CN103131739A - 制备尼泊司他汀的生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备尼泊司他汀的生产工艺，包括如下流程：配制发酵液培养基、发酵与发酵产物纯化。所述发酵液培养基含有甘油3.5％-7.0％、黄豆粉4.5％-8.0％、卵磷脂1.0％-3.5％、黄豆油5％-12％、硫酸镁0.05-0.2％、碳酸钙0.05-0.2％、磷酸二氢钾0.05-0.2％。本发明以黄豆粉、黄豆油、甘油等作为发酵培养基的主要氮源和碳源，采用超声破碎细胞，振荡提取获得尼泊司他汀粗品，随后将粗品进行重结晶得到尼泊司他汀纯品。本发明具有工艺简单、生产周期短、提取率高、生产成本低的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产工艺，具体地说涉及一种尼泊司他汀的生产工艺。
背景技术
尼泊司他汀(Lipstatin)为白色油状物，主要是作为一种化学中间体，应用于新型减肥药奥利司他的生产中。奥利司他是由发酵产物尼泊司他汀经一步加氢还原制得。
奥利司他是一种非全身作用的、具有良好耐受性和有效性的新型减肥药物，是一种强效、专一、长效的脂肪酶抑制剂，主要通过选择性抑制胃肠道胰脂肪酶的活性，阻断30％的膳食脂肪被人体吸收从而达到减轻体重的目的，为肥胖症的药物治疗开辟了新途径。它是FDA认可唯一不影响食欲的减肥药，是目前唯一作为非中枢神经系统作用上市的减肥药物，是目前全球唯一的OTC减肥药，也是目前最畅销的减肥药品。奥利司他除了能有效地减轻体重并防止体重反弹外，还能改善与肥胖相关的心血管危险因子，包括降低血压和减小腰围；改善脂质状况，降低血中胆固醇与甘油三酯的量；降低空腹时的血糖与胰岛素水平，改善血糖耐受性，增强胰岛素敏感性。
生产奥利司他的关键技术在于尼泊司他汀的发酵。目前，尼泊司他汀的发酵水平还停留在较低的水平，生产成本高限制了奥利司他的市场增长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中尼泊司他汀生产成本高、发酵效价低的缺陷，而提供一种生产成本低、发酵效价高的制备尼泊司他汀的生产工艺。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种制备尼泊司他汀的生产工艺，包括如下流程：
(A)配制发酵液培养基
所述发酵液培养基采用甘油、黄豆粉、卵磷脂、黄豆油、硫酸镁、碳酸钙和磷酸二氢钾制成，上述原料的百分比含量分别为甘油3.5％-7.0％、黄豆粉4.5％-8.0％、卵磷脂1.0％-3.5％、黄豆油5％-12％、硫酸镁0.05-0.2％、碳酸钙0.05-0.2％、磷酸二氢钾0.05-0.2％；
(B)发酵
(B1)在发酵液中接种毒三素链霉菌菌种，菌种的细菌浓度为15％-25％；
(B2)菌种发酵过程中，发酵液的温度控制在25℃左右，在发酵60-80小时时，加入无菌载氧体，加入的量为0.05-0.2g/L，继续发酵100-120小时；
(C)发酵产物纯化
(C1)将湿菌体，用去离子水清洗后，悬浮在30-80％甲醇水溶液中，产生菌与萃取剂的质量体积比为1∶20-100g/ml，控制pH值在5.5-7.5之间，采用超声仪进行微生物细胞破碎，得到含有尼泊司他汀的混合物；
(C2)将混合物振荡提取，得到含有尼泊司他汀的提取液；
(C3)将提取液离心，收集上清液，将上清夜减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品；
(C4)将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品。
进一步，所述(B2)步骤中，加入的无菌载氧体为四氟化碳。
进一步，所述(C4)步骤中，采用的有机溶剂可为乙醇、正庚烷、乙腈、正己烷，且均为工业级。
