CN104013928B - 一种治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物，所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝50～300份，茯苓50～400份，莪术50～400份，牡丹皮50～400份，蒲公英50～400份，红花50～400份，桃仁50～400份，夏枯草100～1000份，海藻50～400份，昆布50～400份，香附50～400份，鳖甲50～1000份。本发明还提供其制备方法。应用本发明的药物可有效治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症，且无毒副作用。

Description

一种治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物及其制备方法

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物。

背景技术

子宫肌瘤(Hysteromyoma)又称子宫平滑肌瘤，是女性生殖器最常见的一种良性肿瘤。多无症状，少数表现为阴道出血，腹部触及肿物以及压迫症状等。如发生蒂扭转或其他情况时可引起疼痛。以多发性子宫肌瘤常见。本病确切病因不明，现代西医学采取性激素或手术治疗，尚无其他理想疗法。

子宫内膜异位组织含有雌激素和孕激素受体，使其可以随着月经周期中激素水平的变化而生长和分化。子宫内膜异位症通常限于腹部器官的腹膜表面或者浆膜表面，常见于卵巢、阔韧带后部、后盲管、以及子宫骶韧带(有时形成子宫骶结节)。子宫内膜异位症的临床表现为骨盆疼痛、骨盆包块、月经改变和不孕，而位于肠道或膀胱的病变可在排便或排尿过程中引起疼痛、腹胀以及随着月经而出现的直肠出血(大多数子宫内膜异位植入物在月经期间都会出血)。卵巢或附件结构上的子宫内膜异位植入物可以形成子宫内膜瘤(一种位于卵巢的囊性包块)或附件粘连。据报道，子宫内膜异位症发现于10-15％的25-44岁之间月经活跃的女性，以及25％-50％的不孕女性。

子宫内膜异位症的治疗包括：药物抑制卵巢功能以阻止子宫内膜植入物的生长和活性、保守性手术切除尽可能多的子宫内膜异位组织、前两种治疗的组合应用以及全子宫切除术，通常同时切除卵巢和输卵管。药物治疗包括：雌激素抑制，促性腺激素释放激素激动剂或拮抗剂，雄激素以及孕激素，但是都存在一定的副作用。如雌激素抑制的副作用包括腹胀、乳房触痛、突破出血以及深静脉血栓形成等。

而中医的优势就在于可免除手术带来的痛苦和西药激素对身体的危害，中药制剂对身体的危害小，副作用小，能够治标治本，从根本上解决问题，因此开发出一种治疗子宫肌瘤和子宫内膜异位症的中药药物势在必行。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物及其制备方法。

本发明提供了一种治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物，所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝50～300份，茯苓50～400份，莪术50～400份，牡丹皮50～400份，蒲公英50～400份，红花50～400份，桃仁50～400份，夏枯草100～1000份，海藻50～400份，昆布50～400份，香附50～400份，鳖甲50～1000份。

优选地，所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝100～200份，茯苓160-300份，莪术160-300份，牡丹皮160-300份，蒲公英160-300份，红花160-300份，桃仁160-300份，夏枯草570-700份，海藻160-300份，昆布160-300份，香附160-300份，鳖甲570-750份。

更优选地，所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝152份，茯苓228份，莪术228份，牡丹皮228份，蒲公英228份，红花228份，桃仁228份，夏枯草760份，海藻228份，昆布228份，香附228份，鳖甲380份。

本发明的第二个目的是要求保护药物的剂型，所述药物的剂型为片剂或丸剂。

本发明的第三个目的是要求保护上述治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的制备方法，包括片剂和丸剂的制备，所述片剂的制备方法为：取配方量的十二味药，将桂枝5～100克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附等4味加5～14倍20～95％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～3小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，20～100℃真空干燥；另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲等七味加5～14倍水提取1～3次，每次0.5～3小时；500～4000r/min转速离心5～60分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，20～100℃真空干燥；将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、细粉总质量1～10％的微晶纤维素、1～10％的羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量50％～95％乙醇制成颗粒，干燥，加0.5～3％硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣(转速10～200r/min，风温20～100℃)，即得。

进一步地，所述丸剂的制备方法为：取配方量的十二味药，粉碎成细粉，过筛(必须符合《中国药典》对细粉的要求，即能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95％的粉末)，混匀；每100g粉末加炼蜜100-120g，制成蜜丸，即得。

本发明的第四个目的是要求保护上述药物在制备治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物中的应用。

本发明组方为桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、莪术、红花、蒲公英、鳖甲、夏枯草、昆布、香附、海藻等十二味药材。方中桂枝温经、行气、通阳，暖宫消疲，温肾扶阳、利水消积；牡丹皮、桃仁、莪术理气活血、消癥散结；茯苓渗湿健脾；红花活血中之滞；鳖甲、海藻软坚散结、养阴清热。具有通络散瘀，软坚散结，清热消坚的功效，用于气滞血瘀、瘀热内结所致的妇人盆腔结块癥积，子宫肌瘤、子宫内膜异位症、盆腔炎性包块等病。诸方合用，达到治愈子宫肌瘤和子宫内膜异位症的功效。

本发明的丸剂已有多年的临床应用经验，有较完整的药效学和毒理学资料，有确切的疗效，适用于治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症，且无毒副作用；本发明的片剂是在丸剂的基础上改变剂型的成果，所采用的的制剂工艺能保证药物的有效性，片剂质量在原料药、中间体、制剂各个环节均有可靠保证，能为临床试验提供质量合格的药品。经试验，本发明的片剂同样能够用于治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的配方由以下质量份数的各组分组成：

桂枝152份，茯苓228份，莪术228份，牡丹皮228份，蒲公英228份，红花228份，桃仁228份，夏枯草760份，海藻228份，昆布228份，香附228份，鳖甲380份。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的片剂的制备方法如下：

取桂枝152g，茯苓228g，莪术228g，牡丹皮228g，蒲公英228g，红花228g，桃仁228g，夏枯草760g，海藻228g，昆布228g，香附228g，鳖甲380g；以上十二味，将桂枝33克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附等4味加14倍60％乙醇回流提取二次，每次1.5小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，60℃真空干燥。另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲等七味加14倍水提取三次，每次1小时。3000r/min转速离心25分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，60℃真空干燥。将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏细粉总质量5％的微晶纤维素、5％的羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量90％～93％乙醇制成颗粒，干燥，加质量百分比1％硬脂酸镁混匀，压成1000片(0.4克/片，40～50N)，包薄膜衣(转速30r/min，风温30℃)，即得。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的丸剂的制备方法如下：

