CN104418825B

CN104418825B - 利普司他汀的提纯方法

Info

Publication number: CN104418825B
Application number: CN201310367722.6A
Authority: CN
Inventors: 彭平; 郭萍; 张洪兰; 叶静
Original assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICALS Co Ltd OF PKU INTERNATIONAL HEALTHCARE GROUP; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU International Healthcare Group Co Ltd
Current assignee: CHONGQING DAXIN PHARMACEUTICAL CO LTD; New Founder Holdings Development Co ltd; Peking University Medical Management Co ltd; Peking University Founder Group Co Ltd; PKU Healthcare Industry Group
Priority date: 2013-08-21
Filing date: 2013-08-21
Publication date: 2016-12-28
Anticipated expiration: 2033-08-21
Also published as: CN104418825A

Abstract

本发明提供一种利普司他汀的提纯方法，其包括：1）提供利普司他汀的有机溶剂萃取液；2）将步骤1）所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液进行浓缩；3）将步骤2）得到的浓缩物与C₅‑C₂₀烷烃以及液态有机盐混合，过滤，得到滤液；以及4）将步骤3）得到的滤液进行降温结晶，从而得到所述的利普司他汀。本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：本发明采取萃取、浓缩、结晶等简单的方法，实现了利普司他汀的提取，所得利普司他汀的HPLC纯度可高达（例如）86%；绝对含量可高达（例如）74%。克服了现有技术设备成本高、耗能大、操作繁琐、一次处理量小等缺陷，降低了生产成本，提高了生产效率，适合工业化大生产。

Description

利普司他汀的提纯方法

技术领域

本发明属于制药领域，具体而言，涉及一种利普司他汀的提纯方法。

背景技术

利普司他汀(也可称为尼泊司他汀)的英文名Lipstatin，CAS号：96829-59-3，分子式：C₂₉H₄₉NO₅，分子量：491.708，结构式如下式I所示：

利普司他汀是毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)的代谢产物，能选择性抑制胃肠道中胰脂肪酶的活性，减少脂肪的分解和吸收。其四氢衍生物奥利司他(orlistat)已被罗氏公司(Roche lnc.)成功开发为减肥药赛尼可，是目前国际公认的一种新型减肥降脂药，1998年首次在新西兰上市。奥利司他是目前全球唯一的OTC减肥药，是一种强效和长效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，通过直接阻断人体对食物中脂肪的吸收，摄入的热能和脂肪一旦小于消耗，体内脂肪自然减少，从而达到减重的目的。

而在现有技术中，利普司他汀的纯度越高，制备符合医用标准的奥利司他越容易。例如，CN102070568A公开了奥利司他动态轴向压缩柱的制备型高效液相系统纯化法制备奥利司他，制备出了单杂质小于0.1%，含量大于99.0%的奥利司他，其中要求利普司他汀的纯度大于85%，含量50%～70%。

美国专利US4598089在1986年公开了通过微生物发酵生产利普司他汀的技术，提取采取硅胶为载体，氯仿洗脱，在上硅胶，正己烷和乙酸乙酯洗脱，上反相色谱柱，甲醇洗脱，多次层析，该方法需要采用硅胶柱，成本高，不适合工业化推广。

中国专利公开号No.201010229409.2采用喷嘴式离心机预浓缩发酵液，离心雾化干燥得菌渣，溶剂萃取，浓缩得膏状的利普司他汀，收率80%以上，但是该方法采用了喷雾干燥，耗能较大，并且所得产品纯度较低，因此不适合工业化大生产。

科技文献：胡为民等，毒三素链霉菌生产利普司他汀的发酵与提取中国医药工业杂志，2007年第38卷第10期，705-708中公开了一种利普司他汀的提取方法，其包括：超声波破碎细胞、丙酮萃取、乙酸乙酯萃取、正相柱色谱及半制备柱分离，获得的利普司他汀达到94%，但未提及收率、含量，该方法仍较繁琐，投资大，消耗大，因此成本高，因此不适合工业化大生产。

