CN104450886A - 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用 - Google Patents

一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104450886A
CN104450886A CN201410608428.4A CN201410608428A CN104450886A CN 104450886 A CN104450886 A CN 104450886A CN 201410608428 A CN201410608428 A CN 201410608428A CN 104450886 A CN104450886 A CN 104450886A
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
follows
primer sequence
pcr detecting
pcr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410608428.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104450886B (zh
Inventor
刘世海
梁军
潘华政
王丽萍
刘相萍
梁晔
姚如永
隋爱华
刘自民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Affiliated Hospital of University of Qingdao
Original Assignee
Affiliated Hospital of University of Qingdao
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Affiliated Hospital of University of Qingdao filed Critical Affiliated Hospital of University of Qingdao
Priority to CN201410608428.4A priority Critical patent/CN104450886B/zh
Publication of CN104450886A publication Critical patent/CN104450886A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104450886B publication Critical patent/CN104450886B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用，本发明所述检测试剂包括检测CD40基因、IL10基因、CD83基因、EGFR基因等相关基因和内参ACTB基因、GAPDH基因、HPRT1基因的PCR反应引物。本发明将涉及NF-κB信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，与正常的肝癌、肝细胞做对比，探讨NF-κB信号通路在肿瘤/正常细胞中的可能途径，为研究关键蛋白的调控提供最直接的证据；本发明从转录水平快速准确的找到NF-κB信号通路相关分子，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。

Description

一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学领域，尤其涉及一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用。
背景技术
NF-κB信号通路是存在于生物体内的一条极其重要的信号传导通路，尤其是对凋亡的调节起着非常重要的作用。目前，已经建立起来的NF-κB信号通路包括经典通路和非经典通路。NF-κB的经典信号通路和非经典信号通路的主要区别就在于：在NF-κB的经典信号通路中，IκB蛋白的降解使NF-κB二聚体得到释放。而在NF-κB非经典信号通路中，则是通过P100到P52的加工处理，使信号通路激活。而在NF-κB信号通路的终止中，IκB蛋白家族是至关重要的。而NF-κB通路如何被阻断以抑制肿瘤的发展一直是NF-κB信号通路的谜团和研究热点之一。
目前研究核心信号通路的核心分子调控机制，已经成为治疗肿瘤的一种关键手段，尤其是近年来NF-κB信号通路在肝癌中的研究，已经成为研究开发肝癌药物研发领域的急需解决的重要问题。
发明内容
本发明针对现有技术中如何确定NF-κB核心信号分子的调控，如何解释核心分子在肿瘤细胞中的变化的困难，提供了一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用，本发明将涉及细胞NF-κB的信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，探讨在肝癌细胞系中引起NF-κB信号通路变化的可能靶分子与靶途径，为研究核心NF-κB信号蛋白的调节提供最直接的证据。
为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：
一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂，它包括以下引物：
(1)检测CD40基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGGGTCAAGCAGATTGCTA-3'；
5'-CAGATGACACATTGGAGAAGA-3'；
(2)检测IL10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAAGGCGCATGTGAACTCC-3'；
5'-ATGTCAAACTCACTCATGGCT-3'；
(3)检测CD83基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAGCTGGCATGGAACGAG-3'；
5'-GTCTTGTGAGGAGTCACTAGC-3'；
(4)检测EGFR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCACGAGTAACAAGCTCAC-3'；
5'-TGAGGACATAACCAGCCACC-3'；
(5)检测FASLG基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TTTAACAGGCAAGTCCAACTCA-3'；
5'-GCCACCCTTCTTATACTTCACT-3'；
(6)检测IL1A基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCATGTAAGCTATGGCCCACT-3'；
5'-TTCCCGTTGGTTGCTACTAC-3'；
(7)检测IL1B基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCGACACATGGGATAACGAGG-3'；
5'-TTTTGCTGTGAGTCCCGGAG-3'；
(8)检测IL1R1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCCAGTTGAGTGACATTGCT-3'；
5'-GTGATGAGGGTACTCCTTCTTT-3'；
(9)检测IL8基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGAGAGTGATTGAGAGTGGAC-3'；
5'-ACCCTCTGCACCCAGTTTTC-3'；
(10)检测LTBR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGTCCGACACAACCTGC-3'；
5'-TACAGGATTGGGTCCCTCTC-3'；
(11)检测NOD1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCGACCACGTCCTGCTAT-3'；
5'-AGGTTGGTGAACTGGAAGTG-3'；
(12)检测TLR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCAAACGTGAAGCTACAGGG-3'；
5'-CGAACACATCGCTGACAACT-3'；
(13)检测TLR2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTCTCGGTGTCGGAATGTC-3'；
5'-CCCGCTCACTGTAAGAAACA-3'；
(14)检测TLR3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAACACAAGCATTCGGAATCTG-3'；
5'-AGGAATCGTTACCAACCACATT-3'；
(15)检测TLR4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTTGATCTACCAAGCCTTGAGT-3'；
5'-CTGGTTGTCCCAAAATCACTTT-3'；
(16)检测TLR6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAATGCAAAAACCCTTCACCT-3'；
5'-CAAGTCGTTTCTATGTGGTTGA-3'；
(17)检测TLR9基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCCCTCATATCCCTGTCCC-3'；
5'-TTGCCGTCCATGAATAGGAAG-3'；
(18)检测TNF基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGGCCAAGCCCTGGTATG-3'；
5'-AGGCCAAGCCCTGGTATG-3'。
(19)检测TNFRSF1A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACGAGTGTGTCTCCTGTAGT-3'；
5'-GAGTAGAGCTTGGACTTCCAC-3'；
(20)检测TNFRSF10A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CGGGGAGGATTGAACCAC-3'；
5'-GACGACAAACTTGAAGGTCTT-3'；
(21)检测TNFRSF10B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGTTGCAGCCGTAGTCTTG-3'；
5'-CAGGTCGTTGTGAGCTTCT-3'；
(22)检测TNFSF10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCGTGCTGATCGTGATCTTC-3'；
5'-CTCGTTGGTAAAGTACACGTA-3'；
(23)检测BIRC2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TTCAGTGGTTCTTACTCCAGC-3'；
5'-CTGTAGGGGTTAGTCCTCGAT-3'；
(24)检测FADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGAAGGAGAACGCAACAGT-3'；
5'-CTGAACCTCTTGTACCAGGTC-3'；
(25)检测IRAK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGTTTCGTCACCCAAACATT-3'；
5'-GGGCTGTACCCAGAAGGA-3'；
(26)检测IRAK2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGCCACCCCAATGTCTTACC-3'；
5'-GGGAACCATTTGCCATGTAG-3'；
(27)检测IRF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGCTACACAGTTCCAGG-3'；
5'-TCCTCAGGTAATTTCCCTTCCT-3'；
(28)检测MYD88基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTGCTCTCAACATGCGA-3'；
5'-TGTGTCCGCACGTTCAAGA-3'；
