CN104419739A - 一种发酵生产红霉素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物发酵生产领域，提供了一种发酵生产红霉素(Erythromycin)的方法。该方法以红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）为出发菌，主要包括斜面菌种的制备、摇瓶种子液的制备、种子液培养以及发酵罐工艺控制等四个步骤。本发明在种子罐、发酵罐培养基和发酵过程补料中使用精炼棉籽油代替豆油，降低了发酵成本，在优化发酵工艺的基础上使红霉素的发酵效价和红霉素A含量均有较大提高，适合于工业化大生产。

Description

一种发酵生产红霉素的方法

技术领域

本发明属于生物发酵领域，具体涉及一种发酵生产红霉素的方法。

背景技术

红霉素（Erythromycin，Er）是由红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）产生的次级代谢产物，属于大环内酯类的抗生素。红霉素对需氧的革兰氏阳性球菌和杆菌有强大抗菌作用，但对于大多数需氧革兰氏阴性杆菌无效。然而对其它革兰氏阴性细菌如淋病奈瑟球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟球菌、多杀巴氏菌、苍白密螺旋体、百日咳杆菌、空肠弯曲菌及嗜肺军团菌、肺炎支原体、沙眼衣原体有抑制作用。

近年来，由于红霉素自身的抗药性以及其它一些副作用影响了其自身的使用，但是后来开发出的第二代的红霉素衍生物大都克服了红霉素的缺点，这些衍生物是半合成的红霉素，主要有阿奇霉素(Azithromycin)，克拉霉素(Clarithromycin)，地红霉素(Dirithromycin)，罗红霉素(Roxithromycin)，氟红霉素(Flurithromycin)等，这些第二代的红霉素是以红霉素为母核合成的各种衍生物，经结构改造后，增加了对酸的稳定性，吸收更好，可减少服药次数，扩大了抗菌谱，提高了抗菌活性，不良反应明显减少。由于红霉素第二代衍生物的这些优越性导致了红霉素的需求与产量不断增长，具有很好的市场前景。

自1952年发现红霉素后，红霉素就成为了抗生素生产中的一个重要品种。通过六十年的不断发展，红霉素的产量有了大幅度的提高，红霉素的需求量也大幅度上升。但是，我国的红霉素生产长期以来仍低于国外的水平，发酵单位低、成本高仍是重要的问题，影响了红霉素生产的发展。进行菌种改良和发酵工艺改进是提高红霉素生产水平的两个重要途径。进行菌种改良需要较长的时间，进行培养基改进和工艺调整是比较快速的方法，对红霉素生产水平的提高和成本的降低有着重要意义。

工艺改进方面：宋小锋等在《红色糖多孢茵变温发酵生产红霉素的研究》（中国抗生素杂志2009年12月第34卷第12期722-725）考察了不同温度(29～34qE)对红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)合成红霉素(erythromycin)的影响，对不同温度下的发酵过程进行动力学特性分析，在此基础上提出了红霉素合成的变温培养方法：延滞期及对数期初期温度控制在33～C，发酵中期32～C，后期降温至29～C的条件下进行培养。采用此变温培养进行发酵，红霉素的化学效价和生物效价比恒温32℃培养对照组分别提高了24％和11.1％。

另外，目前国内外已有关于红霉素发酵工艺的研究。Mirjalili N等在《The effect ofrapeseed oil uptake on the production of erythromycin and triketide latone by Saccharopolysporaerythraea》（Biotechnology Progress,1999,15(5):911-918.）证实了菜籽油能够有效提高红霉素产量,Hamedi J等在《Enhancing of erythromycin production by Saccharopolyspora erythraeawith common and uncommon oils》（Journal of industrial Microbiology and Biotechnology，2004，31(10)：447-456）一文中公开红霉素发酵培养基中添加各种油脂,如菜籽油、棉籽油、胡桃油、芝麻油、橄榄油、红花油、玉米油、大豆油、瓜子油等,这些油都可以提高红霉素的产量,但是添加不同种类的油提高效价的程度有所不同,对于不同产地不同质量的油脂对于红霉素发酵影响程度也有一定的差别。

