CN104478991B - 一种新型多肽化合物及其制备方法和其医药应用 - Google Patents

一种新型多肽化合物及其制备方法和其医药应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种多肽活性化合物，特别是羟脯氨酸的三肽化合物及其制备方法，以及所述化合物的医药用途，特别是皮肤美容，包括治疗皱纹的应用。本发明涉及的化合物具有很好的抗皱纹作用，其活性高于市场现在使用的同类产品，并且通过本发明的制备方式制备，得到产品的产率高，非常适用于市场普及推广。所述多肽活性化合物结构式如下：

Description

一种新型多肽化合物及其制备方法和其医药应用
技术领域
本发明属于医药领域，特别涉及一种多肽化合物和其制备方法，以及和其医药应用，特别是皮肤美容的应用。
背景技术
皱纹的产生与年龄、表情肌和重力等密切相关。当表情肌收缩时，皮肤会收缩而出现皱纹。正常的、年轻的皮肤具有一定的弹性和张力，当表情肌松弛后，皮肤会很快复原，使皱纹消失。人进入中年后，人体各项机能活跃度逐渐下降，皮肤作为人体最大的器官也开始明显老化，皮肤变薄、变硬、干燥、张力降低。真皮弹力纤维、断裂，使皮肤的张力和弹性降低，这样，当表情肌松弛后，皮肤不能很快复原，久之则使皱纹“凝固”下来，表情肌不收缩皱纹依然存在。随年龄增大，皮肤和皮下组织更加松弛，加上面部支持组织的萎缩或缺失，以及肌肉的松软，皮肤将会在重力的作用下发生滑坠，形成更深的皱纹。
目前通常采用侵入式的方法祛除皱纹，如采用注射肉毒杆菌毒素(Botox)使面部表情肌麻痹松弛而达到迅速祛皱的功效。Botox作用于胆碱能运动神经末梢，神经肌肉接头即突触处，抑制突触前膜神经介质—乙酰胆碱的释放，使肌肉纤维不能收缩，肌张力减低，因而肌肉麻痹。这种肌松弛时间是有限的，只能维持3～6个月。这种方式也伴随着很大的风险，如感染、疼痛、注射不当引起面瘫等。
在此基础上，彭特法姆股份公司申请的专利CN101061134A公开了一种Dipeptidediaminobutyroyl benzylamide diacetate，其具有良好的对抗皱纹的作用。其不具有Botox的风险，局部外用即可取得较好效果。与Botox不同，Dipeptide diaminobutyroylbenzylamide diacetate作用于突触后膜，是肌肉烟碱乙酰胆碱受体(nmAChR)可逆转的拮抗剂。其与nmAChR的ε亚单位结合从而阻滞神经递质乙酰胆碱与受体的结合，使兴奋传递减弱，肌肉受到刺激减少而松弛。
随着市场的增长，人们对祛皱抗衰产品的需求也在逐渐增长，虽然Dipeptidediaminobutyroyl benzylamide diacetate具有较好的祛皱效果，但并不能满足市场的需求，加之其昂贵的价格，也限制了其在市场的推广应用。
发明内容
本发明的目的是寻找祛皱效果更好，成本低，适合市场推广普及的化合物。通过大量实验在Dipeptide diaminobutyroyl benzylamide diacetate的基础上进行结构改造而得到本发明优选化合物，偶然发现在Dipeptide diaminobutyroyl benzylamidediacetate杂环上引进一个羟基，也即将其脯氨酸改成羟脯氨酸，得到了一系列具有优越活性的羟脯氨酸的三肽化合物。
根据药效试验测试，在建立的人肌细胞和来自小鼠胚胎的脊髓的神经元的共培养模型中分别加入本发明的化合物和Dipeptide diaminobutyroyl benzylamidediacetate，观察培养模型的肌肉收缩频率(详见表5)，发现本发明的化合物NO.3等化合物与Dipeptide diaminobutyroyl benzylamide diacetate相比(P＜0.05)，有显著性差异，证明了本发明的化合物NO.3等化合物具有更强的活性，更优秀的祛皱效果。