取配方量的桂枝，茯苓，莪术，牡丹皮，蒲公英，红花，桃仁，夏枯草，海藻，昆布，香附，鳖甲，粉碎成细粉，过筛(必须符合《中国药典》对细粉的要求，即能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95％的粉末)，混匀。每100克粉末加炼蜜100～120g，制成大蜜丸或小蜜丸，即得。

实施例2

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的配方由以下质量份数的各组分组成：

桂枝50份，茯苓50份，莪术50份，牡丹皮50份，蒲公英50份，红花50份，桃仁50份，夏枯草100份，海藻50份，昆布50份，香附50份，鳖甲50份。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的片剂的制备方法如下：

取桂枝50g，茯苓50g，莪术50g，牡丹皮50g，蒲公英50g，红花50g，桃仁50g，夏枯草100g，海藻50g，昆布50g，香附50g，鳖甲50g。以上十二味，取桂枝5克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附等4味加5倍20％乙醇回流提取3次，每次0.5小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，20℃真空干燥。另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲等七味加5倍水提取3次，每次0.5小时。4000r/min转速离心5分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，20℃真空干燥。将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏细粉总质量8％的微晶纤维素、8％的羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量50-55％乙醇制成颗粒，干燥，加质量百分比0.5％硬脂酸镁混匀，压成0.4克/片的片剂(20-30N)，包薄膜衣(转速10r/min，风温100℃)，即得。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的丸剂的制备方法与实施例1中相同。

实施例3

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的配方由以下质量份数的各组分组成：

桂枝300份，茯苓400份，莪术400份，牡丹皮400份，蒲公英400份，红花400份，桃仁400份，夏枯草1000份，海藻400份，昆布400份，香附400份，鳖甲1000份。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的片剂的制备方法如下：

取桂枝300g，茯苓400g，莪术400g，牡丹皮400g，蒲公英400g，红花400g，桃仁400g，夏枯草1000g，海藻400g，昆布400g，香附400g，鳖甲1000g。将桂枝100克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附等4味加12倍95％乙醇回流提取2次，每次2小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，80℃真空干燥。另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲等七味加12倍水提取2次，每次1.5小时。2000r/min转速离心40分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，80℃真空干燥。将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏细粉总质量4％微晶纤维素、4％羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量60-65％乙醇制成颗粒，干燥，加质量百分比2％硬脂酸镁混匀，压成0.4克/片的片剂(100-120N)，包薄膜衣(转速70r/min，风温50℃)，即得。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的丸剂的制备方法与实施例1中相同。

实施例4

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的配方由以下质量份数的各组分组成：

桂枝200份，茯苓300份，莪术300份，牡丹皮300份，蒲公英300份，红花300份，桃仁300份，夏枯草700份，海藻300份，昆布300份，香附300份，鳖甲750份。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的片剂的制备方法如下：

取桂枝200g，茯苓300g，莪术300g，牡丹皮300g，蒲公英300g，红花300g，桃仁300g，夏枯草700g，海藻300g，昆布300g，香附300g，鳖甲750g。将桂枝55克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附等4味加8倍72％乙醇回流提取1次，提取3小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，100℃真空干燥。另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲等七味加8倍水提取1次，每次3小时。2500r/min转速离心60分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，100℃真空干燥。将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏细粉总质量6％微晶纤维素、6％羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量80-85％乙醇制成颗粒，干燥，加质量百分比3％硬脂酸镁混匀，压成0.4克/片的片剂(170-180N)，包薄膜衣(转速100r/min，风温80℃)，即得。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的丸剂的制备方法与实施例1中相同。

实施例5

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的配方由以下质量份数的各组分组成：

桂枝100份，茯苓160份，莪术160份，牡丹皮160份，蒲公英160份，红花160份，桃仁160份，夏枯草570份，海藻160份，昆布160份，香附160份，鳖甲570份。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的片剂的制备方法如下：

取桂枝100g，茯苓160g，莪术160g，牡丹皮160g，蒲公英160g，红花160g，桃仁160g，夏枯草570g，海藻160g，昆布160g，香附160g，鳖甲570g。将桂枝15克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附等4味加6倍80％乙醇回流提取3次，提取0.5小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，65℃真空干燥。另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲等七味加6倍水提取3次，每次0.5小时。1000r/min转速离心35分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，65℃真空干燥。将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏细粉总质量9％微晶纤维素、9％羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量90-93％乙醇制成颗粒，干燥，加质量百分比1.5％硬脂酸镁混匀，压成0.4克/片的片剂(180-200N)，包薄膜衣(转速180r/min，风温100℃)，即得。

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的丸剂的制备方法与实施例1中相同。

实施例6

本发明的治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的药理、毒理学研究结果如下：

经试验，应用本发明的方法制备得到的片剂和丸剂均对子宫肌瘤和子宫内膜异位症有良好的治疗效果，其中，应用实施例4和5的配方及方法制备的片剂和丸剂治疗效果较好，应用实施例1的配方及方法制备的片剂和丸剂治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的效果最佳，以下将以实施例1制备的片剂(为了方便区分，在下述试验中，本发明将片剂称为桂红鳖甲片)和丸剂(以下称为消瘤丸)详细说明研究结果。

1桂红鳖甲片和消瘤丸对内膜异位的作用

1.1桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠子宫内膜异位的作用

健康雌性SD大鼠90只，体重250±20g，适应性饲养3d后，随机选取10只作为空白对照组，其余80只用于造模。造模前一日，每鼠皮下注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg﹒d。以20％的乌拉坦(4ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，下腹部剃毛后，用75％的酒精消毒。在下腹正中纵切一切口约2cm，暴露子宫。结扎右侧卵巢端，并将右侧子宫角远端长约1.5cm的子宫段结扎后剪下，放入盛有无菌生理盐水的培养皿中。剪成5mm×5mm的子宫组织(包括肌层)2块，以浆膜面对腹膜，粘膜面朝向腹腔，用6-0的不吸收线分别固定四角于切口两侧腹壁肌肉，逐层连续缝合腹部切口，常规关腹。注意观察大鼠的呼吸、心跳，待其自然苏醒。术后肌注青霉素预防感染，共3d，术后第二天注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg﹒d，每三天一次，共5次。

术后第15天，将造模成功动物随机分为6组，即模型组、桂红鳖甲片低(0.35g/kg；相当于含生药量2.926g/kg)、中(0.70g/kg；相当于含生药量5.852g/kg)、高(1.40g/kg；相当于含生药量11.704g/kg)剂量组，消瘤丸组(4.50g/kg；相当于含生药量2.25g/kg)，桂枝茯苓胶囊对照组(0.25g/kg)，配制相应浓度药物，按1.0ml/100g进行灌胃，空白对照组灌胃蒸馏水1.0ml/100g，连续给药30天。

