CN104415046B - 一种芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的应用 - Google Patents
一种芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种芹菜素‑7‑o‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷的应用,属于药物应用领域,芹菜素‑7‑o‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷在制备抑制动脉和静脉血栓的形成药物中的应用,可以在一定程度上抑制血栓的形成。
Description
技术领域
本发明属于药物应用领域,具体涉及黄酮苷类化合物的应用。
背景技术
血液发生凝固或血液中的某些有形成分互相粘集,形成固体质块的过程,称为血栓形成(thrombosis),在这个过程中所形成的固体质块称为血栓(thrombus)。血栓由不溶性纤维蛋白、沉积的血小板、积聚的白细胞和陷入的红细胞组成。血栓分为:白色血栓、混合血栓、红色血栓和透明血栓。
在生理状态下,血液中的凝血因子不断地被激活,从而产生凝血酶,形成微量纤维蛋白,沉着于血管内膜上,但这些微量的纤维蛋白又不断地被激活了的纤维蛋白溶解系统所溶解,同时被激活的凝血因子也不断地被单核吞噬细胞系统所吞噬。这种相互拮抗的凝血系统和抗凝血系统保持着动态平衡,在某些条件作用下,打破了这种动态平衡,即发生凝血过程,形成血栓。
血栓形成机理主要涉及血管壁、血小板、凝血、纤溶和血流,血流状态改变是血栓形成条件之一,血小板和凝血因子是血栓形成的必须物质,其功能激活是高凝状态的表现,纤溶活性对血栓的结局起着重要的作用。无论心或动脉、静脉内的血栓,其形成过程都从血小板粘附于内膜裸露的胶原开始,也就是说,血小板粘集堆的形成是血栓形成的第一步。因此我们选用血栓素合成酶抑制剂——奥扎格雷钠注射液作为阳性对照药,通过抑制血栓烷A2(TXA2)的产生及促进前列环素(PGI2)的生成而改善两者间的平衡失调,从而发挥抗血小板聚集和扩张血管的作用。
目前还没有有关芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在抑制血栓形成方面的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在抑制血栓形成药物中的应用。
本发明所采用的技术方案是:
一种芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷的应用,所述芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在抑制血栓形成的药物中的应用。
所述芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在抑制静脉血栓形成的药物中的应用。
所述芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在抑制动脉血栓形成的药物中的应用。
为了实现上述技术方案将所述药物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、注射用冻干粉针剂。
为了验证所述药物的抑制血栓作用,做了以下实验
实验1
1 实验材料
1.1 供试品
芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷为苦碟子提取的单体化合物,纯度大于90%,供试品号:TN-1210。由石家庄以岭药业股份有限公司提供,批号:20121025。
阳性药及工具药
注射用奥扎格雷钠,苏州二叶制药有限公司,批号:120606。
生理盐水,石家庄四药有限公司,批号:121215162
水合氯醛,天津大茂化学试剂厂,批号:20090628
1.3 实验系统
1.3.1 动物种系:SD大鼠。
1.3.2 动物级别:SPF级。
1.3.3 动物性别和数量:96只,雄性。
1.3.4 动物年龄:约4~6周龄。
1.3.5 动物体重:200-250g。
1.3.6 动物来源:购于中国食品药品检定研究院。
1.3.7 动物合格证号及发证单位、接收日期:合格证编号11400500000953,许可证号SCXK(京)2009-0017,发证单位是中国食品药品检定研究院,接收日期2013年6月17日。
1.3.8 饲养条件:大鼠笼养,饲养在河北省中西医结合医药研究院新药评价中心,光照12小时/天,温度20~26℃,相对湿度40~70%。
1.3.9 检疫过程:新到的动物检疫期6天,检疫期间观察动物饮水、摄食和健康状况,以及是否存在疾病和死亡征兆。
1.3.10 饲料:实验动物全价颗粒饲料,由北京科澳协力饲料有限公司提供,生产许可证:SCXK(京)2009-0012。
1.3.11 饮水:瓶装普通饮用水,动物自由饮用。每日冲洗水瓶并换水一次。
1.3.12 垫料:购自河北省实验动物中心,隔日更换。