发明人推测本发明化合物具有更好的祛皱效果是由于结构中引进的羟基增加了化合物的极性，或者与受体形成氢键，使其与肌肉烟碱乙酰胆碱受体结合更牢固，从而延长作用时间增强拮抗阻断效果。
本发明化合物具有以下通式：
其中
X表示碳键或NH-CH(C＝O)-(CH2)3+n-NH-R5
n表示0、1或2，
R1、R4和R5彼此独立地表示氢、任选经取代的C1-C6-烷基、脒基或四-C1-C6-烷鎓
R2表示氢或任选经取代的C1-C6-烷基，
或者
R1和R2与它们所结合的残基一起表示5-至7-元的饱和环，
R3表示C1-C12-烷氧基、C1-C12-烷基氨基、任选经取代的芳基-C1-C6-烷基氨基、任选经取代的杂芳基-C1-C6-烷基氨基、任选经取代的芳基-C1-C6-烷氧基或任选经取代的杂芳基-C1-C6-烷氧基，并且
R6表示氢，或者当n是1时，也表示氨基，或者与R1以及R6和R1所结合的残基一起表示5-至7-元的饱和环。
本发明进一步涉及前面定义的化合物和盐作为可皮肤外用的活性物，可以制成各种剂型皮肤外用。
上面使用的通用术语如下定义：“烷基”自身作为基团和作为含烷基的基团的结构元件，表示线性以及支化的、饱和的烃残基。实例为不支化的甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正已基、正庚基、正辛基、正壬基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基和正十九烷基，以及支化的异丙基、叔丁基、异丁基、仲丁基和异戊基。
“芳基”表示芳族的烃残基，例如苯基和萘基，优选为苯基。
“杂芳基”指由一个或两个环组成的5-至11-元芳族环体系，其中1至3个成员是选自氧、硫和氮的杂原子；1至2个苯环可以缩合在杂环上。实例为吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、酞嗪基、吡咯基、吡唑啉基、咪唑啉基、1，2，4-三唑啉基、四唑啉基、呋喃基、噻吩基、噁唑啉基、噻唑啉基、异噻唑啉基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基和苯并噻唑基，其中连接可以发生在杂环部分(Heteroteil)或苯环部分(Benzoteil)，并且在Л-过剩杂芳族化合物的情况下发生在氮或任何碳上。
由R1和R2或者R1和R6与它们所结合的残基一起可以形成的5-至7-元饱和环的实例为吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂基、噁唑烷基、噻唑烷基和1，2，3，4-四氢喹啉基。
任选经取代的烷基残基和含有这些残基的基团的取代基是，例如卤素、氨基、胍基、羟基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷硫基、羧基、氨基甲酰基、任选经取代的苯基、任选经取代的苄基、咪唑基甲基、吲哚基甲基和氰基。
任选经取代的芳基和杂芳基基团的取代基是例如卤素、C1-C6-烷基、羟基、C1-C6-烷氧基、C1-C6-烷氧基羰基、CN、氨基、C1-C6-烷基氨基、二-C1-C6-烷基氨基、氨基羰基、C1-C6-烷基氨基羰基、二-C1-C6-烷基氨基羰基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基硫酰基、C1-C6-烷基磺酰基、任选经取代的苄基、任选经取代的苯基、任选经取代的苯氧基或任选经取代的苯基羰基，其中上述芳族环可以由1至3个相同或不同的选自卤素、氰基、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、羟基、氨基、C1-C6-烷基氨基、二-C1-C6-烷基氨基和C1-C6-烷氧基羰基的取代基取代。