给药结束后，所有大鼠用乙醚麻醉，打开腹腔，观察异位内膜病灶生长情况，并测量记录异位内膜的长度、宽度、厚度，计算异位体积，并记录异位组织毛细血管以及粘连情况，将异位组织连同粘连的旁组织剪下固定于10％的甲醛中作病理检查以及免疫组化法检测CD34的表达情况，解剖取卵巢称重，计算器官系数(卵巢重量/大鼠体重×100％，％)。

免疫组化染色步骤：石蜡切片常规脱蜡水化，滴加4％过氧化氢，放置20min，加热修复抗原30min，PBS磷酸盐缓冲液冲洗3min×3次，滴加一抗(1:50)，4℃孵育过夜，PBS冲洗3min×3次，二抗孵育20min，PBS冲洗3min×3次，DBA显色，苏木素复染后中性树胶封片，显微镜下观察。染色后每只实验动物切片随机选取具有代表性的400倍镜视野观察、计数，读片参照Formwitz评分方法，以切片中部细胞作为基数100％，根据受体阳性细胞百分数及染色深浅分四级：-级(阴性)：阳性细胞＜25％(1分)或不染色(1分)；+级(弱阳性)：阳性细胞25％～50％(2分)，阳性染色呈黄色、较清晰(2分)；++级(阳性)：阳性细51％～75％(3分)，阳性染色呈棕黄色、清晰(3分)；+++级(强阳性):阳性细胞＞75％(4分)，细胞浆为褐色(4分)；以两次评分的积作为最终分数。

1.2桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠子宫内膜异位症的作用

雌性昆明种小鼠90只，体重25±2g，造模前两日肌注苯甲酸雌二醇0.05mL/只﹒d。第3天除正常对照组12只外，其余78只动物进行造模，腹腔注射10％乌拉坦麻醉25mL/kg，固定于手术台上，腹部消毒；打开腹腔，将小鼠左侧子宫卵巢端及阴道端两侧结扎后，剪下，纵剖成2片(5mm×5mm)，缝在双侧腹壁上。术后三天每日腹腔注射青霉素170万U/kg，术后每周肌肉注射苯甲酸雌二醇0.05mL/只﹒次，注射两次，以促使异位子宫内膜的生长。

实验第2周造模成功动物随机分6组，即为模型组、桂红鳖甲片低剂量组(0.5g/kg)、桂红鳖甲片中剂量组(1.0g/kg)、桂红鳖甲片高剂量组(2.0g/kg)，消瘤丸组(9.0g/kg，相当于含生药量4.5g/kg)，和桂枝茯苓胶囊组(1.6g/kg)。各组动物按0.2mL/10g灌胃给药，空白对照组和模型组分别给予等量蒸馏水，连续给药5周。

末次给药后30分钟颈椎脱臼处死动物，固定于手术台上，剃毛，腹部消毒，打开腹腔，观察异位内膜病灶生长情况，并测量记录异位内膜的长度、宽度、厚度，将子宫及异位组织连同粘连的旁组织剪下固定于10％的甲醛中作病理检查、免疫组化法检测CD34和VEGF的表达情况，称量卵巢的重量，计算器官系数(卵巢重量/小鼠体重×100％，％)。

免疫组化染色步骤：石蜡切片常规脱蜡水化，滴加4％过氧化氢，放置20min，加热修复抗原30min，PBS磷酸盐缓冲液冲洗3min×3次，滴加一抗(VEGF1:50，CD341:50)，4℃孵育过夜，PBS冲洗3min×3次，二抗孵育20min，PBS冲洗3min×3次，DBA显色，苏木素复染后中性树胶封片，显微镜下观察。染色后每只实验动物切片随机选取具有代表性的400倍镜视野观察、计数，读片参照Formwitz评分方法，以切片中部细胞作为基数100％，根据受体阳性细胞百分数及染色深浅分四级：-级(阴性)：阳性细胞＜25％(1分)或不染色(1分)；+级(弱阳性)：阳性细胞25％～50％(2分)，阳性染色呈黄色、较清晰(2分)；++级(阳性)：阳性细51％～75％(3分)，阳性染色呈棕黄色、清晰(3分)；+++级(强阳性):阳性细胞＞75％(4分)，细胞浆为褐色(4分)；以两次评分的积作为最终分数。

1.3数据统计方法

结果用均数±标准差表示，数据采用SPSS17.0统计软件进行分析，两组间比较采用t检验。

1.4.实验结果

1.4.1桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠子宫内膜异位症的作用

1.4.1.1桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠体重与卵巢系数的影响，结果见表1。

表1 桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠体重、卵巢系数的影响

注：^*与空白对照组比较P＜0.05，^**与空白对照组比较P＜0.01；^##与模型组比较P＜0.01。

1.4.1.2子宫内膜异位灶生长情况比较，结果见表2。

动物处死后剖腹观察外观，并用卡尺测量各组异位灶囊液高度，将两侧异位灶生长情况分为4级：(1)萎缩或未生长(-)：异位灶缩小或伴有色泽泛黄，或仅见异位灶存在但无液体积聚；(2)低度生长(+)：异位灶内有少量液体；(3)中度生长(++)：异位灶中有囊液，但积液高度<2mm；(4)生长良好(+++)：异位灶囊液高度≥2mm。

表2 桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠异位灶囊液情况的影响(n＝10)

1.4.1.3子宫内膜异位灶血管丰富度观察，结果见表3。

分级标准：(1)异位灶血管较丰富(+++)；(2)异位灶血管分布较少(++)；(3)异位灶基本无血管分布(+)；(4)异位组织未见血管分布(-)。

表3 桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠异位组织血管分布情况的影响(n＝10)

1.4.1.4子宫内膜异位灶粘连情况观察，结果见表4。

分级标准：(1)异位组织与肠粘膜或其他组织高度粘连(+++)，并覆盖有脂肪组织；(2)异位组织与其他组织轻度粘连，并覆盖少许脂肪组织(++)；(3)异位组织基本无粘连，或轻轻剥离即开(+)；(4)异位组织未出现任何粘连(-)。

表4 桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠子宫内膜异位组织粘连情况的影响(n＝10)

1.4.1.5子宫内膜异位灶面积、体积观察比较，结果见表5。

表5 各组大鼠治疗前后异位病灶面积、体积的比较(n＝10)

注：^#与模型组比较P＜0.05，^##与模型组比较P＜0.01。

1.4.1.6子宫内膜异位灶中CD34表达变化，结果见表6。

表6 桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠子宫内膜异位灶CD34表达水平的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05。

