JP2001292779A - ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質 - Google Patents
ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 炎症反応に中心的な役割を果たすＮＦ−κＢ
シグナル伝達系に関与し新しいタイプの抗炎症薬の開発
やスクリーニングに有用な酵素タンパク質を得る。 【解決手段】 特定のアミノ酸配列から成りＮＦ−κＢ
を活性化する機能を有することを特徴とするキナーゼ酵
素。
シグナル伝達系に関与し新しいタイプの抗炎症薬の開発
やスクリーニングに有用な酵素タンパク質を得る。 【解決手段】 特定のアミノ酸配列から成りＮＦ−κＢ
を活性化する機能を有することを特徴とするキナーゼ酵
素。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規な酵素タンパ
ク質に関し、特に、炎症反応に関与し抗炎症薬の開発や
スクリーニングに有用なキナーゼ酵素に関する。
ク質に関し、特に、炎症反応に関与し抗炎症薬の開発や
スクリーニングに有用なキナーゼ酵素に関する。
【０００２】
【従来の技術と課題】現在までに多くの抗炎症薬が開発
されてきたが、その多くはプロスタグランジン合成阻害
薬であり、消化器障害という副作用のために、慢性関節
リウマチ等の長期投与を必要とする患者に対しての適応
が限られており、全く異なる作用機序に基づく抗炎症薬
の開発が望まれている。
されてきたが、その多くはプロスタグランジン合成阻害
薬であり、消化器障害という副作用のために、慢性関節
リウマチ等の長期投与を必要とする患者に対しての適応
が限られており、全く異なる作用機序に基づく抗炎症薬
の開発が望まれている。
【０００３】炎症反応に中心的な役割を果たす経路とし
てはＮＦ−κＢシグナル伝達系がよく知られているが、
その作用機序については不明な点も多い。特に、ＮＦ−
κＢシグナル伝達系において、ＩκＢキナーゼ（ＩＫ
Ｋ）によるリン酸化は重要なステップであるが、ＩＫＫ
を活性化するキナーゼについてはその実体が不明であっ
た。ＩＫＫが活性化されてＩκＢがリン酸化されユビキ
チン化分解されると、転写因子であるＮＦ−κＢがＩκ
Ｂから開放され活性化されて炎症が引き起こされる。し
たがって、ＩＫＫを活性化するキナーゼの正体を明らか
にすることができれば該キナーゼを阻害してＮＦ−κＢ
を阻害する物質を探索することにより、全く新しいタイ
プの抗炎症薬の開発に途を開くものと期待されるが、そ
のようなキナーゼは未だ見出されていない。
てはＮＦ−κＢシグナル伝達系がよく知られているが、
その作用機序については不明な点も多い。特に、ＮＦ−
κＢシグナル伝達系において、ＩκＢキナーゼ（ＩＫ
Ｋ）によるリン酸化は重要なステップであるが、ＩＫＫ
を活性化するキナーゼについてはその実体が不明であっ
た。ＩＫＫが活性化されてＩκＢがリン酸化されユビキ
チン化分解されると、転写因子であるＮＦ−κＢがＩκ
Ｂから開放され活性化されて炎症が引き起こされる。し
たがって、ＩＫＫを活性化するキナーゼの正体を明らか
にすることができれば該キナーゼを阻害してＮＦ−κＢ
を阻害する物質を探索することにより、全く新しいタイ
プの抗炎症薬の開発に途を開くものと期待されるが、そ
のようなキナーゼは未だ見出されていない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、このたびＩ
ＫＫをリン酸化してＮＦ−κＢを活性化することのでき
る新規な酵素タンパク質を見出しそのアミノ酸配列を明
らかにすることに成功した。
ＫＫをリン酸化してＮＦ−κＢを活性化することのでき
る新規な酵素タンパク質を見出しそのアミノ酸配列を明
らかにすることに成功した。
【０００５】かくして、本発明は、配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列から成りＮＦ−κＢを活性化する機
能を有することを特徴とするキナーゼ酵素を提供するも
のである。
