CN105166397B - 一种短短芽孢杆菌微生态制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种短短芽孢杆菌微生态制剂，先用接种环将短短芽孢杆菌FJAT‑0809‑GLX(Brevibacillus brevis)划线于菌株培养基上培养以获得单菌落，将所得单菌落接种于种子培养基中恒温振荡摇床培养得种子液；按1％接种量将种子液接入发酵罐中进行液体发酵，则获得液体发酵液，备用；取液体发酵液，添加入NaCl、柠檬酸钙、黄原胶，且NaCl、柠檬酸钙、黄原胶在溶液中的质量百分数分别为4％、0.1‰、2‰，并调节pH值至7.0‑7.2，则得所述的短短芽孢杆菌微生态制剂。该微生态制剂其能够用于饲喂动物，而且解决了现有液体微生态制剂保存过程中易染杂菌的问题，从而能够长期保存。
Description
【技术领域】
本发明涉及农业领域用的微生态制剂，具体涉及一种短短芽孢杆菌微生态制剂。
【背景技术】
20世纪50年代初，研究发现在饲料中添加低浓度的抗生素可以显著的促进动物生长，于是世界上各饲料生产国几乎都以各种抗生素作为饲料添加剂，开创了抗生素饲料添加剂的时代。但随着饲用抗生素的普及应用，其不良反应也逐渐突出，如：抗生素引起的内源性感染和交叉感染、耐药性的产生、畜禽免疫力降低、肠道正常菌群的破坏及其在畜产品和环境中的残留等问题，这些都将给养殖业、饲料工业和动物带来严重威胁，进而通过食物链危及人类的健康。由于饲用抗生素的使用引起了众多负面问题，早在1992年瑞士就禁止使用饲用抗生素，欧盟1999年1月起通过立法禁止抗生素作促生长剂使用，今后的发展趋势是尽量不使用抗生素。20世纪80年代以来，全世界都在不遗余力地研究开发其替代产品。
近年来，随着动物微生态学研究的不断深入，以有益微生物菌群研制开发的饲用微生物添加剂，作为抗生素的替代品及一类新型无公害饲料资源已被广泛使用。微生态制剂是根据动物微生态平衡理论，调整微生态失调，提高宿主健康水平的正常菌群及其代谢产物和选择性促进宿主正常菌群生长的物质制剂总称。目前常用的益生菌主要有乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌和酵母四大类；生产中应用的益生菌制剂常常由上述菌种单一或复合加工而成。其中，芽孢杆菌是一类好氧菌，在一定条件下产生芽孢，因而具有耐高温、耐酸碱及耐胆盐等特性，能够耐受颗粒料的生产加工，用于微生物饲料添加剂的芽孢杆菌是肠道的过路菌，不能定植于肠道中。这类菌剂具有下列功能：生物夺氧，维持胃肠道厌氧环境，常和乳酸菌等厌氧益生菌混合使用；可产生淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶等多种酶类及氨基酸、维生素和促生长因子等多种营养物质，促进营养物质的消化吸收；生物颉颃，抑制致病菌的生长，调节肠道生态平衡；促进淋巴细胞增殖及免疫球蛋白分泌，改善动物机体的免疫功能；促进动物肠道结构和机能的成熟。适合在微生物饲料添加剂生产中应用的芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和东洋芽孢杆菌等。
短短芽孢杆菌芽孢杆菌细胞壁结构简单，分泌蛋白能力强，不含内毒素，具有临床和环境方面的安全性；由于其可形成抗逆性强的芽胞，提高了短短芽孢杆菌FJAT-8672的环境适应能力和与土著微生物的竞争力；并且其具有广谱抗菌活性的一种生防菌，能以活体形式寄居到大量的真菌植物病原体中，包括灰葡萄孢、苍耳单丝壳菌、及终极腐霉并且可以通过分泌抗菌代谢物短杆菌肽S来抑制真菌或细菌的生长。这些优点为短短芽孢杆菌的广泛应用提供了便利。短短芽孢杆菌应用范围非常广泛，主要包括生物防治、环境治理、工业生产和有毒物质降解等等。
目前，对短短芽孢杆菌报道日益增多，例如，申请号CN201010296437.6、名称为“一种新的短短芽孢杆菌菌株及其应用”的中国专利中公开了一种短短芽孢杆菌菌株FJAT-0809-GLX(Brevibacillus brevis)，并采用该短短芽孢杆菌菌株FJAT-0809-GLX的发酵液获得一种能够对龙眼进行保鲜的微生物保鲜菌剂。但尚未发现利用该短短芽孢杆菌菌株FJAT-0809-GLX(Brevibacillus brevis)制备能够作为饲用微生态制剂的相关报道；此外，现有的液体微生态制剂还普遍存在着在保存过程中易染杂菌的问题。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于提供一种短短芽孢杆菌微生态制剂，其能够用于饲喂动物，而且解决了现有液体微生态制剂保存过程中易染杂菌的问题，从而能够长期保存。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种短短芽孢杆菌微生态制剂，其制备方法的具体操作步骤如下：
(1)用接种环将短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX(Brevibacillus brevis)划线于菌株培养基上，并于恒温培养箱中培养24h，并且培养温度为30℃；
(2)将步骤(1)所获得的单菌落接种于100ml的种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养24h，温度30℃，转速180rpm/min；
(3)按1％接种量将步骤(2)所获得的种子液接入发酵罐中进行液体发酵，发酵罐中装有已消毒灭菌的发酵培养基，发酵参数为温度30℃、转速170rpm/min、通气量30L/min、发酵时间48h，则获得液体发酵液，备用；
