CN104096011B - 一种治疗子宫肌瘤的药物组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药领域,具体涉及一种治疗子宫肌瘤的药物组合物。该药物组合物是由以下重量份的原料制成的:小茴香 1~3,蒲黄1~3,桃仁1~3,鸦跖花1~3。该药物组合物采用药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。该药物组合物可用于制备治疗子宫肌瘤以及子宫内膜异位症的药物。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,涉及一种由小茴香、蒲黄、桃仁、鸦跖花组成的具有治疗子宫肌瘤作用的药物组合物。
背景技术
子宫肌瘤是发生在女性生殖器官中的一种常见良性肿瘤,也叫做子宫平滑肌瘤,症状不明显,中医里认为是由于气滞血瘀,脏腑功能失调而引起。
子宫肌瘤有无症状及其轻重,主要决定于肌瘤的部位、大小、数目以及并发症。有的肌瘤小、生长缓慢、无症状,可以终生未被发现。近年由于B型超声检查的广泛应用,不少患者是因常规查体,经B超检查发现有子宫肌瘤,而其本人并无症状。多数患者是因有症状而来就医。子宫肌瘤常见的症状有子宫出血、腹部肿块、阴道溢液、压迫症状等。
子宫肌瘤是雌激素敏感性肿瘤,多见于性激素功能活跃的育龄妇女,少见于绝经后妇女。临床往往发现当外源性给予雌激素或妊娠时,子宫肌瘤迅速增大;绝经后出现的低雌二醇(E2)低孕酮(P)状态可以引起肌瘤的缩小、甚至消失。故长期以来,雌激素一直被认为是子宫肌瘤发生和发展的促进剂,即传统的“雌激素假说”。然而目前许多研究表明,子宫肌瘤患者外周血循环中的E2、P水平与正常人并无显著性差别,而局部肌瘤组织内E2、P含量却高于同一子宫正常平滑肌组织内的含量。因此不能确定血清E2、P水平与子宫肌瘤发生发展的直接关系,而可能在于肌瘤组织局部对激素的敏感性。激素主要的生物学效应靠与
受体结合后才能得以实现。靶组织保留激素的多少取决于其细胞内相应受体的含量;在同一激素水平下,激素在靶组织中产生生物学效应的强弱也取决于靶细胞受体的含量,说明肌瘤的生长与ER、PR的水平密切相关,即所谓受体效应。
本发明提供了一种治疗子宫肌瘤的药物组合物,研究对雌、孕激素负荷法造模的实验性子宫肌瘤大鼠的子宫肌组织进行ER、PR表达水平的测定。结果显示:本发明提供药物组合物组大鼠子宫肌层ER、PR表达水准较模型组大鼠有所下降。
细胞凋亡也称程式性细胞死亡,是细胞衰老、死亡过程的主要形式。细胞凋亡是体内细胞的一个生理性调节机制。Bcl-2和Bax在体内通常以二聚体形式发挥作用。若其中Bcl-2蛋白同聚体形成则抑制细胞凋亡,Bax蛋白同聚体形成则促进细胞凋亡。本研究发现:在空白组大鼠子宫中,Bcl-2呈低表达,Bax呈高表达。这提示在正常大鼠子宫肌层组织中Bax占优势,Bcl-2表达弱,可能使之对凋亡更敏感,更易发生凋亡。模型组大鼠子宫中Bcl-2表达增加,Bax的表达减少,提示Bcl-2高表达可能是肌瘤的特征,导致肌瘤不断增大。本发明药物组合物能够增加子宫肌瘤大鼠Bax的表达,降低大鼠大鼠子宫平滑肌细胞的胞浆中Bcl-2蛋白阳性细胞数量。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗子宫肌瘤的药物组合物。
本发明的另一目的是提供药物组合物的制备方法。
本发明的还提供该药物组合物在制备治疗子宫肌瘤以及子宫内膜异位症药物中的应用。
本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种治疗子宫肌瘤的药物组合物,是由以下重量份的原料制成的:小茴香 1~3,蒲黄1~3,桃仁1~3,鸦跖花1~3。
所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的:小茴香 1,蒲黄2,桃仁3,鸦跖花1。
所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的:小茴香 2,蒲黄3,桃仁2,鸦跖花2。
所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的:小茴香 3,蒲黄1,桃仁1,鸦跖花3。
