CN104530231A - 一种鸡传染性法氏囊精制卵黄抗体提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种鸡传染性法氏囊精制卵黄抗体提取方法，本发明技术方案通过维持辛酸在低离子强度及特定的酸性条件下，使其可与绝大多数的卵黄蛋白反应，形成不可逆的沉淀，而唯有IgY类抗体蛋白不发生反应，仍溶于液体中，因此将卵黄液稀释后经过辛酸处理，再将经辛酸处理后的卵黄液通过离心或者过滤的手段，进行固液分离，可以得到纯度在80％以上IgY水溶液，该方法经济、简便、快速，不损害抗体活性，回收率高。

Description

一种鸡传染性法氏囊精制卵黄抗体提取方法

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种鸡传染性法氏囊精制卵黄抗体提取方法。

背景技术

卵黄抗体(immunoglobulin yolk，IgY)，即鸟类(多指鸡)经特定抗原免疫后，产生相应的特异性抗体，并转运、储存于卵黄中，进而通过特定的提取技术从卵黄中可获得高产量特异性多克隆抗体。由于IgY化学性质稳定、产量高、成本低、，满足动物福利需要，以及具有动物种系发生距离的优势，因此更适于生产特异性抗体，其被动免疫功能可以用于研究如何抵抗病毒和细菌性疾病，具有开发功能性食品和新药的潜能，因此在医药领域具有良好的应用前景。

现有技术的卵黄抗体提取方法主要有酸化水提取法、聚乙二醇法、氯仿提取法等，其中酸化水提取法步骤较复杂、生产周期长、对设备和场地要求较高。而聚乙二醇法用到的聚乙二醇由于易溶于水，因此可能在最终产品中有残留、进而带来潜在安全风险。氯仿提取法也存在同样的问题，即存在毒性的氯仿可能残留在产品中带来安全问题。因此，有必要开发一种工艺简单、无毒性残留的卵黄抗体工业化提取方法。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种鸡传染性法氏囊精制卵黄抗体提取方法，以解决现有技术提取方法所存在的工艺复杂、产物残留毒性等技术问题。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，包括以下步骤：

1)取鸡传染性法氏囊病高免疫鸡蛋，分离卵黄；

2)取步骤1)得到的卵黄过滤去除卵黄膜和系带，而后研磨破碎；

3)向步骤2)破碎后的卵黄中按照1:(2～3)(w/w)的比例加入温度为50～56℃、pH为4.8～5.2的醋酸缓冲液，搅拌，得到混合液；

4)向步骤3)得到的混合液中加入所述混合液体积3～5％(v/v)的正辛酸，搅拌30～180min；

5)将步骤4)搅拌后的产物过滤，收集滤液，即得到鸡传染性法氏囊卵黄抗体。

优选的，步骤3)所述的醋酸缓冲液中乙酸钠、乙酸与水的比例为：0.886g:2.82mL:1000mL。

优选的，步骤2)所述过滤是利用60目尼龙筛实施的。

优选的，步骤2)所述的研磨是利用胶体磨研磨一次。

优选的，步骤5)所述的过滤式利用750B丙纶滤布实施的。

优选的，步骤3)所述搅拌的时间为30min。

优选的，步骤4)所述搅拌的时间为90min。

脂肪酸根据碳链长度分为短链、中链和长链，一般把含有6～12个碳原子组成碳链的脂肪酸称为中链脂肪酸(medium chain fatty acid，MCFA),它被甘油酯化就生成中链脂肪酸甘油三酯(或中链甘油三酯，MCT)。典型的MCT是指饱和辛酸甘油三酯或饱和癸酸甘油三酯或饱和辛酸-癸酸混合的甘油三酯。通过试验我们发现辛酸在低离子强度、PH4.2～4.5的酸性条件下，可与绝大多数的卵黄蛋白反应，形成不可逆的沉淀，唯有IgY类抗体蛋白不发生反应，仍溶于液体中，因此将卵黄液稀释后经过辛酸处理，再将经辛酸处理后的卵黄液通过离心或者过滤的手段，进行固液分离，可以得到纯度在80％以上IgY水溶液，该方法经济、简便、快速，不损害抗体活性，回收率高。

本方法与传统酸化水处理制备卵黄抗体工艺相比省去了离心以及超滤浓缩等步骤，因此具有生产周期短，过程操作方便、结构紧凑、维修费用以及生产能耗低等优势，且制备的抗体收率高、纯度高、性质稳定，易于保存。同时，由于辛酸在水中的溶解度极低，因此在最终产物中几乎无残留，对生物无毒副作用。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。