“卤素”指氟、氯、溴和碘，优选氟和氯。
在式I中，R1优选表示氢，R2优选表示氢或甲基，R3优选表示芳基-C1-C6-烷基氨基并且n优选表示0或1。特别优选的是这样的式I化合物，其中R1表示氢，R2表示氢或甲基，R3表示芳基-C1-C6-烷基氨基并且n优选表示0或1。
特别优选的本发明化合物是：
H-(β-Ala)-Hyp-Arg-NH-苄基；
H-(β-Ala)-Hyp-Gln-NH-苄基；
H-(β-Ala)-Hyp-Dab-NH-苄基或其盐酸盐；
H-(β-Ala)-Hyp-Glu-NH-苄基；
H-(β-Ala)-Hyp-Ser-NH-苄基或其醋酸盐；
H-(β-Ala)-Hyp-Lys-NH-苄基。
以及这些化合物的酸加成盐。
在下面表1-3中的单个化合物举例说明了本发明。
表1：式(I)化合物，其中X表示键
表2：式(I)化合物，其中R6如果存在的话表示氢
表3：式(I)化合物，其中n表示1
式(I)化合物何以与酸形成单价或多价的、均质或混合的盐，例如与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸；或者与合适的羧酸，例如脂族的一元或二元羧酸，如甲酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、富马酸、丙二酸、马来酸、草酸、邻苯二甲酸、柠檬酸、乳酸或酒石酸；或者与芳族羧酸如苯甲酸或水杨酸；或者与芳族-脂族羧酸如扁桃酸或肉桂酸；或者与杂芳族羧酸如烟酸；或者与脂族或芳族磺酸如甲磺酸或苯甲磺酸。优选的为皮肤病学适合的盐。特别优选的为与乙酸和/或三氟乙酸和/或乳酸形成的盐。
通式(I)化合物及其盐可以以光学纯的异构体形式或者以不同异构体的混合物形式(例如作为外消旋物)和/或以旋转异构体的混合物形式存在。
根据本发明，通式I化合物及其盐可以如下制备：通过使用在肽化学领域中本身已知的方法来完整地形成式(I)的化合物，任选裂解剩余的保护基团，任选使游离的氨基进行烷基化或将其转变成胍基官能团和/或使游离的羧基酯化或酰胺化和/或将得到的碱性化合物转化成酸加成盐和/或将获得的酸加成盐转化成相应的共轭碱或转化成另一种盐。
本发明另一发明目的为提供一种可皮肤外用的组合物，所述组合物含有至少一种前述的化合物。
或者可皮肤外用的组合物，所述组合物含有：
a)至少一种所述的化合物，以及
b)安全且有效量的至少一种另外的皮肤护理活性物质，其选自抗皱纹的活性物质或抗萎缩的活性物质。
本发明的式I化合物及其盐可以根据一般常用方法加工成各种可皮肤外用的制剂。通式I化合物及其盐在终端消费者的皮肤外用成品制剂中的浓度为0.5-5000ppm(w/w)，优选1-1000ppm(w/w)的浓度使用，所述浓度按本发明化合物或其盐和载体材料的重量计算。
本发明的式I化合物及其盐的使用形式为溶液/乳状液/混悬液，或者包封于大颗粒、微颗粒或纳米颗粒中或包封于微海绵体中，或者包囊在载体如大胶囊、微胶囊或纳米胶囊中，包囊在脂质体或乳糜微粒中，或者吸收在粉末状的有机聚合物、滑石、膨润土和/或其他矿物载体上。
本发明的式I化合物及其盐可以以任何适合于皮肤外用的制剂的形式使用，例如O/W和W/O乳状液，乳剂，洗剂，软膏剂，胶凝性的和粘稠的、表面活性的和乳化性的聚合物，润发脂，香波，肥皂，凝胶，粉剂，棒状物和笔，喷雾剂，身体护理油，敷面剂和硬膏剂。
本发明的式I化合物及其盐可以与可皮肤外用的组合物的任何其他通常使用的成分(或活性物质)一起使用，所述的其他通常使用的成分是例如提取脂质和/或合成脂质，胶凝性的和粘稠的、表面活性的和乳化性的聚合物，水或脂溶性活性成分，植物提取物，组织提取物，海洋提取物(Meeresextrakte)、防晒品，抗氧化剂，保湿剂和遮蔽剂(Barrieremittel)以及使皮肤回复活力的活性物质(HautrevitalisierendeWirkstoffe)。