1.4.1.7子宫异位内膜组织病变程度的比较，结果见表7。

表7 大鼠异位内膜组织病理观察统计表(只，n＝10)

1.4.2桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠子宫内膜异位症作用的研究结果

1.4.2.1桂红蹩甲片和消瘤丸对小鼠体重的影响，结果见表8。

表8 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠体重的影响

1.4.2.2桂红蹩甲片和消瘤丸对小鼠异位内膜病灶的影响，结果见表9。

表9 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠子宫内膜异位症病灶的影响

注：^#与模型组比较P＜0.05；^△与消瘤丸组比较P<0.05，^◇桂枝茯苓组比较P<0.05。

1.4.2.3桂红蹩甲片和消瘤丸对子宫内膜异位症小鼠异卵巢系数的影响，结果见表10。

表10 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠子宫内膜异位症卵巢系数的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05。

1.4.2.4桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠内膜异位病灶CD34与VEGF的表达，结果见表11。

表11 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠子宫内膜异位灶CD34与VEGF表达水平的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05，#与模型组比较P<0.05

1.4.2.5桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠异位内膜组织病理观察，结果见表12。

表12 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠异位内膜组织病理学改变的影响

实验结果表明桂红鳖甲片可以抑制子宫内膜移组织的生长；桂红鳖甲片高剂量组和消瘤丸组在大鼠异位内膜假腺体和炎性细胞浸润的程度、范围上较模型组有所减轻；免疫组化结果经评分法分析后显示，大鼠子宫内膜异位模型组阳性表达明显高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；桂红鳖甲片各给药组与模型组相比，CD34表达虽有下降趋势，但无显著性差异，消瘤丸组、桂枝茯苓组较模型组比较亦无显著性差异(P>0.05)；小鼠子宫内膜异位模型组阳性表达明显高于空白对照组(P＜0.05)；与模型组相比，消瘤丸组、桂枝茯苓组较模型组比较阳性表达没有明显性差异，桂红鳖甲片各药物治疗组CD34与模型组比较明显降低(P＜0.05)。提示，桂红鳖甲片可以降低实验动物内膜移植组织中CD34的表达；桂红鳖甲片高剂量组VEGF表达显著下降(P＜0.05)，桂红鳖甲片高剂量组可以降低小鼠内膜异位组织中VEGF的表达水平；在桂红鳖甲片作用于大鼠子宫内膜异位实验中，我们发现模型组动物胸腺系数、脾脏系数与空白对照组比较有所下降，给药后，桂红鳖甲片低、中、高剂量组与消瘤丸组胸腺系数、脾脏系数有所升高，但结果与模型组比较无显著性差异(P>0.05)，桂枝茯苓组与模型组比较胸腺系数升高，结果无显著性差异(P>0.05)；在桂红鳖甲片作用于小鼠子宫内膜异位实验中，模型组小鼠胸腺系数较正常对照组明显降低(P<0.05)，脾脏系数明显升高(P<0.05)，桂红鳖甲片各给药组与模型组比较脾脏系数有所下降，胸腺系数稍有上升，但均没有显著性差异。实验数据显示桂红鳖甲片对子宫内膜异位症大鼠、小鼠免疫功能的恢复具有一定的调节作用，但实验数据不具有统计学差异；实验发现大鼠子宫内膜异位症模型组卵巢系数较正常对照组明显升高(P<0.01)，经药物作用后，各组实验动物卵巢系数有所降低，桂红鳖甲片高剂量组实验动物卵巢系数与模型组比较显著降低(P<0.01)，与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。实验发现小鼠子宫内膜异位症模型组卵巢系数较正常对照组下降，各给药组及阳性对照组均不同程度上升。因此，桂红鳖甲片及消瘤丸对实验性大鼠、小鼠子宫内膜异位症具有一定的治疗作用。

2桂红鳖甲片和消瘤丸对子宫肌瘤作用的研究

2.1桂红鳖甲片和消瘤丸的镇痛作用

2.1.1对醋酸致痛小鼠扭体反应的影响

取健康雌性小鼠60只(20±2g)，随机分为6组，每组10只，分别为：空白对照组，桂红鳖甲片低剂量组(0.5g/kg；相当于含生药量4.18g/kg)、桂红鳖甲片中剂量组(1.0g/kg；相当于含生药量8.36g/kg)、桂红鳖甲片高剂量组(2.0g/kg；相当于含生药量16.72g/kg)，消瘤丸组(9.0g/kg；相当于含生药量4.5g/kg)，和桂枝茯苓胶囊组(1.6g/kg)，配制相应浓度，按0.2ml/10g对动物进行灌胃给药，空白对照组给予等量的蒸馏水。各组分别连续灌胃给药7天，末次给药后30min，每只小鼠腹腔注射致痛剂0.6％醋酸溶液10ml/kg。观察小鼠的扭体反应，以腹部收缩、伸展后肢或臀部抬高为扭体反应阳性。注射醋酸后5min开始记录20min内每只小鼠扭体的次数及每组扭体小鼠数，计算各组的扭体抑制率。结果参见表13。抑制率＝(空白对照组扭体数一给药组扭体数)/空白对照组扭体数×100％。

表13 桂红鳖甲片和消瘤丸对醋酸致痛小鼠扭体反应的影响结果

注：^*与空白对照组比较P<0.05，^△与消瘤丸组比较P<0.05，^◇与桂枝茯苓组比较P<0.05。

2.1.2对小鼠热板法致痛反应的影响

于实验前一天用热板法进行痛阈筛选，热板仪温度控制在(55.0±0.5)℃，将小鼠放在热板上，记录小鼠第一次舔后足的时间，作为该小鼠的痛阈值，将痛阈值<5s或者>30s或跳跃者弃之不用。取筛选合格的雌性小鼠60只，间隔5min再重新测定痛阈值1次，将2次痛阈值的平均值作为该鼠给药前痛阈值。将上述入选小鼠称重，随机分为6组，每组10只，分别为：空白对照组，桂红鳖甲片低剂量组(0.5g/kg)、桂红鳖甲片中剂量组(1.0g/kg)、桂红鳖甲片高剂量组(2.0g/kg)，消瘤丸组(9.0g/kg；相当于含生药量4.5g/kg)，和桂枝茯苓胶囊组(1.6g/kg)，配制相应浓度后，按0.2ml/10g对动物进行灌胃给药，空白对照组给予等量的蒸馏水。各组分别连续灌胃给药7天，于末次给药后0.5h、1h、3h、5h将各组动物分别放置于热板测痛仪上，测定痛阈值。若在热板上60s仍无反应的立即取出，其痛阈值按60s计算。结果参见表14。

