CN104388327B - 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料 - Google Patents

一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料 Download PDF

Info

Publication number
CN104388327B
CN104388327B CN201410386448.1A CN201410386448A CN104388327B CN 104388327 B CN104388327 B CN 104388327B CN 201410386448 A CN201410386448 A CN 201410386448A CN 104388327 B CN104388327 B CN 104388327B
Authority
CN
China
Prior art keywords
prawn
strain
enterococcus faecium
survival rate
present
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410386448.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104388327A (zh
Inventor
李晓清
何增国
王凡
刘婷
马青山
鲁春雨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Dabei Nonghuayou Aquatic Technology Co ltd
Beijing Dabeinong Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Beijing Weinong Biotechnology Co ltd
Liaoning Dabei Agricultural Technology Co ltd
Beijing Dabeinong Technology Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Weinong Biotechnology Co ltd, Liaoning Dabei Agricultural Technology Co ltd, Beijing Dabeinong Technology Group Co Ltd filed Critical Beijing Weinong Biotechnology Co ltd
Priority to CN201410386448.1A priority Critical patent/CN104388327B/zh
Publication of CN104388327A publication Critical patent/CN104388327A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104388327B publication Critical patent/CN104388327B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
    • Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures

Abstract

本发明属于微生物技术领域，涉及一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料。本发明以一株屎肠球菌为出发菌株，通过紫外诱变处理，筛选获得耐高温、耐胆盐菌株，该菌株与出发菌株相比，耐高温存活率提高22.31倍，耐胆盐（0.3%BS）存活率3.40倍，耐胆盐（0.6%BS）存活率27.69倍。本发明的屎肠球菌经过10次以上传代培养不退化，具有遗传稳定性。用本发明屎肠球菌制备的诱食剂诱使对虾平均摄食速度较快，对虾摄食量比对照组提高约10%；在阴雨天中，保持了对虾正常摄食，增强了对虾的抗逆性。

