CN104498601A - 一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法 - Google Patents

一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104498601A
CN104498601A CN201410757718.5A CN201410757718A CN104498601A CN 104498601 A CN104498601 A CN 104498601A CN 201410757718 A CN201410757718 A CN 201410757718A CN 104498601 A CN104498601 A CN 104498601A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
hydrogel
snp
single nucleotide
apply
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410757718.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104498601B (zh
Inventor
刘明哲
张红利
蒋刚锋
汪伊月
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenyang Pharmaceutical University
Original Assignee
Shenyang Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenyang Pharmaceutical University filed Critical Shenyang Pharmaceutical University
Priority to CN201410757718.5A priority Critical patent/CN104498601B/zh
Publication of CN104498601A publication Critical patent/CN104498601A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104498601B publication Critical patent/CN104498601B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于疾病检测，药物分析领域。本发明涉及检测目标核酸分子，尤其是多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性（SNP）。本发明使用一种内部含有支链探针DNA的水凝胶作为检测材料。利用被检测DNA与探针DNA形成双链DNA时，单核苷酸错配的DNA（或含有多个单核苷酸变异的DNA）与完全互补的DNA之间的双链解旋温度（Tm）的差异，通过荧光染料鉴别SNP。本方法省略了各种处理和纯化步骤，具有高效，快速，结果肉眼可测等优点。