所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的:小茴香1,蒲黄1,桃仁1,鸦跖花1。
所述药物组合物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
所述药物组合物制备成的口服制剂为片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
所述药物组合物优选采用如下方法制备:取小茴香、蒲黄、桃仁、鸦跖花,混合,加入5~10倍量的水煎煮2~4次,每次0.5~2小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀,装入硬胶囊,即得。
所述药物组合物可用于制备治疗子宫肌瘤的药物。
所述药物组合物还可用于制备治疗子宫内膜异位症的药物。
本发明药物组合物中的小茴香为伞形科茴香属植物茴香FoeniculumvulgareMill.的干燥果实。蒲黄为香蒲科香蒲属植物狭叶香蒲Typha angustifolia L.、东方香蒲T.orientalis Presl、宽叶香蒲T.latifolia L.、长苞香蒲T.angustata Bory et Chaub.的干燥花粉。桃仁为蔷薇科桃属植物桃Amygdalus persica L.[Prunus persica (L.)Batsch.]或山桃A.davidiana (Carr.)C.de Vos ex Henry [Prunus davidiana (Carr.)Franch.]的干燥种子。鸦跖花为毛茛科植物鸦跖花属植物鸦跖花Oxygraphis glacialis(Fisch. ) Bunge的干燥花及全草。
通过如下实验研究验证本发明的技术效果:
实验例1:本发明药物组合物治疗子宫内膜异位症的实验研究
本研究以雌、孕激素负荷法建立大鼠实验性子宫肌瘤模型。研究本发明药物组合物对其的干预,观察子宫形态学改变,并用免疫组化法检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Bcl-2/Bax蛋白在子宫肌层组织中的表达情况,探讨本发明药物组合物治疗子宫肌瘤的作用效果与作用机制。
一、材料与方法
1. 动物 雌性未孕SD大鼠,体质量200~250g ,由南京中医药大学二级动物实验室饲养(SPF级),饲养条件:室温(200±20)℃,相对湿度(60±5)%。实验饲料:汤山龙泉牌实验鼠颗粒饲料。
2. 受试药物与试剂
2.1 本发明药物组合物:取干燥的小茴香 250g、蒲黄250g、桃仁250g、鸦跖花250g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.2 对比药物组合物A:取干燥的小茴香 333g、蒲黄333g、桃仁333g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.3 对比药物组合物B::取干燥的蒲黄333g、桃仁333g、鸦跖花333g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.4对比药物组合物C:取干燥的桃仁333g、鸦跖花333g、小茴香333g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.5对比药物组合物D:取干燥的鸦跖花333g、小茴香333g、蒲黄333g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.6对比药物组合物E:取干燥的小茴香 200g、蒲黄200g、桃仁200g、鸦跖花200g、川楝子200g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.7对比药物组合物F:取干燥的小茴香 200g、蒲黄200g、桃仁200g、鸦跖花200g、当归200g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.8对比药物组合物G:取干燥的小茴香 200g、蒲黄200g、桃仁200g、鸦跖花200g、木香200g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入蒸馏水中,制成1.0g生药/mL浓度的溶液。