本发明的再一目的在于所述的化合物作为可皮肤外用的活性物质或用于制备皮肤外用的组合物的用途。
特别是所述化合物用于皮肤护理或用于制备皮肤护理产品。
更为优选的是所述化合物或皮肤护理产品用于治疗人皮肤中的表情皱纹和/或与年龄相关的皱纹。
可以以安全且有效的量向本发明的组合物中加入另外的肽(包括但不限于二、三、四、五和六肽及其衍生物)。在这里，“肽”涉及天然存在的肽以及合成肽，并且还包括拟肽(Peptidomimetika)和“肽”的金属络合物。在此也可以使用含有肽的天然存在的可商业获得的组合物。
对于用于本发明的制剂来说，合适的二肽包括肌肽(β-Ala-His)，以及合适的三肽包括Gly-His-Lys，可从法国的Sederma公司商购获得)获得的棕榈酰-Gly-His-Lys，肽CK(Arg-Lys-Arg)、肽CK+(Ac-Arg-Lys-Arg-NH2以及可作为Lamin从Sigma(St.Louis,Mo.,USA)商购获得的Gly-His-Lys或His-Gly-Gly的铜络合物。适合用于本发明制剂的四肽包括肽E、Arg-Ser-Arg-Lys。五肽的实例是Matrixyl(棕榈酰-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser),可从法国的Sederma公司获得，以及在WO03/037933中描述的那些。适合用于本发明组合物的六肽是Argireline(Ac-Clu-Clu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2)，由西班牙的Lipotec公司生产。
本发明的化合物以及含有本发明化合物的可皮肤外用的组合物添加到皮肤护理产品中，特别适用与治疗表情皱纹和与年龄相关的皱纹。
下面的实施例中将解释本发明而不限制它的范围。使用的缩写是：
β-Alaβ丙氨酸(3-氨基丙酸)
Hyp羟脯氨酸
Arg精氨酸
Gln谷氨酰胺
Dab2，4-二氨基丁酸
Gluα-氨基戊二酸
Ser丝氨酸
Lys赖氨酸
Dap2，3-二氨基丙酸
Gab2-氨基-4-胍基-丁酸
Pro脯氨酸[(—)吡咯烷-2-羧酸]
MS质谱法
NMR核磁共振
Fmoc9-芴基甲氧基羰基
Boc叔丁氧基羰基
Z苄氧基羰基
EtOAc乙酸乙酯
DCM二氯甲烷
DMF二甲基甲酰胺
TBTU0-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓-四氟硼酸盐
DIPEA二异丙基乙胺
NMMN-甲基吗啉
HOBt1-羟基苯并三唑
DCCN，N’-二环己基碳二亚胺
TFA三氟乙酸
GF/A玻璃纤维微过滤器
CAN乙腈
RT室温
HPLC高效液相色谱
THF四氢呋喃
MEM最低基础培养基
M199培养基199(TECOmedicalAG)
Bzl苄基
具体实施方式
实施例1：本发明化合物的制备
下面实施方案1.1中描述的是本发明的式(I)化合物的代表和这些化合物的盐的制备，对根据实施例获得的洗脱物和产物所进行的分析是用质子-NMR光谱、HPLC-电喷射MS或借助于元素分析来实施的。所述化合物可以根据下面描述的已知方法制备。
1.1化合物NO.3(见下面的表4)
1.1.1Fmoc-Dab(Boc)-2-Cl-Trt树脂的制备
称取2-Cl-Trt树脂80g(88mmol)和Fmoc-Dab(Boc)-OH38.75g(88mmol)，将其加入磨口圆底烧瓶中，然后加入DIPEA157ml(880mmol)和DCM800ml，摇匀，密封后在摇床上震荡反应17h。用DMF洗涤树脂，加入DCM850ml，甲醇100ml，DIPEA50ml混合液封闭20min。封闭结束后用DMF600ml洗涤树脂四次，DCM600ml洗涤树脂二次。抽走溶剂。MeOH600ml，300ml，300ml收缩树脂三次。真空抽干。称重91.75g。干燥低温保存。
