CN104546690B - 一种含有黄藤素的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，本发明公开了一种含有黄藤素的药物组合物，该药物组合物中包括：黄藤素、羟丙甲纤维素、羟苯乙酯、pH调节剂，本发明还公开了另外一种含有黄藤素的药物组合物，该药物组合物包括黄藤素、羟丙甲纤维素、山梨酸和L‑谷氨酸。试验表明，本发明药物组合物制备成阴道凝胶剂，具有更好的安全性和稳定性。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含有黄藤素的药物组合物。
背景技术
念珠菌性阴道炎即外阴阴道假丝念珠菌病（VVC），是由念珠菌引起的一种常见多发的外阴阴道炎症性疾病。白色念珠菌为条件致病菌，10%～20%的非孕妇女及30%的孕妇阴道中有此菌寄生，但菌量少，不引起症状。只有当全身及阴道局部免疫能力下降，尤其是局部细胞免疫力下降，白色念珠菌大量繁殖，才会引发阴道炎症状。该疾病的发病病因为：念珠菌是一种真菌，通常引起阴道炎的是念珠菌中的白色念珠菌。念珠菌对热的抵抗力不强，加热至60℃小时后即可死亡。但对干燥、日光、紫外线及化学制剂等抵抗力较强。其临床表现为：外阴瘙痒，且瘙痒症状时轻时重，时发时止，瘙痒严重时坐卧不宁，寝食难安，炎症较重时还可能出现排尿痛、性交痛等。白带增多是本病的另一主要症状，白带一般很稠，呈豆渣样或乳凝块状。在临床中其检查方法为：妇科检查白带呈白色稠厚豆腐渣样；阴道黏膜红肿，严重的形成浅溃疡少许阴道。分泌物放于10%KOH玻片上，在显微镜下找到菌丝。若有症状而多次镜检为阴性，可用培养法进行培养。诊断：1.外阴奇痒，白带呈白色稠厚豆腐渣样；2.阴道黏膜红肿，严重的形成浅溃疡；3.阴道分泌物中找到白色念珠菌。可取少许阴道分泌物，放于10%KOH或生理盐水玻片上，混匀后在显微镜下找到菌丝，即可确诊。用10%KOH可溶解其他细胞成分，检出率阳性率为70%～80%。若有症状而多次镜检为阴性，可用培养法进行培养确诊。
临床用于治疗念珠菌性阴道炎常用的制剂为黄藤素凝胶剂，黄藤素具有增强白细胞吞噬能力的作用，对多种革兰阳性和阴性菌有抑制作用，尤其抗真菌作用佳。对柯氏表皮癣菌等l2种真菌有不同程度的抑制作用；对白色念珠菌浅部或深部感染，均有良好疗效。另外，实验证明黄藤素腹腔注射，能增强大鼠非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫功能，表明其对机体免疫功能的提高有作用。临床用于妇科炎症、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、外科感染、眼结膜炎等的治疗。以黄藤素为活性成分制备的凝胶剂在临床应用广泛。
发明内容
申请人在研究中发现，黄藤素凝胶虽然在临床应用广泛，但其具有一定的刺激性，给患者带来一定的痛苦，而这种刺激性有可能是凝胶辅料或者有关物质增多导致，因此，申请人通过多次创造性试验研究，得到一种新的黄藤素凝胶，该凝胶是由黄藤素、羟丙甲纤维素、山梨酸和L-谷氨酸为原料制备得到，通过刺激性、稳定性筛选试验，其中一定比例的山梨酸和L-谷氨酸对于黄藤素凝胶剂的有关物质变化影响较小，具有更好的安全性以及稳定性。
本发明通过下述技术方案实现的。
1、一种含有黄藤素的药物组合物，该药物组合物包括：黄藤素、羟丙甲纤维素、羟苯乙酯、pH调节剂。
其中pH调节剂为枸橼酸。
药物组合物包括黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为40-60重量份，羟丙甲纤维素140-160重量份，枸橼酸1-2重量份，羟苯乙酯4-6重量份。
优选的药物组合物包括：黄藤素、羟丙甲纤维素、山梨酸和L-谷氨酸。
所述的药物组合物包括黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为40-60重量份，羟丙甲纤维素140-160重量份，山梨酸和L-谷氨酸6-8重量份。
其中山梨酸与L-谷氨酸的重量比为1:0.20-0.40。
所述的药物组合物制备成药物制剂。
所述的药物制剂包括凝胶剂。
所述的凝胶剂的制备方法包括但不限于：
取山梨酸和L-谷氨酸，加入注射用水，溶解完全，加热至80-90℃，加入羟丙甲纤维素搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，降温至室温，灌装，得到凝胶剂。
所述的药物组合物在制备治疗念珠菌性外阴阴道炎药物中的应用。
本发明的发明目的是为了获得一种刺激性小、有关物质变化小的凝胶剂，该凝胶剂具有更好的稳定性和安全性，对于临床用药具有重要意义。
下述试验研究是在多次试验基础上，针对本发明保护的技术方案进行的结论性论证试验。
一、刺激性筛选试验
试验1组： 黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，枸橼酸1.5g，羟苯乙酯5g。
制备方法：取枸橼酸、羟苯乙酯，加入6.84kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.41kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
试验2组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，苹果酸1.35g，羟苯乙酯5g。
制备方法：取苹果酸、羟苯乙酯，加入6.81kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.39kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
试验3组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，马来酸1.50g，羟苯乙酯5g。
制备方法：取马来酸、羟苯乙酯，加入6.89kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.38kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
试验4组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，枸橼酸1.50g，山梨酸5g。
制备方法：取枸橼酸、山梨酸，加入6.85kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.42kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
试验5组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-天冬氨酸1.50g，山梨酸5g。
制备方法：取L-天冬氨酸、山梨酸，加入6.85kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.40kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
试验6组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-谷氨酸1.50g，山梨酸5g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入6.85kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.41kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