Description

一种基于DNA水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法
技术领域：
本发明属于疾病检测，药物分析领域。本发明涉及检测目标核酸分子，尤其是多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性(SNP)。
背景技术：
DNA水凝胶分为纯DNA水凝胶和DNA与人造高分子材料杂化的DNA水凝胶。本发明是将DNA嵌入高分子水凝胶中，使其成为兼具DNA和水凝胶功能的智能型水凝胶，属于后者。
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是由于单个碱基核苷酸改变而导致基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性。包括单碱基的转换、颠换、以及单碱基的插入/缺失等。一般而言，SNP是指变异频率大于1％的单核苷酸变异。在人类基因组中大概每1000个碱基就有一个SNP，人类基因组上的SNP总量大概是3×106个。
现在普遍认为SNP研究是人类基因组计划走向应用的重要步骤。这主要是因为SNP将提供一个强有力的工具，用于高危群体的发现、疾病相关基因的鉴定、药物的设计和测试以及生物学的基础研究等诸多科研和医疗领域。
目前，检测SNPs的方法主要有以下几种：1、测序方法：常规测序，Pyrosequencing(焦磷酸测序)，微测序(SNaPshot)；2、基于杂交的方法：Taqman探针法，Microarray芯片法；3、引物延伸：MALDI-Tof，dHPLC(变性高效液相色谱技术)；4、以构象为基础的方法：RFLP，SSCP，DGGE；5、溶解曲线：HRM(高分辨率溶解曲线分析技术)。这些方法都需要借助相应的仪器，操作繁琐，且费用昂贵。
SYBR Green I是一种结合于所有双链DNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下或含有单链DNA时，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。除了SYBR Green I外还有溴化乙锭(缩写EtBr，EB)，pico Green，GelRed和GelGreen等荧光染料可用于检测双链DNA。
发明内容：
本发明提供了一种可在特定波长的光照下快速肉眼检测多个单核苷酸变异或SNP的方法。本发明制备并使用一种内部含有支链探针DNA的水凝胶作为检测材料。本发明利用被检测DNA与探针DNA形成双链DNA时，单核苷酸错配的DNA(或含有多个单核苷酸变异的DNA)与完全互补的DNA之间的双链解旋温度(Tm)的差异，通过荧光染料鉴别SNP(或多个单核苷酸变异)。
本发明所提供的水凝胶的结构和形态如图1、2所示：
其中：m、n、x的比值为1:10～50：0.00001～0.001，优选为1:20～30：0.00001～0.01，x的值是根据被检测DNA的量可调。
本发明提供的基于DNA水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法包括以下步骤：
1)制备DNA水凝胶：该水凝胶是以甲叉双丙烯酰胺(MBAAm)为交联剂，丙烯酰胺(AAm)与甲基丙烯酰胺修饰探针DNA的共聚物为骨架的高分子水凝胶。其中甲基丙烯酰胺修饰探针DNA是通过DNA合成仪将甲基丙烯酰胺单体(制备方法参见中国专利申请2013107110031)接入到下述探针DNA序列末端制备而得的。该水凝胶性质参数同于常规的分子生物学用的聚丙烯酰胺电泳凝胶，生物相容性好，凝胶内部呈中性，有助于提高检测灵敏度和信噪比。
具体的制备方案如下：在凝胶单体溶液中(AAm与MBAAm的物质的量之比为10～50:1)，加入甲基丙烯酰胺修饰探针DNA，在引发剂过硫酸铵(APS)和N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED)的作用下，交联成含有探针DNA的AAm含量为4～25％的DNA水凝胶。
2)DNA分子杂交：将步骤1)中制得的水凝胶分别加入到含有完全互补DNA的缓冲液和被检测DNA缓冲液(含有多个单核苷酸变异或SNP)中进行分子杂交。根据所形成的双链DNA的解链温度(Tm)的差异，使完全互补DNA与含有多个单核苷酸变异或SNP的DNA在凝胶中的含量形成显著差异。
3)荧光染料染色成像：将荧光染料(具体可为SYBR Green I，溴化乙锭，PicoGreen，GelRed和GelGreen等对双链DNA具有选择性的核酸检测染料)加入到步骤2)中的缓冲液中进行染色。经特定波长的光照成像，实现SNP的肉眼鉴别。
本发明所提供的多个单核苷酸变异或SNP的检测方法省略了各种处理和纯化步骤，具有高效，快速，结果肉眼可测等优点。本发明提供的方法可检测C/C、A/A、G/G、G/T、G/A、C/A、C/T、T/T SNP以及两个以上的单核苷酸错配的单链DNA。由于探针DNA固定在凝胶内部，因此可实现传感信号在凝胶块儿内的富集，从而达到高检测灵敏度(被检测DNA小于5纳克)。
附图说明：
图1为含有DNA的聚丙烯酰胺高分子及结构。
图2为本发明的DNA水凝胶照片。
图3为实施例2中水凝胶对C/C SNP及含有两个单核苷酸变异的被检测DNA的检测结果(从左到右依次为1-6号管)。
图4为实施例3中水凝胶对A/A SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
图5为实施例4中水凝胶对G/G SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
图6为实施例5中水凝胶对G/T SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
图7为实施例6中水凝胶对G/A SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
图8为实施例7中水凝胶对C/A SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
图9为实施例8中水凝胶对C/T SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
图10为实施例8中水凝胶对T/T SNP的检测结果(从左到右为1、2、3号管)。
具体实施方案：
实施例1
DNA水凝胶的制备过程如下：
1)25％凝胶单体的制备
称取2.5g(0.035mmol)AAm，0.187g(0.0012mmol)MBAAm，用灭菌水定容至10.0ml。
2)4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液的制备
称取0.650g HEPES，0.313g Na2HPO4·12H2O，0.800g NaCl，加入40.0ml灭菌水，用1M NaOH溶液调节pH 7.0，定容至50.0ml。
3)DNA水凝胶的制备
量取适量25％的凝胶单体溶液，加入探针DNA溶液，震荡混匀。加入新鲜配制的10％APS水溶液，10％TEMED溶液，室温下静置30min。将凝胶浸泡在HEPES缓冲液中3h×3次。(探针DNA的浓度可以根据具体情况作出相应的改变。)水凝胶性质参数同于常规的分子生物学用的聚丙烯酰胺电泳凝胶。
实施例2
C/C SNP及含有两个单核苷酸变异的被检测DNA的检测：
取六小块实施例1中制备的DNA水凝胶，编号1,2,3,4,5,6。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2-6号管中各加入18.0μl HEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10.0μM的F-DNA，M1-DNA，M2-DNA，M3-DNA，SCR-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；M1-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个C/C单核苷酸错配的序列；M2-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有两个单核苷酸错配的序列；M3-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有三个单核苷酸错配的序列；SCR-DNA为与探针DNA不相关的随机序列)。孵育0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲液浸泡洗涤3次。吸出缓冲液，各加入18μl HEPES缓冲液和2μlSYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于不含F-DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图3所示。
实施例3
A/A SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18μl HEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10.0μM的F-DNA和A/A-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；A/A-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个A/A单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10min。吸出缓冲液，各加入18.0μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含A/A错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图4所示。
实施例4
G/G SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18.0μlHEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10.0μM的F-DNA和G/G-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；G/G-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个G/G单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10。吸出缓冲液，各加入18.0μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含G/G错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图5所示。
实施例5
G/T SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18.0μlHEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10.0μM的F-DNA和G/T-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；G/T-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个G/T单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10min。吸出缓冲液，各加入18μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含G/T错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图6所示。
实施例6
G/A SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18.0μlHEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10.0μM的F-DNA和G/A-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；G/A-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个G/A单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10min。吸出缓冲液，各加入18μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含G/A错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图7所示。
实施例7
C/A SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18.0μlHEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10.0μM的F-DNA和C/A-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；C/A-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个C/A单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10。吸出缓冲液，各加入18.0μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含C/A错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图8所示。
实施例8
C/T SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18.0μlHEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10μM的F-DNA和C/T-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；C/T-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个C/T单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10min。吸出缓冲液，各加入18.0μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含C/T错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图9所示。
实施例9
T/T SNP的检测：
取3小块上述制备的DNA水凝胶，编号1,2,3。用HEPES缓冲液浸泡0.5h，吸出缓冲液。1号管中加入20.0μl HEPES缓冲液，2、3号管中各加入18.0μlHEPES缓冲液，然后分别加入2.0μl的10μM的F-DNA和T/T-DNA(F-DNA为与探针DNA形成的双链部分完全互补的序列；T/T-DNA为与探针DNA形成的双链部分中含有一个T/T单核苷酸错配的序列)。0.5h后，吸出液体，用HEPES缓冲浸泡10min。吸出缓冲液，各加入18.0μl HEPES缓冲液和2.0μl SYBR 250×，375nm紫外灯下观察。可以明显看到含有与探针DNA完全互补的序列F-DNA的2号管中的凝胶的荧光强度明显大于含T/T错配DNA序列的凝胶的荧光强度。结果如图10所示。
本发明所用到的DNA序列如下所示：
探针DNA:TTT TTT TTA GGC ACA AAC ACG CA (5’-3’)
F-DNA:GAG GTG CGT GTT TGT GCC T (5’-3’)
M1-DNA:GAG GTG CGT CTT TGT GCC T (5’-3’)
M2-DNA:GAG GTG CGT CTT TCT GCC T (5’-3’)
M3-DNA:GAG GTG CCT CTT TCT GCC T (5’-3’)
SCR-DNA:TAT ACC GCT GCT AGC GGA G (5’-3’)
A/A-DNA:GAG GTG CGT GAT TGT GCC T (5’-3’)
G/G-DNA:GAG GTG GGT GTT TGT GCC T (5’-3’)
G/T-DNA:GAG GTG TGT GTT TGT GCC T (5’-3’)
G/A-DNA:GAG GTG AGT GTT TGT GCC T (5’-3’)
C/A-DNA:GAG GTG CGT ATT TGT GCC T (5’-3’)
C/T-DNA:GAG GTG CTT GTT TGT GCC T (5’-3’)
T/T-DNA:CTC AGT TTG TGC CTT A AAA (5’-3’)
粗体表示互补配对序列，下划线表示错配碱基。
结论：本发明可以简便、快速地检测出C/C、A/A、G/G、G/T、G/A、C/A、C/T、T/T SNP以及两个以上的单核苷酸错配的单链DNA。