表14 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠热板法致痛作用的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05，^◇与桂枝茯苓组比较P<0.05。

2.1.3对小鼠尾热刺痛的影响

将上述热板法实验小鼠继续灌胃给药3天，末次给药后1h和2h，将小鼠固定，尾下部1/3处垂直至于热刺痛仪红外光下，以小鼠尾巴甩开红外光的时间为甩尾潜伏期。结果参见表15。

表15 桂红鳖甲片和消瘤丸对小鼠尾热刺痛的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05，^◇与桂枝茯苓组比较P<0.05

由表13-15可以看出，桂红鳖甲片中、高剂量组与空白对照组比较，可以较为明显的抑制小鼠扭体次数(P<0.05)，对内脏钝痛有镇痛作用；桂红鳖甲片对热板致痛小鼠的镇痛效果不明显；桂红鳖甲片各给药组与消瘤丸给药1h后，对小鼠尾热刺痛耐受力增强，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05)。说明桂红鳖甲片对内脏钝痛有镇痛作用。

2.2桂红鳖甲片和消瘤丸的抗炎作用

2.2.1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

取健康昆明种雌性小鼠60只(20±2g)，随机分为6组，每组10只，分别为：空白对照组，桂红鳖甲片低剂量组(0.5g/kg)、桂红鳖甲片中剂量组(1.0g/kg)、桂红鳖甲片高剂量组(2.0g/kg)，消瘤丸组(9.0g/kg；相当于含生药量4.5g/kg)，和桂枝茯苓胶囊组(1.6g/kg)，配制相应浓度，按0.2ml/10g对动物进行灌胃给药，空白对照组给予等量的蒸馏水。各组均连续给药7天，末次给药30min后，将二甲苯30μl/20g涂于小鼠右耳廓致炎，左耳不涂为对照。致炎1h后处死动物，用直径8mm的打孔器在两耳对称位置取下左右耳片称重，以左右耳片重量差作为肿胀度(mg)：右耳片重量-左耳片重量，并计算肿胀率，肿胀抑制率＝(空白组平均肿胀度一给药组平均肿胀度)/空白组平均肿胀度。结果参见表16。

表16 桂红鳖甲片和消瘤丸对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05。

2.2.2对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

取健康昆明种雌性小鼠60只(20±2g)，按体重随机分为6组，每组10只。分别为：空白对照组，桂红鳖甲片低剂量组(0.5g/kg)、桂红鳖甲片中剂量组(1.0g/kg)、桂红鳖甲片高剂量组(2.0g/kg)，消瘤丸组(9.0g/kg；相当于含生药量4.5g/kg)，和桂枝茯苓胶囊组(1.6g/kg)，配制相应浓度，按0.2ml/10g对动物进行灌胃给药，空白对照组给予等量的蒸馏水。各组均连续给药7天，末次给药30min后，尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，随即腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g。20min后，向小鼠腹腔内注射5ml生理盐水，然后将小鼠脱颈处死，轻揉小鼠腹部，仔细吸出洗涤液约2ml，3000rpm离心15min，上清在722型分光光度计590nm处测OD值。结果参见表17。

表17 桂红鳖甲片和消瘤丸对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05，^△与消瘤丸组比较P<0.05。

由表16和17可以看出，二甲苯致小鼠耳肿胀试验中，桂红鳖甲片高剂量组能显著抑制小鼠右耳肿胀度(P<0.05)；小鼠腹腔毛细血管通透性试验中，随着给药剂量的增加，桂红鳖甲片能减轻冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性，与空白对照组比较，中、高剂量组有统计学意义(P<0.05)，说明桂红鳖甲片具有抗急性炎症作用。

2.3对实验性大鼠子宫肌瘤作用研究

健康雌性SD大鼠70只，体重(200±20g)，实验动物适应性饲养3d。随机分为正常对照组(10只)与造模组(60只)2组。造模组隔日肌内注射苯甲酸雌二醇注射液0.05mg/100g，3次/周，10周后将造模组动物随机平均分为模型组、桂红鳖甲片低(0.35g/kg；相当于含生药量2.926g/kg)、中(0.70g/kg；相当于含生药量5.852g/kg)、高(1.40g/kg；相当于含生药量11.704g/kg)剂量组，消瘤丸对照组(4.50g/kg；相当于含生药量2.25g/kg)，桂枝茯苓胶囊对照组(0.25g/kg)6组，10周后上述造模动物同时肌肉注射黄体酮注射液0.5mg/100g，2次/周，连续6周。第11周开始，按1.0ml/100g对各实验组动物进行灌胃给药，空白对照组灌胃蒸馏水1.0ml/100g，连续6周，各组动物每周称取体重一次。

给药结束后，所有大鼠用乙醚麻醉，腹主动脉取血，血液室温下静置20min后，2000r/min，离心10min，分离血清，用于测雌二醇(E2)、孕酮(P)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，按说明书操作。并解剖取子宫、卵巢、脾脏、胸腺，观察子宫和肌瘤形态，计算器官系数[子宫、卵巢、胸腺、脾脏重量/大鼠体重×100％，％]，游标卡尺测量左、右宫角长度(mm)、左、右宫角最大直径(mm)、宫颈长度(mm)、宫颈上、下宽度(mm)。

并将子宫剪下固定于10％甲醛固定液中，常规酒精脱水，蜡包埋，HE染色。取子宫分角以上0.5cm相同部位一段子宫，石蜡包埋、切片，HE染色作病理学检查，光学生物显微镜观察平滑肌细胞的病理改变及子宫平滑肌的厚度变化，同时取相同部位切片，采用免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况，免疫组化染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，滴加4％过氧化氢，放置20min，加热修复抗原20min，PBS磷酸盐缓冲液冲洗3min×3次，滴加一抗(1:100)，湿盒内4℃孵育过夜。PBS冲洗3min×3次，二抗孵育20min，PBS冲洗3min×3次，DBA显色，中性树胶封片，显微镜下观察。染色后每只实验动物切片随机选取2个具有代表性的400倍不同视野观察、计数，读片参照Formwitz评分方法，以切片中部细胞作为基数100％，根据受体阳性细胞百分数及染色深浅分四级：-级(阴性)：阳性细胞＜25％(1分)或不染色(1分)；+级(弱阳性)：阳性细胞25％～50％(2分)，阳性染色呈黄色、较清晰(2分)；++级(阳性)：阳性细51％～75％(3分)，阳性染色呈棕黄色、清晰(3分)；+++级(强阳性):阳性细胞＞75％(4分)，细胞浆为褐色(4分)；以两次评分的积作为最终分数。结果参见表18-23。

表18 给药期间各组动物体重变化(g)

