CN104522472A - 褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及褐藻寡糖复方制剂，特别涉及一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:4~1:10混合。本发明褐藻寡糖茶多酚复合制剂具有抗辐射作用，可明显延长小鼠存活时间，增强小鼠白细胞损伤防御性，同时，降低60Co-γ射线辐射造成的微核产生。
Description
技术领域
本发明涉及褐藻寡糖复方制剂，特别涉及一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂。
背景技术
随着核能广泛应用于科技、生产及日常生活,不可避免地会给人们造成辐射损害。临床上对癌症患者进行的放疗、职业性受照人员的辐射性损害和航天飞行中人员受到的空间辐射等受到高度重视。在这种情况下，就急需一种天然有效、无毒副作用的保健产品。目前国内外海洋生物活性物质的研究有了长足的进步，尤其是海洋功能性寡糖的开发已成为国际生物技术领域的重要课题和研究热点。
褐藻寡糖(Alginate oligosaccharides)，又名褐藻胶寡糖是由褐藻胶经过降解得到的低聚物。褐藻胶(Alginate)是一种由β-1，4-D-甘露糖醛酸(M)和α-1，4-L-古罗糖醛酸(G)2种单体通过1，4-糖苷键链接而成的线性多糖聚合物，主要来自于海带、马尾藻、巨藻等褐藻类植物，具有抗肿瘤、增强免疫、促生长等多种生理活性，但由于其自身是一种高聚合度的物质，分子质量较大，不易溶解，且黏度较大，实际应用有一定的局限性。褐藻胶分子结构中含有大量的羟基，酶解可以改变糖分子伸展结构，使糖羟基暴露，改善其性能。褐藻胶寡糖作为褐藻胶的降解产物，是由2～10个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物，由于其相对分子质量低，具有溶解性能好、机体吸收利用率高、稳定性好等特性。
近年来对褐藻胶寡糖的研究引起广泛关注，尤其是抗肿瘤、抗氧化、抑菌、提高免疫力等活性研究方面取得了很大的进展，为相关功能食品的开发提供了广阔的开发前景。但是有关褐藻胶寡糖抗辐射方面的研究国内外尚属空白。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂。
本发明的技术方案是：
一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:4～1:10混合。
优选的，所述的褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:8混合。
其中，褐藻寡糖的制备方法为称取2g-5g海藻酸钠，在冰水浴中加入15ml浓硫酸，置于常温下搅拌8-12h左右，然后再在冰水浴中加入60ml-90ml水，后置于100℃油浴中冷凝回流水解1-6h左右，反应结束后，加入无水碳酸钙粉末除去硫酸，至pH到6-7，加入活性炭脱色，再调pH到6-9，将水解液送入浓缩器中进行浓缩，得浓缩液缩。将浓缩液打入喷雾干燥器中进行喷雾干燥，得到固体褐藻寡糖。
所述褐藻寡糖的分子量为小于等于2000Da。
优选的，所述复合制剂还包括药学上可接受的辅料或赋形剂。
优选的，所述复合制剂的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、口服液中的任一种口服制剂。
海藻胶寡糖能加速小鼠外周血白细胞和红细胞数的恢复，明显提高脾脏指数，并且可引起抗氧化物酶和超氧化物歧化酶活性显著增高。其机理可能主要与其保护造血组织、提高机体免疫功能和抗氧化作用有关。
茶多酚(Tea Polyphenols，简称TP)是茶叶中最具生理和药用价值的成分之一。近年来，对茶多酚药用价值的研究取得了显著的进展，其抗辐射作用已经得到证实，茶多酚主要是通过清除自由基与调节基因表达及蛋白合成这两大途径来实现抗辐射功能的。
本发明的有益效果是：
本发明褐藻寡糖茶多酚复合制剂具有抗辐射作用，通过动物实验可知，
1)本发明褐藻寡糖茶多酚复合物可明显延长小鼠存活时间，同时显著高于褐藻寡糖或茶多酚的单独使用的效应。
2)本发明褐藻寡糖茶多酚复合物增强小鼠白细胞损伤防御性，同时要比褐藻寡糖或茶多酚的单独效应好。
3)本发明褐藻寡糖茶多酚复合物可以降低60Co-γ射线辐射造成的微核产生，同时要比单独使用褐藻寡糖或茶多酚的效果好。
具体实施方式
本发明的具体实施方式如下：
实施例1：
