SU1713591A1 - Способ получени человеческого лейкоцитарного интерферона - Google Patents

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к производству биопрепаратов, и касается способа получения человеческого лейкоцитарного интерферона.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения человеческого лейкоцитарного а- или у-интерферона, заключающийся в отделении фракции лейкоцитов, удалении из нее эритроцитов, культиви- \ ровании суспензии лейкоцитов в питательной среде и обработке соответствующим индуктором для индукции а- или у-интёрферона.

Однако известный способ позволяет получать на одной и той же культуре только а-или у-интерферон.

Целью изобретения является получение на одной и той же культуре последовательно а- и у-интерферона.

Пример·! Взятую кровь, помещенную в раствор ACI (водный раствор, содержащий лимонную кислоту и декстрозу), в течение 3 ч хранят при 4°С. Одну объемную часть полученного таким образом концентрата лейкоцитов смешивают с пятью объемными частями 0,83%-ного водного раствора хлористого аммония при охлаждении на ледяной бане. Суспензия содержится на ледяной бане до тех пор, пока не произойдет лизирование эритроцитов (5-10 мин). После чего суспензию лейкоцитов культивируют в питательном растворе следующего состава, мг/л:

Хлористый кальций 175-350

Хлористый калий 300-500

Сульфат магния или эквивалентное количество хлористого магния 175-500

SU.,·, 1713591 А1

Хлористый натрий	5000-7000
Бикарбонат натрия	200-3500
Монозамещенный
фосфат натрия	30-150
Глюкоза	500-5500
Нитрат железа (III)	0,0-0,2
При этом можно применять питатель-

ную среду Игла, модифицированную МЕМ Дульбекко, модифицированную МЕМ Глазгова, 10

Указанное лидирование эритроцитов повторяют таким образом, что на 1 об. ч. суспензии лейкоцитов рассчитывают применение 10 об. ч. 0,83%-ного водного раствора хлористого аммония. Образуется 15 суспензия лейкоцитов в питательном растворе, вслед за тем число клеток устанавливают равным 10⁷ клеток/мл. Питательный _u раствор содержит 2 мг/мл Ьвободной от глобулина сыворотки человеческой крови (око- 20 . ло 6%). Клетки обрабатывают при 37°С при постоянном помешивании 200 МЕ/мл свободного от индуктора концентрированного человеческого «-интерферона. Через 2 ч клетки индуцируют 400 гемаглютинирован- 25 ных единиц вируса Сендая. Инкубацию заканчивают через 18 ч после индуцирования. Антивирусный титр суспернативной жидкости, т.е. сырого а- интерферона, составляет

54, 200 El/мл. Клетки, использованные для 30 получения α-интерферона один раз, промывают названным питательным раствором, после чего образуется суспензия лейкоцитов в питательном растворе при концентрации 2,5 · 10⁷ клеток/мл. Питательный рас- 35 твор содержит 1 мг/мл свободной от глобулина сыворотки человеческой крови (около 3%). Затем клетки стимулируют посредством 15мкг/мл конканавалина А. Инкубацию проводят при постоянном помешивании 40 при 37°С и через 16 ч после индуцирования надосадочную жидкость отделяют от клеток. Антивирусный титр надосадочной жидкости, которая содержит /-интерферон, определяют на человеческих амниальных 45 клетках WISH. Кроме того, титры выражаются в сравнении со стандартом человеческого «-интерферона в виде международных единиц(млМ/Е/мл). В настоящее время нет никакого признанного международного 50 стандарта интерферона. Титр суспернативной жидкости составляет 10,600 МЕ/мл и является потенцированной величиной, поскольку препараты /-интерферона содержат также « интерферон. С помощью 55 градуирующей кривой и на основе титра первоначального и обработанного при значении pH 2 вещества фактическое содержание/-интерферона составляет 1,840 МЕ/мл. Для сравнения вышеописанный способ проводят с.тем изменением, что клетки перед производством /-интерферона инкубируются в течение одного дня без обработки вирусов Сендая. Полученный под воздействием конканавалина А титр /-интерферона составляет 340 МЕ/мл.

Для дальнейшего сравнения исключают первый, т.е. производящий «-интерферон период и изолированные лейкоциты индуцируют непосредственно конконавалином А. Титр /-интерфнерона составляет 450 МЕ/мл.

Пример 2. Действуют аналогично примеру 1 с тем отличием, что в качестве питательного раствора применяют питательную среду Игла. Полученный таким образом титр α-интерферона составляет’ 56.000 МЕ/мл. Во второй ступени способа в том же сёмом питательном растворе достигается титр /-интерферона, равный 1,680 МЕ/мл. Если при этом способе исключить производство α-интерферона, то титр /-интерферона составит 280 МЕ/мл.

Предлагаемый способ позволяет на одной и той же культуре лейкоцитов получать а- и /-интерфероны с высоким титром.

Claims (1)

1. Формула изобретения

   Способ получения человеческого лейкоцитарного интерферона путем деления фракции лейкоцитов крови, удаления из нее эритроцитов, культивирования суспензии лейкоцитов в питательной среде.обработки их индуктором интерферона и отделения надосадочной жидкости, содержащей интерферон, отличающийся тем, что, с целью получения на одной и той же культуре последовательно а- и у-ирнтерферона, культивирование суспензии лейкоцитов проводят в присутствии 200 МЕ/мл «-интерферона в течение двух часов, в качестве индикатора используют вирус Сендай в концентрации 400 ГЕ/мл, культивируют 18 ч., отделяют надосадочную жидкость, содержащую α-интерферон, осажденные клетки лейкоцитов промывают, суспендируют в питательной среде, обрабатывают конконавалином А, культивируют 16 ч и отделяют надосадочную жидкость, содержащую /-интерферон.