Description

一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料。
背景技术
屎肠球菌(Enterococcus faecium)属肠球菌属，是人及动物肠道中正常菌群的一部分。还用于改善食品和饲料的质量。它相对于严格厌氧、培养保藏苛刻的双歧杆菌、乳杆菌来说，便于生产和使用。1989年美国FDA公布将屎肠球菌纳入直接用于动物的菌种之一。大量实验证明，由屎肠球菌组成的益生素可提高幼年畜禽的体增重，改善饲料报酬，减少腹泻率，降低死亡率。另外，屎肠球菌代谢产生有机酸、双乙酰、过氧化氢、细菌素等，这些物质具有抑制病原菌与腐败菌、提高机体免疫力、改善畜禽产品品质的生理功效。因此，屎肠球菌在食品工业及畜牧生产中有着广泛的应用前景。
另一方面，屎肠球菌同大部分乳酸菌一样，其耐高温性等抗逆性能差，该因素制约了其大规模生产应用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明通过诱变，提供较高热耐受性和胆盐耐受性的屎肠球菌，且显著高于野生菌株，应用在水产养殖中，提高虾的采食速度。
本发明首先提供一种屎肠球菌（Enterococcus faecium）新菌株，其保藏号为CGMCC No.9134。
本发明的屎肠球菌分离自猪肠道，并通过紫外诱变筛选获得，具体过程如下：
(1) 生长曲线的测量：出发菌株来源于猪肠道，经鉴定为屎肠球菌，革兰氏染色，菌体形态见图1。将其活化两次，接入500mL液体培养基（1L三角瓶）中，37℃培养，每两小时测一次OD值。横坐标为时间，纵坐标为OD值，绘制生长曲线。同时用螺旋自动接种仪测量菌浓度。
(2) 菌悬液的制备：将出发菌活化1~2次后，接种于500mL液体培养基（1L三角瓶）中，根据生长曲线，37℃振荡培养8-10h到对数生长期，取菌液用灭菌的生理盐水洗菌3次，将其配制成浓度为1×108cfu/mL菌悬液。
(3) 致死率：取6个直径为6 cm的无菌培养皿，每平皿加入3~5 mL菌液。紫外预热20-30min，在搅拌状态下，选用15-20 W的紫外灯，照射距离为28 cm，照射时间分别为10s 、20s、40s、60s、2min、4min。 根据诱变时间做适当稀释，各取100 μL涂平板，每个稀释度有3个平行。将原液稀释至10-6，10-7作为对照，每个稀释度有3个平行。避光，37℃培养3d。计算致死率，结果见下表。
表1 紫外诱变致死率
(4) 诱变选育：选择致死率在70%~85%的诱变时间，对出发菌株进行紫外诱变取2个直径为6cm的无菌培养皿，每平皿加入3~5 mL菌液。紫外预热20~30min，在搅拌状态下，选用15~20 W的紫外灯，照射距离为28 cm，照射时间为致死率在70%~85%的诱变时间即10 s和20s，将诱变后的菌液接种的新鲜的液体培养基中，45℃、50℃和55℃避光培养2~3天。菌液变浑浊后，用螺旋自动接种将其分离，挑选菌落形态与出发菌株变化较大的菌株100~300株，对其80℃处理5min，比较突变株的存活率。将存活率较高的10~60株4℃保藏，再其进行胆盐耐受性比较，其中编号为1-10（即CGMCC No.9134）的菌株表现较好，命名为UE01。
（5）稳定性：将筛选获得的菌株在摇瓶中复苏，37℃，恒温培养箱培养1天，连续传代10次，测定其热耐受和胆盐耐受性，即得。
本发明所述的屎肠球菌突变株的特征为：
（1）诱变株UE01菌液80℃处理5min，存活率为0.18%，相对出发菌株提高22倍。
（2）诱变株UE01菌液0.3%处理3h，存活率为20.80%，相对出发菌株提高3.04倍。
（3）诱变株UE01菌液0.6%处理3h，存活率为21.6%，相对出发菌株提高27.69倍。
（4）诱变株UE01最适发酵条件为：培养温度37℃，接种菌龄12h、接种量3%，初始pH值为7.8。
本发明的屎肠球菌新菌株UE01于2014年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC No.9134。
本发明还提供含有所述菌株的微生态制剂。
本发明还提供含有所述菌株的饲料添加剂，饲料添加剂中所述屎肠球菌的活菌数为109-1010cfu/mL。
本发明的屎肠球菌还可以添加到预混料中，因此，本发明还提供含有所述菌株或所述饲料添加剂的预混料。
本发明的菌株可以提高水产对食物的采集速度和采集量，因此，本发明还提供所述菌株在水产诱食中的应用。
本发明的积极效果在于：诱变的屎肠球菌新菌株经过10次以上的传代培养不退化，具有遗传稳定性，且抗逆性远远比出发菌株提高很多。用本发明屎肠球菌制备的诱食剂诱使对虾平均摄食速度较快，对虾摄食量比对照组提高约10%；在阴雨天中，保持了对虾正常摄食，增强了对虾的抗逆性。