一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1∶4混合。
褐藻寡糖的制备方法为称取3g海藻酸钠，在冰水浴中加入15ml浓硫酸，置于常温下搅拌10h左右，然后再在冰水浴中加入80ml水，后置于100℃油浴中冷凝回流水解1-6h左右，反应结束后，加入无水碳酸钙粉末除去硫酸，至pH到6-7，加入活性炭脱色，再调pH到6-9，将水解液送入浓缩器中进行浓缩，得浓缩液缩。将浓缩液打入喷雾干燥器中进行喷雾干燥，得到固体褐藻寡糖。所述褐藻寡糖的分子量为小于等于2000Da。
实施例2
一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:5混合。
制备方法如实施例1所述。
实施例3
一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:6混合。
制备方法如实施例1所述。
实施例4
一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:8混合。
制备方法如实施例1所述。
实施例5
一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:10混合。
制备方法如实施例1所述。
为了进一步说明本发明的复合制剂的抗辐射特性，本发明做了大量的对比实验已说明本发明复合制剂的抗辐射作用。
1.1 材料与动物模型
60Co-γ射线源(第二军医大学附属院放疗科)，照射距离75cm，照射视野20cm×20cm，照射剂量57.0cGy/分；照射时间为8分钟，小单次全身性照射总剂量为4.56Gy。
昆虫小鼠：18-22g。第三军医大学提供实验动物中心提供。
褐藻寡糖(含量≥85％。本申请人自制，制备方法如上所述)；茶多酚(含量≥90％，由无锡太阳绿宝科技有限公司赠送)；褐藻寡糖茶多酚复合物(为本发明实施例4的复合制剂)
1.2 方法
1.2.1 对小鼠平均存或时间的影响
根据体重将80只雌性昆明小鼠，雌雄各半，随机分为辐照对照组、褐藻寡糖组(410mg/kg.d，为复合物配方的2倍)、茶多酚组(410mg/kg.d，为复合物配方的2倍)、褐藻寡糖茶多酚复合物组简称复合组。辐射前连续给药5d，每天一次。辐照当天，30min内给药一次，以后每天固定时间给药一次。给药方式为灌胃。粉剂以蒸馏水制成流质后灌胃。辐照对照组灌以等体积的蒸馏水。在照射后30d内每天观察记录各组小鼠死亡情况，求平均存活时间。
1.2.2 对60Co-γ射线照射小鼠外周血白细胞的影响
小鼠150只，随机分为5组，即正常对照组、辐照对照组、褐藻寡糖组(412mg/kg.d)，茶多酚组(408mg/kg.d)、复合组(410mg/kg.d)。每组30只小鼠。在照射前连续灌胃5d，每天1次，剂量同1.2.1。第6d照射后迅速给药1次，以后每天固定时间给药，每天1次。辐射后第15d眼眶取血测外周血白细胞总数。
照射条件：60Co-γ射线源，照射剂量一次性全身照射亚致死剂量5Gy。
1.2.3 对60Co-γ射线辐射小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响
小鼠50只，雌雄各半，随机分组同1.2.2，辐射48h后脱颈椎处死小鼠，取股骨、挑出骨髓，制片。以甲醇固定，Giemasa染色，于普通光学显微镜下镜检。每只动物计数1000个嗜多染红细胞(polychromatic erythrocytes,PCE)中的微核数，微核率以千分率表示。饲喂方法、照射方法和剂量同1.2.1。
2.数据分析
注：用t检验法进行分析。
3.实验结果
3.1对小鼠30d平均存活时间的影响
表1 小鼠平均存活时间的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg.d) | 平均存活时间(d) |
| 辐射对照组 | 0 | 8.1±2.6 |
| 褐藻寡糖组 | 300 | 13.5±4.3*b |
| 茶多酚组 | 300 | 12.2±5.2*a |
| 复合组 | 300 | 15.7±8.4** |
注：与辐射对照组相比**差异极显著(p<0.01)*表示差异显著(p<0.05)a与复合组相比差异极显著(p<0.01)b差异显著(p<0.05)不标表示差异不显著。
