CN104483314A - 提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的在于提供了一种热稳定性高的食用油过氧化值试纸,大大缩短了样品处理和检测时间,提高试纸的准确度,从而实现样品的现场快速检测。提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法步骤如下:(1)把柠檬酸缓冲剂、还原剂、表面活性剂、底色原料和稳定剂溶解在去离子水中,得到溶液A;(2)把显色剂和反应促进剂溶解在无水乙醇中,得到溶液B;(3)把滤纸依次在溶液A和溶液B中浸泡后鼓风干燥;(4)干燥好的滤纸分切成试纸块,封装;(5)检测反射率的波长范围600-650nm;(6)配制各级过氧化值标准液(0-12meq/kg),用化学滴定法标定真实值;在试纸块上定量滴加标准液,选定波长检测试纸块的反射率,做出反射率-过氧化值关系曲线和标准方程。
Description
技术领域
本发明涉及食用油安全检测领域,具体涉及一种提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法。
背景技术
食用油过氧化值的检测是确保油品质量的关键手段,国内外广泛使用的测定方法主要有高效液相色谱法和化学滴定法。高效液相色谱法需使用大型仪器,实际成本高,难以作为普查使用;而化学滴定法的反应时间长,步骤繁琐,试剂需提前一周以上时间配制,全部手工操作,易受操作人员的人为因素干扰。目前我国各防疫部门检测食用油过氧化值都按照GB/T5009.37-1996规定的分析方法(化学滴定法)。国内外相继发表了检测过氧化值的发明文献专利,如中国专利(CN87106131.7)“过氧乙酸测定试纸及其制备方法”涉及用试纸测定水溶性消毒液中的过氧乙酸的含量;日本专利(53-30383)“油脂中过氧化物测定试纸的制备方法”是以可溶性淀粉、碘化钾作为主要成分,都具有如下缺陷:对光和氧敏感,易失效;反应时间长,超过5分钟;只能定性和半定量测量,不能测出准确的数值等。
经对现在技术文献的检索发现,中国专利申请号为03114362.8,名称为“一种检测液态食用油的过氧化值的方法”该专利中采用通过在高分子骨架结构中吸附药物并干燥,制备成含药膜片。当液态食用油样品接触膜片时,油样品中的过氧化物与膜片中所含药物发生反应,显现颜色,颜色变化的程度与油样品的过氧化值的关系可以用二次方程表达。在可见光范围内检测膜片的反射率可以准确测定过氧化值。同时也可以与比色表配合使用,目测判定过氧化值的范围。该方法制备的试纸热稳定性差,50℃烘烤一天试纸灵敏度明显下降,大大降低了试纸的准确度。在光电化学试条中,较为普遍的是在使用前的某一时间制造这些试条,在此期间对试条进行存放。在存放期间,一些还原剂已失活,因此当最终使用该试条时,就可能得到不准确的结果。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足,提供了一种热稳定性高的食用油过氧化值试纸,使其易于产业化制作和一次性使用,并且大大缩短了样品处理和检测时间,提高试纸的准确度,从而实现样品的现场快速检测。该方法通过在高分子骨架结构中吸附药物并干燥,制备成试纸块。当食用油样品接触试纸块时,油样品中的过氧化物与试纸块中所含药物发生反应,显现颜色,颜色变化的程度与油样品的过氧化值的关系可以用二次方程表达。在可见光范围内检测试纸块的反射率可以准确测定过氧化值。
试纸块中含有的药物由柠檬酸缓冲剂、稳定剂、显色剂、还原剂、表面活性剂、底色原料、反应促进剂等构成。