されるアミノ酸配列から成りＮＦ−κＢを活性化する機
能を有することを特徴とするキナーゼ酵素を提供するも
のである。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明のＮＦ−κＢ活性化キナー
ゼ酵素（以下、ＮＦ−κＢ−Activating Kinaseの頭文
字をとってＮＡＫと略称することがある）は、ＩＫＫの
酵素活性成分を構成するＩＫＫαおよびＩＫＫβの共通
配列に基づく縮重プライマーを用いて、リ・フラウメニ
症候群（Li-Fraumeni syndrome）患者の線維芽細胞由来
のＲＮＡを逆転写ＰＣＲ法によって増幅することによっ
て得られたｃＤＮＡ（図６〜図８参照）から確認された
ものである。図１および配列表に示されるように、この
ＮＡＫは７３０個のアミノ酸から構成され、その分子量
は８４ｋＤａである。
ゼ酵素（以下、ＮＦ−κＢ−Activating Kinaseの頭文
字をとってＮＡＫと略称することがある）は、ＩＫＫの
酵素活性成分を構成するＩＫＫαおよびＩＫＫβの共通
配列に基づく縮重プライマーを用いて、リ・フラウメニ
症候群（Li-Fraumeni syndrome）患者の線維芽細胞由来
のＲＮＡを逆転写ＰＣＲ法によって増幅することによっ
て得られたｃＤＮＡ（図６〜図８参照）から確認された
ものである。図１および配列表に示されるように、この
ＮＡＫは７３０個のアミノ酸から構成され、その分子量
は８４ｋＤａである。
【０００７】本発明のＮＡＫは、アミノ酸配列に関し
て、従来から知られたＩＫＫと次のような相関性を有す
る（図１参照）。 （１）ＮＡＫは、ＩＫＫ−ｉ（リポポリサッカライド誘
発性ＩκＢキナーゼ）に対して全体として６１％の同一
性を有する。 （２）ＮＡＫの酵素活性ドメインは、ＩＫＫαまたはＩ
ＫＫβに対して３０％の同一性を有する。 （３）ＮＡＫは、ＩＫＫαまたはＩＫＫβと同様に、Ｃ
端側にロイシンジッパー（ＬＺ）およびヘリックス・ル
ープ・ヘリックス（ＨＬＨ）モチーフを有する。 （４）ＩＫＫαまたはＩＫＫβが活性化ループに２つの
セリンを有する（活性化に際してはこれらがリン酸化さ
れる）のに対して、ＮＡＫにはこれらのセリンの１つの
代わりにグルタミン酸（Glu 168）が存在する。
て、従来から知られたＩＫＫと次のような相関性を有す
る（図１参照）。 （１）ＮＡＫは、ＩＫＫ−ｉ（リポポリサッカライド誘
発性ＩκＢキナーゼ）に対して全体として６１％の同一
性を有する。 （２）ＮＡＫの酵素活性ドメインは、ＩＫＫαまたはＩ
ＫＫβに対して３０％の同一性を有する。 （３）ＮＡＫは、ＩＫＫαまたはＩＫＫβと同様に、Ｃ
端側にロイシンジッパー（ＬＺ）およびヘリックス・ル
ープ・ヘリックス（ＨＬＨ）モチーフを有する。 （４）ＩＫＫαまたはＩＫＫβが活性化ループに２つの
セリンを有する（活性化に際してはこれらがリン酸化さ
れる）のに対して、ＮＡＫにはこれらのセリンの１つの
代わりにグルタミン酸（Glu 168）が存在する。
【０００８】また、本発明のキナーゼ酵素（ＮＡＫ）
は、インビボおよびインビトロの実験系から、次のよう
に総括される機能を有することが見出されている。 （１）ＮＡＫは、ＩＫＫ（具体的には、炎症性サイトカ
インによるＮＦ−κＢの活性化に必須のサブユニットで
あるＩＫＫβ）をリン酸化して活性化し、ＩκＢ（Ｉκ
ＢαおよびＩκＢβ）のリン酸化、ユビキチン化（ユビ
キチン化分解）を誘導する。 （２）この結果、ＮＡＫはＮＦ−κＢの核移行・転写活
性化を引き起こす。 （３）ＮＡＫは、特にＰＫＣε（プロテインキナーゼＣ
−ε）を介したＮＦ−κＢの活性化に関与している。
は、インビボおよびインビトロの実験系から、次のよう
に総括される機能を有することが見出されている。 （１）ＮＡＫは、ＩＫＫ（具体的には、炎症性サイトカ
インによるＮＦ−κＢの活性化に必須のサブユニットで
あるＩＫＫβ）をリン酸化して活性化し、ＩκＢ（Ｉκ
ＢαおよびＩκＢβ）のリン酸化、ユビキチン化（ユビ
キチン化分解）を誘導する。 （２）この結果、ＮＡＫはＮＦ−κＢの核移行・転写活