杨莲芳等在《不同种类植物油对红霉素发酵的影响》（《食品与发酵科技》2009年，第45卷第4期第46-48页）公开不同种类植物油对红霉素效价的影响结果是油菜籽油>花生油>大豆油>玉米油>芝麻油>茶油>橄榄油≈蓖麻油>棉籽油。卞晨光等在《豆油对红霉素生物合成的影响及作用机制分析》（华东理工大学学报,200430(2):139-142.）公开了在红霉素摇瓶中加入豆油,使红霉素效价提高71.86%,沈兆兵等在《豆油在红霉素发酵中的作用及作用机制的研究》（中国抗生素杂志,2006,31(11):657-660.）公开通过在红霉素发酵罐基础培养基中添加豆油使效价提高43.1%,发酵过程中进行补加豆油试验后效价提高69.7%。在目前国内的红霉素的发酵生产中，普遍使用豆油，豆油是发酵中的一个重要的原料，使用量大，而且价格高，在生产成本中占据很大的比例。且大量研究表明在红霉素发酵过程中豆油的效果要优于棉籽油。

然而国内红霉素发酵水平普遍不高，距国际先进水平低2000～5000u/ml，竞争力差。且早期菌种常规方法获得的效价为2000-3000U/ml，红霉素A的含量在55～65%。因此，为了提高竞争力，必须要降低生产成本，提高红霉素发酵效价和组分A的含量。中国发明专利申请CN102732383A公开了一种改性植物油脂及其在红霉素发酵过程中的应用，该技术方案公开改性棉籽油效果优于天然豆油，但是该技术方案并没有公开所使用的菌种，众所周知菌种对于发酵技术的影响是极其重要的。未改性的棉籽油使用情况没有论述。

发明内容

本发明公开了一种优化发酵方法，用于提高红霉素的发酵水平。

本发明利用红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）发酵生产红霉素的方法，其具体包括如下步骤：

1)斜面菌种的制备：将冻干管的红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）菌种用无菌水稀释后接种装有固体培养基的斜面，在温度32-34℃，湿度30－50％的条件下，培养9－11d，产孢后加无菌水制成孢子悬浮液；

2)摇瓶种子液制备：将孢子悬浮液接种摇瓶种子培养基，在摇床转速为180-250rpm、温度为32-34℃、湿度为20－50％的条件下培养40－52小时；

3)种子液的制备：将2)中培养好的摇瓶种子液接种到种子罐中，接种量为种子罐培养基体积的1.0-2.0%，在温度为32-34℃、搅拌转速为300－500rpm、通气量为0.8VVM-1.5VVM、罐压为0.05-0.06MPa的条件下培养40－60小时；

4)发酵培养：将3)中培养好的菌液接到发酵罐中，接种量为发酵罐培养基体积的10－15％，在温度为32-34℃、搅拌转速为500－700rpm、通气量为0.8VVM-1.2VVM、罐压为0.05－0.06MPa、pH为6.8-7.1、补入营养物质糖、精炼棉籽油和正丙醇的条件下，培养180－200小时。

本发明所用红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）菌种优选的是CPCC240502、CPCC240538。

本发明步骤1）中所用固体培养基成分和含量优选的是：淀粉10-12g/L，玉米浆9-12g/L，氯化钠2-5g/L，硫酸铵2-5g/L，碳酸钙2-4g/L，琼脂20-25g/L，pH为6.5-7.5。

如本发明所述发酵生产红霉素的方法一般来说包括斜面培养、摇瓶种子液培养、种子液培养和发酵培养。发明人在研究高效的发酵生产红霉素的过程中,意外发现在种子液培养过程中所用种子培养基、种子罐培养基及发酵培养过程中所用发酵培养基均使用市售的精炼棉籽油代替豆油，具有预料不到的技术效果。

本发明步骤2)摇瓶种子培养基的成分优选的是：蔗糖，硫酸铵，玉米浆，磷酸二氢钾，硫酸铵，碳酸钙，精炼棉籽油，pH为5.5-6.5；更为优选的是,所述种子培养基各成分的含量为：蔗糖20-50g/L，硫酸铵2-6g/L，玉米浆10-20g/L，磷酸二氢钾0.1-0.2g/L，硫酸镁0.1-0.3g/L，碳酸钙5-8g/L，精炼棉籽油0.05-0.075g/50ml，pH为5.5-6.5。

本发明步骤3)种子罐培养基的成分优选的是：淀粉，糊精，黄豆饼粉，硫酸铵，氯化钠，碳酸钙，精炼棉籽油，消泡剂。更为优选的是,所述种子培养基各成分的含量为：淀粉20-40g/L，糊精20-40g/L，黄豆饼粉20-40g/L，硫酸铵2-5g/L，氯化钠2-5g/L，碳酸钙5-8g/L，精炼棉籽油5-8g/L，消泡剂0.2-0.4g/L，消后pH为6.5-7.2。