1.3.13 标识:动物识别采用5%苦味酸标记。
实验方法
2.1 实验设计依据
2.1.1 采用标准:国家食品药品监督管理局颁布的《药品注册管理办法》,中药、天然药物注册分类及申报资料要求。
2.1.2 实验系统选择说明:静脉血栓形成与血流缓慢、凝血因子活性增高及血管壁受损有密切关系。实验采用下腔静脉结扎方法,其原理为:静脉结扎后可起局部血流淤滞,缺氧致血管内应受损,启动内源性凝血系统,粘聚的血小板与局部形成的凝血因子也因血流受阻而停留在局部,致使局部形成血小板血栓。
剂量与分组
芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷设置3个剂量组,分别为5、2、0.8mg/kg,另设奥扎格雷钠阳性药对照组、模型对照组。奥扎格雷钠剂量为26.7mg/kg(临床用量160mg/天/人),根据以上剂量设置情况,将60只大鼠按体重随机分为5组,每组12只,具体分组和剂量见附表1。
给药方法
经尾静脉注射给药。
供试品配制和保存
根据尾静脉注射体积为1ml/100g,计算芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷各剂量组的配制浓度,具体见附表1,临用前生理盐水稀释至所需浓度,0.22μm滤膜过滤除菌,临用前配制。注射用雷钠每支规格为80mg,每支加生理盐水定容至30ml,浓度即为2.67mg/ml。
供试品的给予
用一次性注射器抽取药液进行尾静脉注射,体积为1ml/100g体重,模型组尾静脉给予同体积的生理盐水,连续给药3天。
模型制备
术前禁食12h,末次给药后30分钟,以10%水合氯醛腹腔麻醉,仰卧位固定于动物解剖板上,备皮、消毒。在下腹部正中切口,长3~4 cm,显露腹腔,将部分小肠移离腹腔,剥离腹膜暴露下腔静脉,分离下腔静脉与腹主动脉。在左肾静脉下方结扎下腔静脉(及该段下腔静脉的主要属支),将外露小肠放回腹腔,注射器喷洒生理盐水保护小肠,逐层缝合腹壁。2h后重新打开腹腔,在结扎下方2cm 处用止血钳夹住下腔静脉,下腔静脉封闭段用注射器吸静残血,纵行剪开管腔,观察有无血栓形成,如有,轻轻取出血栓,用滤纸吸去残余血液后称取湿重,60℃烘箱中烘干,4h后称干重。并计算血栓形成抑制率。
试验操作注意事项:①测试前大鼠应禁食。②剥离大鼠下腔静脉时,避免损伤腹主动脉,以免实验失败。③静脉韧性较差不可用力牵拉。④结扎选用较细结扎线避免结扎不牢还有血管内血流通过。
观测的指标、时间和内容
血栓重量:手术完毕后,将血管剖开取出血栓,用滤纸去除粘附的血液记录血栓湿重(操作时尽量将血栓全部取出,同时应减少残留血液的干扰)。再置于烘箱中,60℃烘烤4h至恒重,精确称量干重。并按如下公式计算血栓形成抑制率。
相关工作人员通知
购买动物时通知动物室,在动物出现异常情况时通知病理室进行处理。
仪器系统
DT2000电子天平,常熟双杰测试仪器厂。
YP-3000电子天平,上海越平科学仪器有限公司。
AL204电子天平,METTLER POLEDO。
101-1A数显电热鼓风干燥箱,上海阳光实验仪器有限公司。
统计方法
数据用均数±标准差(±s)表示,采用SPSS统计软件包,首先进行正态性检验,符合正态分布的数据,均数比较用单因素方差分析,若方差齐,两两比较采用最小显著差法,若方差不齐则采用Dunnett’sT3检验行两两比较;如不符合正态分布,则用非参数检验进行统计分析。
结果(详见附表1)
血栓形成结果见附表1;模型对照组血栓平均干重为5.04mg,阳性药奥扎格雷组血栓平均干重为2.63mg,明显低于模型组(P<0.05),血栓抑制率为47.8%。 芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷高剂量(5mg/kg)血栓平均干重为2.66mg,芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷中剂量(2mg/kg)血栓平均干重为2.79mg,血栓抑制率分别为47.2%和44.6%,均明显低于模型组(P<0.05)。其他各给药组虽有一定程度的降低趋势,但均未见统计学意义。
表1 静脉注射芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对大鼠下腔静脉血栓形成重量的比较
注:与模型组比较:*P<0.05。
结论
在实验造模过程中发现大鼠下腔静脉血管分支有着很明显的个体差异,结扎下腔静脉和主要分支后,由于还存在部分血流,造成部分动物未能形成血栓,使有效动物数下降,对实验统计结果造成一定影响。本实验以腔静脉结扎方法致使大鼠下腔静脉内局部成血小板血栓。观察芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷分别以5mg/kg、2mg/kg、0.8mg/kg静脉给药后对血栓形成的影响。实验结果表明:芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷以5mg/kg、2mg/kg对血栓形成有较好的抑制作用。