性化を引き起こす。 （３）ＮＡＫは、特にＰＫＣε（プロテインキナーゼＣ
−ε）を介したＮＦ−κＢの活性化に関与している。
【０００９】このように、本発明のキナーゼ酵素（ＮＡ
Ｋ）は、炎症の発生に密接な関係があるＮＦ−κＢの活
性化に関与しているので、ＮＡＫを阻害するような物質
をスクリーニングできれば、該物質は、ＩκＢの分解を
抑制することによって炎症性サイトカインのＮＦ−κＢ
のシグナルを遮断する強力かつ特異的な抗炎症薬となり
得る。
Ｋ）は、炎症の発生に密接な関係があるＮＦ−κＢの活
性化に関与しているので、ＮＡＫを阻害するような物質
をスクリーニングできれば、該物質は、ＩκＢの分解を
抑制することによって炎症性サイトカインのＮＦ−κＢ
のシグナルを遮断する強力かつ特異的な抗炎症薬となり
得る。
【００１０】
【実施例】実施例１：ＮＡＫをコードするｃＤＮＡの単
離およびＮＡＫタンパク質の発現 ＩＫＫαおよびＩＫＫβのキナーゼドメインの保存モチ
ーフに基づき、縮重プライマー、5'−AT(TCA)AT(TCA)CA
(TC)(CA)GNGA(TC)ATCAAACC−3'および5'−GG(AGT)ATNCC
NA(AG)(TC)TT(TC)TCAAAGAT−3'を設計した。これらのプ
ライマーを用い、ＭＤＡＨ０４１細胞（Li-Fraumei syn
dromeの患者から得られた線維芽細胞で、自然不死化し
た細胞株。ｐ５３‐/‐のみの変異と考えられている）
由来のＲＮＡを逆転写ＰＣＲにより増幅することにより
２４０ｂｐのＰＣＲ生成物を得た。5'側の配列の完成は
ＲＡＣＥ（5' rapid amplification of cDNA ends）法
によって行い、また、3'側の配列は、ヒト胎児脳ｃＤＮ
Ａライブラリー（Stratagene）をスクリーニングするこ
とによって完成した。このようにして得られたｃＤＮＡ
の塩基配列から配列番号：１で表されるアミノ酸配列を
決定した。
離およびＮＡＫタンパク質の発現 ＩＫＫαおよびＩＫＫβのキナーゼドメインの保存モチ
ーフに基づき、縮重プライマー、5'−AT(TCA)AT(TCA)CA
(TC)(CA)GNGA(TC)ATCAAACC−3'および5'−GG(AGT)ATNCC
NA(AG)(TC)TT(TC)TCAAAGAT−3'を設計した。これらのプ
ライマーを用い、ＭＤＡＨ０４１細胞（Li-Fraumei syn
dromeの患者から得られた線維芽細胞で、自然不死化し
た細胞株。ｐ５３‐/‐のみの変異と考えられている）
由来のＲＮＡを逆転写ＰＣＲにより増幅することにより
２４０ｂｐのＰＣＲ生成物を得た。5'側の配列の完成は
ＲＡＣＥ（5' rapid amplification of cDNA ends）法
によって行い、また、3'側の配列は、ヒト胎児脳ｃＤＮ
Ａライブラリー（Stratagene）をスクリーニングするこ
とによって完成した。このようにして得られたｃＤＮＡ
の塩基配列から配列番号：１で表されるアミノ酸配列を
決定した。
【００１１】上記のｃＤＮＡをバキュロウイルスベクタ
ーｐＶＬ１３９３に組み込み、バキュロウイルスＤＮＡ
（BaculoGold : Pharmingen製）とともにＳｆ９細胞
（カイコ由来株化細胞）にトランスフェクションし、増
殖させた。４８時間後、細胞ライゼートを調製し、発現
したＮＡＫタンパク質をProBond Resin（Invitrogen
製）で精製した。
ーｐＶＬ１３９３に組み込み、バキュロウイルスＤＮＡ
（BaculoGold : Pharmingen製）とともにＳｆ９細胞
（カイコ由来株化細胞）にトランスフェクションし、増
殖させた。４８時間後、細胞ライゼートを調製し、発現
したＮＡＫタンパク質をProBond Resin（Invitrogen
製）で精製した。
【００１２】実施例２：ＮＡＫの機能試験 図３〜図５は、本発明の酵素タンパク質ＮＡＫの機能を
調べたインビボ試験の１例を示すものである。図３は、
ＮＦ−κＢシグナル伝達系に関与する各種の酵素とＮＡ
Ｋとの反応性を免疫沈降法（Immunoprecipitation :Ｉ
Ｐ）およびウエスタンブロッティング法（Immunoblotti