本发明步骤4)发酵培养基的成分优选的是：淀粉，黄豆饼粉，玉米浆，精炼棉籽油，硫酸铵，氯化钠，碳酸钙，消泡剂。更为优选的是,所述发酵培养基各成分的含量为：淀粉30-55g/L，黄豆饼粉30-50g/L，精炼棉籽油5-8g/L，硫酸铵2-5g/L，氯化钠2-5g/L，碳酸钙5-8g/L，消泡剂0.2-0.3g/L，消后pH为6.5-7.2。

本发明与现有技术相比，具有如下明显的优势。

和豆油相比，棉籽油价格较低。棉籽油是以棉花籽榨的油，颜色较其它油深红，粗制棉籽油中含有一种含酚毒甙--棉酚，对菌体的生长代谢有影响，精炼后的棉籽油清除了棉酚等有害物质，适合在发酵中使用。

本技术领域中，技术人员对于红霉素发酵添加植物用油的理解普遍存在豆油等要优于棉籽油，然而本发明人在菌种培养过程中添加使用了精炼棉籽油，提高了发酵效价，降低了发酵成本，解决了现有技术中存在的发酵效价低、生产成本高的缺点。同时，该发明克服了技术偏见，改变了人们对于棉籽油对红霉素发酵过程中所产生作用的错误认识。

同时，本发明优化改进了发酵工艺，发酵放罐时效价比使用豆油、粗制棉籽油的提高至少20％，红霉素A含量也有较大幅度提高，且使用棉籽油成本稍低，更加有利于规模化大生产。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实施例1

斜面培养：按如下比例配制培养基：淀粉10g/L，玉米浆10g/L，氯化钠2g/L，硫酸铵3g/L，碳酸钙3g/L，琼脂22g/L，pH为7.0。配制培养基300ml，加热琼脂融化后搅拌均匀装入10支试管中，121℃灭菌，时间为30min，做成斜面备用。将冻干的红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）CPCC240502菌种用无菌水5ml溶解，取4ml均匀接种在10支斜面上，在温度为33℃、湿度为40％的条件下，培养10d，产生大量孢子。加无菌水制成孢子悬浮液。

摇瓶种子液制备：按如下比例配制培养基：蔗糖40g/L，硫酸铵4g/L，玉米浆15g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，硫酸镁0.2g/L，碳酸钙7g/L，精炼棉籽油0.05g/50ml，pH为6.5。配制培养基200ml，装500mL三角瓶4瓶（每瓶装液量50mL），118℃灭菌，时间为30min，灭菌后备用。将孢子悬浮液2mL接种到摇瓶中。在温度为33.2℃、湿度为40％、摇床转速为220rpm的条件下，培养48hour。

种子罐培养：采用15L不锈钢发酵罐进行种子培养。按如下比例配制种子罐所用液体培养基（按实消后10L配制）：淀粉20g/L，糊精40g/L，黄豆饼粉30g/L，硫酸铵3g/L，氯化钠3g/L，碳酸钙5g/L，精炼棉籽油8g/L，消泡剂0.3g/L，实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为10L，消后pH为7.0。当温度降至32℃时，将150mL种子液（种子罐培养基体积的1.5%）接种到种子罐中，在温度为32℃、搅拌转速为400rpm（转/分）、通气量为1.0VVM(体积/体积/分钟)、罐压为0.05MPa的条件下，培养60hour。

发酵罐培养：采用50L不锈钢发酵罐进行培养。按如下比例配制液体培养基（按实消并移种后35L配制）：淀粉40g/L，黄豆饼粉30g/L，精炼棉籽油8g/L，硫酸铵4g/L，氯化钠3g/L，碳酸钙6g/L，消泡剂0.25g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为30L，，消后pH为7.0，待温度降至33℃时，将种子罐中培养好的菌液5L接到50L发酵罐中，接种量为发酵罐培养基体积的14.3％，接种后培养条件为：温度33℃，搅拌转速为700rpm（转/分），通气量1.0VVM(体积/体积/分钟)，罐压0.05MPa，培养13hour开始补入营养物质糖，直到发酵结束，培养18hour开始补入精炼棉籽油和正丙醇，直到发酵结束。33hour后pH控制在6.8，培养时间为185hour。放罐时红霉素含量为4704U/ml，红霉素A含量73.9%。