(29)检测RIPK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TACATGGAAAAGGCGTGATACA-3'；
5'-GGTCTGCGATCTTAATGTGGA-3'；
(30)检测TBK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GATCACTGCCATTTAGACCC-3'；
5'-AGGCATGTCTCCACTCCAG-3'；
(31)检测TICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGGAATCATCATCGGAACAG-3'；
5'-GAGTGGTCTATGGCGTCCT-3'；
(32)检测TNFAIP3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAACTGGTGTCGAGAAGTCC-3'；
5'-AAGTCTGTGTCCTGAACGC-3'；
(33)检测TRADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGTTTGAGTTGCATCCTAGC-3'；
5'-CGCACTTCAGATTTCGCA-3'；
(34)检测TRAF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTCATGCTGACCGAATGTC-3'；
5'-CCGTCACAAGTTAAGGGGAA-3'；
(35)检测TRAF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTTGAGGAAAGACCTGCGAG-3'；
5'-CGATCATCGGAACCTGACT-3'；
(36)检测TRAF6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGCCATGAAAAGATGCAGAGG-3'；
5'-GCCTGGGCCAACATTCTC-3'；
(37)检测BCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACATCTACAACAACCTACGGC-3'；
5'-GTGAGCCCGTCATAATTGC-3'；
(38)检测CHUK基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGAAGAAGTTGAACCATGCCA-3'；
5'-CTCCAGAACAGTATTCCATTGC-3'；
(39)检测IKBKB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGCCTTTGAGTGCATCAC-3'；
5'-GCTAACAACAATGTCCACCT-3'；
(40)检测IKBKG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCAGAGCAACCAGATTCT-3'；
5'-CTGGCATTCCTTAGTGGCAG-3'；
(41)检测NFKBIA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCGAGACTTTCGAGGAAATAC-3'；
5'-CCATTGTAGTTGGTAGCCTTCA-3'；
(42)检测NFKBIE基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AATTGCTGCTTCGGAATGGA-3'；
5'-ATGCGGGCATCTACCTGG-3'；
(43)检测NFKB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAGCACGAATGACAGAGGC-3'；
5'-CTTGGCGGATTAGCTCTTTT-3'；
(44)检测NFKB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGAGAGTTGCTACAACCCA-3'；
5'-TGTTCCACGATCACCAGGTA-3'；
(45)检测REL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CATGGTAATTTGACGACTGCT-3'；
5'-CTTCCCAATCGTTCAACACA-3'；
(46)检测RELA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGGGACTACGACCTGAATG-3'；
5'-GGGCACGATTGTCAAAGATG-3'；
(47)检测RELB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCGAGCCCGTCTATGACAA-3'；
5'-GTCTTGAACACAATGGCAATC-3'；
(48)检测CCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGCCAGATGCAATCAATGCC-3'；
5'-GGAATCCTGAACCCACTTCT-3'；
(49)检测CCL5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGCAGTCGTCTTTGTCAC-3'；
5'-TCTGGGTTGGCACACACTT-3'；
(50)检测CSF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GACCTCGTGCCAAATTACATT-3'；
5'-GGTGTCTCATAGAAAGTTCGGA-3'；
(51)检测CSF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCTGAACCTGAGTAGAGACAC-3'；
5'-GCTGCTTGTAGTGGCTGG-3'；
(52)检测CSF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGCTTGAGCCAACTCCATA-3'；
5'-AACGCGGTACGACACCTC-3'；
(53)检测ICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TATGAACTGAGCAATGTGCAAG-3'；
5'-TTCCACCCGTTCTGGAGTC-3'；
(54)检测IFNA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCTCGCCCTTTGCTTTACT-3'；
5'-TGTGGGTCTCAGGGAGATCA-3'；
(55)检测IFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CGGTAACTGACTTGAATGTCCA-3'；
5'-CGCTTCCCTGTTTTAGCTGC-3'；
(56)检测TIMP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCACCTTATACCAGCGTTATGA-3'；
5'-GTGTAGACGAACCGGATGTC-3'；
(57)检测LTA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCTACTTCGTCTACTCCCAGG-3'；
5'-CCCGTGGTACATCGAGTG-3'；
(58)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCATTGACTTTTCTGTCGCC-3'；
5'-CAAAGCAAGCCACTCTGT-3'；
(59)检测AGT基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCAATTCAGGCCAAGACAT-3'；
5'-GTCAAGTTTTGCAGCGACTA-3'；
(60)检测BCL2A1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTGCTACAAAATGTTGCGTTC-3'；
5'-GCAATTTGCTGTCGTAGAAGTT-3'；
(61)检测BCL2L1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACTGAATCGGAGATGGAGACC-3'；
5'-CAGTTCAAACTCGTCGCCT-3'；
(62)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCATTGACTTTTCTGTCGCC-3'；
5'-CAAAGCAAGCCACTCTGT-3'；
(63)检测AKT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACAAACGAGGGGAGTACATC-3'；
5'-CCATCATTCTTGAGGAGGAAGT-3'；
(64)检测MAP3K1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TAGGGCCTAACTCTTTCCTGAT-3'；
5'-GTTCTAGTTGAAACACCCGGA-3'；
(65)检测RAF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTTCAGCAGTTTGGCTATCAG-3'；
5'-ACTGTTCTTTGCTTGTTCGG-3'；
(66)检测ATF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACAGATGGAGTACAGGGACT-3'；
5'-ACCACCTGATTGCTGGGC-3'；
(67)检测EGR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCCCTCTGTCTACTATTAAGGC-3'；
5'-GGGACTGGTAGCTGGTATTG-3'；
(68)检测ELK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCGGAAGAGCTTAATGTGGAG-3'；
5'-TTGGTGGTTTCTGGCACAA-3'；
(69)检测FOS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACTCCAAGCGGAGACAGAC-3'；
5'-GGTCATCAGGGATCTTGCAG-3'；
(70)检测JUN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCAAGTGCCGAAAAAGGAAG-3'；
5'-GAGTTCTGAGCTTTCAAGGT-3'；
(71)检测STAT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCTGAATTTCGGCACCT-3'；
5'-AGTAACGATGAGAGGACCCT-3'；
(72)检测CARD11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACCTTCCAGGAGCGGTACTA-3'；
5'-TAGCGCATGGCTAAGTTGTA-3'；
(73)检测CASP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCAATAATGGACAAGTCAAGCC-3'；
5'-CTGTACCCCAGATTTTGTAGCA-3'；
(74)检测CASP8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCATGGACCACAGTAACATGGA-3'；
5'-AGTGAACTGAGATGTCAGCTCAT-3'；
(75)检测CFLAR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGTGAGGCGATTTGACCTG-3'；
5'-TCCGAAACAAGGTGAGGGTT-3'；
(76)检测HMOX1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGACTGCGTTCCTGCTCAAC-3'；
5'-AAGCCCTACAGCAACTGTCG-3'；
(77)检测MALT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGAAGTGTTGATGGCGTCT-3'；
5'-TAGTGAGGAATAGGGCTTCCA-3'；
