质酸的人体治疗活性，反而促进了生物活性透明质酸的抗炎活性，具有与生物活性透明质酸的协同作用。这种协同作用增强了生物活性透明质酸的抗炎效果，因此，卡波姆作为凝胶辅料的同时也是一种协同增效剂。

因此，利用安全有效的生物活性透明质酸，结合具有协同增效作用的凝胶辅料，可生产有效促进皮肤健康和防治皮肤炎症的护肤品凝胶、化妆品凝胶、医疗药物凝胶产品。

本发明利用上述发现提供了具有高效的抗炎活性的生物活性透明质酸凝胶制剂，包括具有抗炎活性的生物活性透明质酸，以及与所述生物活性透明质酸有增效协同作用的卡波姆。

优选地，所述具有抗炎活性的生物活性透明质酸是分子量为0.7KD-100KD的生物活性透明质酸片段。所述生物活性透明质酸片段可采用CHO细胞生产的有糖化的重组人透明质酸酶PH20切割大分子透明质酸的方式获得，且所述透明质酸片段至少有一端是使用能识别透明质酸正常结构的重组人透明质酸酶切割的末端。采用该方式获得的生物活性透明质酸具有安全性高、生物活性高的特点。

优选地，所述生物活性透明质酸片段在凝胶制剂中的重量百分含量为0.6-3％，所述卡波姆的重量百分含量为1.5-3％。

上述仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

目的：生物活性透明质酸片段的生产方法。

方法：原料为纯度90.0％-99.9％的200-600KD的大分子透明质酸，使用CHO细胞生产的重组人透明质酸酶PH20切割，每克透明质酸使用透明质酸酶1000-2000单位，37度消化4-6小时，pH5.0-5.5，130-160mM NaCl，0.5-1.0mMMgSO₄，1.5-2.5mM CaCl₂，最终制成的分子量为0.7KD-100KD透明质酸片段。

所述的分子量为0.7KD-100KD透明质酸片段至少有一端是使用CHO细胞生产的不引起人类过敏反应的有糖化的能识别透明质酸正常结构的重组人透明质酸酶PH20切割的末端，具有促进细胞分泌防卫素2、杀灭微生物和和抑制皮肤粘膜炎症的生物活性，所述的生物活性既取决于透明质酸酶切割的透明质酸片段末端，也取决于透明质酸片段的分子量大小,透明质酸片段的分子量越小，所含重组人透明质酸酶PH20切割的末端越多，生物活性越好。

实施例2

目的：研究不同凝胶剂辅料对生物活性透明质酸的人体生物活性的影响。

方法：本实验采用人体实验的方法检测生物活性透明质酸的人体生物活性，即不同凝胶剂辅料对生物活性透明质酸治疗皮肤炎症性疾病效果的影响。本实验的小动物预实验已发现凝胶剂辅料羟丙甲纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、聚乙二醇、海藻酸钠均降低或不增加生物活性透明质酸的人体生物活性。本实验所有病例均为皮肤炎症性疾病患者，实验组1(卡波姆)采用2％卡波姆+3％生物活性透明质酸凝胶每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；实验组2(羧甲基纤维素钠)采用2％羧甲基纤维素钠+3％生物活性透明质酸胶(膏)每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；实验组3(海藻酸钠)采用2％海藻酸钠+3％生物活性透明质酸胶(膏)每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；实验组4(酵母蛋白水解物)采用2％酵母蛋白水解物+3％生物活性透明质酸胶(膏)每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；阳性对照采用已知有效的3％生物活性透明质酸喷剂每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；阴性对照采用2％卡波姆凝胶每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；比较五组治疗5天后症状和体征改善情况。

瘙痒不适症状疗效评价：显效：症状显著改善或消失，患者满意；有效：症状有改善或减轻，患者仍有不适，要求继续治疗；无效：症状无明显减轻，患者不满意。

体征疗效评价：显效：红色明显变浅，破损明显减轻；有效：红色开始变浅，破损减轻；无效：红色没有变浅，破损没有减轻。

统计学方法：采用SPSS12.0统计学软件进行统计学处理，计量和计数资料组间比较采用t检验和x²检验，以p<0.05为有统计学意义差异。

结果：

如表1所示，第5天症状改善情况：实验组1显效8例，有效2例，总有效率100％；实验组2有效8例，无效2例，总有效率80％，显效率与实验组1比较P<0.01；实验组3有效7例，无效3例，总有效率70％，显效率与实验组1比较P<0.01；实验组4有效6例，无效4例，总有效率60％，显效率与实验组1比较P<0.01。

表1第5天两组患者症状改善情况比较

如表2所示，第5天临床体征改善情况：实验组1显效9例，有效，1例，总有效率100％；实验组2有效8例，无效2例，总有效率80％，显效率与实验组1比较P<0.01；实验组3有效7例，无效3例，总有效率70％，显效率与实验组1比较P<0.01；实验组4有效6例，无效4例，总有效率60％，显效率与实验组1比较P<0.01。

表2第5天两组患者体征改善情况比较。

结论：实验组1(卡波姆)明显比实验组2(羧甲基纤维素钠)、实验组3(海藻酸钠)、实验组4(酵母蛋白水解物)有效，用人体实验表明(1)卡波姆对生物活性透明质酸治疗皮肤炎症体征红、破损和瘙痒症状的疗效有明显协同作用；(2)羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、酵母蛋白水解物对生物活性透明质酸治疗皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的疗效没有促进作用。