1.1.2Fmoc-Hyp-Dab(Boc)-2-Cl-Trt树脂的制备
称取干燥Fmoc-Dab(Boc)-2-Cl-Trt树脂91.75g(40mmol)于固相反应合成柱中。800mlDCM溶胀树脂20min，抽走。用400mlDMF洗涤树脂三次。用400ml20％piperidine/DMF脱Fmoc二次。400mlDMF*4，400mlDCM*2洗涤树脂。抽走溶剂。
称取Fmoc-Hyp-OH、HOBT.H2O于干燥500ml广口三角瓶中。加适量DMF溶剂溶解。置于冰水浴中冷却。加DIC活化3min，避免水汽。将活化后的氨基酸加入上一步树脂中反应2h。抽走反应液。用适量DMF洗涤树脂2min*3次。
1.1.3Boc-β-Ala-Hyp-Dab(Boc)-2-Cl-Trt树脂的制备
Fmoc-Hyp-Dab(Boc)-2-Cl-Trt树脂用400ml20％piperidine/DMF脱Fmoc二次。400mlDMF*4，400mlDCM*2洗涤树脂。抽走溶剂。
称取Boc-β-Ala-OH、HOBT·H2O于干燥500ml广口三角瓶中。加适量DMF溶剂溶解。置于冰水浴中冷却。加DIC活化3min，避免水汽。将活化后的氨基酸加入上一步树脂中反应2h。抽走反应液。用适量DMF洗涤树脂2min*3次。
1.1.4Boc-β-Ala-Hyp-Dab(Boc)-OH的制备
称取干燥至恒重的Boc-β-Ala-Hyp-Dab(Boc)-2-Cl-Trt树脂肽树脂，加适当的三氟乙醇裂解液(1g/10mL)切割反应45min。反应结束后，用砂芯漏斗过滤分离树脂。将滤液旋干，得到全保护粗肽。置于真空干燥器干燥至恒重。
1.1.5Boc-β-Ala-Hyp-Dab(Boc)-NH-Bzl的制备
Boc-β-Ala-Hyp-Dab(Boc)-OH，HOBt用250ml无水四氢呋喃溶解，冷至0℃，缓慢加入DCC，0℃搅拌5分钟，然后加入苄胺及N-甲基吗啉。0℃搅拌2小时，用N-甲基吗啉维持pH8～9，室温搅拌12小时，TLC(氯仿/甲醇/乙酸，20/1/0.4)显示原料点消失。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残留物用石油醚反复研磨，得到的固体加1500ml乙酸乙酯溶解，分别用饱和NaHCO3水溶液(75ml×3)，饱和NaCl水溶液(75ml×1)，5％KHSO4水溶液(75ml×3)，饱和NaCl水溶液(15ml×3)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压旋干得到粗品(产率98％)。1.1.6HCl·H-β-Ala-Hyp-Dab–NH-Bzl的制备
Boc-β-Ala-Hyp-Dab(Boc)-NH-Bzl，0℃下缓慢加入250ml4MHCl/乙酸乙酯，于0℃搅拌1.5小时，反应液出现大量沉淀，TLC(氯仿/甲醇，10/1)显示原料点消失，过滤，沉淀用乙酸乙酯(50ml×3)和无水乙醚(50ml×3)反复洗涤至无HCl，得目标化合物粗品(85％)。
1.1.7精制
采用C18反相柱纯化脱盐。
粗品预处理：60gHCl·H-β-Ala-Hyp-Dab–NH-Bzl分成5份，分别用5ml水溶解，过滤。
填料：C18，柱长800mm，内径50mm，
洗脱条件：梯度洗脱，流速2ml/min，先用2％乙腈1％HOAC水溶液洗脱，硝酸银溶液检测氯离子，接收液无氯后换为10％乙腈1％HOAC水溶液，1小时后再转换为15％乙腈1％HOAC水溶液。
收集样品：采用TLC茚三酮显色方法检测样品的流出情况，并根据HPLC检测数据收集主成分，合并洗脱液，冷冻干燥24小时后，再次加入蒸馏水溶解续冻干48小时得37g终产品白色冻干粉末(产率68％，纯度99.8％)。