附图说明
图1：出发菌株菌体形态（左）与CGMCC No.9134（右）。
图2：菌株热耐受性比较。
图3：菌株胆盐耐受性比较。
图4：菌株3°海盐培养基中生长情况。
图5: 试验塘对虾日摄食量统计图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用是对本发明的阐述而不是对本发明任何形式的限制。
实施例1 耐热试验
出发菌株屎肠球菌，经过20w紫外灯距离28cm照射20秒，避光高温培养3天。将几株耐热较好的突变株与出发菌株单菌落，进行液体活化，37℃过夜，各取1mL，经过80℃水浴处理5min，稀释，取适当的稀释度进行涂布MRS平板，3个平行。以为经高温处理菌液为对照，稀释涂布。按照公式（1）计算菌株存活率较好的部分菌株结果见图2。有图2可知，突变株1-8、1-9、1-10（即CGMCC No.9134）和1-17均较突出，其中，CGMCC No.9134存活率最高，达到0.18%，与出发菌株相比，提高22.31倍。
存活率 = （1）
实施例2 耐胆盐试验
测突变株胆盐耐受性，将几株耐热较好的突变株与出发菌株单菌落，进行液体活化，37℃过夜，各取1mL，8000rpm离心10min，加入1mL含有0.3%猪胆盐的MRS培养基，37℃静置3h。稀释，取适当的稀释度进行涂布MRS平板，3个平行。以为经处理菌液为对照，稀释涂布。按照公式（1）计算菌株存活率。较好菌株的部分结果见图3。经过胆盐0.3%处理3h，较好的部分菌株结果见图3。有图3可知，突变株1-4、1-10（即CGMCC No.9134）、1-15和1-16均较突出，其中，CGMCC No.9134存活率最高，达到53.13%，与出发菌株相比，提高3.40倍。将CGMCC No.9134与出发菌株进行胆盐0.6%处理3h，检测其耐受性，其存活率分别为21.6％和0.78％，CGMCC No.9134较出发菌株提高了27.69倍。
实施例3 耐海盐试验
采用3°海盐水配置MRS，将活化好的突变株与出发菌株，等浓度接种到其中，30℃培养16h，涂布计数。结果由图4可见，突变株1-4、1-10（即CGMCC No.9134）和1-16均能很好的在该海盐度的环境中很好地生长，达到1010cfu/mL，其中，CGMCC No.9134最高，2.63×1010 cfu/mL。
对比例1
测突变株1-10（即CGMCC No.9134）、出发菌株07及赐美健菌株的热耐受性及胆盐耐受性。取三株菌的单菌落，平板活化，接种到ＭRS液体培养基中，37℃培养过夜。采用实施例1中的方法，检测1-10、出发菌株07及赐美健菌株的热耐受性。采用实施例2中的方法，检测1-10、出发菌株07及赐美健菌株的胆盐耐受性。结果见表2，由该表可见，较之赐美健，在热耐受和胆盐耐受方面，1-10的性能都超出很多，分别是其2.3倍、16.5倍及288倍。
表2 与市场上优秀产品菌株的比较
试验例1
1）培养基灭菌：
培养基配方：20g/L果糖、10g/L牛肉膏、5g/L酵母膏、5g/L硫酸镁、5g/L NaCl、5%CaCO3。
配制培养基，注水（自来水即可），灭菌温度为115℃，时间为20min，调节pH值至6.8；
2）稳定理化指标：
发酵罐转速200rpm，通风1:0.23vvm，罐压维持在0.05MPa，液体理化指标稳定后，标定溶解氧。
3）接种发酵：
按照1%的比例接种，培养条件：温度33℃，转速100rpm，罐压为0.05兆帕，通风量为1:0.23vvm。该状态下，培养20h下罐，下罐时活菌数为1×109cfu/ml以上。
4）后处理：
将发酵后的发酵液中，按照质量分数5%添加海盐，按照质量分数2.5%添加黄原胶，海水盐增加发酵液渗透压，抑制屎肠球菌代谢，从而防止其产生气体，但并不造成乳酸菌死亡；黄原胶维持发酵液液相均一稳定，保证发酵液不分层。
5）下罐灌装：
发酵后，将发酵液灌装、压盖、贴标和装箱，灌装即得。
本试验于2013年11月10日至30日选取广东省广州市金海水产养殖基地2口南美白对虾养殖池塘作为研究对象，通过设置饵料台，对养殖池塘对虾摄食状况的监测与统计来研究判断本发明菌株发酵液的诱食效果。其中，试验塘与对照塘基本状况见下表3：
表3 试验塘和对照塘的基本情况
结果表明：试验塘对虾平均摄食速度较快，对虾摄食量比对照组提高约10%；在阴雨天中，保持了对虾正常摄食，增强了对虾的抗逆性，具体摄食状况详见图5。
2014年1月8日至30日于福建漳浦县冬棚对虾高位池进行试验，统计结果表明：本发明发酵液诱食效果明显，高位池对虾摄食量从每餐40斤提升至45斤，对虾活力、状态明显提升。