以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。

除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1

1)将100公斤新鲜鸡传染性法氏囊高免疫蛋消毒后送入蛋黄蛋清分离机进行蛋黄分离，可得到约15L蛋黄；

2)将蛋黄用60目尼龙筛过滤一遍后，用胶体磨研磨一遍；

3)将研磨后的蛋黄液注入100L物料罐中，并加入37.5L醋酸缓冲液，开启搅拌桨，搅拌30分钟；

4)缓慢添加2.1L正辛酸，再搅拌90分钟；

5)将经辛酸处理后的蛋黄液用丙纶750B滤布过滤过夜；

6)将澄清滤液收集，按照鸡传染性法氏囊精制卵黄抗体质量标准要求进行配药，并调节PH值至7.0即可。

实施例2

一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，包括以下步骤：

1)取鸡传染性法氏囊病高免疫鸡蛋，分离卵黄；

2)取步骤1)得到的卵黄过滤去除卵黄膜和系带，而后研磨破碎；

3)向步骤2)破碎后的卵黄中按照1:2(w/w)的比例加入温度为50℃、pH为4.8的醋酸缓冲液，搅拌40min，得到混合液；

4)向步骤3)得到的混合液中加入所述混合液体积3％(v/v)的正辛酸，搅拌30min；

5)将步骤4)搅拌后的产物过滤，收集滤液，即得到鸡传染性法氏囊卵黄抗体。

在以上技术方案的基础上：

步骤3)所述的醋酸缓冲液中乙酸钠、乙酸与水的比例为：0.886g:2.82mL:1000mL。

步骤2)所述过滤是利用60目尼龙筛实施的。

步骤2)所述的研磨是利用胶体磨研磨一次。

步骤5)所述的过滤式利用750B丙纶滤布实施的。

实施例3

一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，包括以下步骤：

1)取鸡传染性法氏囊病高免疫鸡蛋，分离卵黄；

2)取步骤1)得到的卵黄过滤去除卵黄膜和系带，而后研磨破碎；

3)向步骤2)破碎后的卵黄中按照1:2.5(w/w)的比例加入温度为53℃、pH为5.0的醋酸缓冲液，搅拌60min，得到混合液；

4)向步骤3)得到的混合液中加入所述混合液体积4％(v/v)的正辛酸，搅拌90min；

5)将步骤4)搅拌后的产物过滤，收集滤液，即得到鸡传染性法氏囊卵黄抗体。

在以上技术方案的基础上：

步骤3)所述的醋酸缓冲液中乙酸钠、乙酸与水的比例为：0.886g:2.82mL:1000mL。

步骤2)所述的研磨是利用胶体磨研磨一次。

实施例4

一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，包括以下步骤：

1)取鸡传染性法氏囊病高免疫鸡蛋，分离卵黄；

2)取步骤1)得到的卵黄过滤去除卵黄膜和系带，而后研磨破碎；

3)向步骤2)破碎后的卵黄中按照1:3(w/w)的比例加入温度为56℃、pH为5.2的醋酸缓冲液，搅拌70min，得到混合液；

4)向步骤3)得到的混合液中加入所述混合液体积4％(v/v)的正辛酸，搅拌180min；

5)将步骤4)搅拌后的产物过滤，收集滤液，即得到鸡传染性法氏囊卵黄抗体。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取鸡传染性法氏囊病高免疫鸡蛋，分离卵黄；

2)取步骤1)得到的卵黄过滤去除卵黄膜和系带，而后研磨破碎；

3)向步骤2)破碎后的卵黄中按照1:(2～3)(w/w)的比例加入温度为50～56℃、pH为4.8～5.2的醋酸缓冲液，搅拌，得到混合液；

4)向步骤3)得到的混合液中加入所述混合液体积3～5％(v/v)的正辛酸，搅拌30～180min；

5)将步骤4)搅拌后的产物过滤，收集滤液，即得到鸡传染性法氏囊卵黄抗体。

2.根据权利要求1所述的一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于步骤3)所述的醋酸缓冲液中乙酸钠、乙酸与水的比例为：0.886g:2.82mL:1000mL。

3.根据权利要求1所述的一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于步骤2)所述过滤是利用60目尼龙筛实施的。

4.根据权利要求1所述的一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于步骤2)所述的研磨是利用胶体磨研磨一次。

5.根据权利要求1所述的一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于步骤5)所述的过滤式利用750B丙纶滤布实施的。

6.根据权利要求1所述的一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于步骤3)所述搅拌的时间为30min。

7.根据权利要求1所述的一种鸡传染性法氏囊卵黄抗体提取方法，其特征在于步骤4)所述搅拌的时间为90min。