CN104774966B - 肺腺癌miRNA标记物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种miRNA标记物，该miRNA标记物是miRNA‑2116。miRNA‑2116可用于判断肺腺癌是否发生转移或者预判肺腺癌转移风险。经检验证明，miRNA‑2116可有效区分肺腺癌转移样本和非转移样本。在此基础上，miRNA‑2116还可以用于制备抑制肺腺癌转移或预防肺腺癌转移的药物。本发明为临床在分子水平上诊断肺腺癌转移提供了新的诊断方法，同时为肺腺癌转移的基因治疗提供了新的药物靶点。

Description

肺腺癌miRNA标记物
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种肺腺癌miRNA标记物及其应用，具体涉及一种与肺腺癌转移相关的miRNA-2116标记物及其应用。
背景技术
miRNA是天然存在于体内的21-22nt的非编码RNA分子，是一类通过转录后基因沉默对靶基因表达进行调节的RNA。据估计，生物体内约有1/3的基因受miRNA的调控。miRNA与RISC的复合体通过碱基配对可与靶基因mRNA 5’-UTR或者3’-UTR中的互补序列相结合，抑制蛋白质翻译，或是引发mRNA降解，从而负调控靶基因的表达。
肺癌是死亡率最高的癌症，每年死于肺癌的人数超过100万，并且每年新增病例120万。肺腺癌(lung adenocarcinoma)是最常见的癌症，其中约80％的肺癌是非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)，其5年存活率仅为15％，缺乏有效的针对肺癌的早期诊断和治疗手段是低5年存活率的主要原因。在癌症的发生中，经常出现miRNA群失调的现象。几种癌症包括胃癌，乳腺癌，肺癌，结肠癌等已经报道多种表达异常的miRNA种类。
检测miRNA的表达水平可以为癌症的临床诊断提供参考。而miRNA的异常表达直接导致一些与癌症发生相关基因的表达异常，诱发癌症的发生。已有报道证明miRNA可以通过调控靶基因mRNA的表达，在肺癌发生、发展及转移中发挥重要作用。在未来临床治疗中，miRNA不仅可以成为新的肺癌早期诊断和癌症进程相关的标记物，而且也有望通过改变miRNA的表达或者其靶基因的表达治疗肺癌等疾病。寻找和鉴定与肺癌发生相关的miRNA及其靶基因为miRNA的临床治疗提供基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可用于判断肺腺癌转移的miRNA标记物。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明提供了一种用于预判肺腺癌转移风险、诊断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移是否复发的miRNA标记物，所述miRNA标记物是miRNA-2116。所述miRNA-2116选自以下组中的至少一种：miRNA-2116初始miRNA、miRNA-2116前体miRNA、成熟miRNA-2116；所述miRNA-2116初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-2116；所述miRNA-2116前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-2116。
应当知道，本发明的miRNA-2116包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示完整miRNA-2116核酸分子相同的功能，尽管它们通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。
本领域人员熟知，为了保证miRNA的稳定性，可以在miRNA的一端或者两端增加保护性碱基，如TT，也可对miRNA碱基进行修饰，但是不影响miRNA的功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miRNA-2116功能的条件下，对miRNA-2116进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本发明的保护范围之内。
在本发明的一些具体的实施方式中，所述miRNA-2116是成熟miRNA-2116。所述成熟miRNA-2116包括miRNA-2116-5p、miRNA-2116-3p，它们共同享有共同的种子序列。
虽然在某些具体实施方式中所使用的是成熟miRNA-2116，但是本领域技术人员可以预期，初始miRNA(pi-miRNA-2116)、前体miRNA(pre-miRNA-2116)将可以获得与成熟miRNA-2116同样的技术效果，因为细胞有能力进一步将初始miRNA(pi-miRNA-2116)、前体miRNA(pre-miRNA-2116)加工为成熟miRNA-2116。
本发明的miRNA-2116核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟的miRNA-2116主要呈单链形式，而miRNA-2116前体是部分自互补的，以形成双链结构。本发明的核酸分子可以是RNA、DNA、PNA、LNA的形式。
本发明提供了miRNA-2116在制备预判肺腺癌转移风险的工具中的应用。
本发明还提供了miRNA-2116在制备诊断肺腺癌是否发生转移的工具中的应用。