ng : ＩＢ）で検討した実験結果の１例を示す電気泳動
図である。
調べたインビボ試験の１例を示すものである。図３は、
ＮＦ−κＢシグナル伝達系に関与する各種の酵素とＮＡ
Ｋとの反応性を免疫沈降法（Immunoprecipitation :Ｉ
Ｐ）およびウエスタンブロッティング法（Immunoblotti
ng : ＩＢ）で検討した実験結果の１例を示す電気泳動
図である。
【００１３】図３の下段に示すＮＡＫ、ＮＡＫ（ＫＭ）
（ＮＡＫの酵素活性が喪失した変異体）、ＩＫＫβ、Ｆ
ＷＤ１（ＳＣＦユビキチンリガーゼのＩκＢαに対する
特異性成分）、およびＩκＢαにタグ（Flag, myc）を
付けた発現ベクターで２９３Ｔ細胞をトランスフェクシ
ョンした。具体的には、ＦｕＧＥＮＥ６トランスフェク
ションキット（Boehringer製）を用い、pcDNA3-Flag-NA
K、pCR3-Flag-IKKβ、pcDNA3-Flag-FWD1、またはpcDNA3
-myc-IκBαで、２９３Ｔ細胞を３５ｍｍプレート上で
トランスフェクションし、３６時間後、該細胞をＩＰキ
ナーゼバッファー液に溶解した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
り免疫沈降物を分離した後、phospho-IκBα(ser32)[α
-P-IκBα; NEB 9241S]、ユビキチン（α-Ub）、または
Flagエピトープに特異的な抗体を用いてウエスタンブロ
ッティング（ＩＢ）分析を行った。
（ＮＡＫの酵素活性が喪失した変異体）、ＩＫＫβ、Ｆ
ＷＤ１（ＳＣＦユビキチンリガーゼのＩκＢαに対する
特異性成分）、およびＩκＢαにタグ（Flag, myc）を
付けた発現ベクターで２９３Ｔ細胞をトランスフェクシ
ョンした。具体的には、ＦｕＧＥＮＥ６トランスフェク
ションキット（Boehringer製）を用い、pcDNA3-Flag-NA
K、pCR3-Flag-IKKβ、pcDNA3-Flag-FWD1、またはpcDNA3
-myc-IκBαで、２９３Ｔ細胞を３５ｍｍプレート上で
トランスフェクションし、３６時間後、該細胞をＩＰキ
ナーゼバッファー液に溶解した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
り免疫沈降物を分離した後、phospho-IκBα(ser32)[α
-P-IκBα; NEB 9241S]、ユビキチン（α-Ub）、または
Flagエピトープに特異的な抗体を用いてウエスタンブロ
ッティング（ＩＢ）分析を行った。
【００１４】図４は、本発明の酵素タンパク質ＮＡＫが
ＮＦ−κＢの核移行を促進することを調べるために行っ
た蛍光抗体法による実験結果を示す蛍光写真である。Fl
ag−ＮＡＫでＣｏｓ７細胞をトランスフェクションし、
抗Flag抗体、抗ｐ−６５／ＲｅｌＡ抗体およびHoechst
３３２５８で染色した。図中、白い矢印がトランスフェ
クションされた細胞を示す。
ＮＦ−κＢの核移行を促進することを調べるために行っ
た蛍光抗体法による実験結果を示す蛍光写真である。Fl
ag−ＮＡＫでＣｏｓ７細胞をトランスフェクションし、
抗Flag抗体、抗ｐ−６５／ＲｅｌＡ抗体およびHoechst
３３２５８で染色した。図中、白い矢印がトランスフェ
クションされた細胞を示す。
【００１５】図５は、２９３T細胞内で本発明のＮＡＫ
が各種のＮＦ−κＢシグナル伝達系関連物質の共存下で
発現する様子を調べたＩＢ実験の結果を示すものであ
る。Flag−ＮＡＫをＩＫＫβ（ＫＭ）（酵素活性の喪失
したＩＫＫβ：添加量（μｇ）を変化させた）、ＦＷＤ
１およびＭｙｃ−ＩκＢαとともに２９３Ｔ細胞をトラ
ンスフェクションした。
が各種のＮＦ−κＢシグナル伝達系関連物質の共存下で
発現する様子を調べたＩＢ実験の結果を示すものであ
る。Flag−ＮＡＫをＩＫＫβ（ＫＭ）（酵素活性の喪失
したＩＫＫβ：添加量（μｇ）を変化させた）、ＦＷＤ
１およびＭｙｃ−ＩκＢαとともに２９３Ｔ細胞をトラ
ンスフェクションした。
【００１６】図３から理解されるように、本発明の酵素