Claims (9)

1.DNA水凝胶检测单核苷酸变异或单核苷酸多态性中的应用，其特征在于，所述DNA水凝胶的结构如下：
其中
m、n、x的比值为1:10～50：0.00001～0.001。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的DNA水凝胶是以甲叉双丙烯酰胺为交联剂，丙烯酰胺与甲基丙烯酰胺修饰探针DNA的共聚物为骨架的高分子水凝胶。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的甲基丙烯酰胺修饰探针DNA是通过DNA合成仪将甲基丙烯酰胺单体接入到下述探针DNA序列末端制备而得的。
4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，在凝胶单体溶液中，加入甲基丙烯酰胺修饰探针DNA，在引发剂过硫酸铵和N,N,N’,N’-四甲基乙二胺的作用下，交联成含有探针DNA的丙烯酰胺含量为4～25％的DNA水凝胶。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺＝10～50:1，优选为：20～30:1。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的单核苷酸变异是指C/C、A/A、G/G、G/T、G/A、C/A、C/T、T/T SNP以及两个以上的单核苷酸错配。
7.如权利要求1-6任何一项所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备DNA水凝胶；
(2)DNA分子杂交和控温洗涤；
(3)荧光染料染色成像。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的DNA分子杂交为：将步骤1)中制得的水凝胶分别加入到含有完全互补DNA的缓冲液和被检测的含有多个单核苷酸变异或SNPDNA缓冲液中，在特定温度下进行分子杂交和洗涤。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，将荧光染料加入到步骤2)中的缓冲液中进行染，经特定波长的光照成像，实现SNP的肉眼鉴别；所述的荧光染料为SYBR Green I，溴化乙锭，PicoGreen，GelRed或GelGreen等可选择性结合双链核酸的核酸检测染料。
CN201410757718.5A 2014-12-10 2014-12-10 一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法 Active CN104498601B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410757718.5A CN104498601B (zh) 2014-12-10 2014-12-10 一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410757718.5A CN104498601B (zh) 2014-12-10 2014-12-10 一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104498601A true CN104498601A (zh) 2015-04-08
CN104498601B CN104498601B (zh) 2018-03-30