如表1中所示，褐藻寡糖组、茶多酚组、复合组的平均存活时间均显著高于辐照对照组(p＜0.01或0.05)褐藻寡糖、茶多酚、褐藻寡糖茶多酚复合物均可延长致死剂量照射小鼠的平均存活时间，其中褐藻寡糖茶多酚复合物延长小鼠存活时间显著高于褐藻寡糖组、茶多酚组的单独效应(p＜0.01或0.05)。
3.2 对外周血白细胞的影响
表2 小鼠外周血白细胞的影响
| 组别 | 动物数 | 外周血白细胞(×109/L) |
| 正常对照组 | 15 | 12.07±1.14 |
| 辐射对照组 | 15 | 2.12±1.82** |
| 褐藻寡糖组 | 15 | 5.36±1.47*ac |
| 茶多酚组 | 15 | 4.96±2.01*ac |
| 复合组 | 15 | 8.21±2.34*a |
注：用t检验法进行分析。与正常对照组相比**代表差异极显著(p<0.01)，*表示差异显著(p<0.05)a表示与辐射对照组相比差异极显著(p<0.01)b表示差异显著(p<0.05)；c表示与复合组比较，差异极显著(p<0.01)；d表示差异显著(p<0.05)。
从辐射15天后小鼠外周血白细胞总数可知，60Co-γ射线辐射可引起小鼠白细胞的极显著下降(从12.07±1.14下降至2.12±1.82，p＜0.01)。复合组、茶多酚组、褐藻寡糖组与辐射对照相比较，白细胞总数均高于对照组，呈现极显著性差异，p＜0.01。
与茶多酚组、褐藻寡糖组比较，复合组白细胞总数极显著增加(p＜0.01)，这说明褐藻寡糖茶多酚复合物在60Co-γ射线辐射可引起小鼠白细胞损伤方面要比两者的单独效应好。
3.3 对小鼠嗜多染红细胞微核率(micronulei rate)的影响
表3 对小鼠嗜多染红细胞微核率的影响
| 组别 | 动物数 | 微核数(个) | 微核率(‰) |
| 正常对照组 | 10 | 2.07±1.27 | 2.07 |
| 辐射对照组 | 10 | 36.31±5.42 | 36.31** |
| 褐藻寡糖组 | 10 | 22.11±2.12 | 22.11**ac |
| 茶多酚组 | 10 | 28.92±3.34 | 28.92**ac |
| 复合组 | 10 | 17.63±1.97 | 17.63**a |
注：用t检验法进行分析。与正常对照组相比**差异极显著(p<0.01)*表示差异显著(p<0.05)a与辐射对照组相比差异极显著(p<0.01)b差异显著(p<0.05)c与复合组比较差异极显著(p<0.01)d差异显著(p<0.05)
从表3可知，60Co-γ射线辐射可引起小鼠微核率极显著增加从2.07‰上升到36.31‰。与辐射对照组相比较，复合组、茶多酚组、褐藻寡糖组均能显著抑制微核率的发生(p＜0.01)。与茶多酚组，褐藻寡糖组比较，复合组微核率显著低于二者(p＜0.01)。说明茶多酚和褐藻寡糖要比单独使用更能降低60Co-γ射线辐射造成的微核产生。
Claims (5)
1.一种褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，其特征在于，所述复合制剂的活性成分为褐藻寡糖和茶多酚，所述褐藻寡糖和茶多酚按照重量比1:4~1:10混合。
2.根据权利要求1所述的褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，其特征在于，所述复合制剂还包括药学上可接受的辅料或赋形剂。
3.根据权利要求1所述的褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，其特征在于，所述褐藻寡糖的分子量为小于等于2000Da。
4.根据权利要求1所述的褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，其特征在于，所述褐藻寡糖的制备方法为称取2g-5g海藻酸钠，在冰水浴中加入15ml浓硫酸，置于常温下搅拌8-12h左右，然后再在冰水浴中加入60ml-90ml水，后置于100℃油浴中冷凝回流水解1-6h左右，反应结束后，加入无水碳酸钙粉末除去硫酸，至pH到6-7，加入活性炭脱色，再调pH到6-9，将水解液送入浓缩器中进行浓缩，得浓缩液缩；将浓缩液打入喷雾干燥器中进行喷雾干燥，得到固体褐藻寡糖。
5.根据权利要求1或2所述的褐藻寡糖茶多酚抗辐射复合制剂，其特征在于，所述复合制剂的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、口服液中的任一种口服制剂。
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