实施例3

目的：研究不同浓度卡波姆凝胶辅料对生物活性透明质酸的人体生物活性的影响。

方法：制造生物活性透明质酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％和卡波姆1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝胶，不调整甘油、氯化钠、香精、尼泊金甲酯钠、尼泊金丙酯钠的％含量。本实验所有病例均为皮肤炎症性疾病患者，实验组1-5分别采用卡波姆1.5％+生物活性透明质酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝胶，每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；实验组6-10分别采用卡波姆2.0％+生物活性透明质酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝胶，每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；实验组11-15分别采用卡波姆2.5％+生物活性透明质酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝胶，每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；实验组16-20分别采用卡波姆3.0％+生物活性透明质酸0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％凝胶，每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；阳性对照1-5分别采用0.6％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％生物活性透明质酸每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；阴性对照使用卡波姆3.0％(无生物活性透明质酸)凝胶，每天涂抹6次，观察治疗后皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状的情况；每组5个病人，比较20组治疗3天后症状和体征改善情况。

瘙痒不适症状疗效评价：显效：症状显著改善或消失，患者满意；有效：症状有改善或减轻，患者仍有不适，要求继续治疗；无效：症状无明显减轻，患者不满意。。

体征疗效评价：显效：红色明显变浅，破损明显减轻；有效：红色开始变浅，破损减轻；无效：红色没有开始变浅，破损没有减轻。

统计学方法：采用SPSS12.0统计学软件进行统计学处理，计量和计数资料组间比较采用t检验和x²检验，以p<0.05为有统计学意义差异。

结果：

表3第4天各组患者症状改善情况比较

如表3中所示，第4天各实验组组患者症状改善情况比较，P>0.05，各组无差别。

表4第4天各组患者体征改善情况比较

如表4中所示，第4天各实验组组患者体征改善情况比较，P>0.05，各组无差别。

结论：经人体使用实验，结果表明使用0.6％、1.5、2.0、2.5、3.0％生物活性透明质酸和1.5、2.0、2.5、3.0％卡波姆制造的凝胶对皮肤炎症均有治疗效果。使用小于1.5％和大于3.0％卡波姆制造凝胶生产和使用开始不现实(即太少不能实现膏状，太多缺乏可流动性)，不在本实验认证范围。

实施例4

本发明的生物活性透明质酸凝胶制剂除包括上述的生物活性透明质酸和卡波姆外，还包括：水、甘油、氯化钠、香精、苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油。

实施例5

在本发明的生物活性透明质酸凝胶制剂实际生产制备时，上述生物活性透明质酸和卡波姆的重量百分比的合适范围为0.6-3.0％的生物活性透明质酸和1.5-3.0％卡波姆，优选地，包括3.0％的生物活性透明质酸和2％的卡波姆，即上述实施例2中的实验组1配方。

本发明生物活性透明质酸凝胶可制成下述日用护肤品和化妆品、医疗器械凝胶、处方药凝胶：

实施例6

生物活性透明质酸凝胶护肤品和化妆品说明书

规格：50g/瓶

成分：水、生物活性透明质酸、卡波姆、甘油、氯化钠、香精、苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油。

功效：补充透明质酸和维护皮肤健康、保湿、光润细腻皮肤、预防减少细纹、均匀美白肤色。

使用方法：充分清洁面部或所需部位皮肤，取适量直接均匀涂抹面部或所需部位皮肤，轻微按摩促进皮肤吸收，使光洁滑腻。

储存方法：避光密闭常温保存。

实施例7

生物活性透明质酸药用(医疗器械)凝胶说明书

规格：50g/瓶

成分：水、生物活性透明质酸、卡波姆、甘油、氯化钠、香精、苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油。

功效：形成皮肤透明质酸保护膜，维护皮肤健康，辅助治疗皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状。

使用方法：充分清洁所需部位皮肤，取适量润肤霜，直接均匀涂抹面部或所需部位皮肤，轻微按摩促进皮肤吸收，使光洁滑腻。

储存方法：避光密闭常温保存。

实施例8

生物活性透明质酸非处方药凝胶说明书

规格：50g/瓶

成分：水、生物活性透明质酸、卡波姆、甘油、氯化钠、香精、苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油。

功效：抗炎和促进防卫素2分泌，治疗皮肤炎症体症红、破损和瘙痒症状。

使用方法：充分清洁面部或所需部位皮肤，取适量润肤霜，直接均匀涂抹面部或所需部位皮肤，轻微按摩促进皮肤吸收，使光洁滑腻。

储存方法：避光密闭常温保存。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，本领域技术人员利用上述揭示的技术内容做出些许简单修改、等同变化或修饰，均落在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.一种生物活性透明质酸凝胶制剂，其特征在于，包括具有抗炎活性的生物活性透明质酸，以及与所述生物活性透明质酸有增效协同作用的卡波姆；所述具有抗炎活性的生物活性透明质酸是分子量为0.7KD-100KD的生物活性透明质酸片段；所述生物活性透明质酸片段是使用CHO细胞生产的有糖化的重组人透明质酸酶PH20切割大分子透明质酸获得，且所述透明质酸片段至少有一端是使用能识别透明质酸正常结构的重组人透明质酸酶切割的末端。

2.根据权利要求1所述的生物活性透明质酸凝胶制剂，其特征在于，所述生物活性透明质酸的重量百分含量为0.6-3％，所述卡波姆的重量百分含量为1.5-3.0％。

3.根据权利要求1所述的生物活性透明质酸凝胶制剂，其特征在于，所述生物活性透明质酸的重量百分含量为3％，所述卡波姆的重量百分含量为2％。

4.根据权利要求1所述的生物活性透明质酸凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶制剂还包括：水、甘油、氯化钠、香精、苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油。