2.9 阳性对照药物桂枝茯苓胶囊:江苏康缘药业股份有限公司生产,规格:0.31g。将桂枝茯苓胶囊内药物加入蒸馏水中制成0.04g/mL浓度的溶液。
2.10 兔抗大鼠ER、PR、Bcl-2、Bax多克隆抗体:购自北京博奥森生物技术有限公司。
3. 造模与分组
3.1 造模
以雌、孕激素负荷法建立大鼠实验性子宫肌瘤模型,选用SD大鼠,随机分为子宫肌瘤造模组及空白对照组两组。造模方法参照文献报导(易明娟.宫宁口服液治疗子宫肌瘤的实验研究.中药药理与临床,1996,12(4):41-43),造模组给予肌肉注射苯甲酸雌二醇0.06mL/只(含药量0.12mg),3次/周(周一、三、五),共16周,第10周起加黄体酮0.05mL/只(含药量1mg),2次/周(周二、四),共7周。空白对照组给与肌肉注射高温灭菌花生油0.05mL/只,3次/周,共16周。与空白对照组相比,模型组大鼠的子宫平滑肌增生明显,两者有显著差异(P<0.001),说明该方案造模成功。
3.2 分组
造模结束后,随机分为模型组12只、桂枝茯苓胶囊组12只,本发明药物组合物组12只、对比药物组合物A组12只、对比药物组合物B组12只、对比药物组合物C组12只、对比药物组合物D组12只,对比药物组合物E组12只,对比药物组合物F组12只,对比药物组合物G组12只,另设空白对照组(灭菌花生油造模)12只。
4. 给药
造模结束后灌胃给药。本发明药物组合物给予本发明药物组合物10g生药/kg,对比药物组合物A组给予对比药物组合物A 10g生药/kg,对比药物组合物B组给予对比药物组合物B 10g生药/kg,对比药物组合物C组给予对比药物组合物C 10g生药/kg,对比药物组合物D给予对比药物组合物D 10g生药/kg,对比药物组合物E给予对比药物组合物E 10g生药/kg,对比药物组合物F给予对比药物组合物F 10g生药/kg,对比药物组合物G给予对比药物组合物G 10g生药/kg,桂枝茯苓胶囊组给桂枝茯苓胶囊溶液0.6g/kg,模型组、对照组给予饮用水。各组给药体积均为2mL/100g,1次/日(上午10:00),共4周。末次给药后晚20点各组大鼠禁食14h,次日晨各组大鼠10%水合氯醛静脉麻醉后颈动脉取血,取血后采用颈椎脱臼方法处死大鼠并取子宫,10%磷酸缓冲福尔马林固定。
5. 观察指标
5.1 子宫组织形态学观察 以10%福尔马林固定子宫,石蜡包埋切片,HE染色,显微镜下观察子宫组织学形态变化。平滑肌细胞增生程度评分标准:
(-):子宫肌层未见增厚,未见有炎性浸润,结构正常。
(+):子宫肌层增厚不明显,轻度炎性浸润。
(++):子宫肌层轻度增厚,炎细胞浸润较明显。
(+++):子宫肌层明显增厚,炎细胞浸润较重。
5.2 免疫组织学观察
用免疫组化法检测子宫肌瘤细胞内ER、PR、Bcl-2/Bax在子宫肌瘤组织中的表达情况。ER:雌激素是子宫肌瘤生长的主要刺激因素,并发现雌激素是通过其受体而发挥作用的。PR:孕激素在子宫肌瘤的发病中有重要作用,与雌激素起协调作用。孕激素受体介入与肌瘤的生长有关。Bcl-2和Bax:Bcl-2是一种原癌基因,可阻止凋亡并延长细胞寿命,Bax基因能对抗Bcl-2的活性,有直接促进凋亡的功能。
分级标准:综合阳性细胞所占比例和染色强度进行半定量判定。染色强度按下列标准评定:
阴性为0分;
染色虽弱但明显强于阴性对照者为1分;
染色强度中等者为2分;
染色强者为3分。
染色的阳性细胞所占比只评定标准为:
阳性细胞数<5%为阴性:0分;
6%~15%为弱阳性:1分;
16%~30%者为阳性:2分;
>31%者为强阳性:3分。
综合评分:两种评分相加,将结果分为4个等级:
0~1分为(-);
2分为(+);
3~4分为 (++);
5~6分为(+++)。
按综合评分的等级来评价切片指标变化情况。
6. 统计学方法
资料的统计分析应用SPSS13.0统计软体进行统计,计量资料以±s表示,并用t检验;计数资料用秩和检验,P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
1. 本发明药物组合物对模型大鼠的病理组织学影响