タンパク質ＮＡＫは、単独でもSer32におけるＩκＢα
のリン酸化を引き起こす（レーン３参照）が、ＮＡＫと
ＩＫＫβが共発現されると、この効果が増大する（レー
ン６）。ＩＫＫβが過剰発現するとそれ自身のSer32に
おけるリン酸化を起こす（データ示さず）が、ＩＫＫβ
単独の発現は充分ではない（図３のレーン４）。
タンパク質ＮＡＫは、単独でもSer32におけるＩκＢα
のリン酸化を引き起こす（レーン３参照）が、ＮＡＫと
ＩＫＫβが共発現されると、この効果が増大する（レー
ン６）。ＩＫＫβが過剰発現するとそれ自身のSer32に
おけるリン酸化を起こす（データ示さず）が、ＩＫＫβ
単独の発現は充分ではない（図３のレーン４）。
【００１７】ＮＡＫがＦＷＤ１とともに発現されると、
リン酸化されたＩκＢαにＦＷＤ１が結合してそのユビ
キチン化を促進する（図３のレーン７および１０）。こ
のことは、図４に示されるように、ＮＡＫが過剰発現す
るとＲｅｌＡ（ｐ６５）のＮＦ−κＢサブユニットの核
移行をもたらしていることからも裏付けられる。しかし
ながら、ＮＡＫによるＩκＢαのリン酸化は、酵素活性
の喪失したＩＫＫβ（ＫＭ）が共発現されると阻害さ
れ、その影響はＩＫＫβ（ＫＭ）の量に依存している
（図５の電気泳動図の上段参照）。したがって、ＮＡＫ
はＩＫＫの上流で作用するものと考えられる。
リン酸化されたＩκＢαにＦＷＤ１が結合してそのユビ
キチン化を促進する（図３のレーン７および１０）。こ
のことは、図４に示されるように、ＮＡＫが過剰発現す
るとＲｅｌＡ（ｐ６５）のＮＦ−κＢサブユニットの核
移行をもたらしていることからも裏付けられる。しかし
ながら、ＮＡＫによるＩκＢαのリン酸化は、酵素活性
の喪失したＩＫＫβ（ＫＭ）が共発現されると阻害さ
れ、その影響はＩＫＫβ（ＫＭ）の量に依存している
（図５の電気泳動図の上段参照）。したがって、ＮＡＫ
はＩＫＫの上流で作用するものと考えられる。
【００１８】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Japan Science and Technology Corporation <120> NF-κB activating enzyme protein <130> P0145T <160> 1 <210> 1 <211> 730 <212> PRT <213> Homo sapience <400> 1 Met Gln Ser Thr Ser Asn His Leu Trp Leu Leu Ser Asp Ile Leu 5 10 15 Gly Gln Gly Ala Thr Ala Asn Val Phe Arg Gly Arg His Lys Lys 20 25 30 Thr Gly Asp Leu Phe Ala Ile Lys Val Phe Asn Asn Ile Ser Phe 35 40 45 Leu Arg Pro Val Asp Val Gln Met Arg Glu Phe Glu Val Leu Lys 50 55 60 Lys Leu Asn His Lys Asn Ile Val Lys Leu Phe Ala Ile Glu Glu 65 70 75 Glu Thr Thr Thr Arg His Lys Val Leu Ile Met Glu Phe Cys Pro 80 85 90 Cys Gly Ser Leu Tyr Thr Val Leu Glu Glu Pro Ser Asn Ala Tyr 95 100 105 Gly Leu Pro Glu Ser Glu Phe Leu Ile Val Leu Arg Asp Val Val 110 115 120 Gly Gly Met Asn His Leu Arg Glu Asn Gly Ile Val His Arg Asp 125 130 135 Ile Lys Pro Gly Asn Ile Met Arg Val Ile Gly Glu Asp Gly Gln 140 145 150 Ser Val Tyr Lys Leu Thr Asp