注：^**与同时期空白对照组比较P＜0.01；﹟与同时期模型组比较P＜0.05，﹟﹟与同时期模型组比较p＜0.01。

表19 桂红鳖甲片和消瘤丸对造模后大鼠子宫形态变化的影响

注：^*与空白对照组比较P＜0.05，^**与空白对照组比较P＜0.01；﹟与模型组比较P＜0.05，﹟﹟与模型组比较P＜0.01。

表20 桂红鳖甲片和消瘤丸对造模后大鼠子宫湿重及子宫、卵巢、脾脏、胸腺器官系数的影响

注：^*与空白对照组比较P＜0.05，^**与模型组比较P＜0.01；﹟与比较P＜0.05，﹟﹟与组比较P＜0.01。

表21 桂红鳖甲片和消瘤丸对大鼠血清TNF-、E2、P值的影响

注：^**与空白对照组比较P＜0.01；﹟与模型组比较P＜0.05，﹟﹟与模型组比较P＜0.01。

表22 大鼠子宫组织病理观察统计表

表23 桂红鳖甲片对大鼠子宫肌瘤VEGF表达的影响

注：^*与空白对照组比较P<0.05，﹟与模型组比较P<0.05

其中，各个实验的数据处理方法为：结果用均数±标准差表示，数据采用SPSS17.0统计软件进行分析，两组间比较采用t检验。

由上可以看出，用雌激素、孕激素负荷造大鼠子宫肌瘤模型，经过一个月的给药治疗，桂红鳖甲片治疗组和消瘤丸治疗组大鼠子宫与模型组大鼠子宫比较，子宫角长度、子宫角横径、宫颈长度、宫颈宽度均有明显缩小；给药后实验动物卵巢系数、脾脏系数、胸腺系数出现不同程度的升高；经药物治疗后，TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、E2(雌二醇)数值出现降低趋势；与模型组相比，桂红鳖甲片低剂量组、中剂量组和消瘤丸组VEGF(血管内皮生长因子)表达均有不同程度的降低(P＜0.05)。结果表明桂红鳖甲片对雌激素、孕激素负荷诱导的实验性大鼠子宫肌瘤有一定的治疗作用。

3急性毒性试验

3.1剂量设计与分组

3.1.1预试给药方法：体重18-22g的小鼠，每组10只，雌雄各半，禁食不禁水10h后开始给药，以桂红鳖甲片浸膏粉最大给药浓度45％的药液小鼠灌胃，依次容量为0.2ml/10g、0.3ml/10g、0.4ml/10g，各按每日1次或2次灌胃，共6组，每组10只，观察小鼠反应，给药2h后，停止禁食。结果，仅灌胃45％浓度0.2ml/10g，两次/天，间隔4小时，符合桂红鳖甲片浸膏粉的最大剂量(最大给药浓度、最大给药体积，小鼠不足以致死)。

3.1.2计量设置依据

根据预试结果，以桂红鳖甲片内容物最大给药浓度45％，0.2ml/10g的体积给予小鼠，一天给药两次，间隔4小时，未见小鼠死亡，由于给药浓度和容量的限制，只能测定其最大耐受量(MTD)。

3.1.3动物分组

将小鼠于实验前，实验中称体重，按体重随机分组为2个组，每组动物20只，雌雄各半，分别为给药组和对照组。

3.2给药途径、频率、方法

3.2.1给药途经：灌胃给药

3.2.2给药频率：一天2次，间隔4小时。

3.2.3给药方法：小鼠禁食不禁水10小时后，以桂红鳖甲片内容物最大给药浓度45％，0.2ml/10g的体积给予小鼠，一天给药两次，间隔4小时，给药2小时后结束禁食。

3.3指标测定方法

3.3.1观察时间：14天

3.3.2观察动物毒性反应情况：给药后即刻、2h、4h、6h。试验第2天至第14天，每日上午观察一次，下午观察一次，根据《中药、天然药物毒性研究技术指导原则》第三稿中的《实验动物毒性反应指标表》详细观察动物反应。

3.3.3第14天处死所有动物，解剖肉眼观察脏器的病变情况，如果有明显的异常，取部分动物的心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等脏器做病理学观察。

3.4实验结果

3.4.1.临床表征

毒性反应的表现为给药后活动减少，腹卧，2小时后活动恢复正常，未见小鼠死亡或其他异常现象。

3.4.2.计算小鼠的MTD

临床用量：临床拟用量一次3片，一日3次，制粒前的干浸膏8.36g生药/g，每片重0.4g，相当于含生药3.344g/片，即0.4g浸膏/片。

小鼠灌胃的药液浓度为45％，0.2ml/10g，一天两次。

故小鼠的MTD为18g/kg，即150g生药/kg。

3.4.3.表24为对小鼠体重的影响

表24 对小鼠体重的影响

注：给药组与对照组比较：P均大于0.05。

3.4.4.病理解剖

解剖肉眼观察脏器的病变情况，未见小鼠脏器有异常现象。

4长期毒性实验

4.1动物分组：

购入的180只大鼠观察检疫7天后，将检疫合格的160只大鼠按性别随机分为4组，分别为溶媒对照组(I组)，桂红鳖甲片低(II组)、中(III组)、高(IV组)三个剂量组。每组40只，雌雄各半。

4.2剂量设计及依据：

4.2.1剂量设计依据

4.2.1.1前期毒性研究资料

急毒实验结果表明，桂红鳖甲片最大给药浓度45％(w/v)，最大给药体积(0.2ml/10g.bw)灌胃给予小鼠，一日2次，2次给药间隔4h，动物未出现死亡，其最大耐受量(MTD)为18g/kg，即150g生药/kg。提示桂红鳖甲片对小鼠无明显毒性。

4.2.1.2临床成人每天每公斤体重用药量

桂红鳖甲片临床拟用剂量：一次3片，一日3次，1片所含生药量相当于原药材3.344g，即成人每日用量按原药材计为30.096g。桂红鳖甲片1g干浸膏相当于8.36g生药材，成人每日用量按桂红鳖甲片(浸膏粉)计为3.6g。成人体重按60kg计算，即成人每日每公斤用药量为3.6g/60kg＝0.06g浸膏/kg。

4.2.2剂量设计

大鼠6个月长期毒性低、中、高剂量组给药量分别为临床成人每日每公斤体重用药量的17.5、35、70倍，即1.05g/kg、2.10g/kg、4.20(浸膏)g/kg·d，即8.77g、17.54g、35.11g(生药)/kg·d，以0.5％CMC-Na溶液配制，浓度分别为10.5％、21％、42％的混悬药液。溶媒溶媒对照组：经口灌服等体积0.5％CMC-Na混悬液。剂距：2倍。