各组大鼠病理组织学评分结果见表1。造模后的空白对照组、子宫肌瘤模型组,子宫的病理增生两者有极显著差异(P<0.001),表明造模成功。与模型组相比,桂枝茯苓胶囊组及本发明药物组合物大鼠的病理增生显著减轻(P<0.05或P<0.01),表明桂枝茯苓胶囊及本发明药物组合物对子宫肌瘤模型大鼠的病理增生有一定的改善作用,且本发明药物组合物组优于桂枝茯苓胶囊组。对比药物组合物A组、对比药物组合物B组、对比药物组合物C组、对比药物组合物D组、对比药物组合物E组、对比药物组合物F组、对比药物组合物G组对大鼠的病理增生改变情况不显著,提示对比药物组合物A、对比药物组合物B、对比药物组合物C、对比药物组合物D、对比药物组合物E组、对比药物组合物F组、对比药物组合物G组对减轻模型大鼠病理的作用不明显。结果显示桂枝茯苓胶囊和本发明药物组合物对子宫肌瘤模型大鼠的病理情况均有显著的改善作用,表明其对模型大鼠子宫的瘤样增生有较好的治疗作用,且本发明药物组合物优于桂枝茯苓胶囊。
表1 对模型大鼠病例情况的影响(±s)
2. 本发明药物组合物对子宫肌瘤模型大鼠子宫肌细胞中相关受体的影响
2.1 本发明药物组合物对子宫肌瘤细胞中ER含量的影响,见表2,与模型组相比,空白对照组ER表达的差异有显著统计学意义(P<0.01),模型组的平均秩次为15.35,高于空白对照组(平均秩次为6.84),说明模型组子宫肌层ER表达水准明显升高。本发明药物组合物与模型组相比,其差异有统计学意义(P<0.05)。而桂枝茯苓胶囊组的平均秩次为10.64,小于模型组(平均秩次为15.35),但其差异无统计学意义。结果显示本发明药物组合物组大鼠子宫肌层ER表达水准较模型组大鼠有所下降,且本发明药物组合物组优于对比药物组合物A组、对比药物组合物B组、对比药物组合物C组、对比药物组合物D组、对比药物组合物E组、对比药物组合物F组、对比药物组合物G组。桂枝茯苓胶囊组大鼠子宫肌层ER表达水准较模型组大鼠无明显改变。
表2 对子宫肌瘤细胞中ER含量的影响 (±s)
2.2 本发明药物组合物对子宫肌细胞中PR含量的影响,见表3,模型组和空白对照组子宫肌细胞的胞浆中均有阳性颗粒表达,但模型组肌瘤细胞阳性和强阳性表达率高达75%,而正常肌组织相应表达率仅为30%,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,本发明药物组合物组能够显著减少子宫肌瘤模型大鼠肌细胞中PR含量(P<0.05)。桂枝茯苓胶囊组模型大鼠肌细胞中PR含量减少不明显。结果显示本发明药物组合物组对大鼠子宫肌层PR表达水准较模型组大鼠明显下降,且本发明药物组合物优于对比药物组合物A、对比药物组合物B、对比药物组合物C、对比药物组合物D、对比药物组合物E、对比药物组合物F、对比药物组合物G。桂枝茯苓胶囊无明显改变。
表3 对子宫肌细胞中PR含量的影响 (±s)
2.3 本发明药物组合物对子宫肌细胞中Bcl-2含量的影响,见表4,空白对照组大鼠子宫平滑肌细胞的胞浆中Bcl-2蛋白阳性细胞多呈弱阳性、散在分布;模型组大鼠子宫平滑肌细胞的胞浆中Bcl-2蛋白阳性细胞数量明显增多,与空白对照组比较,二者Bcl-2阳性表达有显著差异(P<0.05)。与模型组相比,本发明药物组合物组大鼠子宫平滑肌细胞的胞浆中Bcl-2蛋白阳性细胞数量明显减少,强度明显减弱,与模型组有显著差异(P<0.05),结果显示本发明药物组合物能显著减少子宫肌瘤模型大鼠肌细胞中Bcl-2蛋白含量;对比药物组合物A组、对比药物组合物B组、对比药物组合物C组、对比药物组合物D组、对比药物组合物E组、对比药物组合物F组、对比药物组合物G组,与模型组比较,无明显差异。桂枝茯苓胶囊组大鼠子宫平滑肌细胞的胞浆中Bcl-2蛋白含量减少不明显。
表4 对子宫肌细胞中Bcl-2含量的影响 (±s)
2.4 本发明药物组合物对子宫肌细胞中Bax含量的影响,见表5,模型组大鼠Bax的表达程度低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。本发明药物组合物组大鼠Bax的表达程度高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),说明本发明药物组合物能增加子宫肌瘤大鼠模型Bax的表达。对比药物组合物A组、对比药物组合物B组、对比药物组合物C组、对比药物组合物D组、对比药物组合物E组、对比药物组合物F组、对比药物组合物G组,与模型组比较,无明显差异。桂枝茯苓胶囊组大鼠Bax的表达程度略高于模型组,但差异无统计学意义。