Phe Gly Ala Ala Arg Glu Leu Glu 155 160 165 Asp Asp Glu Gln Phe Val Ser Leu Tyr Gly Thr Glu Glu Tyr Leu 170 175 180 His Pro Asp Met Tyr Glu Arg Ala Val Leu Arg Lys Asp His Gln 185 190 195 Lys Lys Tyr Gly Ala Thr Val Asp Leu Trp Ser Ile Gly Val Thr 200 205 210 Phe Tyr His Ala Ala Thr Gly Ser Leu Pro Phe Arg Pro Phe Glu 215 220 225 Gly Pro Arg Arg Asn Lys Glu Val Met Tyr Lys Ile Ile Thr Gly 230 235 240 Lys Pro Ser Gly Ala Ile Ser Gly Val Gln Lys Ala Glu Asn Gly 245 250 255 Pro Ile Asp Trp Ser Gly Asp Met Pro Val Ser Cys Ser Leu Ser 260 265 270 Arg Gly Leu Gln Val Leu Leu Thr Pro Val Leu Ala Asn Ile Leu 275 280 285 Glu Ala Asp Gln Glu Lys Cys Trp Gly Phe Asp Gln Phe Phe Ala 290 295 300 Glu Thr Ser Asp Ile Leu His Arg Met Val Ile His Val Phe Ser 305 310 315 Leu Gln Gln MET Thr Ala His Lys Ile Tyr Ile His Ser Tyr Asn 320 325 330 Thr Ala Thr Ile Phe His Glu Leu Val Tyr Lys Gln Thr Lys Ile 335 340 345 Ile Ser Ser Asn Gln Glu Leu Ile Tyr Glu Gly Arg Arg Leu Val 350 355 360 Leu Glu Pro Gly Arg Leu Ala Gln His Phe Pro Lys Thr Thr Glu 365 370 375 Glu Asn Pro Ile Phe Val Val Ser Arg Glu Pro Leu Asn Thr Ile 380 385 390 Gly Leu Ile Tyr Glu Lys Ile Ser Leu Pro Lys Val His Pro Arg 395 400 405 Tyr Asp Leu Asp Gly Asp Ala Ser Met Ala Lys Ala Ile Thr Gly 410 415 420 Val Val Cys Tyr Ala Cys Arg Ile Ala Ser Thr Leu Leu Leu Tyr 425 430 435 Gln Glu Leu Met Arg Lys Gly Ile Arg Trp Leu Ile Glu Leu Ile 440 445 450 Lys Asp Asp Tyr Asn Glu Thr Val His Lys Lys Thr Glu Val Val 455 460 465 Ile Thr Leu Asp Phe Cys Ile Arg Asn Ile Glu Lys Thr Val Lys 470 475 480 Val Tyr Glu Lys Leu Met Lys Ile Asn Leu Glu Ala Ala Glu Leu 485 490 495 Gly Glu Ile Ser Asp Ile His Thr Lys Leu Leu Arg Leu Ser Ser 500 505 510 Ser Gln Gly Thr Ile Glu Thr Ser Leu Gln Asp Ile Asp Ser Arg 515 520 525 Leu Ser Pro Gly Gly Ser