Family

ID=52940051

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410757718.5A Active CN104498601B (zh) 2014-12-10 2014-12-10 一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104498601B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107557459A (zh) * 2017-09-29 2018-01-09 沈阳药科大学 一种联合使用DNA水凝胶和DNAzyme检测SNP的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103804590A (zh) * 2013-12-19 2014-05-21 沈阳药科大学 一种dna水凝胶及其在过氧化物检测中的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103804590A (zh) * 2013-12-19 2014-05-21 沈阳药科大学 一种dna水凝胶及其在过氧化物检测中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUEWEN LIU: "Oligonucleotide-functionalized hydrogels as stimuli responsive materials and biosensors", 《SOFT MATTER》 *
YOSHIHIKO MURAKAMI ET AL.: "Hybrid Hydrogels to Which Single-Stranded (ss) DNA Probe Is Incorporated Can Recognize Specific ssDNA", 《MACROMOLECULES》 *
孙蓓丽: "基于聚丙烯酰胺凝胶的高通量SNP检测芯片的研究及应用", 《中国优秀硕士论文全文数据库》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107557459A (zh) * 2017-09-29 2018-01-09 沈阳药科大学 一种联合使用DNA水凝胶和DNAzyme检测SNP的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104498601B (zh) 2018-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5385973B2 (ja) 反応における複数の核酸配列の同時検出
JP6085564B2 (ja) 標的核酸の検出法
ES2656958T3 (es) Medición de la longitud de telómeros en muestras fijadas en formalina, embebidas en parafina (FFPE) por PCR cuantitativa
US20110033855A1 (en) Method for quantifying target nucleic acid molecules and kit for quantifying target nucleic acid molecules
Choi et al. Hydrogel micropost-based qPCR for multiplex detection of miRNAs associated with Alzheimer's disease
Brockman et al. Direct observation of single flexible polymers using single stranded DNA
PT1805199E (pt) Métodos de amplificação de ácidos nucleicos
WO2010058342A1 (en) Real time multiplex pcr detection on solid surfaces using double stranded nucleic acid specific dyes
US20190256899A1 (en) Nucleic acid amplification and use thereof
KR20120017033A (ko) 반응 카트리지에서의 다중 핵산 서열의 검출
CN107257862A (zh) 从多个引物测序以增加数据速率和密度
Knob et al. Sequence-specific sepsis-related DNA capture and fluorescent labeling in monoliths prepared by single-step photopolymerization in microfluidic devices
JP2013081450A (ja) 多型検出用プローブ、多型検出方法、薬効判定方法及び多型検出用試薬キット
BRPI0807826A2 (pt) " geração de moléculas de ácido nucleico ".
CN104498601A (zh) 一种基于dna水凝胶检测多个单核苷酸变异或单核苷酸多态性的方法
CN1269967C (zh) 单核苷酸多态性的鉴定
ES2899826T3 (es) Kit para detectar conjuntamente múltiples ácidos nucleicos diana que difieren entre sí y procedimiento de detección usando el mismo
KR20070100531A (ko) 쌍이온 화합물을 이용한 핵산 혼성화 특이성을 증가시키는방법
CN102424833A (zh) 多基因突变位点的实时pcr基因检测芯片及其检测方法
US11369945B2 (en) Simple single-step porous polymer monolith for DNA extraction
JP5843112B2 (ja) 標的塩基配列の識別方法
CN112063759A (zh) 一种同时检测香蕉多种病毒的rt-lamp引物、试剂盒及检测方法
CN108646014A (zh) 基于适体构象变化的荧光检测血小板源性生长因子的方法
EP3914734B1 (en) Compositions and method for synthesizing nucleic acids
US11427862B2 (en) Oligonucleotides and methods for internal control of eukaryotic DNA amplification reactions

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant