CN105801689B - 一种共制备卵白蛋白与卵铁传递蛋白的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种共制备卵白蛋白与卵铁传递蛋白的方法，涉及生物、医药及食品工业技术领域。步骤如下：室温下收集鸡蛋清，按照鸡蛋清与新鲜去离子水体积比为1：2的比例进行稀释，调节pH至5.0左右，均匀搅拌后离心；向离心所得上清液A中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，均匀搅拌后离心，收集沉淀B；溶解沉淀B后再向其中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，离心，收集上清液C及沉淀D。上清C中含有高纯度卵白蛋白，沉淀D中含有较高纯度卵铁传递蛋白。本发明简便快速，成本低廉，条件温和安全，适用于大规模工业化生产卵白蛋白与卵铁传递蛋白。

Description

一种共制备卵白蛋白与卵铁传递蛋白的方法
技术领域
本发明涉及生物、医药及食品工业技术领域，更具体涉及一种共制备卵白蛋白与卵转铁蛋白的工艺。
背景技术
鸡蛋由蛋壳、蛋清以及蛋黄三部分组成，蛋清约占总重的60%～63%，含有丰富的活性蛋白质，这些蛋白质有54%为卵白蛋白（Ovalbumin）、12%为卵铁传递蛋白（Ovotransferrin）。卵白蛋白是一种优质蛋白质，可以提供人体所必需的8种氨基酸；可以与铁（III）离子形成稳定复合物，制备新型生物高分子载体补铁剂；制备卵白蛋白多肽、卵白蛋白粉及营养口服液，增强机体免疫力，抑制血管紧张素转化酶活性。卵铁传递蛋白具有与人转铁蛋白和乳铁蛋白相似的抗菌、抗病毒和抗真菌活性，可作为良好的免疫功能因子或生物医药产品，还可作为化疗药物的载体。
目前常用硫酸铵、硫酸钠及氯化钠进行盐析是以大量制备卵白蛋白，但是产品中含盐量高，需要多次脱盐才能获得较高纯度的卵白蛋白。此外，超滤技术也可以制备卵白蛋白，但需要贵重设备，分离规模也较有限。卵铁传递蛋白可用盐析法、离子交换法或者固定化金属螯合亲和色谱法进行分离提取，也存在需要脱盐或规模不大的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种共制备卵白蛋白与卵转铁蛋白的工艺。该方法所用工艺简单快捷，所用试剂生物安全性高，条件温和，易于放大，无需复杂设备，可以克服现有卵白蛋白与卵转铁蛋白制备工艺的缺点。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：一种共制备卵白蛋白与卵转铁蛋白的方法，按照下述步骤进行：
（1）用去离子水按比例稀释鸡蛋清，调节pH至5.0左右，搅拌均匀，离心去除沉淀，收集上清液A；
（2）向步骤（1）所得的上清液A中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，形成混合液，搅拌均匀，离心，收集沉淀B；
（3）以20mM Tris溶液（pH 8.0）溶解沉淀B，随后向所得溶液中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，离心，收集上清液C及沉淀D。上清液C中含有高纯度卵白蛋白，沉淀D中含有较高纯度的卵铁传递蛋白。
步骤（1）中，所述鸡蛋清为在室温下新鲜鸡蛋中收集的鸡蛋清，去离子水为新鲜的去离子水；所述鸡蛋清与去离子水体积比为1：2。
步骤（2）中，所述混合液中聚乙二醇的质量百分浓度为15～30%。
步骤（1）和步骤（2）中，所述离心速度为8000 rpm，离心时间为30min。
步骤（3）中，所述混合液中聚乙二醇的质量百分浓度为8～15%。
本发明具有以下优点：
（1） 本发明所用工艺可以同时得到卵白蛋白与卵铁传递蛋白；
（2） 本发明所用工艺操作非常简单易行，生产周期短，无需复杂设备，易于大规模工业化生产；
（3） 本发明所用工艺中未使用任何有毒有害化学物质，所使用的聚乙二醇具有很高的生物安全性，可以确保分离所得产品质量的安全性，有利于所得产物用于医药及食品行业。
附图说明
图1为一种共制备卵白蛋白与卵转铁蛋白的工艺的操作流程示意图。
图2为十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测聚乙二醇20000处理蛋清所得结果。其中，泳道1：所用鸡蛋清上清液A；泳道2：蛋白质分子量标准；泳道3：质量百分浓度为15%的聚乙二醇20000处理鸡蛋清后沉淀B；泳道4：质量百分浓度为8%的聚乙二醇20000处理鸡蛋清后上清液C；泳道5：质量百分浓度为8%的聚乙二醇20000处理鸡蛋清后沉淀D；泳道6：市售转铁蛋白对照品；泳道7：市售卵白蛋白对照品。