与现有技术相比，本发明以黄豆粉、黄豆油、甘油等作为发酵培养基的主要氮源和碳源，采用超声破碎细胞，振荡提取获得尼泊司他汀粗品，随后将粗品进行重结晶得到尼泊司他汀纯品，使尼泊司他汀的生产成本大大降低，发酵效价提高。
附图说明
图1为本发明制备尼泊司他汀的生产工艺的流程图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：请参阅图1，本发明揭示了一种制备尼泊司他汀的生产工艺，包括如下流程：
A、配制发酵液培养基
所述发酵液培养基采用甘油、黄豆粉、卵磷脂、黄豆油、硫酸镁、碳酸钙和磷酸二氢钾制成，所述发酵液培养基含有甘油4.0％、黄豆粉4.5％、卵磷脂1.5％、黄豆油5％、硫酸镁0.05％、碳酸钙0.05％、磷酸二氢钾0.05％。
B、发酵
B1、在发酵液中接种毒三素链霉菌菌种，菌种的细菌浓度为15％。
B2、菌种发酵过程中，发酵液的温度控制在25℃左右，在发酵60-80小时时，加入无菌载氧体，加入的量为0.05g/L，继续发酵100-120小时。
C、发酵产物纯化，包括如下步骤：
C1、将湿菌体，用去离子水清洗后，悬浮在50％甲醇水溶液中，产生菌与萃取剂的质量体积比为1∶40，pH值为5.5，超声15分钟，得到含有尼泊司他汀的混合物。
C2、将混合物振荡4小时，得到含有尼泊司他汀的提取液。
C3、将提取液在4℃、5000rpm条件下离心10分钟，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品。
C4、将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品，尼泊司他汀的效价为9.6g/L。
所述(B2)步骤中，加入的无菌载氧体为四氟化碳，所述(C4)步骤中，采用的有机溶剂可为乙醇、正庚烷、乙腈、正己烷，且均为工业级。当然，本发明并不限于此，在其它实施例中，所述(B2)步骤中也可以加入其它的无菌载氧体，所述(C4)步骤中也可以采用其它工业级的有机溶剂。
实施例2：请参阅图1，本发明揭示了一种制备尼泊司他汀的生产工艺，包括如下流程：
A、配制发酵液培养基
所述发酵液培养基采用甘油、黄豆粉、卵磷脂、黄豆油、硫酸镁、碳酸钙和磷酸二氢钾制成，所述发酵液培养基含有甘油5.0％、黄豆粉6％、卵磷脂2.5％、黄豆油8％、硫酸镁0.1％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.1％。
B、发酵
B1、在发酵液中接种毒三素链霉菌菌种，菌种的细菌浓度为20％。
B2、菌种发酵过程中，发酵液的温度控制在25℃左右，在发酵60-80小时时，加入无菌载氧体，加入的量为0.1g/L，继续发酵100-120小时。
C、发酵产物纯化，包括如下步骤：
C1、将湿菌体，用去离子水清洗后，悬浮在30％甲醇水溶液中，产生菌与萃取剂的质量体积比为1∶30，pH值为7.5，超声30分钟，得到含有尼泊司他汀的混合物。
C2、将混合物振荡2小时，得到含有尼泊司他汀的提取液。
C3、将提取液在4℃、3000rpm条件下离心30分钟，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品。
C4、将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品，尼泊司他汀的效价为10.5g/L。
所述(B2)步骤中，加入的无菌载氧体为四氟化碳，所述(C4)步骤中，采用的有机溶剂可为乙醇、正庚烷、乙腈、正己烷，且均为工业级。当然，本发明并不限于此，在其它实施例中，所述(B2)步骤中也可以加入其它的无菌载氧体，所述(C4)步骤中也可以采用其它工业级的有机溶剂。
实施例3：请参阅图1，本发明揭示了一种制备尼泊司他汀的生产工艺，包括如下流程：