因此目前亟需一种新的纯度较高且适于工业化生产的利普司他汀的提纯方法。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种利普司他汀的提纯方法。

具体而言，本发明提供：

（1）一种利普司他汀的提纯方法，其包括：

1）提供利普司他汀的有机溶剂萃取液；

2）将步骤1）所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液进行浓缩；

3）将步骤2）得到的浓缩物与C₅-C₂₀烷烃以及液态有机盐混合，过滤，得到滤液；以及

4）将步骤3）得到的滤液进行降温结晶，从而得到所述的利普司他汀。

（2）根据（1）所述的方法，其中，所述的液态有机盐选自丁酸三乙胺、丁酸二乙胺、丁酸乙胺、醋酸丁胺、醋酸二丙胺、醋酸丙胺、醋酸三丙胺、丁酸二甲胺、丁酸三甲胺、丙酸三乙胺、丙酸二乙胺、丙酸乙胺、丙酸丙胺、丙酸二丙胺以及丙酸丁胺中的一种或几种，优选为醋酸丁胺。

（3）根据（1）所述的方法，其中，所述的C₅-C₂₀烷烃选自戊烷、己烷、庚烷、辛烷、异辛烷、壬烷、癸烷、十三烷、十四烷、十五烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、甲基环戊烷、乙基环戊烷、丙基环戊烷、丁基环戊烷、甲基环己烷、乙基环己烷、丙基环己烷、丁基环己烷、甲基环庚烷、乙基环庚烷、丙基环庚烷以及丁基环庚烷中的一种或几种，优选为异辛烷。

（4）根据（1）所述的方法，其中，步骤2）得到的浓缩物与所述的C₅-C₂₀烷烃的重量体积比为1:(2-8)，优选为1:(3-7)。

（5）根据（1）所述的方法，其中，所述的C₅-C₂₀烷烃与所述的液态有机盐的体积重量比为1:(0.05-0.5)，优选为1:(0.1-0.25)。

（6）根据（1）所述的方法，其中，步骤4）所述的降温结晶包括：

i）将步骤3）得到的滤液与C₅-C₂₀烷烃混合；以及

ii）将步骤i）得到的混合液降温至-20～-10℃；以进行结晶，从而得到所述的利普司他汀。

（7）根据（6）所述的方法，其中，步骤3）得到的滤液与所述的C₅-C₂₀烷烃的体积比为1:(0.4-2.5)；优选为1:(0.6-1.1)。

（8）根据（1）-（7）中任意一项所述的方法，其中，在步骤1）所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液中，所述的有机溶剂包含乙腈。

（9）根据（8）所述的方法，其中，所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液是通过以下方法得到的：

a）将经过发酵产生利普司他汀的发酵液的pH调至1.5-6.5，优选为3-5；

b）将步骤a）得到的发酵液与第一有机溶剂以及第二有机溶剂混合，以进行萃取，分离得到含有利普司他汀的萃取液，浓缩；

c）将步骤b）得到的浓缩物用C₅-C₂₀烷烃进行提取，分离得到含有利普司他汀的提取液；以及

d）将步骤c）得到的提取液用乙腈进行萃取，分离得到所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液；

其中，所述的第一有机溶剂的极性高于所述的第二有机溶剂。

（10）根据（9）所述的方法，其中，在步骤b）中，所述的第一有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇以及丙酮中的一种或几种，优选为乙醇；以及所述的第一有机溶剂与所述的发酵液的体积比优选为(0.08-0.8):1；更优选为(0.1-0.6):1；更优选为(0.1-0.3):1。

（11）根据（9）所述的方法，其中，在步骤b）中，所述的第二有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯等低级酯中的一种或几种，优选为醋酸丁酯；以及所述的第二有机溶剂与所述的发酵液的体积比优选为(0.2-3.0):1；更优选为(0.3-1.0):1。