已经通过非限定性实施例对本发明作出了举例说明。但本领域的技术人员会理解，在没有偏离本发明的宗旨和范围下，可以对本发明作出各种修改、替换和变更。
表1、2、3和4中的其他化合物可以类似地制备，最为优选的化合物如表4所示。
表4
编号 化合物 分子式 分子量
NO.1 H-(β-Ala)-Hyp-Arg-NH-苄基 C22H36N7O4 462.57
NO.2 H-(β-Ala)-Hyp-Gln-NH-苄基 C21H32N5O5 434.51
NO.3 H-(β-Ala)-Hyp-Dab-NH-苄基 C19H30N5O4 392.47
NO.4 H-(β-Ala)-Hyp-Glu-NH-苄基 C21H31N4O6 435.49
NO.5 H-(β-Ala)-Hyp-Ser-NH-苄基 C19H29N4O5 393.46
NO.6 H-(β-Ala)-Hyp-Lys-NH-苄基 C22H36N5O4 434.55
实施例2本发明化合物盐的制备
在上述化合物合成过程(实施例1的1.1.6)，通过HCl/乙酸乙酯脱保护形成化合物的盐酸盐；在精制过程(实施例1的1.1.7)通过反相制备，将盐酸盐转成醋酸盐。
依照上述方法，可以获得化合物以与其他酸形成的、单价或多价的、均质或混合的盐形式存在，所述酸为无机和/或有机酸。
HCl·β-Ala-Hyp-Dab-NH-Bzl(NO.3化合物的盐酸盐)为化合物合成的最后一步脱保护过程中，HCl与目标化合物的氨端形成盐酸盐；
HOAC·β-Ala-Hyp-Ser-NH-Bzl(NO.5化合物的醋酸盐)为在纯化过程中，样品先用氨水或者碳酸氢钠中和盐酸后，上样到C18制备柱中，洗脱剂为0.5％HOAC水溶液/乙腈溶液，收集目标纯度化合物后浓缩冻干得到HOAC·β-Ala-Hyp-Ser-NH-Bzl。
实施例3：药效测试
3.1建立培养模型
为了测试、评估本发明化合物的效用，需建立人肌细胞和来自小鼠胚胎的脊髓的神经元的共培养模型。
3.2.1材料：第三次传代中的正常的人肌细胞(成肌细胞)
具有“背根神经节”的出生10天的小鼠胚胎的脊髓外植体
培养基：2/3MEM和1/3M199、2mML-谷胺酰胺、50UI/ml青霉素、50μg/ml链霉素、5％胎牛血清。
3.2.2培养条件：37℃，5％CO2
3.2.3培养方法：
在用明胶包被的平板中培养正常的人肌(成肌细胞)直到形成单层的肌原纤维(来自融合的肌细胞)。然后，将具有背根神经节的出生10天的小鼠胚胎的脊髓外植体置于所述肌细胞单层上，共培养48小时后，观察到从外植体生长出的神经突与肌细胞接触，100小时后开始发生收缩。共培养4周后，神经和肌肉已经充分连接，形成了具有完全成熟的神经肌肉接头(相当于具有运动终板)的、充分分化的横纹肌纤维模型，在这一阶段，肌原纤维可以进行规律的收缩。然后将该模型用于以下测试。
3.3测试方法
3.3.1材料
本发明的待测试化合物、Syn-ake(INCI名称：Dipeptide diaminobutyroylbenzylamide diacetate，生产厂家：彭特法姆股份公司)、培养模型、培养基、与录像机连接的显微镜
3.3.1加入化合物前观察
用与录像机连接的显微镜观察培养模型的肌肉收缩频率30秒，观察5次，计数，取平均值。
3.3.2加入化合物后测试
将待测试的化合物和Syn-ake(彭特法姆股份公司)在培养基中稀释成不同浓度后，分别加入培养模型中。另外再设一空白对照组。在1分钟、2小时、24小时和48小时时观察肌肉收缩频率各30秒，并计数。
3.4测试结果
表5与化合物加入之前的肌肉收缩次数(5次测量平均值，每次测量30秒)相比较，化合物加入后1分钟、2小时、48小时的肌肉收缩次数(5次测量平均值，每次测量30秒)的变化百分数△[％]
备注：1mM＝0.001mol/L
