CN104406992A - 一种透射电镜检测古代丝织品的方法 - Google Patents

一种透射电镜检测古代丝织品的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种透射电镜检测古代丝织品的方法，采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。本发明的有益成果为：1本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，操作简便，易于分析。

Description

一种透射电镜检测古代丝织品的方法
技术领域
本发明属于古代丝织品的检测领域，尤其涉及一种透射电镜检测古代丝织品的方法。
背景技术
丝绸是中华民族宝贵的文化和物质遗产，但是近年来关于丝绸的起源问题却众说纷纭，难以有一个简便的科学论据。关于古代丝绸的检测，传统的检测方法主要有显微镜观察，光谱，质谱分析等，但是由于受到墓葬环境的影响，丝绸已经腐烂不堪，面目全非，并且受到杂质的干扰，谱图出现很多杂峰，后期解析极为困难。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：针对上述现有技术存在的问题提出一种快速、简单的透射电镜检测古代丝织品的方法。
为此本发明所采取的技术方案是：一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下：
A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；
B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%-10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120μL的PBS溶液，II 组加入80-120μL的由PH7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50-70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
本发明采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。
本发明的有益成果为：1 本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2 与现有技术相比，本发明成本低，操
作简便，易于分析。
具体实施方式
实施例1采用步骤如下：
A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；
B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入质量浓度为1.0ml的1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心40min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80μL的PBS溶液，II 组加入80μL的由PH7.4的PBS溶液稀释10倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
实施例2采用步骤如下：
A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；
B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为40nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.3ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体35μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在10000r/min下离心50min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入100μL的PBS溶液，II 组加入100μL的由PH7.4的PBS溶液稀释30倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成60nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
实施例3采用步骤如下：
A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；
B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体50μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在11000r/min下离心60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入120μL的PBS溶液，II 组加入120μL的由PH7.4的PBS溶液稀释50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。

Claims (1)

1.一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下：
A)PBS7.4洗涤液配制：KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4；
B)金纳米粒子的制备：采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备：用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50μL；所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%-10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4℃下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为I、II，放置于打孔皿中；I设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120μL的PBS溶液，II 组加入80-120μL的由PH7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37℃下孵育1h；然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105372420A (zh) * 2015-11-12 2016-03-02 浙江理工大学 一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法
CN107365377A (zh) * 2017-08-01 2017-11-21 浙江理工大学 一种用于文物检测的麻纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法
CN108680405A (zh) * 2018-03-21 2018-10-19 浙江理工大学 一种碱老化桑蚕丝模拟丝绸文物样的方法
CN109187510A (zh) * 2018-09-05 2019-01-11 浙江理工大学 一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0543600A (ja) * 1991-08-08 1993-02-23 Kanebo Ltd 抗体または抗原固定化絹フイブロイン膜および免疫測定用センサー
JPH0572205A (ja) * 1991-09-14 1993-03-23 Kanebo Ltd 免疫測定方法及び装置
CN103509108A (zh) * 2013-08-07 2014-01-15 浙江大学 利用特征十二多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法
CN103509107A (zh) * 2013-08-07 2014-01-15 浙江大学 利用特征多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法
CN104059131A (zh) * 2014-07-04 2014-09-24 丝科普乐（北京）生物科技有限公司 抗丝素蛋白多克隆抗体及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0543600A (ja) * 1991-08-08 1993-02-23 Kanebo Ltd 抗体または抗原固定化絹フイブロイン膜および免疫測定用センサー
JPH0572205A (ja) * 1991-09-14 1993-03-23 Kanebo Ltd 免疫測定方法及び装置
CN103509108A (zh) * 2013-08-07 2014-01-15 浙江大学 利用特征十二多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法
CN103509107A (zh) * 2013-08-07 2014-01-15 浙江大学 利用特征多肽制备家蚕丝素蛋白特异抗体的方法
CN104059131A (zh) * 2014-07-04 2014-09-24 丝科普乐（北京）生物科技有限公司 抗丝素蛋白多克隆抗体及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
郑秦等: "利用丝素蛋白抗体鉴定古代丝织品", 《蚕业科学》, vol. 40, no. 3, 15 June 2014 (2014-06-15), pages 520 - 526 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105372420A (zh) * 2015-11-12 2016-03-02 浙江理工大学 一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法
CN107365377A (zh) * 2017-08-01 2017-11-21 浙江理工大学 一种用于文物检测的麻纤维素酶解产物偶联蛋白质的制备方法
CN108680405A (zh) * 2018-03-21 2018-10-19 浙江理工大学 一种碱老化桑蚕丝模拟丝绸文物样的方法
CN109187510A (zh) * 2018-09-05 2019-01-11 浙江理工大学 一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法
CN109187510B (zh) * 2018-09-05 2020-10-16 浙江理工大学 一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法

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