（12）根据（9）所述的方法，其中，在步骤c）中，步骤b）得到的浓缩物与所述的C₅-C₂₀烷烃的重量体积比为1:(2-10)；优选为1:(4-6)。

（13）根据（9）所述的方法，其中，在步骤d）中，步骤c）得到的提取液与所述的乙腈的体积比为1:(0.05-2)；优选为1:(0.2-0.5)。

本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

本发明的利普司他汀的提纯方法，采取萃取、浓缩、结晶等简单的方法，实现了利普司他汀的提取，所得利普司他汀的HPLC纯度提高至74%以上，例如，可高达86%，绝对含量提高至60%以上，例如，可高达74%。

本发明所述的方法能够避免使用树脂吸附、硅胶柱、喷雾干燥等现有技术，相应地克服了上述现有技术设备成本高、耗能大、操作繁琐、一次处理量小等方面的缺陷，因此降低了生产成本，提高了生产效率，适合工业化大生产。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

本发明所述的“液态有机盐”也称为离子液体，是指在室温或接近室温下（此处所述的室温或接近室温指的是10-35℃）呈现液态的、由阴阳离子所组成的有机盐，也可称为低温熔融盐。液态有机盐一般由低熔点的有机酸与低熔点的有机碱等当量反应的产物。

本发明所述的“重量体积比”的单位为g:ml。

本发明所述的“体积重量比”的单位为ml:g。

利普司他汀为孢内产物，其发酵液是一种浓稠、菌浓高的油水性液体，并且无明显固型物，发酵液不便于固液分离；利普司他汀是一种多烯烃及酯结构的物质，它易受多种因素影响而被破坏并发生降解，产生杂质。目前工艺中通常采用硅胶柱以及采用乙醇作为萃取剂，对利普司他汀进行纯化。但是由于乙醇的溶解性强，能溶解的物质广泛，但对溶解物的选择性差，萃取液中的杂质过多，对之后的硅胶有“死吸附”作用的物质的含量高，因此实际生产过程中硅胶的使用寿命短，生产成本高。

本发明人对利普司他汀的有机溶剂萃取纯化进行了大量的试验，出人意料地发现将利普司他汀的有机溶剂萃取液浓缩后用液态有机盐和烷烃提取，能够大幅提高利普司他汀结晶液纯度，使利普司他汀能够容易地通过降温结晶进行纯化。上述步骤能够所得的利普司他汀HPLC纯度提高至74%以上，例如，可高达86%，绝对含量提高至60%以上，例如，可高达74%。本发明人在此发现的基础上，进一步得到了本发明的技术方案。

具体而言，本发明提供了：

一种利普司他汀的提纯方法，其包括：

1）提供利普司他汀的有机溶剂萃取液；

4）将步骤3）得到的滤液进行降温结晶，从而得到所述的利普司他汀；

优选的是，所述的液态有机盐选自丁酸三乙胺、丁酸二乙胺、丁酸乙胺、醋酸丁胺、醋酸二丙胺、醋酸丙胺、醋酸三丙胺、丁酸二甲胺、丁酸三甲胺、丙酸三乙胺、丙酸二乙胺、丙酸乙胺、丙酸丙胺、丙酸二丙胺以及丙酸丁胺中的一种或几种，优选为醋酸丁胺。其中，本领域技术人员所公知的是，所述的液态有机盐可由相应的酸与相应的碱通过简单的酸碱反应制备得到，其制备过程中的各原料均市售可得，例如，丙酸三乙胺可通过将纯丙酸与纯三乙胺反应后得到。

优选的是，所述的C₅-C₂₀烷烃选自戊烷、己烷、庚烷、辛烷、异辛烷、壬烷、癸烷、十三烷、十四烷、十五烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、甲基环戊烷、乙基环戊烷、丙基环戊烷、丁基环戊烷、甲基环己烷、乙基环己烷、丙基环己烷、丁基环己烷、甲基环庚烷、乙基环庚烷、丙基环庚烷以及丁基环庚烷中的一种或几种，优选为异辛烷。