图3为十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测聚乙二醇200处理蛋清所得结果。其中，泳道1：所用鸡蛋清上清液A；泳道2：蛋白质分子量标准；泳道3：质量百分浓度为30%的聚乙二醇200处理鸡蛋清后沉淀B；泳道4：质量百分浓度为15%的聚乙二醇200处理鸡蛋清后上清液C；泳道5：质量百分浓度为15%的聚乙二醇200处理鸡蛋清后沉淀D；泳道6：市售卵白蛋白对照品；泳道7：市售转铁蛋白对照品。
具体实施方式
下面结合附图以及具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
取100ml新鲜鸡蛋清，加入200ml新鲜去离子水，调节pH至5.0左右，均匀搅拌1小时，8000 rpm离心30min除去沉淀。向离心获取的上清液A中加入聚乙二醇20000至其质量百分浓度为15%，再搅拌1小时，8000rpm离心30min，收集沉淀B，并以50ml 20mM Tris溶液（pH8.0）溶解该沉淀，搅拌1小时使沉淀充分溶解，随后向所得溶液中加入聚乙二醇200溶液至其质量百分浓度为8%，再搅拌1小时，8000rpm离心30min，收集上清液C及沉淀D。所得上清液C经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明含有纯度99.7%的卵白蛋白，总得率为61.5%；所得沉淀D经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明含有纯度85.2%的卵铁传递蛋白，总得率为63.6%。如图1为一种共制备卵白蛋白与卵转铁蛋白的工艺的操作流程示意图。
图2为十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测聚乙二醇20000处理蛋清所得结果。其中，泳道1：所用鸡蛋清上清液A；泳道2：蛋白质分子量标准；泳道3：质量百分浓度为15%的聚乙二醇20000处理鸡蛋清后沉淀B；泳道4：质量百分浓度为8%的聚乙二醇20000处理鸡蛋清后上清液C；泳道5：质量百分浓度为8%的聚乙二醇20000处理鸡蛋清后沉淀D；泳道6：市售转铁蛋白对照品；泳道7：市售卵白蛋白对照品。
实施例2
取100ml新鲜鸡蛋清，加入200ml新鲜去离子水，调节pH至5.0左右，均匀搅拌1小时，8000 rpm离心30min除去沉淀。向离心获取的上清液A中加入聚乙二醇200至其质量百分浓度为30%，再搅拌1小时，8000rpm离心30min，收集沉淀B，并以50ml 20mM Tris溶液（pH8.0）溶解该沉淀，搅拌1小时使沉淀充分溶解，随后向所得溶液中加入聚乙二醇200溶液至其质量百分浓度为15%，再搅拌1小时，8000rpm离心30min，收集上清液C及沉淀D。所得上清液C经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明含有纯度91.6%的卵白蛋白，总得率为72.3%；所得沉淀D经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明含有纯度81.3%的卵铁传递蛋白，总得率为77.2%。
图3中，泳道1：所用鸡蛋清上清液A；泳道2：蛋白质分子量标准；泳道3：质量百分浓度为30%的聚乙二醇200处理鸡蛋清后沉淀B；泳道4：质量百分浓度为15%的聚乙二醇200处理鸡蛋清后上清液C；泳道5：质量百分浓度为15%的聚乙二醇200处理鸡蛋清后沉淀D；泳道6：市售卵白蛋白对照品；泳道7：市售转铁蛋白对照品。
所述实施例为本发明的优选的实施方式，但本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员能够做出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种共制备卵白蛋白与卵转铁蛋白的方法，其特征在于按照下述步骤进行：
（1）用去离子水按比例稀释鸡蛋清，调节pH至5.0左右，搅拌均匀，离心去除沉淀，收集上清液A；
（2）向步骤（1）所得的上清液A中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，形成混合液，搅拌均匀，离心，收集沉淀B；
（3）以pH为 8.0的20mM Tris溶液溶解沉淀B，随后向所得溶液中加入分子量介于为200～20000的聚乙二醇，离心，收集上清液C及沉淀D；上清液C中含有卵白蛋白，沉淀D中含有卵转铁蛋白 ；
步骤（1）中，所述鸡蛋清为在室温下新鲜鸡蛋中收集的鸡蛋清，去离子水为新鲜的去离子水；所述鸡蛋清与去离子水体积比为1：2；
步骤（1）和步骤（2）中，所述离心速度为8000 rpm，离心时间为30min；
其中，步骤（2）中加入质量百分浓度为15%的分子量20000的聚乙二醇且步骤（3）中加入质量百分浓度为8%的分子量200的聚乙二醇;或者步骤（2）中加入质量百分浓度为30%的分子量200的聚乙二醇且步骤（3）中加入质量百分浓度为15%的分子量200的聚乙二醇。
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