实施例2

斜面培养：按如下比例配制培养基：淀粉12g/L，玉米浆12g/L，氯化钠3g/L，硫酸铵2g/L，碳酸钙4g/L，琼脂25g/L，pH为7.5。配制培养基300ml，加热琼脂融化后搅拌均匀装入10支试管中，121℃灭菌，时间为30min，灭菌后做成斜面备用。将冻干的红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）CPCC240502用无菌水5ml溶解，取4ml均匀接种在10支斜面上，在温度为32℃、湿度为30％的条件下培养11d，产生大量孢子。加无菌水制成孢子悬浮液。

摇瓶种子液制备：按如下比例配制培养基：蔗糖50g/L，硫酸铵6g/L，玉米浆10g/L，磷酸二氢钾0.15g/L，硫酸镁0.1g/L，碳酸钙8g/L，精炼棉籽油0.05g/50ml，pH为6.0。配制培养基200ml，装500mL三角瓶4瓶（每瓶装液量50mL），118℃灭菌，时间为30min，灭菌后备用。将孢子悬浮液2mL接种到摇瓶中。在温度为32℃、湿度为20％、摇床转速为250rpm的条件下，培养52hour。

种子罐培养：采用15L不锈钢发酵罐进行种子培养。按如下比例配制种子罐所用液体培养基（按实消后10L配制）：淀粉25g/L，糊精30g/L，黄豆饼粉20g/L，硫酸铵5g/L，氯化钠2g/L，碳酸钙6g/L，精炼棉籽油7g/L，消泡剂0.2g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为10L，，消后pH为7.2，当温度降至33℃时，将100mL种子液（种子罐培养基体积的1%）接种到种子罐中，在温度为33℃、搅拌转速为500rpm（转/分）、通气量为0.8VVM(体积/体积/分钟)、罐压为0.05MPa的条件下，培养50hour。

发酵罐培养：采用50L不锈钢发酵罐进行培养。按如下比例配制液体培养基（按实消并移种后35L配制）：淀粉30g/L，黄豆饼粉40g/L，精炼棉籽油7g/L，硫酸铵5g/L，氯化钠2g/L，碳酸钙5g/L，消泡剂0.2g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为31L，，消后pH为7.2，待温度降至32℃时，将种子罐中培养好的菌液4L接到50L发酵罐中，接种量为发酵罐培养基体积的11.4％，接种后培养条件为：温度32℃，搅拌转速为600rpm（转/分），通气量1.2VVM(体积/体积/分钟)，罐压0.05MPa，31hour后将pH控制在7.0，培养11hour开始补入营养物质糖，直到发酵结束，培养15hour开始补入精炼棉籽油和正丙醇，直到发酵结束。培养时间为180hour。放罐时红霉素含量为4818U/ml，红霉素A含量73.4%。

实施例3（对比例）

将摇瓶种子液培养过程中使用的培养基、种子罐培养培养过程中所用的种子罐培养基和发酵罐培养过程中的发酵罐基础培养基和补料使用豆油代替精炼棉籽油，其它同实施例2，放罐时红霉素含量为3860U/ml，红霉素A含量67.9%。

实施例4（对比例）

将摇瓶种子液培养过程中使用的培养基、种子罐培养培养过程中所用的种子罐培养基和发酵罐培养过程中的发酵罐基础培养基和补料使用粗制棉籽油(市售)代替精炼棉籽油，其它同实施例2，放罐时红霉素含量为3244U/ml，红霉素A含量63.7%。

实施例5

斜面培养：按如下比例配制培养基：淀粉10g/L，玉米浆9g/L，氯化钠4g/L，硫酸铵4g/L，碳酸钙3g/L，琼脂20g/L，pH为6.5。配制培养基300ml，加热琼脂融化后搅拌均匀装入10支试管中，121℃灭菌，时间为30min，灭菌后做成斜面备用。将冻干的红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）CPCC240538用无菌水5ml溶解，取4ml均匀接种在10支斜面上，在温度为34℃、湿度为50％的条件下培养9d，产生大量孢子。加无菌水制成孢子悬浮液。