(78)检测PSIP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAACAGGGGTTACTTCAACCTC-3'；
5'-GCCTTTCAGCATATTCCTTCT-3'；
(79)检测RHOA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATTGGCGCTTTTGGGTACAT-3'；
5'-GCAGCTCTCGTAGCCATTTC-3'；
(80)检测CCL20基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTGTACCAAGAGTTTGCTC-3'；
5'-GCACACAGACAACTTTTTCTTT-3'；
(81)检测CXCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CATCGCCCATGGTTAAGAAAAT-3'；
5'-ATTGGTGGCTGTTCCTGAAGGA-3'；
(82)检测CXCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAAACCGAAGTCATAGCCAC-3'；
5'-GCTCCCCTTGTTCAGTATCT-3'；
(83)检测STX11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TAAGTGGGACGTGTTTTCCG-3'；
5'-TCGATGACGTTCAGGGTGT-3'；
(84)检测TIFA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TACAGGTGCATGGTCAGATTCG-3'；
5'-CTGTCGGAGAACTGCTTTGG-3'；
(85)检测GAPDH基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGCCACCCAGAAGACT-3'；
5'-CTCAGTGTAGCCCAGGAT-3'；
(86)检测ACTB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTACAGCTTCACCACCAC-3'；
5'-ACTTGCGCTCAGGAGGAGC-3'；
(87)检测HPRT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAAAGGACCCCACGAAGTGT-3'；
5'-GTCAAGGGCATATCCTACAACA-3'。
本发明还提供了所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用。
所述癌细胞为肺癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞和肝癌细胞。
对上述技术方案的进一步改进：所述检测试剂适用于实时荧光定量PCR检测方法。
对上述技术方案的进一步改进：所述实时荧光定量PCR的反应体系为：Taq聚合酶反应混合液10μl，上游引物0.1-0.2μmol，下游引物0.1-0.2μmol，cDNA模板25-100ng，灭菌蒸馏水补足到20μl。
对上述技术方案的进一步改进：所述Taq聚合酶为TaKaRa公司的2×Premix ExTaq聚合酶。
对上述技术方案的进一步改进：所述实时荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性，30秒；95℃变性，5秒，59℃，20秒，进行40个循环。溶解曲线分析95℃，15秒，至65℃，1分钟，按照4.4℃/秒进行梯度降温。
其PCR反应仪器为罗氏公司的LightCycler480。该87对引物置于96孔板中，进行实时荧光定量PCR检测。可以通过一次反应获得关于NF-ΚB信号通路核心分子的变化。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：本发明提供了检测NF-ΚB信号通路核心分子变化的试剂，借助于所述检测试剂可以通过实时荧光定量NF-κB在转录水平快速检测出与NF-ΚB相关的基因，在此基础上分析研究肿瘤NF-κB信号通路的核心分子及作用机理，从而快速准确的找到肿瘤相关药物的NF-κB调节信号通路，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。
同时本发明还提供了检测的PCR方法，所述实验体系可以在任何一台实时荧光定量PCR仪器上进行，实验操作简便，费用低廉，结果重复性好，有利于减少下游不必要的检测，是研究肿瘤相关药物作用机理的一种重要手段。
结合附图阅读本发明的具体实施方式后，本发明的其他特点和优点将变得更加清楚。
附图说明
图1表明了本发明利用NF-κB信号通路筛选出肝癌细胞系HepG2与肝细胞系L02差异表达的基因，其中1：HepG2细胞；2：L02细胞。
图2实时荧光定量PCR检测NF-κB信号通路基因的表达。
图3溶解曲线分析NF-κB信号通路基因的表达。
图4肝癌/正常肝细胞中NF-κB信号通路基因表达的差异。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明。
实施例1
本发明通过肝癌细胞进行举例说明，但是本发明并不限于肝癌，本发明所述检测试剂可以应用于包括乳腺癌、肺癌、肝癌等常见癌症。
本发明通过培养两种细胞系：人肝癌细胞系HepG2、人正常肝细胞系L02，然后利用NF-κB信号通路检测试剂检测两种细胞系中核心NF-κB分子的变化。
本发明中所用的人肝癌细胞系HepG2、人正常肝细胞系L02购自美国ATCC公司，DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司，用于提取总RNA的RNAiso，逆转录试剂盒，2×Premix Ex Taq试剂盒购买自TaKaRa。
利用本发明所述试剂检测细胞内NF-κB信号通路包括以下具体步骤：
一、人肝癌细胞系HepG2、人正常肝细胞系L02的培养与传代
以HepG2细胞为例，在60mm细胞培养板内加入1mL 0.2％胰酶溶液，轻轻摇动以使胰酶与细胞充分接触，37℃二氧化碳孵箱内孵育2min，镜下观察大部分细胞浮起后，加入4mL含10％FBS的DMEM培养基，吹匀后加入15mL离心管内，2000g离心6min，弃去上清，根据细胞种类加入相应的适当体积培养液，用10mL移液管反复吹打数次，使细胞游离。此过程中避免产生气泡，以免影响细胞计数。取细胞悬液20μL，滴入细胞计数板内，按细胞计数法计量四角四大格内细胞总数。计数时仅计数细胞形态完整的细胞，堆积的细胞按1个细胞计算。计算公式如下：
细胞浓度(个/mL)＝(4大格细胞总数)×104×稀释倍数/4。
根据细胞种类用相应的培养液细胞悬液稀释至5×106个/mL，在60mm细胞培养皿内加入细胞，每板2mL此细胞稀释液，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，细胞一般在0.5h-1h后贴壁，数小时后开始生长，24h-48h后成为单层细胞。
二、总RNA的提取
1)取CO2孵箱中处于对数生长期60mm平皿的细胞一盘，吸掉培养液后，用无菌1×PBS清洗2次后，在细胞表面加1mL RNAiso，用枪头反复抽吸均匀，转入无菌管中。
2)室温培育5min，以溶解核蛋白。加0.2mL酚/氯仿(1:1)，剧烈振荡15sec，室温孵育2-3min。
3)4℃，12000g离心15min，细胞会产生分层。
4)将上层液体转至无RNase的离心管中，加入0.5mL异丙醇，颠倒混匀3次，室温培育10min。
5)4℃，12000g离心10min，RNA形成底部沉淀。
6)弃上清，用无RNase的75％乙醇1mL洗涤沉淀。4℃，7000g离心5min。
8)空气中干燥RNA约5-10min。不宜太干。
9)用30-50μL DEPC水溶解RNA。
结果如图1所示，从图中的电泳可以看出1泳道为HepG2，2泳道为L02细胞，总RNA的条带完整，适合做下游逆转录等实验。
三、cDNA的合成
1)在预冷的试管中加入下列反应混合物：
总RNA                  1-5μg
oligo(dT)(0.5μg/μl)  1μL
用RNase-free水定容至   12μL。
2)混匀，离心3-5sec。
3)70℃作用5min后冰浴30sec，离心3-5sec。
4)将试管冰浴，再加入如下组分：
5×Reaction buffer        μL4
Rnase Inhibiter(20U/μL)  1μL
dNTP mix(10mM)            2μL
5)轻轻混匀，离心3-5sec。
6)37℃水浴5min，加1μL的M-MuLV Reverse Transcriptase(20U/μL)，混匀。
7)37℃作用60min。70℃孵育10min结束反应，置冰上进行下游试验。
四、实时荧光定量PCR
取合成好的cDNA为模板，按照以下体系进行实时荧光定量PCR反应：
在罗氏的LightCycler480仪器上设置如下程序：95℃预变性，30秒；95℃变性，5秒，59℃，20秒，进行40个循环。溶解曲线分析95℃，15秒，至65℃，1分钟，按照4.4℃/秒进行梯度降温。所述检测试剂包括以下引物：
(1)检测CD40基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGGGTCAAGCAGATTGCTA-3'；(SEQ ID No:1)
5'-CAGATGACACATTGGAGAAGA-3'；(SEQ ID No:2)
(2)检测IL10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAAGGCGCATGTGAACTCC-3'；(SEQ ID No:3)
5'-ATGTCAAACTCACTCATGGCT-3'；(SEQ ID No:4)
(3)检测CD83基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAGCTGGCATGGAACGAG-3'；(SEQ ID No:5)
5'-GTCTTGTGAGGAGTCACTAGC-3'；(SEQ ID No:6)
(4)检测EGFR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCACGAGTAACAAGCTCAC-3'；(SEQ ID No:7)
5'-TGAGGACATAACCAGCCACC-3'；(SEQ ID No:8)
(5)检测FASLG基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TTTAACAGGCAAGTCCAACTCA-3'；(SEQ ID No:9)
5'-GCCACCCTTCTTATACTTCACT-3'；(SEQ ID No:10)
(6)检测IL1A基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCATGTAAGCTATGGCCCACT-3'；(SEQ ID No:11)
5'-TTCCCGTTGGTTGCTACTAC-3'，(SEQ ID No:12)
(7)检测IL1B基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCGACACATGGGATAACGAGG-3'；(SEQ ID No:13)
5'-TTTTGCTGTGAGTCCCGGAG-3'；(SEQ ID No:14)
(8)检测IL1R1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCCAGTTGAGTGACATTGCT-3'；(SEQ ID No:15)
5'-GTGATGAGGGTACTCCTTCTTT-3'；(SEQ ID No:16)
(9)检测IL8基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGAGAGTGATTGAGAGTGGAC-3'；(SEQ ID No:17)
5'-ACCCTCTGCACCCAGTTTTC-3'；(SEQ ID No:18)
(10)检测LTBR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGTCCGACACAACCTGC-3'；(SEQ ID No:19)
5'-TACAGGATTGGGTCCCTCTC-3'；(SEQ ID No:20)
(11)检测NOD1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCGACCACGTCCTGCTAT-3'；(SEQ ID No:21)
5'-AGGTTGGTGAACTGGAAGTG-3'；(SEQ ID No:22)