本发明的实验证明已发生转移的肺腺癌组织中miRNA-2116的水平显著高于为发生转移的肺腺癌组织中miRNA-2116的水平。因此，与不发生转移的肺腺癌组织中的miRNA-2116的水平相比，如果受试者肺腺癌组织中miRNA-2116的水平显著升高，那么则可以判断该受试者肺腺癌细胞转移的风险高或者已经发生了转移，从而采取预防肺腺癌细胞转移的方案或者为临床治疗方案的制定提供诊断基础。
本发明还提供了miRNA-2116在判断肺腺癌转移复发的工具中的应用。与不发生转移的肺腺癌组织中的miRNA-2116的水平相比，如果受试者肺腺癌组织中miRNA-2116的水平显著升高，则表明受试者肺腺癌细胞再次发生了转移。
进一步，上述预判肺腺癌转移风险、判断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移复发的工具包括但不限于，芯片、试剂盒。所述工具包括用于待测样本中miRNA-2116表达水平的试剂。所述试剂可以是针对miRNA-2116的引物或探针。
本发明还提供了上述miRNA-2116在高通量测序平台中的应用。通过高通量测序能获知待检测样本肺腺癌组织中miRNA-2116的表达水平，将待测样本的结果同未发生转移的肺腺癌组织相比，容易判断待测样本是否存在转移的风险或者容易判断待测样本是否已经发生了转移、或者判断肺腺癌转移是否复发。因此，经过高通量测序获得miRNA-2116与肺腺癌转移相关性的应用同样包含在本发明的保护范围之内。
本发明还提供了一种用于预判肺腺癌转移风险、诊断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移是否复发的芯片，所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miRNA-2116的部分或全部序列。所述寡核苷酸探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于判断肺腺癌是否发生转移或者判断肺腺癌转移风险或者判断肺腺癌转移是否复发的miRNA的寡核苷酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同一芯片上通过检测多种miRNA指标联合判断肺腺癌转移的情况也包含在本发明的保护范围之内。
进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料，例如但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。
所述的miRNA芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如，如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5’端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本发明的miRNA芯片。如果核酸不含氨基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》；J.L.erisi，V.R.Iyer，P.O.BROWN.Exploring the metabolic and genetic control of geneexpression on a genomic scale.Science，1997；278：680和马立人，蒋中华主编.生物芯片.北京：化学工业出版社，2000，1-130。
本发明还提供了一种用于预判肺腺癌转移风险、诊断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移是否复发的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测受试者肺腺癌组织中miRNA-2116的表达水平的试剂。与未发生转移的肺腺癌组织中的miRNA-2116的表达水平比较，若通过试剂盒检测肺腺癌组织中miRNA-2116的表达水平显著升高，则判断该受试者的肺腺癌转移风险很高或者已发生转移、或者再次发生转移。
进一步，所述试剂包括针对miRNA-2116的引物和/或探针。所述试剂还包括针对现有技术中已经报道的可用于判断肺腺癌是否发生转移，或者判断肺腺癌转移风险，或者判断肺腺癌转移是否复发的miRNA的引物和/或探针。将多种miRNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种miRNA指标联合判断肺腺癌转移的情况也包含在本发明的保护范围之内。
本发明的miRNA-2116可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表达miRNA-2116的DNA片段的载体转染细胞获得。所述载体包括病毒载体、真核载体。
病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。
真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEF Bos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。