优选的是，步骤2）得到的浓缩物与所述的C₅-C₂₀烷烃的重量体积比为1:(2-8)，优选为1:(3-7)，单位为g:ml。

优选的是，所述的C₅-C₂₀烷烃与所述的液态有机盐的体积重量比为1:(0.05-0.5)，优选为1:(0.1-0.25)，单位为ml:g。

优选的是，步骤4）所述的降温结晶包括：

i）将步骤3）得到的滤液与C₅-C₂₀烷烃混合；以及

更优选的是，将C₅-C₂₀烷烃加入（例如，滴加入）至步骤3）得到的滤液中，以进行所述的混合。

更优选的是，步骤3）得到的滤液与所述的C₅-C₂₀烷烃的体积比为1:(0.4-2.5)；优选为1:(0.6-1.1)。

所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液可通过本领域常规方法制备得到，例如，可通过科技文献：胡为民等，毒三素链霉菌生产利普司他汀的发酵与提取中国医药工业杂志，2007年第38卷第10期，705-708中的萃取步骤制备得到。但是本发明并不限于此。在所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液中，对利普司他汀的含量没有特别的限制。

本发明人通过试验进一步地发现，在对利普司他汀进行有机萃取的过程中，特别是针对由利普司他汀的发酵液制备的有机溶剂萃取液，通过乙腈萃取能够进一步除去其中存在的低极性物质，更有利于之后利普司他汀从结晶液中结晶分离。

优选的是，在步骤1）所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液中，所述的有机溶剂包含乙腈。

更优选的是，所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液是通过以下方法得到的：

b）将步骤a）得到的滤液与第一有机溶剂以及第二有机溶剂混合，以进行萃取，分离得到含有利普司他汀的萃取液，浓缩；

本文所述的发酵液是指生产利普司他汀的微生物（例如，毒三素链霉菌）的发酵液，其可通过（例如）下述科技文献中所述的方法进行发酵得到：胡为民等人的“毒三素链霉菌生产利普司他汀的发酵与提纯工艺”《中国医药工业杂志》，2007,38(10)，第705-708页。毒三素链霉菌可以是任何能主要生产利普司他汀的毒三素链霉菌，包括通过诱变得到的高产菌种。

更优选的是，所述的发酵液是通过对毒三素链霉菌进行发酵而获得的。

更优选的是，在步骤b）中，所述的第一有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇以及丙酮中的一种或几种，优选为乙醇。

更优选的是，在步骤b）中，所述的第一有机溶剂与所述的发酵液的体积比为(0.08-0.8):1；优选为(0.1-0.6):1；更优选为(0.1-0.3):1。

更优选的是，在步骤b）中，所述的第二有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯等低级酯中的一种或几种，优选为醋酸丁酯。

更优选的是，在步骤b）中，所述的第二有机溶剂与所述的发酵液的体积比为(0.2-3.0):1；优选为(0.3-1.0):1。

更优选的是，在步骤c）中，步骤b）得到的浓缩物与所述的C₅-C₂₀烷烃的重量体积比为1:(2-10)；优选为1:(4-6)，单位为g:ml。

更优选的是，所述的C₅-C₂₀烷烃选自戊烷、己烷、庚烷、辛烷、异辛烷、壬烷、癸烷、十三烷、十四烷、十五烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、甲基环戊烷、乙基环戊烷、丙基环戊烷、丁基环戊烷、甲基环己烷、乙基环己烷、丙基环己烷、丁基环己烷、甲基环庚烷、乙基环庚烷、丙基环庚烷以及丁基环庚烷中的一种或几种，优选为异辛烷。

更优选的是，在步骤d）中，步骤c）得到的提取液与所述的乙腈的体积比为1:(0.05-2)；优选为1:(0.2-0.5)。

本发明的一个优选实施方案可以是：

一种利普司他汀的提取方法，将利普司他汀发酵液调pH1.5-6.5，加入有机溶剂1和有机溶剂2，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层，水洗；浓缩至干、回收有机溶剂2。混合物中加入有机溶剂3萃取，过滤，加入乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，加入有机溶剂3和有机液态盐，搅拌溶解，过滤；滤液加入有机溶剂3，降温，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。