(12)检测TLR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCAAACGTGAAGCTACAGGG-3'；(SEQ ID No:23)
5'-CGAACACATCGCTGACAACT-3'；(SEQ ID No:24)
(13)检测TLR2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTCTCGGTGTCGGAATGTC-3'；(SEQ ID No:25)
5'-CCCGCTCACTGTAAGAAACA-3'；(SEQ ID No:26)
(14)检测TLR3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAACACAAGCATTCGGAATCTG-3'；(SEQ ID No:27)
5'-AGGAATCGTTACCAACCACATT-3'；(SEQ ID No:28)
(15)检测TLR4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTTGATCTACCAAGCCTTGAGT-3'；(SEQ ID No:29)
5'-CTGGTTGTCCCAAAATCACTTT-3'；(SEQ ID No:30)
(16)检测TLR6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAATGCAAAAACCCTTCACCT-3'；(SEQ ID No:31)
5'-CAAGTCGTTTCTATGTGGTTGA-3'；(SEQ ID No:32)
(17)检测TLR9基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCCCTCATATCCCTGTCCC-3'；(SEQ ID No:33)
5'-TTGCCGTCCATGAATAGGAAG-3'；(SEQ ID No:34)
(18)检测TNF基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGGCCAAGCCCTGGTATG-3'；(SEQ ID No:35)
5'-AGGCCAAGCCCTGGTATG-3'。(SEQ ID No:36)
(19)检测TNFRSF1A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACGAGTGTGTCTCCTGTAGT-3'；(SEQ ID No:37)
5'-GAGTAGAGCTTGGACTTCCAC-3'；(SEQ ID No:38)
(20)检测TNFRSF10A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CGGGGAGGATTGAACCAC-3'；(SEQ ID No:39)
5'-GACGACAAACTTGAAGGTCTT-3'；(SEQ ID No:40)
(21)检测TNFRSF10B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGTTGCAGCCGTAGTCTTG-3'；(SEQ ID No:41)
5'-CAGGTCGTTGTGAGCTTCT-3'；(SEQ ID No:42)
(22)检测TNFSF10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCGTGCTGATCGTGATCTTC-3'；(SEQ ID No:43)
5'-CTCGTTGGTAAAGTACACGTA-3'；(SEQ ID No:44)
(23)检测BIRC2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TTCAGTGGTTCTTACTCCAGC-3'；(SEQ ID No:45)
5'-CTGTAGGGGTTAGTCCTCGAT-3'；(SEQ ID No:46)
(24)检测FADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGAAGGAGAACGCAACAGT-3'；(SEQ ID No:47)
5'-CTGAACCTCTTGTACCAGGTC-3'；(SEQ ID No:48)
(25)检测IRAK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGTTTCGTCACCCAAACATT-3'；(SEQ ID No:49)
5'-GGGCTGTACCCAGAAGGA-3'；(SEQ ID No:50)
(26)检测IRAK2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGCCACCCCAATGTCTTACC-3'；(SEQ ID No:51)
5'-GGGAACCATTTGCCATGTAG-3'；(SEQ ID No:52)
(27)检测IRF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGCTACACAGTTCCAGG-3'；(SEQ ID No:53)
5'-TCCTCAGGTAATTTCCCTTCCT-3'；(SEQ ID No:54)
(28)检测MYD88基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTGCTCTCAACATGCGA-3'；(SEQ ID No:55)
5'-TGTGTCCGCACGTTCAAGA-3'；(SEQ ID No:56)
(29)检测RIPK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TACATGGAAAAGGCGTGATACA-3'；(SEQ ID No:57)
5'-GGTCTGCGATCTTAATGTGGA-3'；(SEQ ID No:58)
(30)检测TBK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GATCACTGCCATTTAGACCC-3'；(SEQ ID No:59)
5'-AGGCATGTCTCCACTCCAG-3'；(SEQ ID No:60)
(31)检测TICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGGAATCATCATCGGAACAG-3'；(SEQ ID No:61)
5'-GAGTGGTCTATGGCGTCCT-3'；(SEQ ID No:62)
(32)检测TNFAIP3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAACTGGTGTCGAGAAGTCC-3'；(SEQ ID No:63)
5'-AAGTCTGTGTCCTGAACGC-3'；(SEQ ID No:64)
(33)检测TRADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGTTTGAGTTGCATCCTAGC-3'；(SEQ ID No:65)
5'-CGCACTTCAGATTTCGCA-3'；(SEQ ID No:66)
(34)检测TRAF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTCATGCTGACCGAATGTC-3'；(SEQ ID No:67)
5'-CCGTCACAAGTTAAGGGGAA-3'；(SEQ ID No:68)
(35)检测TRAF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTTGAGGAAAGACCTGCGAG-3'；(SEQ ID No:69)
5'-CGATCATCGGAACCTGACT-3'；(SEQ ID No:70)
(36)检测TRAF6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGCCATGAAAAGATGCAGAGG-3'；(SEQ ID No:71)
5'-GCCTGGGCCAACATTCTC-3'；(SEQ ID No:72)
(37)检测BCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACATCTACAACAACCTACGGC-3'；(SEQ ID No:73)
5'-GTGAGCCCGTCATAATTGC-3'；(SEQ ID No:74)
(38)检测CHUK基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGAAGAAGTTGAACCATGCCA-3'；(SEQ ID No:75)
5'-CTCCAGAACAGTATTCCATTGC-3'；(SEQ ID No:76)
(39)检测IKBKB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGCCTTTGAGTGCATCAC-3'；(SEQ ID No:77)
5'-GCTAACAACAATGTCCACCT-3'；(SEQ ID No:78)
(40)检测IKBKG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCAGAGCAACCAGATTCT-3'；(SEQ ID No:79)
5'-CTGGCATTCCTTAGTGGCAG-3'；(SEQ ID No:80)
(41)检测NFKBIA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCGAGACTTTCGAGGAAATAC-3'；(SEQ ID No:81)
5'-CCATTGTAGTTGGTAGCCTTCA-3'；(SEQ ID No:82)
(42)检测NFKBIE基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AATTGCTGCTTCGGAATGGA-3'；(SEQ ID No:83)
5'-ATGCGGGCATCTACCTGG-3'；(SEQ ID No:84)
(43)检测NFKB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAGCACGAATGACAGAGGC-3'；(SEQ ID No:85)
5'-CTTGGCGGATTAGCTCTTTT-3'；(SEQ ID No:86)
(44)检测NFKB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGAGAGTTGCTACAACCCA-3'；(SEQ ID No:87)
5'-TGTTCCACGATCACCAGGTA-3'；(SEQ ID No:88)
(45)检测REL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CATGGTAATTTGACGACTGCT-3'；(SEQ ID No:89)
5'-CTTCCCAATCGTTCAACACA-3'；(SEQ ID No:90)
(46)检测RELA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGGGACTACGACCTGAATG-3'；(SEQ ID No:91)
5'-GGGCACGATTGTCAAAGATG-3'；(SEQ ID No:92)
(47)检测RELB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCGAGCCCGTCTATGACAA-3'；(SEQ ID No:93)
5'-GTCTTGAACACAATGGCAATC-3'；(SEQ ID No:94)
(48)检测CCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGCCAGATGCAATCAATGCC-3'；(SEQ ID No:95)
5'-GGAATCCTGAACCCACTTCT-3'；(SEQ ID No:96)
(49)检测CCL5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGCAGTCGTCTTTGTCAC-3'；(SEQ ID No:97)
5'-TCTGGGTTGGCACACACTT-3'；(SEQ ID No:98)
(50)检测CSF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GACCTCGTGCCAAATTACATT-3'；(SEQ ID No:99)
5'-GGTGTCTCATAGAAAGTTCGGA-3'；(SEQ ID No:100)
(51)检测CSF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCTGAACCTGAGTAGAGACAC-3'；(SEQ ID No:101)