实验2
实验目的
采用电刺激法所致的大鼠颈动脉血栓形成模型,观察芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对颈动脉血栓形成的影响。
实验材料
1.1 供试品
1.1.2 名称:芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷,黄色粉末,为苦碟子提取的单体化合物,纯度大于90%,供试品号:TN-1210。由石家庄以岭药业股份有限公司提供,批号:20121025。
阳性药及工具药
奥扎格雷钠注射液,山西恒大制药有限公司,批号:120302。
水合氯醛,天津市大茂化学试剂厂,批号:20090228。
生理盐水,石家庄四药有限公司,批号:120421405。
实验系统
1.3.1 动物种系:SD大鼠。
1.3.2 动物级别:SPF级。
1.3.3 动物性别和数量:100只(包含模型练习动物4只),全部为雄性。
1.3.4 动物年龄:约4~6周龄。
1.3.5 动物体重:180-200g。
1.3.6 动物来源:购于中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所。
1.3.7 动物合格证号及发证单位、接收日期:合格证编号0294655,许可证号SCXK(京)2009-0017,发证单位是中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所,接收日期2013年1月11日。
1.3.8 饲养条件:大鼠笼养,饲养在河北省中西医结合医药研究院新药评价中心,光照12小时/天,温度20~26℃,相对湿度40~70%。
1.3.9 检疫过程:新到的动物检疫期3天,在检疫期间观察动物饮水、摄食和健康状况,以及是否存在疾病和死亡征兆。
1.3.10 饲料:实验动物全价颗粒饲料,由北京科澳协力饲料有限公司提供,生产许可证:SCXK(京)2009-0012。
1.3.11 饮水:瓶装普通饮用水,动物自由饮用。每日冲洗水瓶并换水一次。
1.3.12 垫料:购自河北省实验动物中心,隔日更换。
1.3.13 标识:动物识别采用5%苦味酸标记。
实验方法
2.1 实验设计依据
2.1.1 采用标准:国家食品药品监督管理局颁布的《药品注册管理办法》,中药、天然药物注册分类及申报资料要求。
2.1.2 实验系统选择说明:YLS-14B动物血栓生成仪采用了物理方法(直流电刺激),损毁颈动脉血管的内皮细胞,从而激活凝血因子,启动凝血机制,造成血小板和纤维蛋白聚集,形成一种混合性的血栓,这种血栓近似人体的起始血栓,用红外监测装置监测血栓形成过程,对血栓形成引起的血流脉动变化进行全程的监测,及时捕捉到血栓全阻塞血管的时间。
剂量与分组
芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷设置3个剂量组,分别为5、2、0.8mg/kg,另设奥扎格雷钠阳性药对照组、模型对照组。奥扎格雷钠剂量为26.7mg/kg(临床用量160mg/天/人),根据以上剂量设置情况,将60只大鼠按体重随机分为下列5组,每组12只,具体分组和剂量见附表2。
给药方法
经尾静脉注射给药。
供试品配制和保存
根据尾静脉注射体积为1ml/100g,计算芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷各剂量组的配制浓度,具体见附表1,临用前生理盐水稀释至所需浓度,0.22μm滤膜过滤除菌。奥扎格雷钠每支规格为2ml:40mg,取2ml加生理盐水定容至15ml,浓度即为2.67mg/ml。
供试品的给予
用一次性注射器抽取药液进行尾静脉注射,体积为1ml/100g体重,模型组尾静脉给予同体积的生理盐水,连续给药3天。
模型制备
末次给药后30分钟,以10%水合氯醛腹腔麻醉,仰卧位固定于动物解剖板上,剥离大鼠的左侧颈总动脉,剥离长度约1.5cm,将YLS-14B小动物血栓生成仪的血栓探头上的压板打开,将剥离好的颈总动脉勾入探头的沟槽内,探头上标出的血流方向应与被测动物颈总动脉的血流方向一致。轻轻放下压板,使血栓探头与动物身体保持垂直,将上端软线放入固定支架的夹子内同定,调整好高度和方向。将刺激电流控制在1.5mA,电刺激时间定为5min(预实验确定电流控制和刺激时间),间隔4s记录1次血管栓塞率,动态观察颈动脉栓塞形成程度和时间。
试验操作注意事项:①测试前大鼠应禁水12h,减少体液分泌。②剥离大鼠颈总动脉时,避免损伤神经,以免影响实验结果。③剥离颈动脉时应向远心端剥离。④实验时不要加生理盐水或其它液体。⑤腔内有较多体液时请用纱布蘸出。⑥每做完一只动物时请用滤纸吸干探头槽中的体液和血液。⑦请使用配带的解剖照明灯,如用其它灯光近距离照明时应在开启仪器前关掉灯光,避免干扰。
观测的指标、时间和内容
血栓生成仪间隔4s记录1次血管栓塞率,共记录5min,取其平均值即5min内的平均栓塞率作为评价指标。
相关工作人员通知