试验方法：取雌兔40只，随机分为8组，分别为空白组、机械刺激组、试验1组-试验6组。每天定时以消毒的玻璃套管将凝胶剂缓缓推入阴道深处（机械刺激组只使用玻璃套管不加药物，空白组不使用），给药前用消毒过的玻璃套管刺激使其排尿，给药后将家兔仰卧位固定10min后放回，连续给药7天，给药量为5mg/kg。于末次试验后24h内将雌兔处死解剖，肉眼观察并记录阴道充血和炎症情况。取阴道组织，以10%甲醛液固定，分成上、中、下三段，制成5μm石蜡包埋切片，常规染色进行组织学炎症刺激程度判定染色，光镜下观察。按Eckstein标准，以充血、水肿、炎症细胞浸润及上皮细胞坏死4项指标评分。每项刺激程度分别判定为0~4分，0分为无刺激反应，4分为严重损伤，总分在0~9分为可接受，9~10分为边缘值，≥11分为不可接受。
试验结果：各组雌兔阴道溃疡、浸润、水肿和充血评分及总分值见表1。
表1雌兔阴道刺激实验结果
| 组别 | 例数(只) | 充血 | 水肿 | 炎症细胞浸润 | 上皮细胞坏死 | 总分 |
| 空白 | 8 | 0.2 | 0.1 | 0.9 | 0.2 | 1.4 |
| 机械刺激 | 8 | 2.2 | 1.7 | 1.5 | 0.9 | 6.3 |
| 试验1组 | 8 | 3.7 | 3.3 | 2.6 | 2.1 | 11.7 |
| 试验2组 | 8 | 3.9 | 3.4 | 2.7 | 1.9 | 11.9 |
| 试验3组 | 8 | 3.8 | 3.3 | 2.6 | 1.7 | 11.4 |
| 试验4组 | 8 | 2.7 | 2.2 | 1.9 | 1.1 | 7.9 |
| 试验5组 | 8 | 2.6 | 2.1 | 1.7 | 0.9 | 7.3 |
| 试验6组 | 8 | 2.4 | 2.1 | 1.5 | 0.7 | 6.7 |
试验结论：上述试验表明，试验1组至试验3组的刺激性总分大于11分，因此申请人舍弃该试验组别，而试验4组至试验6组刺激性小于8分，申请人保留该3组组别。
二、稳定性试验
试验方法：取试验一试验4组至试验6组的凝胶剂在温度60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，检测含量和有关物质，试验结果见表2。
【有关物质检测】取凝胶适量，加流动相（同含量测定流动相）溶解并制成每1ml约含黄藤素100μg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml含2μg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，各杂质峰面积之和，不得大于对照溶液色谱图主成分面积的0.25倍（小于0.5%）。
【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）测定
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈：水：磷酸二氢钠：十二烷基硫酸钠（300ml：200ml：1.7g：0.85g）为流动相，流速1ml/min，检测波长345nm。理论板数按盐酸巴马汀计不低于1500。
取凝胶剂适量（约相当于盐酸巴马汀10mg），置100ml量瓶中，加流动相溶解，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸巴马汀对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml含100μg的对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
表2 不同制剂稳定性试验结果
试验结论：上述稳定性试验表明，试验4组、试验5组经过高温试验后，其有关物质已增加很大，并且不符合质量要求，故应该舍弃。
三、比例筛选试验
试验1组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-谷氨酸1.60g，山梨酸5.9g。
试验2组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-谷氨酸1.08g，山梨酸5.42g。
试验3组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-谷氨酸1.62g，山梨酸4.88g。
试验4组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-谷氨酸1.86g，山梨酸4.64g。
试验5组：黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为50g，羟丙甲纤维素150g，L-谷氨酸2.17g，山梨酸4.33g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入6.85kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.40kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂1000支。
刺激性试验：同试验一，试验结果见表3。
稳定性试验：同试验二，试验结果见表4。
表3雌兔阴道刺激实验结果
| 组别 | 例数(只) | 充血 | 水肿 | 炎症细胞浸润 | 上皮细胞坏死 | 总分 |
| 空白 | 8 | 0.2 | 0.1 | 0.6 | 0.1 | 1.0 |
| 机械刺激 | 8 | 2.1 | 1.7 | 1.3 | 1.0 | 6.1 |
| 试验1组 | 8 | 2.5 | 2.2 | 1.6 | 0.8 | 7.1 |
| 试验2组 | 8 | 2.4 | 2.4 | 1.7 | 0.5 | 7.0 |
| 试验3组 | 8 | 2.4 | 2.5 | 1.6 | 0.3 | 6.8 |
| 试验4组 | 8 | 2.5 | 2.4 | 1.5 | 0.4 | 6.8 |
| 试验5组 | 8 | 2.7 | 2.7 | 1.6 | 0.5 | 7.5 |
试验结论：试验数据表明，L-谷氨酸与山梨酸的比例，对于刺激性影响不大。
表4 不同制剂稳定性试验结果
试验小结：上述数据表明，山梨酸与L-谷氨酸的重量比小于1：0.2，或者大于1:0.40时，经过10天高温后，其有关物质已经大于0.50%，不符合质量标准的要求，因此申请人保留山梨酸与L-谷氨酸的重量比为1:0.20-0.40。
制备实施例
实施例1
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为500g，羟丙甲纤维素1500g，L-谷氨酸10.9g，山梨酸54.1g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.5kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.4kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例2
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为500g，羟丙甲纤维素1500g，L-谷氨酸16.2g，山梨酸48.8g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.5kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.4kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例3
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为500g，羟丙甲纤维素1500g，L-谷氨酸18.6g，山梨酸46.4g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.5kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.40kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例4