表5 对子宫肌细胞中Bax含量的影响(±s)
三、讨论
有多种文献报道,桂枝茯苓胶囊对于治疗子宫肌瘤有确切疗效,发明人将其作为阳性对照药物,与本发明药物组合物进行比较,从模型大鼠的病理改变情况表明本发明药物组合物和桂枝茯苓胶囊能够拮抗子宫肌层的增生(P<0.05或P<0.01),且本发明药物组合物本发明药物组合物优于桂枝茯苓胶囊组。
本发明药物组合物能降低子宫肌瘤大鼠模型Bcl-2的表达,增加子宫肌瘤大鼠模型Bax的表达,本发明药物组合物与模型组比较有显著差异,而桂枝茯苓胶囊组表达程度略有改善,但差异无统计学意义。本发明药物组合物可能通过增强肌瘤细胞对凋亡的敏感性,不易逃避凋亡原的刺激,致使肌瘤细胞存活期缩短,肌瘤不断缩小。
具体实施方式:
实施例1:
处方:小茴香 143g,蒲黄286g,桃仁429g,鸦跖花143g。
制法:取干燥的小茴香 143g,蒲黄286g,桃仁429g,鸦跖花143g,加5000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,加入适量糊精,混匀,制成颗粒,装入胶囊,制成硬胶囊剂1000粒。
实施例2:
处方:小茴香 222g,蒲黄333g,桃仁222g,鸦跖花222g。
制法:取干燥的小茴香 222g,蒲黄333g,桃仁222g,鸦跖花222g,加8000mL水煎煮,煎煮2次,每次1小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,加入适量淀粉、硬脂酸镁,混匀,制成颗粒,干燥,压制成片,包衣,制成1000片。
实施例3:
处方:小茴香 375g,蒲黄125g,桃仁125g,鸦跖花375g。
制法:取干燥的小茴香 375g,蒲黄125g,桃仁125g,鸦跖花273g,加7000mL水煎煮,煎煮3次,每次0.5小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,加入适量淀粉,泛制成丸,干燥,制成5000丸。
实施例4:
处方:小茴香 250g,蒲黄250g,桃仁250g,鸦跖花250g。
制法:取干燥的小茴香 250g,蒲黄250g,桃仁250g,鸦跖花250g,加5000mL水煎煮,煎煮4次,每次2小时,提取液合并,滤过,滤液加水调整总量至5000mL,灌装,每支10mL,灭菌,制成口服液500支。
Claims (5)
1.一种治疗子宫肌瘤的药物组合物,其特征在于,该药物组合物是由以下重量份的原料制成的:小茴香 1,蒲黄1,桃仁1,鸦跖花1。
2.如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,该药物组合物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
3.如权利要求2所述的药物组合物,其特征在于,该药物组合物采用药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
4.如权利要求3所述的药物组合物,其特征在于,该药物组合物采用如下方法制备:取小茴香、蒲黄、桃仁、鸦跖花,混合,加入5~10倍量的水煎煮2~4次,每次0.5~2小时,提取液合并,滤过,滤液浓缩,干燥,粉碎成细粉,加入辅料,混匀,装入硬胶囊,即得。
5.如权利要求1所述的药物组合物在制备治疗子宫肌瘤药物中的应用。
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CN104096011A (zh) | 2014-10-15 |
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PB01 | Publication | ||
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CB03 | Change of inventor or designer information |
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GR01 | Patent grant | ||
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