购买动物时通知动物室,在动物出现异常情况时通知病理室进行处理。
仪器系统
AL204电子天平,METTLER POLEDO。
DT2000电子天平:常熟双杰测试仪器厂。
YP-3000电子天平,上海越平科学仪器有限公司。
YLS-14B小动物血栓生成仪,济南益延科技发展有限公司。
统计方法
数据用均数±标准差(±s)表示,采用SPSS统计软件包,首先进行正态性检验,符合正态分布的数据,均数比较用单因素方差分析,若方差齐,两两比较采用最小显著差法,若方差不齐则采用Dunnett’sT3检验行两两比较;如不符合正态分布,则用非参数检验进行统计分析。
结果
实验结果见附表2:模型组5min内的平均血管栓塞率为61.30%,阳性对照药奥扎格雷钠栓塞率为39.14%,明显低于模型组(P<0.05);芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷高剂量组(5mg/kg)、中剂量组(2mg/kg)栓塞率分别为37.62、41.65%,均明显低于模型组(P<0.01,P<0.05),芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷低剂量组(0.8mg/kg)栓塞率为51.15%,与模型组比较未见统计学差异(P>0.05)。
表2 芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对大鼠颈动脉血栓形成的影响
注:各给药组与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01。
结论
在实验造模过程中发现大鼠个体差异,造成部分动物未能形成血栓,使有效动物数下降,本实验采用电刺激法所致的大鼠颈动脉血栓形成模型,观察芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷对颈动脉血栓形成的影响。实验结果表明:芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷高剂量组(5mg/kg)和中剂量组(2mg/kg)均可显著降低大鼠颈动脉5min内的血管栓塞率,提示芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷在一定程度上可抑制大鼠颈动脉血栓的形成。
具体实施方式
实施例1:片剂制备
称取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷30g,加入微晶纤维素100g,乳糖200g,充分混匀,加入交联羧甲基纤维素钠,混合均匀,用24目筛制粒,70℃烘干,整粒,加入1%硬脂酸镁,混匀,压片,制成1000片片剂。
实施例2:胶囊剂制备
称取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷12g,加入微晶纤维素50g,加入交联聚维酮10g,乳糖130g,充分混匀,加入5%聚维酮K30水溶液30ml,再加水15ml,充分搅拌,混合均匀,用24目筛制粒,70℃烘干,整粒,加入1%硬脂酸镁,混匀,装入胶囊得1000粒胶囊。
实施例3:颗粒剂制备
称取30g芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷,加入蔗糖500g,糊精2500g,充分混匀,加水180ml,充分搅拌,混合均匀,用24目筛制粒,70℃烘干,整粒,分装成500袋。
实施例4:滴丸剂制备
称取1000g聚乙醇6000,70℃水浴熔化,加入30g芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷原料,边加边搅拌,加完充分搅拌,滴制成丸,制成1000粒滴丸。
实施例5:注射用冻干粉针剂的制备
称取30g芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷原料,加入注射用水充分溶解,调节PH值至7.4,0.2μm微孔滤膜滤过,封装至1000支安瓿。
Claims (1)
1.芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷片在制备抑制静脉血栓形成的药物中的应用,其特征在于,所述芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷片的制备方法为: 取芹菜素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷30g,加入微晶纤维素100g,乳糖200g,充分混匀,加入交联羧甲基纤维素钠,混合均匀,用24目筛制粒,70℃烘干,整粒,加入1%硬脂酸镁,混匀,压片,制成1000片。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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