本发明的另一个优选实施方案可以是：

一种利普司他汀的提取方法，将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液调pH1.5～6.5，优选pH3～5；调发酵液pH所用的酸选自盐酸、硫酸、磷酸、醋酸和草酸中的一种或多种，优选硫酸。

加入发酵液体积0.08～0.8倍体积的有机溶剂1和发酵液体积0.2～3.0倍体积的有机溶剂2，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层，水洗；浓缩至干、回收有机溶剂2，得到深黄色膏状物。有机溶剂1优选0.1～0.6倍，更优选0.1～0.3倍；有机溶剂1选自：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、或它们的混合物，优选乙醇；有机溶剂2选自：乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯等低级酯或是它们的混合物，优选醋酸丁酯；优选0.3～1.0倍。

加入深黄色膏状物2-10倍重量的有机溶剂3，优选4～6倍；有机溶剂3选自：选自戊烷、己烷、庚烷、辛烷、异辛烷、壬烷、癸烷、十三烷、十四烷、十五烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、甲基环戊烷、乙基环戊烷、丙基环戊烷、丁基环戊烷、甲基环己烷、乙基环己烷、丙基环己烷、丁基环己烷、甲基环庚烷、乙基环庚烷、丙基环庚烷、丁基环庚烷中的一种或多种，优选异辛烷。

搅拌溶解，过滤，加入有机溶剂3体积0.1-1倍体积的乙腈，搅拌洗涤10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干、回收乙腈得黄色油膏状物。优选0.2～0.6倍；

加入黄色油膏状物2～6倍重量的有机溶剂3，和该步骤所述的有机溶剂30.05～0.5倍的体积重量比的有机液态盐，搅拌溶解，过滤，得滤液。有机溶剂3优选3～4倍；有机液态盐优选0.1～0.25倍，有机液态盐选自：丁酸三乙胺溶液、丁酸二乙胺、丁酸乙胺、醋酸丁胺、醋酸二丙胺、醋酸丙胺、醋酸三丙胺、丁酸二甲胺、丁酸三甲胺、丙酸三乙胺溶液、丙酸二乙胺、丙酸乙胺、丙酸丙胺、丙酸二丙胺、丙酸丁胺或它们的混合物，优选醋酸丁胺。

滤液补加0.4～2.5倍体积的有机溶剂3，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。补加的有机溶剂3优选0.6～1.1倍。

以下通过实施例的方式进一步解释或说明本发明内容，但这些实施例不应被理解为对本发明保护范围的限制。

在以下实施例中，按照下列方法测定利普司他汀的HPLC纯度，HPLC法的条件为：高效液相色谱仪（购自岛津株式会社的LC-10AD）；色谱柱XDB-C18（250mm×4.6mm）；流动相为90%乙腈（30：70）；流量1.0ml/min；柱温30℃；检测波长195nm；进样体积10μl。

在以下实施例中，将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液的方法可以参见（例如）科技文献：胡为民等，毒三素链霉菌生产利普司他汀的发酵与提取中国医药工业杂志，2007年第38卷第10期，705-708，但是本发明不限于此。

在以下实施例中，如无特殊说明，各试剂均市售可得，例如，可得自成都金山化学试剂有限公司。

实施例1

醋酸丁胺的制备：30g醋酸搅拌下加入36.5g丁胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀硫酸调pH3.0，加入乙醇1.5L和醋酸丁酯3.60L，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层4.1L，水洗；浓缩至干、回收醋酸丁酯，得到深黄色膏状物665.2g。加入异辛烷1.8L提取，过滤，加入0.70L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物96.4g。

加入异辛烷0.50L和醋酸丁胺65g，搅拌溶解，过滤；滤液加入异辛烷0.40L，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀51.2g。HPLC纯度84.76%，含量（即重量纯度，下同）70.14%。