5'-GCTGCTTGTAGTGGCTGG-3'；(SEQ ID No:102)
(52)检测CSF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGCTTGAGCCAACTCCATA-3'；(SEQ ID No:103)
5'-AACGCGGTACGACACCTC-3'；(SEQ ID No:104)
(53)检测ICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TATGAACTGAGCAATGTGCAAG-3'；(SEQ ID No:105)
5'-TTCCACCCGTTCTGGAGTC-3'；(SEQ ID No:106)
(54)检测IFNA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCTCGCCCTTTGCTTTACT-3'；(SEQ ID No:107)
5'-TGTGGGTCTCAGGGAGATCA-3'；(SEQ ID No:108)
(55)检测IFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CGGTAACTGACTTGAATGTCCA-3'；(SEQ ID No:109)
5'-CGCTTCCCTGTTTTAGCTGC-3'；(SEQ ID No:110)
(56)检测TIMP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCACCTTATACCAGCGTTATGA-3'；(SEQ ID No:111)
5'-GTGTAGACGAACCGGATGTC-3'；(SEQ ID No:112)
(57)检测LTA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCTACTTCGTCTACTCCCAGG-3'；(SEQ ID No:113)
5'-CCCGTGGTACATCGAGTG-3'；(SEQ ID No:114)
(58)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCATTGACTTTTCTGTCGCC-3'；(SEQ ID No:115)
5'-CAAAGCAAGCCACTCTGT-3'；(SEQ ID No:116)
(59)检测AGT基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCAATTCAGGCCAAGACAT-3'；(SEQ ID No:117)
5'-GTCAAGTTTTGCAGCGACTA-3'；(SEQ ID No:118)
(60)检测BCL2A1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTGCTACAAAATGTTGCGTTC-3'；(SEQ ID No:119)
5'-GCAATTTGCTGTCGTAGAAGTT-3'；(SEQ ID No:120)
(61)检测BCL2L1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACTGAATCGGAGATGGAGACC-3'；(SEQ ID No:121)
5'-CAGTTCAAACTCGTCGCCT-3'；(SEQ ID No:122)
(62)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCATTGACTTTTCTGTCGCC-3'；(SEQ ID No:123)
5'-CAAAGCAAGCCACTCTGT-3'；(SEQ ID No:124)
(63)检测AKT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACAAACGAGGGGAGTACATC-3'；(SEQ ID No:125)
5'-CCATCATTCTTGAGGAGGAAGT-3'；(SEQ ID No:126)
(64)检测MAP3K1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TAGGGCCTAACTCTTTCCTGAT-3'；(SEQ ID No:127)
5'-GTTCTAGTTGAAACACCCGGA-3'；(SEQ ID No:128)
(65)检测RAF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTTCAGCAGTTTGGCTATCAG-3'；(SEQ ID No:129)
5'-ACTGTTCTTTGCTTGTTCGG-3'；(SEQ ID No:130)
(66)检测ATF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACAGATGGAGTACAGGGACT-3'；(SEQ ID No:131)
5'-ACCACCTGATTGCTGGGC-3'；(SEQ ID No:132)
(67)检测EGR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCCCTCTGTCTACTATTAAGGC-3'；(SEQ ID No:133)
5'-GGGACTGGTAGCTGGTATTG-3'；(SEQ ID No:134)
(68)检测ELK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCGGAAGAGCTTAATGTGGAG-3'；(SEQ ID No:135)
5'-TTGGTGGTTTCTGGCACAA-3'；(SEQ ID No:136)
(69)检测FOS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACTCCAAGCGGAGACAGAC-3'；(SEQ ID No:137)
5'-GGTCATCAGGGATCTTGCAG-3'；(SEQ ID No:138)
(70)检测JUN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCAAGTGCCGAAAAAGGAAG-3'；(SEQ ID No:139)
5'-GAGTTCTGAGCTTTCAAGGT-3'；(SEQ ID No:140)
(71)检测STAT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCTGAATTTCGGCACCT-3'；(SEQ ID No:141)
5'-AGTAACGATGAGAGGACCCT-3'；(SEQ ID No:142)
(72)检测CARD11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACCTTCCAGGAGCGGTACTA-3'；(SEQ ID No:143)
5'-TAGCGCATGGCTAAGTTGTA-3'；(SEQ ID No:144)
(73)检测CASP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCAATAATGGACAAGTCAAGCC-3'；(SEQ ID No:145)
5'-CTGTACCCCAGATTTTGTAGCA-3'；(SEQ ID No:146)
(74)检测CASP8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCATGGACCACAGTAACATGGA-3'；(SEQ ID No:147)
5'-AGTGAACTGAGATGTCAGCTCAT-3'；(SEQ ID No:148)
(75)检测CFLAR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGTGAGGCGATTTGACCTG-3'；(SEQ ID No:149)
5'-TCCGAAACAAGGTGAGGGTT-3'；(SEQ ID No:150)
(76)检测HMOX1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGACTGCGTTCCTGCTCAAC-3'；(SEQ ID No:151)
5'-AAGCCCTACAGCAACTGTCG-3'；(SEQ ID No:152)
(77)检测MALT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGAAGTGTTGATGGCGTCT-3'；(SEQ ID No:153)
5'-TAGTGAGGAATAGGGCTTCCA-3'；(SEQ ID No:154)
(78)检测PSIP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAACAGGGGTTACTTCAACCTC-3'；(SEQ ID No:155)
5'-GCCTTTCAGCATATTCCTTCT-3'；(SEQ ID No:156)
(79)检测RHOA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATTGGCGCTTTTGGGTACAT-3'；(SEQ ID No:157)
5'-GCAGCTCTCGTAGCCATTTC-3'；(SEQ ID No:158)
(80)检测CCL20基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTGTACCAAGAGTTTGCTC-3'；(SEQ ID No:159)
5'-GCACACAGACAACTTTTTCTTT-3'；(SEQ ID No:160)
(81)检测CXCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CATCGCCCATGGTTAAGAAAAT-3'；(SEQ ID No:161)
5'-ATTGGTGGCTGTTCCTGAAGGA-3'；(SEQ ID No:162)
(82)检测CXCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAAACCGAAGTCATAGCCAC-3'；(SEQ ID No:163)
5'-GCTCCCCTTGTTCAGTATCT-3'；(SEQ ID No:164)
(83)检测STX11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TAAGTGGGACGTGTTTTCCG-3'；(SEQ ID No:165)
5'-TCGATGACGTTCAGGGTGT-3'；(SEQ ID No:166)
(84)检测TIFA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TACAGGTGCATGGTCAGATTCG-3'；(SEQ ID No:167)
5'-CTGTCGGAGAACTGCTTTGG-3'；(SEQ ID No:168)
(85)检测GAPDH基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGCCACCCAGAAGACT-3'；(SEQ ID No:169)
5'-CTCAGTGTAGCCCAGGAT-3'；(SEQ ID No:170)
(86)检测ACTB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTACAGCTTCACCACCAC-3'；(SEQ ID No:171)
5'-ACTTGCGCTCAGGAGGAGC-3'；(SEQ ID No:172)
(87)检测HPRT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAAAGGACCCCACGAAGTGT-3'；(SEQ ID No:173)
5'-GTCAAGGGCATATCCTACAACA-3'。(SEQ ID No:174)
上述引物置于96孔板上进行PCR反应，其中每对引物置于任一孔中，共将87对引物置于87个孔中即可。
图2是HepG2和L02细胞实时荧光定量PCR扩增的结果，从扩增曲线可以看出目的基因扩增良好，适合下游的Ct值分析；
五、数据分析
利用各个基因的Ct值计算核心NF-ΚB基因的表达差异。
图3是HepG2和L02细胞实时荧光定量PCR后的溶解曲线分析，从溶解曲线看，目的基因的峰形单一，扩增产物为目的基因，没有引物二聚体、非特异性扩增等现象，说明该引物和PCR体系良好，适合下游实验。
图4是HepG2和L02细胞实时荧光定量PCR后，进行差异表达分析后的结果，从该结果可以筛选出与肝癌发生、发展密切相关的NF-κB信号通路分子。