A、配制发酵液培养基
所述发酵液培养基采用甘油、黄豆粉、卵磷脂、黄豆油、硫酸镁、碳酸钙和磷酸二氢钾制成，所述发酵液培养基含有甘油6.5％、黄豆粉7.5％、卵磷脂3.0％、黄豆油10％、硫酸镁0.2％、碳酸钙0.2％、磷酸二氢钾0.2％。
B、发酵
B1、在发酵液中接种毒三素链霉菌菌种，菌种的细菌浓度为25％。
B2、菌种发酵过程中，发酵液的温度控制在25℃左右，在发酵60-80小时时，加入无菌载氧体，加入的量为0.15g/L，继续发酵100-120小时。
C、发酵产物纯化，包括如下步骤：
C1、将湿菌体，用去离子水清洗后，悬浮在80％甲醇水溶液中，产生菌与萃取剂的质量体积比为1∶20，pH值为6.5，超声20分钟，得到含有尼泊司他汀的混合物。
C2、将混合物振荡3小时，得到含有尼泊司他汀的提取液。
C3、将提取液在4℃、4000rpm条件下离心15分钟，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品。
C4、将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品，尼泊司他汀的效价为10.9g/L。
所述(B2)步骤中，加入的无菌载氧体为四氟化碳，所述(C4)步骤中，采用的有机溶剂可为乙醇、正庚烷、乙腈、正己烷，且均为工业级。当然，本发明并不限于此，在其它实施例中，所述(B2)步骤中也可以加入其它的无菌载氧体，所述(C4)步骤中也可以采用其它工业级的有机溶剂。
本发明以黄豆粉、黄豆油、甘油等作为发酵培养基的主要氮源和碳源，采用超声破碎细胞，振荡提取获得尼泊司他汀粗品，随后将粗品进行重结晶得到尼泊司他汀纯品。使尼泊司他汀的生产成本大大降低，发酵效价提高。本发明具有工艺简单、生产周期短、提取率高、生产成本低的特点。
以上结合最佳实施例对本发明进行了描述，但本发明并不局限于以上揭示的实施例，而应当涵盖各种根据本发明的本质进行的修改、等效组合。
Claims (3)
1.一种制备尼泊司他汀的生产工艺，其特征在于，包括如下流程：
(A)配制发酵液培养基
所述发酵液培养基采用甘油、黄豆粉、卵磷脂、黄豆油、硫酸镁、碳酸钙和磷酸二氢钾制成，上述原料的百分比含量分别为甘油3.5％-7.0％、黄豆粉4.5％-8.0％、卵磷脂1.0％-3.5％、黄豆油5％-12％、硫酸镁0.05-0.2％、碳酸钙0.05-0.2％、磷酸二氢钾0.05-0.2％；
(B)发酵
(B1)在发酵液中接种毒三素链霉菌菌种，菌种的细菌浓度为15％-25％；
(B2)菌种发酵过程中，发酵液的温度控制在25℃左右，在发酵60-80小时时，加入无菌载氧体，加入的量为0.05-0.2g/L，继续发酵100-120小时；
(C)发酵产物纯化
(C1)将湿菌体，用去离子水清洗后，悬浮在30-80％甲醇水溶液中，产生菌与萃取剂的质量体积比为1∶20-100g/ml，控制pH值在5.5-7.5之间，采用超声仪进行微生物细胞破碎，得到含有尼泊司他汀的混合物；
(C2)将混合物振荡提取，得到含有尼泊司他汀的提取液；
(C3)将提取液离心，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品；
(C4)将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品。
2.如权利要求1所述的制备尼泊司他汀的生产工艺，其特征在于：所述(B2)步骤中，加入的无菌载氧体为四氟化碳。
3.如权利要求1所述的制备尼泊司他汀的生产工艺，其特征在于：所述(C4)步骤中，采用的有机溶剂可为乙醇、正庚烷、乙腈、正己烷，且均为工业级。
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