Leu Ala Asp Ala Trp Ala His Gln Glu 530 535 540 Gly Thr His Pro Lys Asp Arg Asn Val Glu Lys Leu Gln Val Leu 545 550 555 Leu Asn Cys Met Thr Glu Ile Tyr Tyr Gln Phe Lys Lys Asp Lys 560 565 570 Ala Glu Arg Arg Leu Ala Tyr Asn Glu Glu Gln Ile His Lys Phe 575 580 585 Asp Lys Gln Lys Leu Tyr Tyr His Ala Thr Lys Ala Met Thr His 590 595 600 Phe Thr Asp Glu Cys Val Lys Lys Tyr Glu Ala Phe Leu Asn Lys 605 610 615 Ser Glu Glu Trp Ile Arg Lys Met Leu His Leu Arg Lys Gln Leu 620 625 630 Leu Ser Leu Thr Asn Gln Cys Phe Asp Ile Glu Glu Glu Val Ser 635 640 645 Lys Tyr Gln Glu Tyr Thr Asn Glu Leu Gln Glu Thr Leu Pro Gln 650 655 660 Lys Met Phe Thr Ala Ser Ser Gly Ile Lys His Thr Met Thr Pro 665 670 675 Ile Tyr Pro Ser Ser Asn Thr Leu Val Glu Met Thr Leu Gly Met 680 685 690 Lys Lys Leu Lys Glu Glu Met Glu Gly Val Val Lys Glu Leu Ala 695 700 705 Glu Asn Asn His Ile Leu Glu Arg Phe Gly Ser Leu Thr Met Asp 710 715 720 Gly Gly Leu Arg Asn Val Asp Cys Leu *** 725
【図１】本発明の酵素タンパク質（ＮＡＫ）のアミノ酸
配列を従来から知られたヒト由来のＩＫＫタンパク質の
アミノ酸配列と対比して示すものである。
配列を従来から知られたヒト由来のＩＫＫタンパク質の
アミノ酸配列と対比して示すものである。
【図２】本発明の酵素タンパク質（ＮＡＫ）のアミノ酸
配列を従来から知られたヒト由来のＩＫＫタンパク質の
アミノ酸配列と対比して示す図１の続きである。図１お
よび図２において、同一または類似のアミノ酸部分は黒
枠で示している。また、ＨＬＭは破線で示し、ロイシン
ジッパーは＊で示している。
配列を従来から知られたヒト由来のＩＫＫタンパク質の
アミノ酸配列と対比して示す図１の続きである。図１お
よび図２において、同一または類似のアミノ酸部分は黒
枠で示している。また、ＨＬＭは破線で示し、ロイシン
ジッパーは＊で示している。
【図３】ＮＦ−κＢシグナル伝達系に関与する各種の酵
素と本発明の酵素タンパク質との反応性を免疫沈降法
（ＩＰ）およびウエスタンブロッティング法（ＩＢ）で
検討した実験結果の１例を示す電気泳動図である。
素と本発明の酵素タンパク質との反応性を免疫沈降法
（ＩＰ）およびウエスタンブロッティング法（ＩＢ）で
検討した実験結果の１例を示す電気泳動図である。
【図４】本発明の酵素タンパク質がＮＦ−κＢの核移行
を促進することを調べるために行った蛍光抗体法による
実験結果を示す蛍光写真である。
を促進することを調べるために行った蛍光抗体法による
実験結果を示す蛍光写真である。
【図５】２９３Ｔ細胞内で本発明の酵素タンパク質が各
種のＮＦ−κＢシグナル伝達系関連物質共存下で発現す
る様子を調べたＩＢ実験の結果を示す電気泳動図であ
る。
種のＮＦ−κＢシグナル伝達系関連物質共存下で発現す
る様子を調べたＩＢ実験の結果を示す電気泳動図であ
る。
【図６】本発明の酵素タンパク質をコードするｃＤＮＡ
の塩基配列および本発明の酵素タンパク質を構成するア