本发明将涉及与NF-κB信号通路密切相关的分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，与正常的乳腺细胞、乳腺癌做对比，探讨NF-κB信号通路在肿瘤/正常细胞中的可能途径，为研究关键蛋白的调控提供最直接的证据；本发明从转录水平快速准确的找到NF-κB信号通路相关分子，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂，其特征在于它包括以下引物：
(1)检测CD40基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGGGTCAAGCAGATTGCTA-3'；
5'-CAGATGACACATTGGAGAAGA-3'；
(2)检测IL10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAAGGCGCATGTGAACTCC-3'；
5'-ATGTCAAACTCACTCATGGCT-3'；
(3)检测CD83基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAGCTGGCATGGAACGAG-3'；
5'-GTCTTGTGAGGAGTCACTAGC-3'；
(4)检测EGFR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCACGAGTAACAAGCTCAC-3'；
5'-TGAGGACATAACCAGCCACC-3'；
(5)检测FASLG基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TTTAACAGGCAAGTCCAACTCA-3'；
5'-GCCACCCTTCTTATACTTCACT-3'；
(6)检测IL1A基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCATGTAAGCTATGGCCCACT-3'；
5'-TTCCCGTTGGTTGCTACTAC-3'；
(7)检测IL1B基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCGACACATGGGATAACGAGG-3'；
5'-TTTTGCTGTGAGTCCCGGAG-3'；
(8)检测IL1R1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCCAGTTGAGTGACATTGCT-3'；
5'-GTGATGAGGGTACTCCTTCTTT-3'；
(9)检测IL8基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGAGAGTGATTGAGAGTGGAC-3'；
5'-ACCCTCTGCACCCAGTTTTC-3'；
(10)检测LTBR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGTCCGACACAACCTGC-3'；
5'-TACAGGATTGGGTCCCTCTC-3'；
(11)检测NOD1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCGACCACGTCCTGCTAT-3'；
5'-AGGTTGGTGAACTGGAAGTG-3'；
(12)检测TLR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCAAACGTGAAGCTACAGGG-3'；
5'-CGAACACATCGCTGACAACT-3'；
(13)检测TLR2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTCTCGGTGTCGGAATGTC-3'；
5'-CCCGCTCACTGTAAGAAACA-3'；
(14)检测TLR3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAACACAAGCATTCGGAATCTG-3'；
5'-AGGAATCGTTACCAACCACATT-3'；
(15)检测TLR4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTTGATCTACCAAGCCTTGAGT-3'；
5'-CTGGTTGTCCCAAAATCACTTT-3'；
(16)检测TLR6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAATGCAAAAACCCTTCACCT-3'；
5'-CAAGTCGTTTCTATGTGGTTGA-3'；
(17)检测TLR9基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCCCTCATATCCCTGTCCC-3'；
5'-TTGCCGTCCATGAATAGGAAG-3'；
(18)检测TNF基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGGCCAAGCCCTGGTATG-3'；
5'-AGGCCAAGCCCTGGTATG-3'。
(19)检测TNFRSF1A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACGAGTGTGTCTCCTGTAGT-3'；
5'-GAGTAGAGCTTGGACTTCCAC-3'；
(20)检测TNFRSF10A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CGGGGAGGATTGAACCAC-3'；
5'-GACGACAAACTTGAAGGTCTT-3'；
(21)检测TNFRSF10B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGTTGCAGCCGTAGTCTTG-3'；
5'-CAGGTCGTTGTGAGCTTCT-3'；
(22)检测TNFSF10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCGTGCTGATCGTGATCTTC-3'；
5'-CTCGTTGGTAAAGTACACGTA-3'；
(23)检测BIRC2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TTCAGTGGTTCTTACTCCAGC-3'；
5'-CTGTAGGGGTTAGTCCTCGAT-3'；
(24)检测FADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGAAGGAGAACGCAACAGT-3'；
5'-CTGAACCTCTTGTACCAGGTC-3'；
(25)检测IRAK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGTTTCGTCACCCAAACATT-3'；
5'-GGGCTGTACCCAGAAGGA-3'；
(26)检测IRAK2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGCCACCCCAATGTCTTACC-3'；
5'-GGGAACCATTTGCCATGTAG-3'；
(27)检测IRF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGCTACACAGTTCCAGG-3'；
5'-TCCTCAGGTAATTTCCCTTCCT-3'；
(28)检测MYD88基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTGCTCTCAACATGCGA-3'；
5'-TGTGTCCGCACGTTCAAGA-3'；
(29)检测RIPK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TACATGGAAAAGGCGTGATACA-3'；
5'-GGTCTGCGATCTTAATGTGGA-3'；
(30)检测TBK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GATCACTGCCATTTAGACCC-3'；
5'-AGGCATGTCTCCACTCCAG-3'；
(31)检测TICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGGAATCATCATCGGAACAG-3'；
5'-GAGTGGTCTATGGCGTCCT-3'；
(32)检测TNFAIP3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAACTGGTGTCGAGAAGTCC-3'；
5'-AAGTCTGTGTCCTGAACGC-3'；
(33)检测TRADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGTTTGAGTTGCATCCTAGC-3'；
5'-CGCACTTCAGATTTCGCA-3'；
(34)检测TRAF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTCATGCTGACCGAATGTC-3'；
5'-CCGTCACAAGTTAAGGGGAA-3'；
(35)检测TRAF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTTGAGGAAAGACCTGCGAG-3'；
5'-CGATCATCGGAACCTGACT-3'；
(36)检测TRAF6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGCCATGAAAAGATGCAGAGG-3'；
5'-GCCTGGGCCAACATTCTC-3'；
(37)检测BCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACATCTACAACAACCTACGGC-3'；
5'-GTGAGCCCGTCATAATTGC-3'；
(38)检测CHUK基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGAAGAAGTTGAACCATGCCA-3'；
5'-CTCCAGAACAGTATTCCATTGC-3'；
(39)检测IKBKB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGCCTTTGAGTGCATCAC-3'；
5'-GCTAACAACAATGTCCACCT-3'；
(40)检测IKBKG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCAGAGCAACCAGATTCT-3'；
5'-CTGGCATTCCTTAGTGGCAG-3'；
(41)检测NFKBIA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCGAGACTTTCGAGGAAATAC-3'；
5'-CCATTGTAGTTGGTAGCCTTCA-3'；
(42)检测NFKBIE基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AATTGCTGCTTCGGAATGGA-3'；
5'-ATGCGGGCATCTACCTGG-3'；
(43)检测NFKB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAGCACGAATGACAGAGGC-3'；
5'-CTTGGCGGATTAGCTCTTTT-3'；
(44)检测NFKB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGAGAGTTGCTACAACCCA-3'；
5'-TGTTCCACGATCACCAGGTA-3'；
(45)检测REL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CATGGTAATTTGACGACTGCT-3'；
5'-CTTCCCAATCGTTCAACACA-3'；
(46)检测RELA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TGGGGACTACGACCTGAATG-3'；
5'-GGGCACGATTGTCAAAGATG-3'；
(47)检测RELB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCGAGCCCGTCTATGACAA-3'；
5'-GTCTTGAACACAATGGCAATC-3'；