4.3给药方法：

(1)给药途径及选择理由：临床上拟用口服给药，本实验采用与临床一致的给药途径，灌胃给药；

(2)给药时间：大鼠进行观察检疫1周后，连续给药6个月；

(3)给药频率：每周给药6天，周日不给药；

(4)给药体积：1ml/100g.bw。

4.4观察指标和时间

(1)一般症状观察：每日观察大鼠一般形态外观、行为活动、饮食情况、分泌物、排泄物等，同时观察动物中毒反应的症状，起始时间，严重程度，持续时间，是否可逆，填写笼旁观察表。

(2)体重：每周测定体重一次，并根据体重调整给药剂量。

(3)饲料消耗量：每周称量动物的给料量和剩余量，计算动物一周的饲料消耗量。摄食量(g)＝给料量-剩余量。饲料消耗量(g/100g.bw.7d)＝摄食量/体重×100。

(4)血液学指标：给药中期、末期和恢复期结束时各测1次，共3次。检测下列项目：红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板计数(PLT)、白细胞计数(WBC)、淋巴细胞百分含量(LYM％)、中间细胞百分含量(MID％)、粒细胞百分含量(GRA％)、网织红细胞数(Ret％)、凝血酶原时间(PT)。结果与溶媒对照组比较。

(5)血液生化学指标：给药中期、末期和恢复期结束时各测1次，共3次。检测下列项目：丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)、碱性磷酸酶(ALP)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、肌酐(Crea)、总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)、钾离子浓度(K⁺)、钠离子浓度(Na⁺)、氯离子浓度(Cl^-)。

(6)大体解剖：肉眼观察动物各器官组织大体变化情况。给药中期、末期和恢复期结束时各检查1次，共计3次。给药后濒死或给药期间死亡动物均应及时进行大体解剖；

(7)脏器重量及脏器系数：给药中期、末期和恢复期结束时各检查1次，共计3次。检测下列脏器：脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫。脏器系数＝脏器重量/体重×100。

(8)组织病理学检查：给药中期、末期和恢复期结束时各检查1次，共计3次。检测下列脏器：皮肤、脑(大脑、小脑、脑干)、视神经、垂体、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脊髓(颈、胸、腰段)、胸腺、胃、胰腺、大肠和小肠、膀胱、淋巴结(颈部、肠系膜淋巴结)、甲状腺、甲状旁腺、主动脉、睾丸、附睾、前列腺、卵巢、子宫、气管、食管、胸骨(骨髓)、唾液腺。

(9)给药中期、末期和恢复期观察：给药中期结束，动物禁食过夜后，分别每组取14只动物(雌雄各半)，麻醉，腹主动脉取血，处死，取各组织脏器作血液学、血液生化学、脏器系数、组织病理学等检查。其余动物正常给药，给药末期结束，动物禁食过夜后，分别每组取16只动物(雌雄各半)，麻醉，腹主动脉取血，处死，取脏器，检查项目同中期。剩余动物停药，常规饲养1个月，观察动物毒性反应的可逆程度及可能出现的延迟性毒性反应。恢复期结束，动物禁食过夜后，各组取10只大鼠(雌雄各半)，麻醉，腹主动脉取血，处死，取脏器，检查项目同中、末期。

4.5数据统计处理方法

采用PEMS统计软件进行统计分析，体重、摄食量等计量资料结果以表示，组间比较时采用单因素方差分析，方差齐时用t检验，方差不齐时用秩和检验，检验水准0.05。

4.6实验结果

4.6.1一般症状

各组大鼠均未见死亡或一般毒性症状。

4.6.2体重和体重系数

高剂量组雄性(♂)大鼠给药第23、25、26周与溶媒对照组比较均有降低(P﹤0.05)；低、中剂量组(♀)大鼠给药4周与溶媒对照组比较有降低(P﹤0.05)；高剂量组雌性(♀)大鼠给药1、2周与溶媒对照组比较有明显降低(P﹤0.05，P﹤0.01)。但未见受试物使体重减少或增加的规律性变化。其余各组大鼠体重变化基本符合大鼠体重增长规律。4.6.3进食量(饲料消耗量)

大鼠给药初期(3周以前)进食量较大。但3周以后，进食量逐渐趋向稳定。雄性大鼠：低、中、高剂量组第6周与溶媒对照组比较有升高(P﹤0.05)；中剂量组第3、5、7、8、12周与溶媒对照组比较均有升高(P﹤0.05)。雌性大鼠：低剂量组第10周与溶媒对照组比较有升高(P﹤0.05)；高剂量组第2周与溶媒对照组比较有升高(P﹤0.05)。4.6.4脏器系数

中期：低、中、高剂量组与溶媒对照组比较均无明显差异。

末期：高剂量组(♂)肾脏(左、右)系数与溶媒对照组比较有升高(P﹤0.05)，低、中剂量组与溶媒对照组比较，均无明显差异。

恢复期：低、中、高剂量组与溶媒对照组比较均无明显差异。

4.6.5血液学检查(含血凝指标)

中期：低剂量组(♂)HCT与溶媒对照组比较有降低(P﹤0.05)；高剂量组(♀)WBC与溶媒对照组比较有升高(P﹤0.05)。

末期：中剂量组(♂)LYMPH与溶媒对照组比较有升高(P﹤0.05)；中剂量组(♀)RBC、HGB与溶媒对照组比较均有升高(P﹤0.05)。

恢复期：中、高剂量组(♂)RBC与溶媒对照组比较均有升高(P﹤0.05)；中剂量组(♂)MCV与溶媒对照组比较有降低(P﹤0.05)；中、高剂量组(♂)MCH与溶媒对照组比较有明显降低(P﹤0.05，P﹤0.01)。

4.6.6血生化指标和电解质检查

中期：低、中、高剂量组(♂、♀)CI-与溶媒对照组比较均有显著降低(P﹤0.01)；低剂量组(♀)ALB与溶媒对照组比较有降低(P﹤0.05)；中、高剂量组(♀)GLU与溶媒对照组比较均有显著升高(P﹤0.01)；低剂量组(♀)K⁺与溶媒对照组比较有降低(P﹤0.05)；低、中、高剂量组(♀)Na⁺与溶媒对照组比较均有显著降低(P﹤0.01、P﹤0.05)。

末期：高剂量组(♂)CRE、GLU与溶媒对照组比较有显著降低(P﹤0.05、P﹤0.01)；低、中、高剂量组(♂)Na⁺与溶媒对照组比较均有显著降低(P﹤0.01)。低、中剂量组(♀)CRE与溶媒对照组比较显著降低(P﹤0.05、P﹤0.01)；高剂量组(♀)TG、AST与溶媒对照组比较有降低(P﹤0.05)。