ミノ酸配列を並べて示す。
の塩基配列および本発明の酵素タンパク質を構成するア
ミノ酸配列を並べて示す。
【図７】本発明の酵素タンパク質をコードするｃＤＮＡ
の塩基配列および本発明の酵素タンパク質を構成するア
ミノ酸配列を並べて示す図６の続きである。
の塩基配列および本発明の酵素タンパク質を構成するア
ミノ酸配列を並べて示す図６の続きである。
【図８】本発明の酵素タンパク質をコードするｃＤＮＡ
の塩基配列および本発明の酵素タンパク質を構成するア
ミノ酸配列を並べて示す図６および図７の続きである。
の塩基配列および本発明の酵素タンパク質を構成するア
ミノ酸配列を並べて示す図６および図７の続きである。
Claims (1)
- 【請求項１】 配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
から成りＮＦ−κＢを活性化する機能を有することを特
徴とするキナーゼ酵素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000110481A JP2001292779A (ja) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000110481A JP2001292779A (ja) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001292779A true JP2001292779A (ja) | 2001-10-23 |
Family
ID=18622979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000110481A Pending JP2001292779A (ja) | 2000-04-12 | 2000-04-12 | ＮＦ−κＢを活性化する酵素タンパク質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001292779A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5376534B2 (ja) * | 2008-09-29 | 2013-12-25 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | ストレス耐性が付与された植物体の生産方法およびその利用 |
| CN104450886A (zh) * | 2014-11-03 | 2015-03-25 | 青岛大学附属医院 | 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用 |
-
2000
- 2000-04-12 JP JP2000110481A patent/JP2001292779A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5376534B2 (ja) * | 2008-09-29 | 2013-12-25 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | ストレス耐性が付与された植物体の生産方法およびその利用 |
| US9371540B2 (en) | 2008-09-29 | 2016-06-21 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Method for production of plant imparted with stress tolerance and use thereof |
| CN104450886A (zh) * | 2014-11-03 | 2015-03-25 | 青岛大学附属医院 | 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用 |
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