可以表达miRNA-2116的DNA片段可以通过如下方式获取：从miRNA数据库中(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)寻找miRNA-2116在基因组上的位置及具体序列信息，根据基因组序列确定miRNA-2116初始miRNA的位置，在miRNA-2116初始miRNA位置的上下游500-800bp区间内设计特异性引物，扩增引物中间的序列即可获得表达miRNA-2116的DNA片段。
本发明还提供了前面所述的miRNA-2116在制备抑制肺腺癌转移、侵袭或者预防肺腺癌转移、侵袭的药物中的应用。本发明的实验证明miRNA-2116与肺腺癌的转移相关，在此基础上，通过抑制miRNA-2116的表达可用于抑制肺腺癌的转移和侵袭或者降低肺腺癌转移和侵袭的风险。
进一步，所述药物包含miRNA-2116抑制剂。所述miRNA-2116抑制剂能够抑制miRNA-2116的表达或者能够抑制miRNA-2116的功能。所述miRNA-2116抑制剂的抑制靶标不限于miRNA-2116本身，还包括miRNA-2116的上下游，例如：编码miRNA-2116的基因组序列，miRNA-2116靶基因、调控miRNA-2116的蛋白或者基因。
进一步，miRNA-2116抑制剂包括蛋白、寡核苷酸、小分子化合物。
优选地，所述miRNA-2116抑制剂是miRNA-2116的反义寡核苷酸或者miRNA-2116模拟物。
根据miRNA-2116序列容易设计出它的反义寡核苷酸，将反义寡核苷酸转移到人体内后，它们能够明显下调miRNA-2116的表达。“反义寡核苷酸(antisense-oligonucleotides，AS-Ons或ASO)”又称为“反义核苷酸”，是指长度约为18-26nt(更特别的约19-22nt)的DNA分子或RNA分子或其类似物。
在本发明中，所述的“反义寡核苷酸”还包括采用如基于核酸锁或核酸链骨架修饰技术等手段获得的经修饰的反义核苷酸，所述的修饰基本不改变反义寡核苷酸的活性，更佳地，所述修饰可提高反义寡核苷酸的稳定性、活性或治疗效果。核酸锁(locked nucleicacid，LNA)通常是指通过一个亚甲基桥将核糖的2’氧原子和4’碳原子连接起来的修饰技术。基于核酸链骨架的修饰技术发展出的反义药物在可溶性，抗核酸酶降解等方面大有改善，且易于大量合成。寡核苷酸的骨架修饰方法有多种，包括硫代法，例如将脱氧核苷酸链硫代修饰为硫代脱氧核苷酸链。该方法是将DNA骨架上的磷酸键的氧原子用硫原子替代，可抵抗核酸酶降解。应理解，任何能够保持所述反义寡核苷酸的大部分或全部活性的修饰都包含在本发明中。
本发明的抑制肺腺癌转移的药物还包含药物学上可以接受的载体，所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体。
所述药物可以制成包括但不限于显微注射剂、适于转染的剂型、注射液、片剂、粉剂、粒剂、胶囊剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
所述药物可以单独施用；或者与其他能够抑制肺腺癌转移的药物进行组合施用。
所述药物可以离体施用：将miRNA-2116或者miRNA-2116的表达载体在体外导入或转染人体自身或异体细胞(或异种细胞)，经体外细胞扩增后，输回人体。
所述药物可以体内施用：将miRNA-2116或者miRNA-2116的表达载体直接导入体内。这种载体可以是病毒型或非病毒性，甚至是裸DNA或RNA。
所述的受试者可以是人类或者其他哺乳动物。更具体地，受试者是器官、组织、细胞。
附图说明
图1显示利用QPCR检测miRNA-2116在肺腺癌组织中的表达情况；
图2显示利用QPCR检测miRNA-2116在肺腺癌细胞系中的表达情况；
图3显示anti-miRNA-2116对miRNA-2116表达的抑制作用。
具体实施方式
下面结合具体的实施例进一步说明本发明，本发明的实施例仅用于解释本发明，并不意味着限制本发明的保护范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1与肺腺癌转移相关的miRNA的筛选
1、样本获取：30例肺腺癌组织(包括15例有转移样本和15例无转移样本)上述样本为肺腺癌患者的手术切除标本，这些标本来自于河北医科大学第四医院和北京友谊医院。上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。组织样本的临床资料包括：性别、年龄、肿瘤大小、病理分级(Edmonson)、转移与否、复发与否等。
2、肺腺癌组织总RNA的提取
每100mg组织加入1mL Trizol，用液氮研磨充分研碎组织块。加入约1/5体积的氯仿，上下颠倒充分混匀1分钟左右，室温下静置5分钟。4℃，12,000rpm离心15分钟后小心转移上清液入新的1.5ml离心管，加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温静置10分钟。4℃，12000rpm离心10分钟后，去上清，向沉淀中加入2/5体积的70％乙醇，4℃，12000rpm离心洗涤沉淀5分钟。去上清，将沉淀室温晾干后加入适量无RNA酶的水充分溶解，测定OD260和OD280值。采用无RNA酶的DNA酶I处理，QIAGEN RNeasy试剂盒纯化总RNA，详细操作原理和方法见试剂盒说明书。琼脂糖胶电泳评价总RNA质量，在凝胶成像仪上观测、拍照，保存图像，一般认为28S:18S≥2可以初步判定总RNA质量较好。
3、miRNA的提取和标记
3.1用Ambion公司的miRNAs抽提试剂盒抽提获得miRNA，具体操作按照相应说明书。样品用T4RNA连接酶标记步骤依照Thomson的方法。miRNA标记方法大致如下：1.4μgmiRNA和500ng 5’-磷酸盐-胞嘧啶-尿嘧啶cy3-3’(Dharmacon，Chicago，USA)及2单位T4RNAligase(NEB，Ipswich，USA)，于4℃孵育2小时。每份miRNA样品均设等量的相应阴性对照。
3.2标记的RNA用0.3M醋酸钠和2.5倍体积的乙醇进行沉淀，再用15μl含3×SSC、0.2％SDS和15％甲酰胺的杂交液重悬，所有的杂交重复两次，杂交用LifterSlipTM(Erie，PA USA)以保证杂交液在芯片和盖片之间均匀流动。
3.3将杂交室放在杂交仪BioMixerTMII上(CapitalBio Corp，Beijing，China)于42℃水浴杂交过夜，之后用洗液洗两遍。
4、miRNA芯片操作：
miRNA芯片，采用博奥生物有限公司的miRNA表达谱芯片(单通道芯片)，按照说明书的指示进行miRNA表达谱的检测。
5、结果：
分析miRNA芯片表达谱的检测结果，可知miRNA-2116在已发生转移的肺腺癌组织中和未发生转移的肺腺癌组织中的表达存在显著差异，与未发生转移的肺腺癌组织相比，在已发生转移的肺腺癌组织中miRNA-2116的水平显著升高(约4倍)。
实施例2 QPCR验证差异表达的miRNA-2116
1、根据miRNA芯片的检测结果选择miRNA-2116进行大样本QPCR验证。按照实施例1中的样本收集方式选择转移肺腺癌组织和未转移肺腺癌组织各80例。
2、RNA提取过程同实施例1。
3、逆转录：将10pg-1μg的总RNA模板与2μl 10*缓冲液、2μl dATP(10mM)、0.5μlpolyA多聚酶、0.5μl核糖核酸酶(RNase)抑制剂和无核糖核酸酶水(RNase free water)混合，体积最后为20μl，37℃孵育1h。然后反应管中加入1μl 0.5μg/μl Oligo(dT)特异性RT引物，70℃孵育5min后立刻冰上孵育至少2min，打断RNA和引物的二级结构。最后，将上述20μl反应混合物与4μl 5*缓冲液、1μl dNTP(10mM)，0.5μl M-MLV逆转录酶，0.5μl核糖核酸酶(RNase)抑制剂，10μl polyA反应混合液和4μl无核糖核酸酶水(RNase free water)混合，42℃孵育1h。
4、QPCR反应：采用25μl反应体系，每个样本设置3个平行管，所有扩增反应均重复三次以上以保证结果的可靠性。配制以下反应体系：SYBR Green聚合酶链式反应体系12.5μl，正向引物(5μM/μl)1μl，反向引物(5μM/μl)1μl，模板cDNA 2.0μl，无酶水8.5μl。各项操作均于冰上进行。扩增程序为：95℃10min，(95℃20s，60℃55s)*50个循环。以SYBR Green作为荧光标记物，在Light Cycler荧光实时定量PCR仪上进行PCR反应。扩增miRNA-2116的正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物为通用反向引物(购自北京旷博生物技术有限公司)。以snRNA U6作为参照基因，其上游引物序列为SEQ ID NO.2所示；下游引物序列为SEQID NO.3所示。通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。
5、结果
如图1所示，与未发生转移的肺腺癌组织相比，已发生转移的肺腺癌组织中miRNA-2116的表达水平显著升高，与miRNA芯片结果一致。
实施例3 miRNA-2116在肺腺癌细胞系中的表达
1、细胞培养
将肺腺癌细胞株A549，NCI-H1650，NCI-H1299、SPC-A-1于RPMI1640培养基和10％胎牛血清中培养，将人肺上皮细胞株BEAS-2B于BEGM培养液和10％胎牛血清中培养，置于37℃、5％CO2培养箱中。
2、QPCR
2.1细胞总RNA提取：利用QINGEN公司的RNA提取试剂盒进行细胞总RNA的提取，按照说明书指示进行。
2.2QPCR：步骤同实施例2。
3、结果
如图2所示，与人肺上皮细胞株BEAS-2B相比，肺腺癌细胞株A549，NCI-H1650，NCI-H1299、SPC-A-1中miRNA-2116的表达明显升高(P<0.05)。
实施例4研究miRNA-2116对肺腺癌细胞粘附能力的影响
1、设计合成针对miRNA-2116的反义寡核苷酸(anti-miRNA-2116)
在miRNA数据库(http://www.sanger.ac.uk)中找到miRNA-2116的序列信息，根据miRNA-2116的序列信息由大连宝生物生物技术有限公司设计合成anti-miRNA-2116和随机对照序列。
2、细胞培养：A549培养方法同实施例3。
3、细胞转染
将A549细胞分为两组，分别为抑制阴性对照组(anti-NC)、miRNA-2116抑制组(anti-miRNA-2116)。将阴性对照组及抑制组分别转染anti-NC和anti-miRNA-2116，运用转染试剂LipofectamineTM 2000进行转染，转染方法参照说明书。anti-NC和anti-miRNA-2116的工作浓度均为5μM。转染后48h收集各组细胞用于后续实验。
4、QPCR实验
细胞总RNA提取和PCR步骤同实施例3。
结果如图3所示，与抑制阴性对照组(anti-NC)相比，miRNA-2116抑制组(anti-miRNA-2116)的miRNA-2116的水平显著下降，表明anti-miRNA-2116能够有效抑制miRNA-2116的表达。
5、细胞粘附实验
将转染48h的A549细胞使用0.25％胰酶消化成细胞悬液，以5×104个/ml接种于96孔细胞培养板，每孔0.1ml，60min后，37℃PBS洗去未粘附的细胞，MTT法测各孔490nm波长光吸收值。用光吸收值大小代表粘附活细胞的相对数量。
6、结果
miRNA-2116抑制组(anti-miRNA-2116)相对光密度值为0.214±0.041，抑制阴性对照组(anti-NC)相对光密度值为1.504±0.126。与抑制阴性对照组(anti-NC)相比，miRNA-2116抑制组(anti-miRNA-2116)光吸收值显著下降(P<0.05)。上述实验结果表明anti-miRNA-2116能够显著抑制A549细胞粘附能力，同时表明miRNA-2116有利于A549细胞粘附。
实施例5研究miRNA-2116对肺腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响
1、细胞培养同实施例4
2、迁移实验
转染48h的A549细胞使用胰酶消化并计数，取105个细胞置于1.5mL EP管中，加入200μL无血清培养基重悬细胞，加入transwell小室中，下层小室加入10％胎牛血清的DMEM培养基，放入37℃，5％CO2孵箱培养24h。取transwell小室，用棉签擦除里面的细胞，并用PBS轻轻洗掉里面剩余细胞。固定染色后显微镜下取8个随机视野进行计数。
3、侵袭实验
转染48h的A549细胞使用胰酶消化并计数，取105个细胞置于1.5mL EP管中，加入200μL无血清培养基重悬细胞，加入经过铺基质胶的transwell小室中，下层小室加入10％FBS的DMEM培养基，放人37℃，5％CO2孵箱培养24h。取transwell小室，用棉签擦除里面的细胞，并用PBS轻轻洗掉里面剩余细胞。固定染色后显微镜下取8个随机视野进行计数。
4、结果
迁移实验：与抑制阴性对照组(anti-NC)相比，miRNA-2116抑制组(anti-miRNA-2116)穿过transwell小室基底膜的细胞减少了约60％。
侵袭实验：与抑制阴性对照组(anti-NC)相比，miRNA-2116抑制组(anti-miRNA-2116)穿过已经铺过基质胶的transwell小室基底膜的细胞减少了62％。
上述实验结果表明，anti-miRNA-2116能够显著抑制A549细胞迁移、侵袭能力，同时表明miRNA-2116有利于A549细胞的迁移和侵袭。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.miRNA-2116在制备预判肺腺癌转移风险、诊断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移是否复发的工具中的应用，其特征在于，所述miRNA-2116选自以下组中的至少一种：miRNA-2116初始miRNA、miRNA-2116前体miRNA、成熟miRNA-2116；所述miRNA-2116初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-2116；所述miRNA-2116前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA-2116。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA-2116是成熟miRNA-2116。
3.miRNA-2116在制备预判肺腺癌转移风险、诊断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移是否复发的芯片的应用，其特征在于，所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性地对应于权利要求1所述的miRNA-2116的部分或全部序列。
4.miRNA-2116在制备预判肺腺癌转移风险、诊断肺腺癌是否发生转移、判断肺腺癌转移是否复发的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测受试者肺腺癌组织中权利要求1所述的miRNA-2116的表达水平的试剂；与未发生转移的肺腺癌组织中所述miRNA-2116的表达水平比较，若肺腺癌组织中所述miRNA-2116的表达水平显著升高，则判断该受试者的肺腺癌发生转移的风险高、或者已发生转移、或者转移已复发。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括针对所述miRNA-2116的引物和/或探针。
6.miRNA-2116的抑制剂在制备抑制肺腺癌转移、侵袭或者预防肺腺癌转移、侵袭的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物包含所述miRNA-2116抑制剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述miRNA-2116抑制剂能够抑制miRNA-2116的表达或者能够抑制miRNA-2116的功能。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述miRNA-2116抑制剂是所述miRNA-2116的反义寡核苷酸或所述miRNA-2116模拟物。
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