实施例2

醋酸丁胺的制备：60g醋酸搅拌下加入73g丁胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀硫酸调pH4.10，加入乙醇3.0L和醋酸丁酯6.0L，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层8.2L，水洗；浓缩至干、回收醋酸丁酯，得到深黄色膏状物689.4g。混合物中加入异辛烷2.4L提取，过滤，加入1.44L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物100.3g。

加入异辛烷0.38L和醋酸丁胺38g，搅拌溶解，过滤；滤液加入异辛烷0.30L，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀53.7g。HPLC纯度82.25%，含量67.38%。

实施例3

醋酸丁胺的制备：60g醋酸搅拌下加入73g丁胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀磷酸调pH5.0，加入乙醇1.0L和醋酸丁酯3.0L，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层3.2L，水洗；浓缩至干、回收醋酸丁酯，得到深黄色膏状物622.8g。混合物中加入异辛烷1.5L提取，过滤，加入0.8L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物87.2g。

加入异辛烷0.60L和醋酸丁胺75g，搅拌溶解，过滤；滤液加入异辛烷0.36L，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀48.1g。HPLC纯度85.29%，含量73.42%。

实施例4

丁酸乙胺的制备：88g丁酸搅拌下加入45g乙胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀硫酸调pH3.5，加入甲醇2.0L和醋酸乙酯4.5L，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层5.1L，水洗；浓缩至干、回收醋酸乙酯，得到深黄色膏状物652.4g。混合物中加入戊烷2.0L提取，过滤，加入0.9L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物79.6g。

加入戊烷0.54L和丁酸乙胺55g，搅拌溶解，过滤；滤液加入戊烷0.38L，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀42.2g。HPLC纯度74.06%，含量61.51%。

实施例5

醋酸丁胺的制备：60g醋酸搅拌下加入73g丁胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀硫酸调pH4.2，加入乙醇2.3L和醋酸丁酯3.8L，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层5.3L，水洗；浓缩至干、回收醋酸丁酯，得到深黄色膏状物615.8g。混合物中加入异辛烷2.5L提取，过滤，加入0.5L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物73.7g。

加入异辛烷0.45L和醋酸丁胺110g，搅拌溶解，过滤；滤液加入异辛烷0.50L，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀45.5g。HPLC纯度86.76%，含量74.03%。

实施例6

丁酸乙胺的制备：88g丁酸搅拌下加入45g乙胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀硫酸调pH3.0，加入乙醇1.5L、1L甲醇和醋酸丁酯3.60L、6.4L乙酸乙酯，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层12.4L，水洗；浓缩至干、回收醋酸丁酯，得到深黄色膏状物752.6g。加入异辛烷2.2L提取，过滤，加入0.90L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物107.8g。

加入辛烷0.60L和丁酸乙胺75g，搅拌溶解，过滤；滤液加入异辛烷0.40L，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀52.9g。HPLC纯度84.23%，含量70.06%。

实施例7

丁酸乙胺的制备：88g丁酸搅拌下加入45g乙胺中，备用。

醋酸丁胺的制备：60g醋酸搅拌下加入73g丁胺中，备用。

将毒三素链霉菌进行发酵获得的利普司他汀发酵液10L用稀硫酸调pH4.70，加入乙醇2.5L和醋酸丁酯5.60L，搅拌萃取，静置分层，得上层有机溶剂层7.7L，水洗；浓缩至干、回收醋酸丁酯，得到深黄色膏状物681.7g。加入异辛烷1.8L、环己烷0.5L提取，过滤，加入0.95L乙腈，搅拌10～15min，静置分层；取下层，浓缩至干，回收乙腈，得到黄色油膏状物101.6g。

加入异辛烷0.50L和醋酸丁胺65g、60g丁酸乙胺，搅拌溶解，过滤；滤液加入异辛烷0.40L、0.2L戊烷，逐渐降温至-18℃，结晶，得淡黄色利普司他汀晶体。得利普司他汀48.9g。HPLC纯度82.38%，含量69.19%。