Claims (2)

1.一种水产动物诱食剂，其含有屎肠球菌（Enterococcus faecium）的发酵液，和占发酵液5%质量分数的海盐、占发酵液2.5%质量分数的黄原胶，屎肠球菌保藏编号为CGMCCNo.9134。
2.权利要求1所述的水产动物诱食剂在水产诱食中的应用。
CN201410386448.1A 2014-08-07 2014-08-07 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料 Active CN104388327B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410386448.1A CN104388327B (zh) 2014-08-07 2014-08-07 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410386448.1A CN104388327B (zh) 2014-08-07 2014-08-07 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104388327A CN104388327A (zh) 2015-03-04
CN104388327B true CN104388327B (zh) 2018-05-08

Family

ID=52606288

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410386448.1A Active CN104388327B (zh) 2014-08-07 2014-08-07 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104388327B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106387488B (zh) * 2015-12-28 2019-10-15 天津昌农科技有限责任公司 一种膨化鲤鱼饲料及其制备方法
CN108531408B (zh) * 2017-03-06 2021-11-05 福建大北农水产科技有限公司 一株胶红酵母新菌株及微生态制剂
CN108660097B (zh) * 2018-05-23 2021-11-09 天津农学院 一株鱼源屎肠球菌r8的筛选及应用
CN111690560B (zh) * 2020-06-10 2022-04-08 青岛玛斯特生物技术有限公司 一种屎肠球菌及其在水产养殖中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559545A (zh) * 2011-12-15 2012-07-11 北京大北农科技集团股份有限公司 一种水产用复合微生态制剂及其预混料
CN102747003A (zh) * 2011-12-29 2012-10-24 武汉华大瑞尔科技有限公司 一株益生屎肠球菌的筛选及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559545A (zh) * 2011-12-15 2012-07-11 北京大北农科技集团股份有限公司 一种水产用复合微生态制剂及其预混料
CN102747003A (zh) * 2011-12-29 2012-10-24 武汉华大瑞尔科技有限公司 一株益生屎肠球菌的筛选及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN104388327A (zh) 2015-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103981115B (zh) 一株高抗逆性屎肠球菌及其应用
CN103981118B (zh) 一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法和应用
CN103981117B (zh) 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用
CN101999525B (zh) 一种复合益生素饲料添加剂
CN103468613B (zh) 一种巨大芽孢杆菌及其固体发酵制备菌剂的方法和应用
CN102293340B (zh) 一种可提高免疫功能的猪用复合预混料
CN106318880B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌、由其制备的抑菌剂及用途
CN101671638B (zh) 一种双歧杆菌新菌株及其发酵制备方法与应用
CN106867933A (zh) 对凡纳滨对虾养殖中水质净化的微生态制剂及制备与应用
CN108865953A (zh) 一株广谱抑制水产病原性弧菌的芽孢杆菌及其复合菌制剂
CN104388327B (zh) 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料
CN109548962B (zh) 一种包含植物乳杆菌的复合微生物菌剂及其应用
CN101884394B (zh) 一种雏鸡用复合微生物饲料添加剂及其制备方法
CN102212493A (zh) 一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法
CN108531408A (zh) 一株胶红酵母新菌株及微生态制剂
CN107177522A (zh) 一株高活性饲用植物乳杆菌及其培养方法和应用
CN106754549A (zh) 可长期保存的水产养殖用复合乳酸杆菌粉末及其制备方法
CN107779422B (zh) 一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的非脱羧勒克菌生防菌株
CN109055264A (zh) 一种用于海参养殖的微生物菌剂及其制备方法
CN105211632A (zh) 一种多效微生物饲料添加剂及其制备方法
CN106701645A (zh) 具有免疫促生长作用的解淀粉芽孢杆菌b7及其应用方法
CN101732706B (zh) 仔猪副伤寒活疫苗的制备方法及其产品
CN108823135A (zh) 一种提高海洋褐色杆菌活菌数量和抗菌活性的发酵培养基及发酵条件
CN102304488A (zh) 一种用于池蝶蚌养殖的微生物制剂
CN109423451A (zh) 一种酿酒酵母菌株ksa01及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20190122

Address after: 100080, Zhongguancun building, No. 27 Zhongguancun street, Beijing, Haidian District, China, 14 floor

Co-patentee after: CHANGDE DABEINONG FEED CO.,LTD.

Patentee after: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.

Address before: 100080, Zhongguancun building, No. 27 Zhongguancun street, Beijing, Haidian District, China, 14 floor

Co-patentee before: BEIJING WEINONG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

Patentee before: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.

Co-patentee before: LIAONING DABEI AGRICULTURAL TECHNOLOGY CO.,LTD.

TR01 Transfer of patent right
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 100080, Zhongguancun building, No. 27 Zhongguancun street, Beijing, Haidian District, China, 14 floor

Patentee after: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.

Patentee after: Hunan Dabei Nonghuayou Aquatic Technology Co.,Ltd.

Address before: 100080, Zhongguancun building, No. 27 Zhongguancun street, Beijing, Haidian District, China, 14 floor

Patentee before: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.

Patentee before: CHANGDE DABEINONG FEED CO.,LTD.

CP01 Change in the name or title of a patent holder