CN109548962B - 一种包含植物乳杆菌的复合微生物菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明一种包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂，所述复合微生物菌剂的制备方法包括如下步骤：(1)将预混合固体发酵培养基用水充分溶解；(2)在步骤(1)制得的固体发酵培养基水溶液中加入0.01～1‰预复配固体微生物复合菌剂，用氢氧化钠调节pH 5～8，搅拌均匀并用盖子将容器盖好密封；(3)在温度为25～40℃的条件下，发酵5～9天，最后添加10～30wt％的玉米生化黄腐酸，制得所述包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂。本发明复合微生物菌剂组成稳定、通用性强，在畜禽或水产养殖领域具有良好的应用效果。
Description
技术领域
本发明涉及复合微生物应用技术领域，尤其是涉及一种包含植物乳杆菌的复合微生物菌剂及其在畜禽、水产养殖中的应用。
背景技术
随着物质生活不断提高，人们对食品安全的要求也越来越高。随着食品安全日益受重视，绿色养殖无疑是大势所趋。
兽药的残留问题是绿色生态养殖必须解决的事情。减少抗生素等药物的用量甚至是不使用，必须走预防保健的道路。微生态制剂、中药制剂、功能性饲料添加剂、生物制剂等预防措施为养殖户所使用，有利于绿色养殖的发展。
EM菌(Effective Microorganisms)是一种常用复合微生物菌剂，它由光合细菌、乳酸菌、酵母菌和丝状菌为主的10个属80余个微生物复合而成。EM菌极易生存繁殖，能较快而稳定地占据主导地位，形成有益的微生物菌的优势群落，从而发挥作用。它具有性能稳定、功能齐全的优势。关于EM菌在绿色养殖中的应用已有不少报道。
为了改善肉鸡养殖环境，减少药品的应用，生产绿色无公害鸡肉，通过在肉鸡饲料和饮水中添加EM菌，并定期用EM菌喷洒养殖场所和排泄物应用EM菌后，肉鸡成活率提高、肉鸡生长速度加快、料重比降低、鸡舍内NH3和H2S含量显著下降、鸡的生存环境和工作人员的工作环境改善(董水丽,张延翔,刘恩斌,EM菌在肉鸡言之中的应用,黑龙江畜牧兽医,2017,10:60-62,286)。
胡京等研究了两种不同浓度的EM菌剂对养殖水体水质、幼刺参生长性能的影响。结果表明，使用EM菌剂的养殖水体，COD、非离子氨、亚硝酸盐、硫化氢均低于空白对照组。使用EM菌剂的试验组，增重率显著提高。相关数据表明，EM菌剂在有效改善水质的同时又可以显著提高海参的增重率，是较理想的微生态制剂(董琦,张春岩,肖珊,王晗,王际辉,两种EM菌剂对养殖水体水质及幼刺参生长性能的影响,大连工业大学学报,2016,2:79-83)。
然而也有一些研究不支持EM菌的应用效果(陈鲜鑫,王金全,接种不同菌液的发酵液体饲料对断奶仔猪养分消化率和腹泻的影响,养猪,2011(1):9-12)。可见，微生物制剂用于养殖时，必须考虑下列事项：(1)组成相对稳定，不能出现较大波动以免影响使用效果；(2)通用性强，可适应多种应用场合；(3)应用效果重现性好，便于大规模推广。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一种包含植物乳杆菌的复合微生物菌剂及其应用。本发明复合微生物菌剂组成稳定、通用性强，具有良好的应用效果。
本发明的技术方案如下：
一种包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂，所述复合微生物菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将预混合固体发酵培养基用水充分溶解；
(2)在步骤(1)制得的固体发酵培养基水溶液中加入0.01～1‰预复配固体微生物复合菌剂，用氢氧化钠调节pH 5～8，搅拌均匀并用盖子将容器盖好密封；其中0.01～1‰是以水溶解后的预混合固体发酵培养基溶液为基准；
(3)在温度为25～40℃的条件下，发酵5～9天，最后添加10～30wt％的玉米生化黄腐酸，制得所述包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂。
所述预混合固体发酵培养基溶液所含原料及各原料的质量百分含量为：葡萄糖0.1～5％，红糖0.1～5％，氯化钠0.1～1％，磷酸二氢钾0.01～2％，磷酸氢二钾0.01～2％，柠檬酸三铵0.01～2％，余量为水。
所述预复配固体微生物复合菌剂所含菌种及各菌种的含量为：
所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌种保藏号CCTCC NO:M 2018632。
一种包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂的应用，其特征在于，用于畜禽或水产养殖。
用于养殖时，将所述原菌液与水按照1:50-200的质量比稀释，将稀释液喷洒入养殖水体或拌入饵料。
本发明有益的技术效果在于：
本发明微生物菌剂组成稳定、通用性强，具有良好的应用效果，便于大规模使用。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行具体描述。
本发明涉及本发明植物乳杆菌ZR-01(Lactobacillus plantarum ZR-01)已于2018年09月18日保藏在位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏编号为CCTCC NO:M 2018632。
实施例1
一种含植物乳杆菌的复合微生物菌剂，其制备方法包括如下步骤：
(1)在发酵罐或桶中将预混合固体发酵培养基用水充分溶解；
(2)在步骤(1)制得的培养基水溶液中加入0.1‰预复配固体微生物复合菌剂(以水溶解后的预混合固体发酵培养基溶液为基准)，用氢氧化钠调节pH 6.5，搅拌均匀并用盖子将容器盖好密封；
(3)在30℃条件下发酵6天，最后添加15wt％的玉米生化黄腐酸，制得所述复合微生物菌剂；其pH 3.0，总菌数2.2×107cfu/mL；其中植物乳杆菌3×105cfu/mL。
所述预混合固体发酵培养基用水充分溶解后，各原料的质量百分比如表1所示：
表1
所述预复配固体微生物复合菌剂由表2所示的含量的菌种组成：
表2
| 菌种名称 | 含量 |
| 地衣芽孢杆菌 | 1×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 植物乳杆菌 | 1×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 嗜酸乳杆菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 粪肠球菌 | 1×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 酿酒酵母 | 1×10<sup>8</sup>cfu/g |
| 产朊假丝酵母 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 戊糖片球菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 双歧杆菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
植物乳杆菌菌种保藏号CCTCC NO:M 2018632。
实施例2
一种含植物乳杆菌的复合微生物菌剂，其制备方法包括如下步骤：
(1)在发酵罐或桶中将预混合固体发酵培养基用水充分溶解；
(2)在步骤(1)制得的培养基水溶液中加入0.8‰预复配固体微生物复合菌剂(以水溶解后的预混合固体发酵培养基溶液为基准)，用氢氧化钠调节pH 8，搅拌均匀并用盖子将容器盖好密封；
(3)在40℃条件下发酵5天，最后添加30wt％的玉米生化黄腐酸，制得所述复合微生物菌剂；其pH 3.8，总菌数2.8×107cfu/mL；其中植物乳杆菌2×105cfu/mL。
所述预混合固体发酵培养基用水充分溶解后，各原料的质量百分比如表3所示：
表3
| 原料名称 | 含量 |
| 葡萄糖 | 5％ |
| 红糖 | 0.5％ |
| 氯化钠 | 1％ |
| 磷酸二氢钾 | 0.1％ |
| 磷酸氢二钾 | 0.01％ |
| 柠檬酸三铵 | 2％ |
| 水 | 91.39％ |
所述预复配固体微生物复合菌剂由表4所示的含量的菌种组成：
表4
| 菌种名称 | 含量 |
| 地衣芽孢杆菌 | 1×10<sup>8</sup>cfu/g |
| 植物乳杆菌 | 5×10<sup>8</sup>cfu/g |
| 嗜酸乳杆菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 粪肠球菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 酿酒酵母 | 5×10<sup>8</sup>cfu/g |
| 产朊假丝酵母 | 1×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 戊糖片球菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 双歧杆菌 | 1×10<sup>9</sup>cfu/g |
植物乳杆菌菌种保藏号CCTCC NO:M 2018632。
实施例3
一种含植物乳杆菌的复合微生物菌剂，其制备方法包括如下步骤：
(1)在发酵罐或桶中将预混合固体发酵培养基用水充分溶解；
(2)在步骤(1)制得的培养基水溶液中加入1‰预复配固体微生物复合菌剂(以水溶解后的预混合固体发酵培养基溶液为基准)，用氢氧化钠调节pH 5，搅拌均匀并用盖子将容器盖好密封；
(3)在25℃条件下发酵9天，最后添加10wt％的玉米生化黄腐酸，制得所述复合微生物菌剂；其pH 2.9，总菌数3.0×107cfu/mL；其中植物乳杆菌5×105cfu/mL。
所述预混合固体发酵培养基用水充分溶解后，各原料的质量百分比如表5所示：
表5
| 原料名称 | 含量 |
| 葡萄糖 | 0.1％ |
| 红糖 | 5％ |
| 氯化钠 | 0.5％ |
| 磷酸二氢钾 | 2％ |
| 磷酸氢二钾 | 1％ |
| 柠檬酸三铵 | 1％ |
| 水 | 90.4％ |
所述预复配固体微生物复合菌剂由表6所示的含量的菌种组成：
表6
| 菌种名称 | 含量 |
| 光合细菌 | 5×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 枯草芽孢杆菌 | 2×10<sup>6</sup>cfu/g |
| 凝结芽孢杆菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 地衣芽孢杆菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 植物乳杆菌 | 2×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 嗜酸乳杆菌 | 1×10<sup>6</sup>cfu/g |
| 粪肠球菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 酿酒酵母 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
| 产朊假丝酵母 | 1×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 戊糖片球菌 | 0.5×10<sup>9</sup>cfu/g |
| 双歧杆菌 | 1×10<sup>5</sup>cfu/g |
植物乳杆菌菌种保藏号CCTCC NO:M 2018632。
对比例：
参照实施例1，复合微生物菌剂中去除植物乳杆菌，其他条件相同。
测试例1
将实施例1制备的复合生物菌剂用于对虾养殖。养殖地点位于南通洋口镇。
设室外、室内2个大组试验。室外组采用外塘养殖，分为4组试验组，每组各5亩，彼此相临近，分别记做组1-组4。虾种体长约4cm，放养密度150尾/m2。组1-组4使用相同配合饵料，按虾体重5％-8％投喂，每天7：00、11：00、17：00、21：00定时定点投喂。组1施用实施例1制得的复合微生物菌剂，组2施用对比例制得微生物菌剂，组3施用市售EM液体菌剂(总菌数为2.6×107cfu/mL)，组4为空白组，不施用微生物菌剂。
菌剂使用方法：发酵液稀释100倍后拌料使用，稀释液用量10kg/吨饵料。室内组采用大棚养殖，也设4组试验组，每组各400m2；室内组养殖条件同室外组。设一个养殖季结束后，室外组收获情况统计如表7所示，室内组收获情况统计如表8所示：
表7
表8
测试例2
将实施例1制备的复合微生物菌剂用于罗非鱼养殖预防肠道疾病。养殖地点位于盐城市射阳县。
分为4组试验组，选取彼此相临近的4个罗非鱼养殖池塘，分别记做组1-组4，每组使用相同配合饵料，按体重5％投喂。组1施用实施例1制得的复合微生物菌剂，组2施用对比例制得的微生物菌剂，组3施用市售EM液体菌剂(总菌数为2.6×107cfu/mL)，组4为空白组，不施用微生物菌剂。菌剂使用方法：发酵液稀释100倍后拌料使用，稀释液用量10kg/吨饵料。连续投喂四周，每个组别随机取鱼3尾，取罗非鱼鱼肠内容物，用灭菌生理盐水迅速稀释适当倍数，分别涂布营养琼脂和TCBS琼脂平板，平板计数法计算48h肠道异养菌数量和弧菌数量。计算结果如表9所示。
表9
注：抑菌率＝(对照组细菌量-试验组细菌量)/对照组细菌量×100％
测试例3
将实施例1制备的复合微生物菌剂用于中华鳌绒蟹养殖水质改良试验。养殖地点位于泰州兴化市。
分为4组试验组，选取蓝藻爆发严重的4个中华鳌绒蟹养殖池塘，水深1.2-1.5米，水面面积15-20亩/塘。编组分别为组1-组4，每组使用相同配合饵料，按体重5％投喂。试验前分别测定每组可见度、pH值、氨氮、亚硝酸盐和蓝藻量(目测)各指标。组1施用实施例制得的复合微生物菌剂，组2施用对比例制得的微生物菌剂，组3施用市售EM液体菌剂(总菌数为2.6×107cfu/mL)，组4为空白组，不施用微生物菌剂。
菌剂使用方法：每天上午发酵液按照1公斤/亩，直接均匀泼洒水面，连续泼洒5天。5天后测定各组的可见度、pH值、氨氮、亚硝酸盐和蓝藻量(目测)各指标，结果如表10所示：
表10
测试例4
将实施例1制备的复合微生物菌剂并将其用于中华鳌绒蟹养殖调节池塘水质pH值。养殖地点位于泰州兴化市。
分为4组试验组，选取pH超过9.5的4个中华鳌绒蟹养殖池塘，水深1.2-1.5米，水面面积15-20亩/塘。编组分别为组1-组4，每组使用相同配合饵料，按体重5％投喂。试验前分别测定每组可见度、pH值、氨氮、亚硝酸盐和蓝藻量(目测)各指标。组1施用实施例制备的复合微生物菌剂+3公斤/亩红糖，组2施用对比例制备的微生物菌剂+3公斤/亩红糖，组3施用市售EM液体菌剂+3公斤/亩红糖，组4为空白组，只投放3公斤/亩红糖。
菌剂使用方法：每天上午发酵液按照1公斤/亩配合红糖(3公斤/亩)，直接均匀泼洒水面，连续泼洒2天。2天后测定各组的pH值，结果如表11所示：
表11
| pH值 | 组1 | 组2 | 组3 | 组4 |
| 试验前 | 9.7 | 9.7 | 9.6 | 9.8 |
| 试验后 | 8.2 | 8.7 | 8.5 | 9.1 |
Claims (1)
1.一种用于水产养殖的包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述复合微生物菌剂的制备方法包括如下步骤：
(1)将预混合固体发酵培养基用水充分溶解；
(2)在步骤(1)制得的固体发酵培养基水溶液中加入0.1‰预复配固体微生物复合菌剂，用氢氧化钠调节pH 6.5，搅拌均匀并用盖子将容器盖好密封；其中0.1‰是以水溶解后的预混合固体发酵培养基溶液为基准；
所述预混合固体发酵培养基溶液所含原料及各原料的质量百分含量为：葡萄糖0.1～5％，红糖0.1～5％，氯化钠0.1～1％，磷酸二氢钾0.01～2％，磷酸氢二钾0.01～2％，柠檬酸三铵0.01～2％，余量为水；
(3)在温度为30℃的条件下，发酵6天，最后添加15wt％的玉米生化黄腐酸，制得所述包含植物乳酸杆菌的复合微生物菌剂；其pH 3.0，总菌数2.2×107cfu/mL；其中植物乳杆菌3×105cfu/mL；复合微生物菌剂稀释100倍后拌料使用，稀释液用量10kg/吨饵料；
所述预复配固体微生物复合菌剂所含菌种及各菌种的含量为：
所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌种保藏号CCTCC NO:M 2018632。
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