稳定剂是甘露醇和海藻糖两者的混合,甘露醇是山梨糖醇的异构化体,山梨糖醇的吸湿性很强,而该品完全没有吸湿性,甘露醇无吸湿性,干燥快,化学稳定性好,不易被空气中的氧所氧化。耐油性、耐热氧化性以及尺寸稳定性均较好,耐热度更是高达180℃。海藻糖又称漏芦糖、蕈糖,是由两个葡萄糖分子以1,1-糖苷键构成的非还原性糖,对多种生物活性物质具有非特异性保护作用。科学家们发现,沙漠植物卷叶柏在干旱时几近枯死,遇水后却又可以奇迹般复活;高山植物复活草能够耐过冰雪严寒;一些昆虫在高寒、高温和干燥失水等条件下不冻结、不干死,就是它们体内的海藻糖创造的生命奇迹。海藻糖因此在科学界素有“生命之糖”的美誉。国际权威的《自然》杂志曾在2000年7月发表了对海藻糖进行评价的专文,文中指出:“对许多生命体而言,海藻糖的有与无,意味着生命或者死亡”。海藻糖对生物体具有神奇的保护作用,是因为海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征。许多对外界恶劣环境表现出非凡抗逆耐受力的物种,都与它们体内存在大量的海藻糖有直接的关系。而自然界中如蔗糖、葡萄糖等其它糖类,均不具备这一功能。这一独特的功能特性,使得海藻糖可以作为蛋白质药物、酶、疫苗和其他生物制品的优良活性保护剂,海藻糖可应用于研究用生物试剂的保存,作为对生物酶制剂中反应中激活剂与稳定剂。例如各种工具酶、细胞膜、细胞器、抗体、抗原及病毒等等,使得生命科学研究更为方便快捷有效,英国大学Camilo.C等详细的研究了海藻糖对DNA限制性内切酶、DNA连接酶和DNA聚合酶的保护作用,结果表明,所有加入海藻糖干燥的酶样,在70℃保存35天或在37℃保存9个月后,其活力并无损失,仍能精确的将DNA截断。我国中科院微生物研究所应用海藻糖干燥制备、用于人血清胆固醇测定的三种诊断工具酶,在室温下长期保存后,活性保持率都在90%以上,现已成功的进入于临床应用。这是其它种类的保护剂都不可能达到的效果,利用海藻糖作为诊断工具酶等生物试剂的稳定剂和保护剂,可置于常温条件下干燥并保存,不仅简化了生物试剂的制备过程,也给我国幅员广大的农村地区患者的疾病诊治带来便利。温度是影响酶反应效率的重点因素之一,高温能提高酶的催化活力,但易使酶失活。研究发现海藻糖在高温下能保持酶的正常活性,甚至起热激活作用,还能用于提高干燥保存的酶的活性。在反应体系中加入海藻糖,使热敏感的酶在高温下稳定性和活性增加,可当作耐热酶使用,海藻糖的这一作用在生物药学和工业生产领域具有广泛的应用价值。
显示剂是联苯胺的衍生物,分子式为:[R1C6HmNR2]2;其中m=2-4,R1=H,CH3,C6H5,CH3O,NH2;R2=H,CH3。还原剂为辣根过氧化物酶,反应促进剂是噻唑、,的衍生物,分子结构为:R3C6HmN:C(R4)S;其中m=3-4;R3=H,CH3,C2H5;R4=H,OH,SH,NH2。表面活性剂是十二烷基硫酸钠、吐温20、OP-10、曲拉通100及渗透剂OT,底色原料是甲基橙、橙黄G。
试纸块的制备,按以下步骤进行:
(1)把柠檬酸缓冲剂、还原剂、表面活性剂、底色原料和稳定剂溶解在去离子水中,得到溶液A。
(2)把显色剂和反应促进剂溶解在无水乙醇中,得到溶液B。
(3)把滤纸依次在溶液A和溶液B中浸泡并在温度50-70℃下鼓风干燥。
(4)干燥好的滤纸分切成试纸块,封装在真空铝箔袋或装有硅胶干燥剂的塑料瓶内。
(5)检测反射率的波长范围600-650nm,最好是630nm。
(6)标准曲线的制作:配制各级过氧化值标准液(0-12meq/kg),用化学滴定法标定真实值。在试纸块上定量滴加标准液,120秒后选定波长检测试纸块的反射率,做出反射率-过氧化值关系曲线和标准方程。
使用方法:
在试纸块上滴加样品,120秒后在选定的波长测定试纸块的反射率,若反射率在食用油检测仪的检测范围之内,则可通过食用油检测仪自动处理转化,并与单片机中储存的标准曲线进行比对,转化为过氧化值的浓度,直接由显示器显示出检测结果。