Claims

1.一种利普司他汀的提纯方法，其包括：

1)提供利普司他汀的有机溶剂萃取液；

2)将步骤1)所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液进行浓缩；

3)将步骤2)得到的浓缩物与C₅-C₂₀烷烃以及液态有机盐混合，过滤，得到滤液，其中，所述的液态有机盐选自丁酸三乙胺、丁酸二乙胺、丁酸乙胺、醋酸丁胺、醋酸二丙胺、醋酸丙胺、醋酸三丙胺、丁酸二甲胺、丁酸三甲胺、丙酸三乙胺、丙酸二乙胺、丙酸乙胺、丙酸丙胺、丙酸二丙胺以及丙酸丁胺中的一种或几种；以及

4)将步骤3)得到的滤液进行降温结晶，从而得到所述的利普司他汀。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的液态有机盐为醋酸丁胺。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的C₅-C₂₀烷烃选自戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十三烷、十四烷、十五烷、环戊烷、环己烷、环庚烷、甲基环戊烷、乙基环戊烷、丙基环戊烷、丁基环戊烷、甲基环己烷、乙基环己烷、丙基环己烷、丁基环己烷、甲基环庚烷、乙基环庚烷、丙基环庚烷以及丁基环庚烷中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的C₅-C₂₀烷烃为异辛烷。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤2)得到的浓缩物与所述的C₅-C₂₀烷烃的重量体积比为1:(2-8)，单位为g:ml。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述的重量体积比为1:(3-7)，单位为g:ml。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的C₅-C₂₀烷烃与所述的液态有机盐的体积重量比为1:(0.05-0.5)，单位为ml:g。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述的体积重量比为1:(0.1-0.25)，单位为ml:g。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤4)所述的降温结晶包括：

i)将步骤3)得到的滤液与C₅-C₂₀烷烃混合；以及

ii)将步骤i)得到的混合液降温至-20～-10℃；以进行结晶，从而得到所述的利普司他汀。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，步骤3)得到的滤液与所述的C₅-C₂₀烷烃的体积比为1:(0.4-2.5)。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述体积比为1:(0.6-1.1)。

12.根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中，在步骤1)所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液中，所述的有机溶剂包含乙腈。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液是通过以下方法得到的：

a)将经过发酵产生利普司他汀的发酵液的pH调至1.5-6.5；

b)将步骤a)得到的发酵液与第一有机溶剂以及第二有机溶剂混合，以进行萃取，分离得到含有利普司他汀的萃取液，浓缩；

c)将步骤b)得到的浓缩物用C₅-C₂₀烷烃进行提取，分离得到含有利普司他汀的提取液；以及

d)将步骤c)得到的提取液用乙腈进行萃取，分离得到所述的利普司他汀的有机溶剂萃取液；

14.根据权利要求13所述的方法，其中，步骤a)中的所述pH为3-5。

15.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤b)中，所述的第一有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇以及丙酮中的一种或几种；以及所述的第一有机溶剂与所述的发酵液的体积比为(0.08-0.8):1。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，步骤b)中的所述的第一有机溶剂为乙醇。

17.根据权利要求15所述的方法，其中，所述的第一有机溶剂与所述的发酵液的体积比为(0.1-0.6):1。

18.根据权利要求15所述的方法，其中，所述的第一有机溶剂与所述的发酵液的体积比为(0.1-0.3):1。

19.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤b)中，所述的第二有机溶剂选自如下低级酯中的一种或几种：乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯；以及所述的第二有机溶剂与所述的发酵液的体积比为(0.2-3.0):1。

20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述的第二有机溶剂为醋酸丁酯。

21.根据权利要求19所述的方法，其中，所述的体积比为(0.3-1.0):1。

22.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤c)中，步骤b)得到的浓缩物与所述的C₅-C₂₀烷烃的重量体积比为1:(2-10)，单位为g:ml。

23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述的重量体积比为1:(4-6)，单位为g:ml。

24.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤d)中，步骤c)得到的提取液与所述的乙腈的体积比为1:(0.05-2)。

25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述体积比为1:(0.2-0.5)。