恢复期：低、中、高剂量组(♀)TBI与溶媒对照组比较，均降低(P﹤0.05)。

4.6.7组织病理学检查

组织病理学检查未发现明显的毒理性靶器官，但个别脏器有轻微的病理学改变。

(1)肺脏：各组部分大鼠肺间质可见淋巴细胞浸润，系大鼠自身病变有关。

(2)肝脏：各组均有几例脂肪变性、肝细胞点状坏死，余例无明显的病理变化，亦符合大鼠自身病变。

(3)胃：空白溶媒对照组有5例腺体轻度增生，各组余例未见明显病理变化。

(4)肺、肾、脾间质小动脉均有几例管壁增厚。

(5)各组小肠黏膜、大肠黏膜下均有几例淋巴细胞浸润。

(6)上述(3)、(4)、(5)项应亦为大鼠本身病变。

(7)其余脏器未见明显病理变化。

4.7结论

以桂红鳖甲片1.05g/kg、2.10g/kg、4.20(浸膏)g/kg·d，连续灌胃给与大鼠180天，停药后恢复期1个月，给药组大鼠一般症状观察未见明显异常，进食量亦无减少或增加的规律性变化。在本实验条件下无桂红鳖甲片关联性明显的毒性靶器官。因此，桂红鳖甲片大鼠安全剂量不低于2.10(浸膏)g/kg·d，为人临床拟用剂量倍数的35倍。

5.临床治疗

本申请人对有关消瘤丸的临床实际治疗情况进行了研究并进行了总结，共治疗子宫肌瘤患者60例，年龄在27～5O岁，中位年龄为42.5岁，其中治疗组30例，对照组30例。肌瘤平均体积为：(7.002±7.165)cm。采用随机双盲对照试验，治疗组30组、对照组病例30例，1：l随机分组。治疗组口服消瘤丸，规格0.35g/粒，6粒/次，日3次；对照组使用期待疗法。连续3个月为1个疗程。

5.1观察指标与方法

5.1.1中医证候治疗前及治疗后分别详细记录患者临床症状和体征，参照《中药新药治疗子宫肌瘤的临床研究指导原则》制定中医证候积分及病情分级标准。下腹包块：子宫体正常大小，质不软不硬，表面规则为正常计0分；子宫体增大，如孕5～6周，质硬，或表面不规则为轻度计3分；子宫体增大，如孕7～8周，质硬，或表面不规则为中度计6分；子宫体增大，如孕9～l0周，质硬，或表面不规则为重度计9分。次症：小腹刺痛、月经量多症状按轻、中、重分别计分1、2、3分。经期延长、经色紫黯、经质粘稠有块、小腹坠胀、乳房胀痛、精神抑郁症状按有、无各计分为1、0分。病情分级：轻度：积分<7分；中度：8分≤积分≤l4分；重度：15分≤积分≤21分。

5.1.2子宫及肌瘤体积：治疗前后于经后3～14d分别行腹部常规B超检查：测量子宫体和子宫肌瘤瘤体长、宽、厚三径。大小按不规则椭球体积公式(4/3abc)计算，a、b、c分表示子宫及肌瘤在三维界面中三个切面的半径值。

5.1.3疗效标准

5.1.3.1临床综合疗效判定标准：临床痊愈：肌瘤消失；显效：肌瘤缩小1/2以上者，有效：肌瘤缩小l/3以上者；无效：未达到有效标准者。

5.1.3.2中医证候疗效标准临床痊愈：临床症状、体征消失或基本消失。证候积分减少≥95％；显效：中医临床症状、体征明显改善，积分减少≥17％且<95％；有效：中医临床症状、体征均有好转，积分减少≥30％且<70％，无效：中医临床症状、体征无明显改善，甚至加重，积分减少不足30％。中医单项症状消失及缓解率，消失：症状疗后降为0。显效：症状疗后下降，但不为0。无效：症状疗后无变化。加重：症状疗后增加。

5.2结果

5.2.1子宫肌瘤大小疗效：治疗组总有效率为53.3％，对照组总有效率为36.7％。

5.2.2中医证候疗效：治疗组总有效率为73.3％，对照组总有效率为33.3％。

5.2.3治疗前后肝肾功能相比较，表明治疗组药物对肝肾功无影响，安全可靠。

研究结果说明，(1)消瘤丸治疗气滞血瘀型子宫肌瘤有明显的疗效；改善临床症状；(2)消瘤丸可调节气血，从而缩小子宫肌瘤；(3)治疗组治疗前后其肝肾功能变化无明显差异，说明消瘤丸安全，无明显毒副作用。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物的制备方法，包括片剂的制备，其特征在于：所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝50～300份，茯苓50～400份，莪术50～400份，牡丹皮50～400份，蒲公英50～400份，红花50～400份，桃仁50～400份，夏枯草100～1000份，海藻50～400份，昆布50～400份，香附50～400份，鳖甲50～1000份；

所述片剂的制备方法为：取配方量的十二味药，将桂枝5～100克粉碎成细粉，剩余的桂枝与牡丹皮、莪术、夏枯草、香附4味加5～14倍20～95%乙醇回流提取1～3次，每次0.5～3小时，滤过，回收乙醇，浓缩至稠膏，20～100℃真空干燥；另取蒲公英、茯苓、红花、桃仁、海藻、昆布、鳖甲七味加5～14倍水提取1～3次，每次0.5～3小时；500～4000 r/min转速离心5～60分钟，滤过，滤液浓缩至稠膏，20～100℃真空干燥；将上述干浸膏合并，粉碎成细粉，加入粉碎的桂枝粉、细粉总质量1～10%的微晶纤维素、1～10%的羟丙甲基纤维素，混合均匀，过筛，用适量50%～95%乙醇制成颗粒，干燥，加0.5～3%硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝100～200份，茯苓160～300份，莪术160～300份，牡丹皮160～300份，蒲公英160～300份，红花160～300份，桃仁160～300份，夏枯草570～700份，海藻160～300份，昆布160～300份，香附160～300份，鳖甲570～750份。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述药物由以下质量份数的各组分组成：桂枝152份，茯苓228份，莪术228份，牡丹皮228份，蒲公英228份，红花228份，桃仁228份，夏枯草760份，海藻228份，昆布228份，香附228份，鳖甲380份。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述包薄膜衣时的转速为10～200r/min，风温为20～100℃。

5.应用权利要求1～4任一所述的方法制备得到的药物。

6.权利要求5所述的药物在制备治疗子宫肌瘤、子宫内膜异位症的药物中的应用。