根据上面表5，对化合物NO.3(0.1mM、0.5mM、1.0mM)和Syn-ake(0.1mM、0.5mM、1.0mM)在1分钟的肌肉收缩次数(5次测量平均值)变化百分数对应值进行均值t检验分析，P＜0.05，两者在相同浓度下的结果对比均有显著性差异，证明了本发明的化合物NO.3具有更强的活性，更优秀的祛皱效果。
实施例4：一种精华液的配制
处方：
成分 百分比(％w/w)
化合物No.3 0.01
透明质酸钠 0.2
芦芭胶(HispalGel) 4.49
甘油 5
Phenonip 0.3
蒸馏水 余量
15％三乙醇胺 Q.S适量
配制方法：
蒸馏水加热煮沸后降温至60-70℃，加入Phenonip，搅拌溶解，分为两份。一份在恒温为55℃搅拌情况下缓缓加入透明质酸钠，使其完全溶解，充分溶胀。另一份加入化合物No.3，搅拌超声溶解，用0.45um的微孔滤膜过滤。把溶解的化合物No.3、芦芭胶和甘油加入到透明质酸钠水溶液中，搅拌形成均一溶液，用15％的三乙醇胺溶液调节溶液pH值至5.5左右，加入蒸馏水。
实施例5：一种抗皱护肤霜的配制
处方：
成分 百分比(％w/w)
化合物No.3 0.01
乳木果油 5.0
橄榄油 3.0
角鲨烷 5.0
三异辛酸甘油酯 5.0
甘油单硬脂酸酯 5.0
鲸蜡醇 2.0
聚二甲基硅氧烷 2.0
甘油 8.0
卡波姆 0.5
氢氧化钾 0.15
Phenonip 0.3
蒸馏水 余量
配制方法：
将上述处方中的油相和水相进行初步乳化，调整该乳化体系的温度在35-40℃，加入化合物No.3，搅拌均匀后，进一步降温，加入Phenonip，搅拌均匀，加入蒸馏水。完成本实施例抗皱护肤霜的制备。
实施例6：一种凝胶剂型的配制
处方：
成分 百分比(％w/w)
化合物No.3 0.01
卡波姆940 1.0
甘油 5.0
Phenonip 0.3
三乙醇胺 Q.S适量
蒸馏水 余量
配制方法：
取卡波姆，散于适量去蒸馏水中，静置，使充分溶胀，加入甘油、Phenonip，搅匀，加入化合物No.3，搅匀后，加三乙醇胺调PH值至5.0-7.0，加入蒸馏水。完成本实施例凝胶剂型的制备。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.通式(I)的化合物
其中，
X表示碳键，
n表示0，
R1、R4和R5彼此独立地表示氢，
R3是O(CH2)2苯基，并且R6表示氢。
2.权利要求1所述的化合物在制备皮肤护理的组合物的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述用途是指抗皱纹。
4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述用途是指用于治疗人皮肤中的表情皱纹和/或与年龄相关的皱纹。
5.可皮肤外用的组合物，其特征在于，所述组合物含有权利要求1所述的化合物，以及载体。
6.可皮肤外用的组合物，其特征在于，所述组合物含有：
a)根据权利要求1所述的化合物，以及载体；
b)安全且有效量的至少一种另外的皮肤护理活性物质，其选自抗皱纹的活性物质或抗萎缩的活性物质。
7.根据权利要求5或6任一权利要求所述的组合物，其特征在于，所述化合物的量为0.5ppm至5000ppm，按所述化合物和载体材料的重量计算。
8.根据权利要求5或6任一权利要求所述的组合物，其特征在于，其存在形式为溶液，混悬液，乳状液，乳剂，洗液或软膏剂，润发脂，香波、肥皂，凝胶，粉剂，棒状物，笔，喷雾剂或身体护理油，或者包囊于载体中。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述组合物还含有其他通常使用的成分，选自提取脂质，合成脂质，植物提取物，组织提取物，海洋提取物，防晒品，抗氧化剂，保湿剂，和遮蔽剂，和使皮肤恢复活力的活性物质。
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