(48)检测CCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGCCAGATGCAATCAATGCC-3'；
5'-GGAATCCTGAACCCACTTCT-3'；
(49)检测CCL5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAGCAGTCGTCTTTGTCAC-3'；
5'-TCTGGGTTGGCACACACTT-3'；
(50)检测CSF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GACCTCGTGCCAAATTACATT-3'；
5'-GGTGTCTCATAGAAAGTTCGGA-3'；
(51)检测CSF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCTGAACCTGAGTAGAGACAC-3'；
5'-GCTGCTTGTAGTGGCTGG-3'；
(52)检测CSF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGCTTGAGCCAACTCCATA-3'；
5'-AACGCGGTACGACACCTC-3'；
(53)检测ICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TATGAACTGAGCAATGTGCAAG-3'；
5'-TTCCACCCGTTCTGGAGTC-3'；
(54)检测IFNA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCTCGCCCTTTGCTTTACT-3'；
5'-TGTGGGTCTCAGGGAGATCA-3'；
(55)检测IFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CGGTAACTGACTTGAATGTCCA-3'；
5'-CGCTTCCCTGTTTTAGCTGC-3'；
(56)检测TIMP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCACCTTATACCAGCGTTATGA-3'；
5'-GTGTAGACGAACCGGATGTC-3'；
(57)检测LTA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCTACTTCGTCTACTCCCAGG-3'；
5'-CCCGTGGTACATCGAGTG-3'；
(58)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCATTGACTTTTCTGTCGCC-3'；
5'-CAAAGCAAGCCACTCTGT-3'；
(59)检测AGT基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCCAATTCAGGCCAAGACAT-3'；
5'-GTCAAGTTTTGCAGCGACTA-3'；
(60)检测BCL2A1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTGCTACAAAATGTTGCGTTC-3'；
5'-GCAATTTGCTGTCGTAGAAGTT-3'；
(61)检测BCL2L1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACTGAATCGGAGATGGAGACC-3'；
5'-CAGTTCAAACTCGTCGCCT-3'；
(62)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCATTGACTTTTCTGTCGCC-3'；
5'-CAAAGCAAGCCACTCTGT-3'；
(63)检测AKT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACAAACGAGGGGAGTACATC-3'；
5'-CCATCATTCTTGAGGAGGAAGT-3'；
(64)检测MAP3K1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TAGGGCCTAACTCTTTCCTGAT-3'；
5'-GTTCTAGTTGAAACACCCGGA-3'；
(65)检测RAF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GTTCAGCAGTTTGGCTATCAG-3'；
5'-ACTGTTCTTTGCTTGTTCGG-3'；
(66)检测ATF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACAGATGGAGTACAGGGACT-3'；
5'-ACCACCTGATTGCTGGGC-3'；
(67)检测EGR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCCCTCTGTCTACTATTAAGGC-3'；
5'-GGGACTGGTAGCTGGTATTG-3'；
(68)检测ELK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATCGGAAGAGCTTAATGTGGAG-3'；
5'-TTGGTGGTTTCTGGCACAA-3'；
(69)检测FOS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACTCCAAGCGGAGACAGAC-3'；
5'-GGTCATCAGGGATCTTGCAG-3'；
(70)检测JUN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCAAGTGCCGAAAAAGGAAG-3'；
5'-GAGTTCTGAGCTTTCAAGGT-3'；
(71)检测STAT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GGCTGAATTTCGGCACCT-3'；
5'-AGTAACGATGAGAGGACCCT-3'；
(72)检测CARD11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ACCTTCCAGGAGCGGTACTA-3'；
5'-TAGCGCATGGCTAAGTTGTA-3'；
(73)检测CASP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CCAATAATGGACAAGTCAAGCC-3'；
5'-CTGTACCCCAGATTTTGTAGCA-3'；
(74)检测CASP8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TCATGGACCACAGTAACATGGA-3'；
5'-AGTGAACTGAGATGTCAGCTCAT-3'；
(75)检测CFLAR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGTGAGGCGATTTGACCTG-3'；
5'-TCCGAAACAAGGTGAGGGTT-3'；
(76)检测HMOX1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AGACTGCGTTCCTGCTCAAC-3'；
5'-AAGCCCTACAGCAACTGTCG-3'；
(77)检测MALT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GAGAAGTGTTGATGGCGTCT-3'；
5'-TAGTGAGGAATAGGGCTTCCA-3'；
(78)检测PSIP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAACAGGGGTTACTTCAACCTC-3'；
5'-GCCTTTCAGCATATTCCTTCT-3'；
(79)检测RHOA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-ATTGGCGCTTTTGGGTACAT-3'；
5'-GCAGCTCTCGTAGCCATTTC-3'；
(80)检测CCL20基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTGTACCAAGAGTTTGCTC-3'；
5'-GCACACAGACAACTTTTTCTTT-3'；
(81)检测CXCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CATCGCCCATGGTTAAGAAAAT-3'；
5'-ATTGGTGGCTGTTCCTGAAGGA-3'；
(82)检测CXCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CAAACCGAAGTCATAGCCAC-3'；
5'-GCTCCCCTTGTTCAGTATCT-3'；
(83)检测STX11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TAAGTGGGACGTGTTTTCCG-3'；
5'-TCGATGACGTTCAGGGTGT-3'；
(84)检测TIFA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-TACAGGTGCATGGTCAGATTCG-3'；
5'-CTGTCGGAGAACTGCTTTGG-3'；
(85)检测GAPDH基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-CTGCCACCCAGAAGACT-3'；
5'-CTCAGTGTAGCCCAGGAT-3'；
(86)检测ACTB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-GCTACAGCTTCACCACCAC-3'；
5'-ACTTGCGCTCAGGAGGAGC-3'；
(87)检测HPRT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：
5'-AAAAGGACCCCACGAAGTGT-3'；
5'-GTCAAGGGCATATCCTACAACA-3'。
2.权利要求1所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用，其特征在于：所述癌细胞为肺癌细胞、乳腺癌细胞、肺癌细胞和肝癌细胞。
4.根据权利要求2所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用，其特征在于：所述检测试剂适用于实时荧光定量PCR检测方法。
5.根据权利要求4所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应体系为：Taq聚合酶反应混合液10μl，上游引物0.1-0.2μmol，下游引物0.1-0.2μmol，cDNA模板25-100ng，灭菌蒸馏水补足到20μl。
6.根据权利要求5所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用，其特征在于：所述Taq聚合酶为TaKaRa公司的Premix Ex Taq聚合酶。
7.根据权利要求4所述的PCR试剂在制备检测癌细胞的检测试剂中的应用，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性，30秒；95℃变性，5秒，59℃，20秒，进行40个循环。溶解曲线分析95℃，15秒，至65℃，1分钟，按照4.4℃/秒进行梯度降温。
CN201410608428.4A 2014-11-03 2014-11-03 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用 Active CN104450886B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410608428.4A CN104450886B (zh) 2014-11-03 2014-11-03 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410608428.4A CN104450886B (zh) 2014-11-03 2014-11-03 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104450886A true CN104450886A (zh) 2015-03-25