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为400g，羟丙甲纤维素1400g，山梨酸和L-谷氨酸60g，其中山梨酸50g，L-谷氨酸10g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.1kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.44kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例5
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为400g，羟丙甲纤维素1400g，山梨酸和L-谷氨酸60g，其中山梨酸46.1g，L-谷氨酸13.9g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.1kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.39kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例6
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为400g，羟丙甲纤维素1400g，山梨酸和L-谷氨酸60g，其中山梨酸42.86g，L-谷氨酸17.14g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.1kg的注射用水中，加热至85℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.35kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例7
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为600g，羟丙甲纤维素160g，山梨酸和L-谷氨酸80g，其中山梨酸66.67g，L-谷氨酸13.33g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入72.0kg的注射用水中，加热至80℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.55kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例8
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为600g，羟丙甲纤维素160g，山梨酸和L-谷氨酸80g，其中山梨酸59.3g，L-谷氨酸20.7g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入69.6kg的注射用水中，加热至80℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.50kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例9
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为600g，羟丙甲纤维素160g，山梨酸和L-谷氨酸80g，其中山梨酸57.1g，L-谷氨酸22.9g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入69.6kg的注射用水中，加热至80℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.50kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例10
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为450g，羟丙甲纤维素1455g，山梨酸和L-谷氨酸72g，其中山梨酸60g，L-谷氨酸12g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.7kg的注射用水中，加热至90℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.48kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例11
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为450g，羟丙甲纤维素1455g，山梨酸和L-谷氨酸72g，其中山梨酸51.4g，L-谷氨酸18.6g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入67.3kg的注射用水中，加热至90℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.40kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
实施例12
黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为450g，羟丙甲纤维素1455g，山梨酸和L-谷氨酸72g，其中山梨酸54.1g，L-谷氨酸17.9g。
制备方法：取L-谷氨酸、山梨酸，加入68.4kg的注射用水中，加热至90℃，加入羟丙甲纤维素，搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，加入注射用水2.46kg，搅拌降温至室温，灌装，得到凝胶剂10000支。
将上述实施例按照说明书试验一刺激性试验方法进行试验，得到上述实施例的凝胶剂刺激性总分均小于8.0；按照说明书试验二稳定性试验，得到上述实施例的凝胶10天高温试验后，其有关物质均小于0.50%。
制备实施例包括但不限于上述。
Claims (3)
1.一种黄藤素凝胶剂，其特征在于该凝胶剂由黄藤素按C21H21NO4·HCl·3H2O计为40-60重量份，羟丙甲纤维素140-160重量份，山梨酸和L-谷氨酸6-8重量份组成；其中山梨酸与L-谷氨酸的重量比为1:0.20-0.40。
2.根据权利要求1所述的一种黄藤素凝胶剂，其特征在于该凝胶剂的制备方法为：
取山梨酸和L-谷氨酸，加入注射用水，溶解完全，加热至80-90℃，加入羟丙甲纤维素搅拌均匀，加入黄藤素，搅拌均匀，降温至室温，灌装，得到凝胶剂。
3.根据权利要求1所述的一种黄藤素凝胶剂，其特征在于该凝胶剂在制备治疗念珠菌性外阴阴道炎药物中的应用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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Address after: No. 23 Xikang Road, Badaling Town, Yanqing District, Beijing 100210 (Yanqing Park, Zhongguancun Science and Technology Park) Patentee after: Tongfang Pharmaceutical Group Co Ltd Address before: 100210 Ziguang East Road, Badaling Economic and Technological Development Zone, Yanqing County, Beijing Patentee before: BEIJING UNIS PHARMACEUTICAL CO., LTD. |
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| CP03 | Change of name, title or address |