具体实施方式
下面以具体实施方式对本发明进行进一步说明,但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1试剂组合物的稳定剂只有海藻糖的试纸块的制备
1、将100g的柠檬酸缓冲试剂、1.6g辣根过氧化物酶、2.8g表面活性剂、12g底色原料和100g的海藻糖依次溶解在1000mL的去离子水中。将滤纸浸入溶液中,1分钟后取出,60℃烘干;再把15g的显色剂、10g反应促进剂溶解在1000mL的无水乙醇中,把滤纸在溶液中浸泡1分钟,取出并在60℃下烘干,分切成5×5mm正方形试纸块分装在密闭真空包装的铝箔袋待用。同时取少量试纸块密封放置于60℃的烘箱中分别连续烘烤1天,2天,7天。
2、用吸管在试纸块上滴加一滴待测油样的样品,120秒后在食用油检测仪检测试纸块的反射率,并通过食用油检测仪自动处理转化,与单片机中储存的标准曲线进行比对,转化为过氧化值的浓度,直接由显示器显示出检测结果。试验结果见表1
表1实例1油样测试结果
实施例2试剂组合物的稳定剂只有甘露醇的试纸块的制备
1、将100g的柠檬酸缓冲试剂、1.6g辣根过氧化物酶、2.8g表面活性剂、12g底色原料和100g的甘露醇依次溶解在1000mL的去离子水中。将滤纸浸入溶液中,1分钟后取出,60℃烘干;再把15g的显色剂、10g反应促进剂溶解在1000mL的无水乙醇中,把滤纸在溶液中浸泡1分钟,取出并在60℃下烘干,分切成5×5mm正方形试纸块分装在密闭真空包装的铝箔袋待用。同时取少量试纸块密封放置于60℃的烘箱中分别连续烘烤1天,2天,7天。
2、用吸管在试纸块上滴加一滴待测油样的样品,120秒后在食用油检测仪检测试纸块的反射率,并通过食用油检测仪自动处理转化,与单片机中储存的标准曲线进行比对,转化为过氧化值的浓度,直接由显示器显示出检测结果。试验结果见表2
表2实例2油样测试结果
实施例3试剂组合物的稳定剂为甘露醇和海藻糖的混合物试纸块的制备
1、将100g的柠檬酸缓冲试剂、1.6g辣根过氧化物酶、2.8g表面活性剂、12g底色原料和100g的甘露醇和海藻糖的混合物依次溶解在1000mL的去离子水中。将滤纸浸入溶液中,1分钟后取出,60℃烘干;再把15g的显色剂、10g反应促进剂溶解在1000mL的无水乙醇中,把滤纸在溶液中浸泡1分钟,取出并在60℃下烘干,分切成5×5mm正方形试纸块分装在密闭真空包装的铝箔袋待用。同时取少量试纸块密封放置于60℃的烘箱中分别连续烘烤1天,2天,7天。
2、用吸管在试纸块上滴加一滴待测油样的样品,120秒后在食用油检测仪检测试纸块的反射率,并通过食用油检测仪自动处理转化,与单片机中储存的标准曲线进行比对,转化为过氧化值的浓度,直接由显示器显示出检测结果。试验结果见表3
表3实例3油样测试结果
Claims (2)
1.提高检测食用油过氧化值试纸热稳定性的方法,其步骤如下:
(1)把柠檬酸缓冲剂、还原剂、表面活性剂、底色原料和稳定剂溶解在去离子水中,得到溶液A;
(2)把显色剂和反应促进剂溶解在无水乙醇中,得到溶液B;
(3)把滤纸依次在溶液A和溶液B中浸泡并在温度50-70℃下鼓风干燥;
(4)干燥好的滤纸分切成试纸块,封装在真空铝箔袋或装有硅胶干燥剂的塑料瓶内;
(5)检测反射率的波长范围600-650nm,最好是630nm;
(6)标准曲线的制作:配制各级过氧化值标准液(0-12meq/kg),用化学滴定法标定真实值;在试纸块上定量滴加标准液,120秒后选定波长检测试纸块的反射率,做出反射率-过氧化值关系曲线和标准方程。
2.根据权利要求1所述的方法,所述稳定剂为甘露醇或海藻糖或两者的混合物。
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