摇瓶种子液制备：按如下比例配制培养基：蔗糖20g/L，硫酸铵2g/L，玉米浆20g/L，磷酸二氢钾0.15g/L，硫酸镁0.3g/L，碳酸钙5g/L，精炼棉籽油0.075g/50ml，pH为6。配制培养基250ml，装500mL三角瓶5瓶（每瓶装液量50mL），在温度为118℃，时间为30min的条件下灭菌，灭菌后备用。将孢子悬浮液2mL接种到摇瓶中。在温度为34℃、湿度为50％、摇床转速为180rpm的条件下培养40hour。

种子罐培养：采用15L不锈钢发酵罐进行种子培养。按如下比例配制种子罐所用液体培养基（按实消后10L配制）：淀粉40g/L，糊精20g/L，黄豆饼粉40g/L，硫酸铵2g/L，氯化钠4g/L，碳酸钙8g/L，精炼棉籽油5g/L，消泡剂0.4g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为10L，消后pH为6.5，当温度降至33.5℃时，将200mL种子液（种子罐培养基体积的2%）接种到种子罐中，在温度为33.5℃、搅拌转速为300rpm（转/分）、通气量为1.5VVM(体积/体积/分钟)、罐压为0.06MPa的条件下，培养45hour。

发酵罐培养：采用50L不锈钢发酵罐进行培养。按如下比例配制液体培养基（按实消并移种后35L配制）：淀粉50g/L，黄豆饼粉50g/L，精炼棉籽油6g/L，硫酸铵2g/L，氯化钠5g/L，碳酸钙8g/L，消泡剂0.3g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为31.5L，消后pH为7.0，待温度降至33.5℃时，将种子罐中培养好的菌液3.5L接到50L发酵罐中，接种量为发酵罐培养基体积的10％，接种后培养条件为：温度33.5℃，搅拌转速为600rpm（转/分），通气量0.8VVM(体积/体积/分钟)，罐压0.06MPa，36hour后pH控制在6.9，培养15hour开始补入营养物质糖，直到发酵结束，培养22hour开始补入精炼棉籽油和正丙醇，直到发酵结束。培养时间为200hour。放罐时红霉素含量为4577U/ml，红霉素A含量74.05%。

实施例6

斜面培养：按如下比例配制培养基：淀粉11g/L，玉米浆10g/L，氯化钠5g/L，硫酸铵3.5g/L，碳酸钙2g/L，琼脂23g/L，pH为7.0。配制培养基300ml，加热琼脂融化后搅拌均匀装入10支试管中，121℃灭菌，时间为30min，灭菌后做成斜面备用。将冻干的红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）CPCC240538用无菌水5ml溶解，取4ml均匀接种在10支斜面上，在温度为34℃、湿度为45％的条件下培养9d，产生大量孢子。加无菌水制成孢子悬浮液。

摇瓶种子液制备：按如下比例配制培养基：蔗糖35g/L，硫酸铵3g/L，玉米浆20g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硫酸镁0.2g/L，碳酸钙6g/L，精炼棉籽油0.075g/50ml，pH为5.5。配制培养基200ml，装500mL三角瓶4瓶（每瓶装液量50mL），在温度为118℃、时间为30min的条件下灭菌，灭菌后备用。将孢子悬浮液2mL接种到摇瓶中。在温度为33.5℃、湿度为35％、摇床转速为200rpm的条件下，培养45hour。

种子罐培养：采用15L不锈钢发酵罐进行种子培养。按如下比例配制种子罐所用液体培养基（按实消后10L配制）：淀粉30g/L，糊精25g/L，黄豆饼粉35g/L，硫酸铵4g/L，氯化钠5g/L，精炼棉籽油6g/L，碳酸钙7g/L，消泡剂0.3g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为10L，消后pH为7.0，当温度降至34℃时，将150mL种子液（种子罐培养基体积的1.5%）接种到种子罐中，在温度为34℃、搅拌转速为400rpm（转/分）、通气量为1.2VVM(体积/体积/分钟)、罐压为0.05MPa的条件下，培养40hour。