CN104450886B CN104450886B (zh) 2016-08-24

Family

ID=52897631

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410608428.4A Active CN104450886B (zh) 2014-11-03 2014-11-03 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104450886B (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104774935A (zh) * 2015-04-02 2015-07-15 河南农业大学 检测TLR2/4介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN104946778A (zh) * 2015-04-02 2015-09-30 河南农业大学 检测TLR7/8介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN104946777A (zh) * 2015-04-02 2015-09-30 河南农业大学 检测TLR9介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN106591448A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 南京师范大学 荧光RT‑RCR检测河川沙塘鳢MyD88基因表达的试剂盒及其应用
CN109112133A (zh) * 2018-08-08 2019-01-01 嘉兴学院 一种核苷酸和该核苷酸的重组载体及其在制备抗肿瘤药物中的应用
CN110564825A (zh) * 2019-09-18 2019-12-13 新疆医科大学第一附属医院 一种阿尔茨海默病与信号通路相关基因甲基化的研究方法
CN111197084A (zh) * 2020-03-10 2020-05-26 中国医学科学院医学生物学研究所 检测树鼩NF-κB基因转录水平的引物、试剂盒及方法
CN111690751A (zh) * 2020-07-13 2020-09-22 青岛大学附属医院 一种检测肿瘤药物靶标的pcr试剂及其应用
CN111808958A (zh) * 2020-07-13 2020-10-23 青岛市市立医院 一种用于检测细胞凋亡信号通路的pcr试剂及其应用
CN111850123A (zh) * 2020-07-13 2020-10-30 青岛大学附属医院 一种用于检测细胞血管生成信号通路基因表达的pcr试剂及其应用
CN111850121A (zh) * 2020-07-13 2020-10-30 青岛大学附属医院 一种检测dna损伤信号通路核心分子的筛选试剂及其应用
CN111850122A (zh) * 2020-07-13 2020-10-30 青岛大学附属医院 一种检测肝癌核心信号分子的pcr检测试剂及其应用
WO2021248587A1 (zh) * 2020-06-10 2021-12-16 浙江大学 用于诊断肝癌的标志物及其检测试剂和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001292779A (ja) * 2000-04-12 2001-10-23 Japan Science & Technology Corp ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質
CN101182540A (zh) * 2007-11-06 2008-05-21 浙江大学 NF-κB位点缺失的DC-SIGN启动子真核质粒的构建方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001292779A (ja) * 2000-04-12 2001-10-23 Japan Science & Technology Corp ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質
CN101182540A (zh) * 2007-11-06 2008-05-21 浙江大学 NF-κB位点缺失的DC-SIGN启动子真核质粒的构建方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YANG QIAN ET AL.: "Expression of nuclear factor-kB in traumatic cataract", 《CHINESE JOURNAL OF TRAUMATOLOGY》 *
严明等: "NF-κB信号转导通路与口腔鳞癌转移关系的研究", 《第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编》 *

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104946777B (zh) * 2015-04-02 2018-01-26 河南农业大学 检测TLR9介导的NF‑κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN104946778A (zh) * 2015-04-02 2015-09-30 河南农业大学 检测TLR7/8介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN104946777A (zh) * 2015-04-02 2015-09-30 河南农业大学 检测TLR9介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN104774935A (zh) * 2015-04-02 2015-07-15 河南农业大学 检测TLR2/4介导的NF-κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN104946778B (zh) * 2015-04-02 2018-01-26 河南农业大学 检测TLR7/8介导的NF‑κB信号通路中关键分子含量的特异性引物、扩增程序及定量试剂盒
CN106591448B (zh) * 2016-12-13 2020-03-31 南京师范大学 荧光RT-RCR检测河川沙塘鳢MyD88基因表达的试剂盒及其应用
CN106591448A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 南京师范大学 荧光RT‑RCR检测河川沙塘鳢MyD88基因表达的试剂盒及其应用
CN109112133A (zh) * 2018-08-08 2019-01-01 嘉兴学院 一种核苷酸和该核苷酸的重组载体及其在制备抗肿瘤药物中的应用
CN110564825A (zh) * 2019-09-18 2019-12-13 新疆医科大学第一附属医院 一种阿尔茨海默病与信号通路相关基因甲基化的研究方法
CN110564825B (zh) * 2019-09-18 2023-04-25 新疆医科大学第一附属医院 一种阿尔茨海默病与信号通路相关基因甲基化的研究方法
CN111197084A (zh) * 2020-03-10 2020-05-26 中国医学科学院医学生物学研究所 检测树鼩NF-κB基因转录水平的引物、试剂盒及方法
WO2021248587A1 (zh) * 2020-06-10 2021-12-16 浙江大学 用于诊断肝癌的标志物及其检测试剂和应用
CN111690751A (zh) * 2020-07-13 2020-09-22 青岛大学附属医院 一种检测肿瘤药物靶标的pcr试剂及其应用
CN111808958A (zh) * 2020-07-13 2020-10-23 青岛市市立医院 一种用于检测细胞凋亡信号通路的pcr试剂及其应用
CN111850123A (zh) * 2020-07-13 2020-10-30 青岛大学附属医院 一种用于检测细胞血管生成信号通路基因表达的pcr试剂及其应用
CN111850121A (zh) * 2020-07-13 2020-10-30 青岛大学附属医院 一种检测dna损伤信号通路核心分子的筛选试剂及其应用
CN111850122A (zh) * 2020-07-13 2020-10-30 青岛大学附属医院 一种检测肝癌核心信号分子的pcr检测试剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104450886B (zh) 2016-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104450886A (zh) 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用
CN103642927B (zh) 一种检测自噬信号通路的试剂、pcr检测方法及其应用
CN103667492B (zh) 一种检测wnt信号通路的试剂、pcr检测方法及其应用
CN103627814B (zh) 一种检测Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用
CN105524924B (zh) 环状RNA circ‑ZKSCAN1的用途
CN103589721A (zh) 植物微小核糖核酸的提取、制备及其应用
CN101974529B (zh) 含自由三磷酸基团的TGF-β特异性siRNA及其应用
CN108179194A (zh) 一种肿瘤分子标志物circBIRC6及其抑制剂和用途
CN112587663B (zh) 长链非编码RNA-lncIVRL在防治甲型流感病毒感染中的应用
CN112791187A (zh) miR-142-5p在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用
CN104774966B (zh) 肺腺癌miRNA标记物
CN104711240B (zh) 禽呼肠孤病毒σA蛋白及其相关生物材料的应用
Du et al. Co-expression network analysis identifies innate immune signatures for Albizia julibrissin saponin active fraction-adjuvanted avian influenza vaccine
Chen et al. Identification of key target genes and pathway analysis in nonalcoholic fatty liver disease via integrated bioinformatics analysis
CN104762274B (zh) 禽呼肠孤病毒σNS蛋白及其相关生物材料的应用
CN104027820B (zh) 一种miRNA在治疗或诊断高脂血症及动脉硬化疾病中的应用
CN101671669A (zh) 一种肝癌靶向性基因表达元件ae及其应用
CN112691194A (zh) 一个肿瘤相关次生淋巴水肿的药物干预靶点及其应用
CN105457030A (zh) B2m在作为卵巢癌治疗靶点中的应用
Pan et al. Differential expression of genes in HepG2 cells caused by UC001kfo RNAi as shown by RNA-seq
Xia et al. Preliminary investigation of five novel long non-coding RNAs in hepatocellular carcinoma cell lines
CN101831461B (zh) 一种人小RNA-148a表达载体及应用
Wang et al. Effectiveness of lentivirus-mediated RNA interference targeting mouse tumor necrosis factor α in vitro and in vivo
CN111789957B (zh) 敲低lncBCAS1-4_1细胞株与活性维生素D联用在制备抗肿瘤药物中的应用
Deng et al. Abnormal expression of serum miR‐4746‐5p in liver cancer patients after interventional chemotherapy and its possible mechanism

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant