CN104434956A

CN104434956A - 治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻的复方制剂

Info

Publication number: CN104434956A
Application number: CN201310442523.7A
Authority: CN
Inventors: 龙际淮; 肖丽; 王馨; 饶中树; 刘青春
Original assignee: Chongqing Huapont Pharm Co Ltd
Current assignee: Chongqing Huapont Pharm Co Ltd
Priority date: 2013-09-25
Filing date: 2013-09-25
Publication date: 2015-03-25
Anticipated expiration: 2033-09-25
Also published as: CN104434956B

Abstract

本发明首次发现，维A酸、甲硝唑和升华硫三种活性成分的复方具有明确的治疗痤疮、银屑病或酒糟鼻的作用。本发明用科学设计的大量实验证实了上述发现：将含维A酸、甲硝唑和升华硫三种药的复方制剂与“三种药物单方联合使用”，三种“两药复方与一药单方”联合用药对比，证实，本发明的复方对痤疮样症状的改善作用明显好于四个联用组；在模拟银屑病的鼠尾鳞片颗粒层形成的影响试验中，三药复方对小鼠鼠尾表皮鳞片颗粒层的形成率的提高明显好于四个联用组；在体外杀螨试验评价对酒糟鼻的治疗作用实验中，三药复方的螨虫死亡率明显高于四个联用组。此外，皮肤刺激性对比实验表明：比起三种药物单用的联合用药，本发明含三种药物的复方具有更小的皮肤刺激性。

Description

治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻的复方制剂

技术领域

本发明涉及维A酸、甲硝唑和升华硫三种药物配伍的复方及其在治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻三种皮肤病的用途，本发明还涉及含这三种药物的制剂。

背景技术

维A酸是常用的皮肤病外用药物，甲硝唑和升华硫也曾见于治疗皮肤病。这三种药物中，单用其中一种或其中两种的配方有过治疗皮肤病的报道，如：

CN201110372832.2公开了一种复方制剂，包括甲硝唑、氯霉素、冰片、升华硫，辅料包括硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、丙二醇、三乙醇胺、吐温等，可治疗面部痤疮。

CN201010108411.4公开了一种复方制剂，包括0.01%-2.5％维A酸类药物、0.2%-10％的抗菌类药物以及0.01%-1％雌激素或1%-10％螺内酯，用于治疗痤疮。

CN201010187977.0公开了一种复方制剂，包括大黄、紫草、甘草、姜黄、黄芩、氧化锌、水杨酸、薄荷脑、硫磺、冰片、维A酸和氮酮，用于治疗银屑病。

但未见用维A酸、甲硝唑和升华硫三种药物作为活性成分配成治疗皮肤病的复方制剂的报道。

目前用于治疗皮肤病的复方制剂存在品种较少、适应症狭窄等缺点。特别是，痤疮、银屑病和酒糟鼻都是常见的且难治的皮肤病。而现有技术中，没有一种有效的药物制剂同时对这三种皮肤病有效。

此外，有些皮肤病治疗药物对皮肤有刺激性，如上市的硫软膏的说明书中就指出，该制剂和维A酸联合用药，会增加皮肤刺激性。

因此，很有必要提供一种针对痤疮、银屑病和酒糟鼻三种皮肤病都有效，且皮肤刺激性小的的治疗药物。

发明内容

本发明的目的一是提供一种治疗皮肤病的新的活性成分复方制剂；

本发明的另一目的是提供适应症较广的治疗皮肤病的复方制剂，可兼用于治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻三种皮肤病，并用科学方法证明该复方的有效性，且无皮肤刺激性，可用于临床。

本发明在大量实验的基础上，首次发现，维A酸、甲硝唑和升华硫三种活性成分的复方具有明确的治疗痤疮、银屑病或酒糟鼻的作用。本发明用科学设计的实验证实了上述发现。

本发明的方案是：一种复方制剂，其特征是：以质量计，含有0.005%-1%的维A酸、0.05%-5%的甲硝唑和0.5%-10%的升华硫。

本发明的活性成分为维A酸、甲硝唑和升华硫三种药物。其中，维A酸可以促进上皮细胞增生、分化、角质溶解，可治疗痤疮、银屑病等；甲硝唑具有广谱抗厌氧菌和抗原虫的作用，外用可治疗皮炎、疥疮、痤疮；升华硫具有消毒、杀菌的作用，可用于治疗痤疮、脂溢性皮炎、酒糟鼻。

发明人将维A酸、甲硝唑和升华硫制成复方制剂，并通过试验获得了该复方制剂治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻时活性成分的适宜比例。维A酸用量为复方制剂的0.005%-1%，优选0.01%-0.5%（W/W）；甲硝唑用量为复方制剂的0.05%-5%（W/W），优选0.1%-2%（W/W）；升华硫的用量为复方制剂的0.5%-10%，优选1%-5%（W/W）。

上述复方制剂，可以根据实际需要，按常规制备方法制成不同的外用剂型，具体的剂型不用限定。常用外用制剂如乳膏剂、凝胶剂、油膏剂、涂膜剂、混悬剂等均可。

制备乳膏剂时，将活性成分分散到油相与水相乳化后形成的乳膏基质之中，即可。

制备凝胶剂时，将活性成分分散到凝胶基质中，即可。

制备油膏剂时，将活性成分分散到油性辅料制成的油膏基质中，即可。

制备涂膜剂时，将活性成分分散到成膜材料制成的溶液中，即可。

制备混悬剂时，将活性成分分散到含有助悬剂的混悬基质中，即可。

根据不同剂型的需要，上述复方制剂中可以含有多种不具有药理活性并可用于药用的常用辅料。如：

上述复方制剂中，还可以含有溶解剂，溶解剂是指用于溶解活性成分的物质，可选自二甲亚砜或乙醇。其用量以质量计，可以为复方制剂质量的0.5%-3%。

上述复方制剂中，还可以含有分散基质，分散基质是一种在制剂中使活性成分得以分散并起赋形作用的辅料，分散基质可选自凡士林、十八醇或液体石蜡，填充剂的用量以质量计，可以为复方制剂质量的2%-25%；

上述复方制剂中，还可以含有保湿剂，保湿剂是指外用制剂中能防止制剂中水份蒸发失散并保持制剂柔软的一种辅料，保湿剂可选自甘油或丙二醇，保湿剂的用量以质量计，可以为复方制剂质量的2%-20%；

上述复方制剂中，如果为乳膏，则可以含有乳化剂，乳化剂是能促使两种互不相溶的液体形成稳定乳浊液的一种辅料，可选自硬脂酸、三乙醇胺或单甘脂。乳化剂的用量以质量计，可以为复方制剂质量的0.5%-10%。

上述复方制剂中，如果为凝胶剂，则可以含有胶凝剂，胶凝剂是指能将胶乳转变成均匀的半固体凝胶的一种辅料。胶凝剂可以选用常用的，如卡波姆等。其用量以质量计，可以为复方制剂质量的0.5%-2%。

上述复方制剂中，为了促进活性成分的吸收，还可以添加透皮吸收促进剂，透皮吸收促进剂是指可以帮助药物透过皮肤角质层和表皮扩散的一种辅料，透皮吸收促进剂可以选自氮酮或油酸。其用量不需要特别限定，可以是外用制剂中透皮吸收促进剂的常规用量。

上述复方制剂中，为了提高制剂的稳定性，可以添加抗氧化剂，抗氧化剂是指能延缓氧对药物制剂产生氧化作用的物质，如硫代硫酸钠、维生素E、叔丁基对羟基茴香醚或2,6-二叔丁基对甲酚。其用量不用特别限定，可以是外用制剂中抗氧化剂的常规用量。

上述复方制剂中，为了提高制剂的稳定性，还可以添加防腐剂，防腐剂是指能抑制制剂中微生物发育生长防止制剂腐败的一种辅料，如尼泊金乙酯、山梨酸钾。其用量不用特别限定，使用外用制剂中防腐剂的常规用量即可。

上述复方制剂特别适合用于治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻。

为验证本发明的效果，对本发明“含三种药的复方制剂（实施例1、2、3、6、7，共5种制剂）”与“三种药物单方联合使用”，三种“两药复方与一药单方”联合用药，以及空白对照等多实验组进行了如下药效学对比实验：

1、兔耳痤疮模型的治疗作用

实施例1、2、3、6、7组的三药复方对痤疮样症状的改善作用明显好于四个联用组（单方联用，或两药复方与一药单方联用）；

2、模拟银屑病的鼠尾鳞片颗粒层形成的影响试验

实施例1、2、3、6、7组的三药复方对小鼠鼠尾表皮鳞片颗粒层的形成率的提高明显好于四个联用组（单方联用，或两药复方与一药单方联用）；

3、体外杀螨试验比较评价对酒糟鼻的治疗作用。

实施例1、2、3、6、7组的螨虫死亡率明显高于四个联用组（三种单方联用，或两药复方与一药单方联用）。

本发明还对三药复方进行了皮肤刺激性对比实验，结果表明：

比起三种药物单用的联合用药，实施例1、2、3、6、7组含三种药物的复方具有更小的皮肤刺激性。

本发明的有益效果是：

1、适应症广泛。可以用于治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻三种疾病，与现有的制剂相比，具有更为广泛的适应症。

2、疗效好。通过药理实验证实，本发明的复方制剂治疗痤疮、银屑病和酒糟鼻，具有协同增效作用，与三种药物单方联合使用，以及两种药物复方与一种药物单方联合使用相比，均具有更好的疗效。

3、副作用小。现有技术中认为升华硫与维A酸类药物联用会对皮肤产生更大的刺激性，但本发明制成的复方制剂的皮肤刺激性比三种药物单方联合使用的刺激性更小。

具体实施方式

说明：

实施例1-9：分别为本发明的9种含三种药的复方制剂；

对比例1-6：两药复方制剂以及一药单方制剂，活性成分见表1；

表1药效实验所用对比例制剂中活性成分

活性成分

对比例1

对比例2

对比例3

对比例4

对比例5

对比例6

维A酸

√

—

√

—

√

甲硝唑

—

√

—

√

—

升华硫

—

√

—

√

实施例1维A酸+甲硝唑+升华硫复方油膏

组方：维A酸0.1g，甲硝唑2g，升华硫20g，液体石蜡50g，维生素E2g，凡士林加至1000g。

制备方法：将维A酸、甲硝唑和升华硫三种主药加入到液体石蜡中，混合均匀，得到药物混合物。取凡士林加热融化得油膏基质，在搅拌下将药物混合物加入到油膏基质中，再加入维生素E，冷却后即得到复方油膏。

实施例2维A酸+甲硝唑+升华硫复方乳膏

组方：维A酸1g，甲硝唑20g，升华硫10g，十八醇20g，甘油100g，丙二醇100g，单甘脂30g，尼泊金乙酯1g，乙醇10g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用乙醇溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，三种主药备用；取十八醇、单甘脂，水浴上加热至80℃，得油相；另取丙二醇、甘油、尼泊金乙酯，加入蒸馏水，水浴加热至80℃，得水相。将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，直至冷凝，得到基质。在基质形成过程中，搅拌加入维A酸、甲硝唑和升华硫三种主药，即得复方乳膏。

实施例3维A酸+甲硝唑+升华硫复方乳膏

组方：维A酸0.5g，甲硝唑15g，升华硫20g，液体石蜡200g，丙二醇20g，单甘脂10g，三乙醇胺10g，硫代硫酸钠20g，二甲亚砜5g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用二甲亚砜溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，三种主药备用；取液体石蜡、单甘脂，水浴上加热至80℃，得油相；另取丙二醇、三乙醇胺、硫代硫酸钠，加入蒸馏水，水浴加热至80℃，得水相。将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，直至冷凝，得到基质。在基质中搅拌加入维A酸、甲硝唑和升华硫三种主药，即得复方乳膏。

实施例4维A酸+甲硝唑+升华硫复方乳膏

组方：维A酸0.25g，甲硝唑10g，升华硫50g，凡士林30g，十八醇20g，液体石蜡200g，甘油20g，丙二醇80g，三乙醇胺5g，维生素E5g，2,6-二叔丁基对甲酚2g，叔丁基对羟基茴香醚1g，乙醇15g、油酸2g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用乙醇溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，三种主药备用；取凡士林、十八醇、液体石蜡、维生素E、2,6-二叔丁基对甲酚、叔丁基对羟基茴香醚、油酸，水浴上加热至80℃得油相；另取甘油、丙二醇、三乙醇胺，加入蒸馏水，水浴加热至80℃，得水相。将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，直至冷凝，得到基质。在基质中搅拌加入维A酸、甲硝唑和升华硫三种主药，即得复方乳膏。

实施例5维A酸+甲硝唑+升华硫复方乳膏

组方：维A酸5g，甲硝唑1g，升华硫30g，凡士林10g，十八醇10g，液体石蜡100g，甘油130g，硬脂酸50g、三乙醇胺20g，单甘脂30g，二甲亚砜30g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用二甲亚砜溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，三种主药备用；取凡士林、十八醇、液体石蜡、硬脂酸、单甘脂，水浴上加热至80℃，得油相；另取甘油、三乙醇胺和蒸馏水，水浴加热至80℃，得水相。将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，直至冷凝，得到基质。在基质中搅拌加入维A酸、甲硝唑和升华硫三种主药，即得复方乳膏。

实施例6维A酸+甲硝唑+升华硫复方涂膜剂

组方：维A酸10g，甲硝唑0.5g，升华硫12g，丙二醇50g，维生素E7g，聚乙烯醇50g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑、升华硫加入到丙二醇中，得到药物混合液；再将聚乙烯醇与维生素E混合，用少量蒸馏水溶解，形成基质液。将药物混合液与基质液充分混合，加入剩余蒸馏水，即得复方涂膜剂。

实施例7维A酸+甲硝唑+升华硫复方凝胶

组方：维A酸0.05g，甲硝唑50g，升华硫100g，卡波姆(934)20g，维生素E10g、氮酮2g、尼泊金乙酯5g，山梨酸钾1g，二甲亚砜20g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用二甲亚砜溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，将三种主药混合均匀，得到药液；将卡波姆与蒸馏水混合，得到基质；在基质中加入药液、氮酮、维生素E、尼泊金乙酯、山梨酸钾，搅拌均匀，即得复方凝胶。

实施例8维A酸+甲硝唑+升华硫复方凝胶

组方：维A酸1g，甲硝唑2g，升华硫5g，卡波姆(940)5g，丙二醇20g，二甲亚砜30g，2,6-二叔丁基对甲酚1g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用二甲亚砜溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，将三种主药与丙二醇混合均匀，得到药液；将卡波姆与蒸馏水混合，得到基质；在基质中加入药液、2,6-二叔丁基对甲酚，搅拌均匀，即得复方凝胶。

实施例9维A酸+甲硝唑+升华硫复方混悬剂

组方：维A酸4g，甲硝唑30g，升华硫30g，丙二醇10g，二甲亚砜15g，甘油60g，羟丙甲纤维素0.5g，尼泊金乙酯1g，维生素E10g，蒸馏水加至1000g。

制备方法：维A酸、甲硝唑用二甲亚砜溶解，升华硫研磨成粉过120目筛，三种主药备用；将羟丙甲纤维素加入蒸馏水中，溶胀完全后，再加入丙二醇、甘油、尼泊金乙酯、维生素E，混合均匀，得到混悬基质；在基质中加入上述三种主药，混合均匀，即得复方混悬剂。

对比例1维A酸单方制剂

组方：维A酸1.5g，无甲硝唑和升华硫，其余与实施例3相同。

对比例2甲硝唑单方制剂

组方：甲硝唑45g，无维A酸和升华硫，其余与实施例3相同。

对比例3升华硫单方制剂

组方：升华硫60g，无维A酸和甲硝唑，其余与实施例3相同。

对比例4维A酸+甲硝唑复方制剂

组方：维A酸1g，甲硝唑30g，无升华硫，其余与实施例3相同。

对比例5甲硝唑+升华硫复方制剂

组方：甲硝唑30g，升华硫40g，无维A酸，其余与实施例3相同。

对比例6维A酸+升华硫复方制剂

组方：维A酸1g，升华硫40g，无甲硝唑，其余与实施例3相同。

对比例1-6制剂的制备方法均与实施例3相同。

试验例1本发明三种药物的复方制剂对煤焦油致兔耳痤疮模型的治疗作用

1、试验目的

比较本发明的三药复方制剂，与三种药物单方联合使用以及两药复方与一药单方联合使用，对兔耳痤疮模型的作用，评价本发明复方制剂对痤疮的治疗作用。

2、试验材料

试验药物：对比例1、2、3中的单方制剂，对比例4、5、6中的两药复方制剂，实施例1、2、3、6、7的三药复方制剂。

试验动物：新西兰兔，雌雄各半，体重2.0～2.5kg，购自中国人民解放军第三军医大学，合格证号SCXK(渝)2012-0003。

试验动物分组：将44只兔随机分为11组，每组4只兔，雌雄各半，分别为：

对照组：包括：正常对照组、模型对照组。

给药组共9组：包括：

维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、

维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组、

甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组、

维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组、

实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例6组、实施例7组。

3、试验方法

3.1兔耳痤疮模型建立方法

除正常对照组外，其余各组在兔双耳内侧耳管开口处2×2cm范围，每日涂抹浓度为5%的煤焦油，每次0.25mL，连续14天，建立兔耳痤疮模型。

3.2实验方法

建立兔耳痤疮模型后，正常对照组和模型对照组不涂任何药物，其余各组双耳外涂相应药物，每日1次，连续14天。具体涂抹的药物为：

实施例1、2、3、6、7组分别涂抹实施例1、2、3、6、7的复方制剂0.24g；

维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组：涂抹对比例1单方制剂0.08g、对比例2单方制剂0.08g和对比例3单方制剂0.08g；

维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组：涂抹对比例4复方制剂0.16g和对比例3单方制剂0.08g；

甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组：涂抹对比例5复方制剂0.16g和对比例1单方制剂0.08g；

维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组：涂抹对比例6复方制剂0.16g和对比例2单方制剂0.08g。

每次给药前和末次给药后24小时观察给药部位，末次给药后24小时处死全部动物，局部取材，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，由专业病理人员鉴定结果。

4、试验结果

4.1肉眼观察结果

正常对照组：兔耳柔软，毛细血管清晰，有良好的透光度，兔耳管开口处为整齐排列的毛囊和纤细的毛发。

模型对照组：5％浓度煤焦油处理家兔，14天后可观察到毛囊明显增大，且毛囊口有明显角栓，痤疮样改变明显，所有兔建模成功。14天后，模型对照组造模部位耳部仍可见明显的毛囊角栓,但丘疹略减轻、变平。

各给药组：给药14天后，维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组、甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组、维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组，兔耳肿胀、表皮角化和痤疮等症状均有不同程度的改善；实施例1、2、3、6、7组兔耳的肿胀、表皮角化物、痤疮全部消失，基本等同正常皮肤。

4.2显微镜观察结果

正常对照组：表皮较薄，表皮表面可见少量角化物，表皮真皮交界清楚，可见毛囊，未见毛囊融合及毛囊漏斗不扩张。

模型对照组：表皮明显增生，角化过度，毛囊扩张，相邻毛囊融合，毛囊漏斗部扩大成壶状，其中充满大量角化物质。

各给药组：维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组、甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组、维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组：表皮明显增生和角化均有不同程度的改善，局部毛囊轻微到轻度扩张，其中有微量到中等的疏松角化物，未见相邻毛囊融合及毛囊漏斗部壶状扩大。实施例1、2、3、6、7组表皮组织、毛囊皮脂腺等基本恢复正常。组织病理检查的分级结果见表2。

表2各组兔痤疮模型的表皮角化物检查结果

注1：“-”为无粉刺；“+”为毛囊漏斗部可见少量致密角化物；“++”为毛囊漏斗部可见中等量角化物,并向皮脂腺延伸；“+++”为扩张的毛囊内有广泛的角化物。

注2：经秩和检验,各给药组与模型对照组相比有统计学差异（P＜0.05),各实施例组与维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组相比有统计学差异（P＜0.05)。

注3：每组4只动物，每只动物两只耳用药，每组共8例模型。

5、结论

上述检查结果表明：各给药组药物与不给药对比，均使兔痤疮模型的痤疮样症状得到不同程度的改善，如耳肿胀程度降低、表皮角化物减少、毛囊扩张程度减轻等，说明对痤疮均有一定的治疗作用。而本发明实施例1、2、3、6、7组的三药复方对痤疮样症状的改善作用明显好于四个联用组（单方联用，或两药复方与一药单方联用），说明本发明的复方制剂具有更好的疗效。

另外，实施例1、2、3组的三药复方相比实施例6、7组，有更好的效果。

试验例2本发明三种药物的复方制剂对鼠尾鳞片颗粒层形成的影响试验

1、试验目的

鼠尾鳞片表皮天然缺乏颗粒层的特点可模拟银屑病的表皮角化不全。本试验比较本发明的三药复方制剂，三种药物单方联合使用，以及两药复方与一药单方联合使用，对银屑病动物模型的作用，进而评价本发明复方制剂对银屑病的治疗作用。

2、试验材料

试验药物：对比例1、2、3中的单方制剂，对比例4、5、6中的复方制剂，实施例1、2、3、6、7的复方制剂。

试验动物：昆明种小鼠，18-23g，购自重庆第三军医大学实验动物中心，实验动物生产许可证号SCXK（渝）2012-0003。

试验动物分组：小鼠随机分为10组，每组10只，雌雄各半。分别为：

空白对照组、维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组、甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组、维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例6组、实施例7组。

3、试验方法

空白对照组不涂药，其余各组小鼠鼠尾根部分别外涂药物，每日2次，间隔8小时，连续给药14天，各组具体外涂的药物为：

实施例1、2、3、6、7组分别涂抹实施例1、2、3、6、7的复方制剂0.084g；

维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组：涂抹对比例1单方制剂0.028g、对比例2单方制剂0.028g和对比例3单方制剂0.028g；

维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组：涂抹对比例4复方制剂0.056g和对比例3单方制剂0.028g；

甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组：涂抹对比例5复方制剂0.056g和对比例1单方制剂0.028g；

维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组：涂抹对比例6复方制剂0.056g和对比例2单方制剂0.028g。

第15天处死小鼠，取鼠尾距根部1.5cm处背侧皮肤一长条，10%福尔马林固定，制成H.E.切片；光镜下计数每100个鳞片中有颗粒层形成的鳞片数，即为颗粒层形成率。

4、试验结果

采用SPSS16.0统计软件包进行单因素方差分析，小鼠尾部表皮鳞片的颗粒层形成率见表3。

表3各组药物对小鼠鼠尾表皮鳞片颗粒层形成率（%）的影响

注1：与空白对照组比较，*：p<0.05，**：p<0.01；实施例1、2、3、6、7组与维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组比较，△△：p<0.01；实施例1、2、3、6、7组与维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组比较，＃：p<0.05，＃＃：p<0.01。

注2：每组10只动物。

5、试验结论

上述试验结果表明：各给药组药物与不给药对比，都能不同程度地提高小鼠鼠尾表皮鳞片颗粒层的形成率，说明对银屑病均有一定的治疗作用。而本发明实施例1、2、3、6、7组的三药复方对小鼠鼠尾表皮鳞片颗粒层的形成率的提高明显好于四个联用组（单方联用，或两药复方与一药单方联用），说明本发明的复方制剂具有更好的疗效。

试验例3本发明复方制剂体外杀螨作用研究

1、试验目的

毛囊蠕形螨感染是酒糟鼻发病的重要因素，本试验通过体外试验比较比较本发明的三药复方制剂，三种药物单方联合使用，以及两药复方与一药单方联合使用的杀螨作用，评价本发明复方制剂对酒糟鼻的治疗作用。

2、试验材料

试验螨虫：采用透明胶带粘贴法获取人体蠕形螨，具体步骤：受检者睡眠前洗脸后，将6cm×1.5cm的透明胶带分别贴于额、颊、鼻、下巴等部位，次日晨取下胶带贴于载玻片上镜检。

3、试验方法

试验分为10组，分别为空白对照组、维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组、甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组、维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例6组、实施例7组。

空白对照组不给药，其余各组的每个载玻片分别滴加药物，各组具体滴加的药物为：

实施例1、2、3、6、7组分别滴加实施例1、2、3、6、7的复方制剂210μL；

维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组：滴加对比例1单方制剂70μL、对比例2单方制剂70μL和对比例3单方制剂70μL；

维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组：滴加对比例4复方制剂140μL和对比例3单方制剂70μL；

甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组：滴加对比例5复方制剂140μL和对比例1单方制剂70μL；

维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组：滴加对比例6复方制剂140μL和对比例2单方制剂70μL。

加好药物后，均匀铺开，使药物与虫体充分接触。置(25+1)℃恒温箱内，分别在1h、2h、3h、4h、8h、12h取出在低倍显微镜下观察计数活螨。

蠕形螨的死亡判断标准：①虫体收缩或透明；②虫体破裂，外周有油滴样堆积物；③虫体停止活动，用解剖针触之亦不动。

采用SPSS16.0软件对观察数据进行X2检验。

4、试验结果

维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、维A酸甲硝唑复方+升华硫单方联用组、甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组、维A酸升华硫复方+甲硝唑单方联用组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例6组、实施例7组螨虫全部死亡的时间分别为8h、8h、8h、8h、4h、4h、4h、4h、3h。用药后3h螨虫死亡率见表4。

表4各组药物杀螨效果比较

注：与空白对照组比较，*：p<0.05，**：p<0.01；

实施例1、2、3、6、7组与维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组比较，△：p<0.05,△△：p<0.01；

实施例1、2、3、6、7组与甲硝唑升华硫复方+维A酸单方联用组比较，＃：p<0.05，

＃＃：p<0.01。

5、试验结论

上述试验结果表明：各给药组与空白对照组相比，螨虫死亡率都得到了不同程度的提高，说明各给药组药物对酒糟鼻均有一定的治疗作用。而实施例1、2、3、6、7组的螨虫死亡率明显高于四个联用组（单方联用，或两药复方与一药单方联用），说明本发明的复方制剂具有更好的疗效。

试验例4本发明复方制剂的皮肤刺激性研究

1、试验目的

观察本发明的复方制剂对家兔完整皮肤是否有刺激性作用，并与三种药物单方联合使用的情况进行比较。

2、试验材料

试验药物：对比例1、2、3中的单方制剂，实施例1、2、3、6、7的复方制剂。

3、试验方法

将42只家兔随机分为7组，每组6只，雌雄各半。分别为空白对照组、维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例6组、实施例7组。给药前24h，将各组家兔背部脊柱两侧毛剃掉，面积约7cm×7cm，无毛区左右对称。

各组给药情况为：空白对照组不给药；

实施例1、2、3、6、7组分别给药实施例1、2、3、6、7的复方制剂0.6g；

维A酸+甲硝唑+升华硫三药单方联用组：给药对比例1单方制剂0.2g、对比例2单方制剂0.2g和对比例3单方制剂0.2g。

各组药物均涂在兔脊柱左侧脱毛区域，阴性对照组在右侧脱毛区涂0.6mL生理盐水。然后用二层纱布覆盖，再以无刺激胶布封闭、固定。24h后用温水去除受试物，观察涂药部位的皮肤，再次涂上相同的受试物，连续5d。并于末次去除药物后1、24、48、72h观察脱毛区皮肤的刺激程度。按表4给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。计算每一观察时间点各组受试物及对照皮肤反应积分的平均分值。

表5皮肤刺激反应评分标准

4、试验结果

各组试验结果见表6。

表6各组药物对家兔完整皮肤刺激性试验结果

从以上结果可以看出：实施例1、2、3、6、7组去除药物后1h、24h、48h的皮肤刺激性分值均比联用组更低。

5、试验结论

比起使用三种含单一活性成分药物的联合用药，实施例1、2、3、6、7组含三种药物的复方具有更小的皮肤刺激性。

Claims

1.维A酸、甲硝唑和升华硫三种活性成分的复方在制备治疗痤疮、银屑病或酒糟鼻的药物的用途。

2.权利要求1所述的用途，所述药物含有0.005%-1%的维A酸、0.05%-5%的甲硝唑和0.5%-10%的升华硫，所述含量是重量百分含量。

3.权利要求1所述的用途，所述药物含有0.01%-0.5%的维A酸、0.1%-2%的甲硝唑和1%-5%的升华硫，所述含量是重量百分含量。

4.一种复方制剂，其特征是：含有0.005%-1%的维A酸、0.05%-5%的甲硝唑和0.5%-10%的升华硫。

5.权利要求4所述的复方制剂，其特征是：维A酸的含量为0.01%-0.5%，甲硝唑的含量为0.1%-2%，升华硫的含量为1%-5%。

6.权利要求4所述的复方制剂，还含有溶解剂、分散基质、保湿剂、乳化剂或胶凝剂。

7.权利要求6所述的复方制剂，所述溶解剂选自二甲亚砜或乙醇；所述分散基质选自凡士林、十八醇或液体石蜡；所述保湿剂选自甘油或丙二醇；所述乳化剂选自硬脂酸、三乙醇胺或单甘脂；所述胶凝剂选自卡波姆。

8.权利要求4-6任一所述的复方制剂，还含有透皮吸收促进剂、抗氧化剂或防腐剂。

9.权利要求8所述的复方制剂，所述透皮吸收促进剂选自氮酮、二甲亚砜或油酸；所述抗氧化剂选自硫代硫酸钠、维生素E、叔丁基对羟基茴香醚或2,6-二叔丁基对甲酚；所述防腐剂选自尼泊金乙酯或山梨酸钾。

10.权利要求4所述的复方制剂，剂型为乳膏剂、凝胶剂、油膏剂、涂膜剂或混悬剂。