发酵罐培养：采用50L不锈钢发酵罐进行培养。按如下比例配制液体培养基（按实消并移种后35L配制）：淀粉55g/L，黄豆饼粉45g/L，精炼棉籽油5g/L，硫酸铵3g/L，氯化钠4g/L，碳酸钙7g/L，消泡剂0.3g/L。实消温度为121℃，时间为30min，实消后体积为29.7L，，消后pH为6.5，待温度降至34℃时，将种子罐中培养好的菌液5.3L接到50L发酵罐中，接种量为发酵罐培养基体积的15％，接种后培养条件为：温度34℃，搅拌转速为500rpm（转/分），通气量1.0VVM(体积/体积/分钟)，罐压0.06MPa，34hour后pH控制在7.1，培养14hour开始补入营养物质糖，直到发酵结束，培养20hour开始补入精炼棉籽油和正丙醇直到发酵结束。培养时间为193hour。放罐时红霉素含量为4495U/ml，红霉素A含量73.71%。

实施例7（对比例）

将种子罐培养培养过程中所用的种子罐培养基和发酵罐培养过程中的发酵罐基础培养基和补料使用豆油代替精炼棉籽油，其它同实施例5，放罐时红霉素A含量为3642U/ml，红霉素A含量68.35%。

实施例8（对比例）

将种子罐培养培养过程中所用的种子罐培养基和发酵罐培养过程中的发酵罐基础培养基和补料使用粗制棉籽油(市售)代替精炼棉籽油，其它同实施例6，放罐时红霉素A含量为3021U/ml，红霉素A含量64.35%。

Claims (9)

1.一种利用红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）发酵生产红霉素的方法，其特征在于，发酵培养过程包括如下步骤：

1)斜面菌种的制备：将冻干管的红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea）菌种用无菌水稀释后接种装有固体培养基的斜面，在温度32-34℃，湿度30－50％的条件下，培养9－11d，产孢后加无菌水制成孢子悬浮液；

2)摇瓶种子液制备：将孢子悬浮液接种摇瓶种子培养基，在摇床转速为180-250rpm、温度为32-34℃、湿度为20－50％的条件下培养40－52小时；

3)种子液的制备：将2)中培养好的摇瓶种子液接种到种子罐中，接种量为种子罐培养基体积的1.0-2.0%，在温度为32-34℃、搅拌转速为300－500rpm、通气量为0.8VVM-1.5VVM、罐压为0.05-0.06MPa的条件下培养40－60小时；

4)发酵培养：将3)中培养好的菌液接到发酵罐中，接种量为发酵罐培养基体积的10－15％，在温度为32-34℃、搅拌转速为500－700rpm、通气量为0.8VVM-1.2VVM、罐压为0.05－0.06MPa、pH为6.8-7.1、补入营养物质糖、精炼棉籽油和正丙醇的条件下，培养180－200小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤1)固体培养基成分和含量为：淀粉10-12g/L，玉米浆9-12g/L，氯化钠2-5g/L，硫酸铵2-5g/L，碳酸钙2-4g/L，琼脂20-25g/L，pH为6.5-7.5。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述摇瓶种子液培养过程所用培养基、种子液培养过程中所用种子罐培养基及发酵培养过程中所用发酵罐基础培养基和补料所添加的植物油为均为精炼棉籽油。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤2)摇瓶种子液培养基还包括以下成分：蔗糖，硫酸铵，玉米浆，磷酸二氢钾，硫酸镁，碳酸钙。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤2)摇瓶种子培养基成分和含量为：蔗糖20-50g/L，硫酸铵2-6g/L，玉米浆10-20g/L，磷酸二氢钾0.1-0.2g/L，硫酸镁0.1-0.3g/L，碳酸钙5-8g/L，精炼棉籽油0.05-0.075g/50ml，pH为5.5-6.5。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤3)种子罐培养基还包括以下成分：淀粉，糊精，黄豆饼粉，硫酸铵，氯化钠，碳酸钙，消泡剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于,所述种子罐培养基各成分的含量为：淀粉20-40g/L，糊精20-40g/L，黄豆饼粉20-40g/L，硫酸铵2-5g/L，氯化钠2-5g/L，碳酸钙5-8g/L，消泡剂0.2-0.4g/L，精炼棉籽油5-8g/L，消后pH为6.5-7.2。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述发酵基础培养基还包括以下成分：淀粉，黄豆饼粉，玉米浆，硫酸铵，氯化钠，碳酸钙，消泡剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于,所述发酵基础培养基各成分的含量为：淀粉30-55g/L，黄豆饼粉30-50g/L，精炼棉籽油5-8g/L，硫酸铵2-5g/L，氯化钠2-5g/L，碳酸钙5-8g/L，消泡剂0.2-0.3g/L，消后pH为6.5-7.2。