(4)取步骤(3)获得的液体发酵液，添加入NaCl、柠檬酸钙、黄原胶，且NaCl、柠檬酸钙、黄原胶在溶液中的质量百分数分别为4％、0.1‰、2‰，并调节pH值至7.0-7.2，则得所述的短短芽孢杆菌微生态制剂。
进一步地，所述菌株培养基的组分：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，琼脂粉1.7％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2；
所述种子培养基的组分：酵母浸粉0.5％，胰蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2；
所述发酵培养基的组分：可溶性淀粉0.8％，豆饼粉3％，蛋白胨0.2％，蔗糖2％，CaCl20.5％，消泡剂0.17％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2。
本发明的有益效果在于：
通过利用短短芽孢杆菌菌株FJAT-0809-GLX制备获得一种能够有效抑制杂菌生长的微生态制剂，解决了现有液体微生态制剂保存过程中易染杂菌的问题，从而能够长期保存，而且以一定量添加至饲料中饲喂动物例如仔猪时能够起到很好的增重效果，即本发明微生态制剂能够为我国的禽畜养殖业和绿色生态农业带来无限的生机。
【具体实施方式】
为了更好地理解本发明，下面结合各实施例进一步地阐述说明本发明的内容，但这些实施例仅是示例性的，并不用于限制本发明的范围。
实施例1短短芽孢杆菌微生态制剂的制备
用接种环将短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX(Brevibacillus brevis)划线于菌株培养基上，并于恒温培养箱中培养24h，并且培养温度为30℃，得单菌落；将获得的单菌落接种于100ml的种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养24h，温度30℃、转速180rpm/min，培养结束后即得种子液；按1％接种量将种子液接入发酵罐中进行液体发酵，发酵罐中装有已消毒灭菌的发酵培养基，发酵参数为温度30℃、转速170rpm/min、通气量30L/min、发酵时间48h，则获得液体发酵液，备用；取获得的液体发酵液，添加入NaCl、柠檬酸钙、黄原胶，且NaCl、柠檬酸钙、黄原胶在溶液中的质量百分数分别为4％、0.1‰、2‰，并调节pH值至7.0-7.2，则得所述的短短芽孢杆菌微生态制剂；换而言之，所述的短短芽孢杆菌微生态制剂由如下组分组成：4％NaCl、0.1‰柠檬酸钙、2‰黄原胶，余量为获得的液体发酵液，pH7.0-7.2。
其中，菌株培养基的组分：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，琼脂粉1.7％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2；种子培养基的组分：酵母浸粉0.5％，胰蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2；发酵培养基的组分：可溶性淀粉0.8％，豆饼粉3％，蛋白胨0.2％，蔗糖2％，CaCl20.5％，消泡剂0.17％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2。
另外，需要说明的是，在本发明中，如无特殊说明，所提及或出现的百分数均为质量百分数，千分数也均为质量千分数。
实施例2短短芽孢杆菌微生态制剂的抑菌活性试验
将实施例1制备所得的短短芽孢杆菌微生态制剂置于阴凉干燥处常温保存，并分别于保存0d、10d、20d、30d、50d时取样；所取样品经系列梯度稀释(吸取1mL样品至装有9mL无菌水的试管，即配成10-1稀释倍数的稀释液，经系列稀释至10-5稀释倍数的稀释液)后涂布于NA平板(NA平板的组分：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，琼脂粉1.7％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2)，30℃下培养48h，统计各样品的活菌数，并采用琼脂扩散法检测各样品的抑菌活性。
检测结果表明，实施例1制备所得的短短芽孢杆菌微生态制剂随着保存时间的延长，活菌数和抑菌效果都比较稳定，第0d和30d的活菌数分别为1.21×108cfu/ml和1.30×108cfu/ml；保存30天后测定短短芽胞杆微生态制剂上清液对不同致病菌的抑菌活效果，结果表明，对大肠杆菌抑菌圈直径为23.25mm，对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为18.31mm，对沙门氏菌抑菌圈直径23.20mm，即本发明短短芽孢杆菌微生态制剂对这三种动物病原菌均具有良好的抑制作用。
实施例3短短芽孢杆菌微生态制剂对断奶仔猪生产性能的影响
为了验证本发明短短芽孢杆菌微生态制剂用于饲喂动物时所产生的影响，申请人进行了如下试验。
试验地点：福清市国家现代农业示范园养猪场；
试验动物：断奶日龄30天的仔猪；
试验分组：将150头5kg左右的断奶仔猪随机分成5个组(1个为对照组，4个为试验组即处理组)，每个组3栏(重复)，每个重复10头猪，进行试验。
以猪场饲喂的常规日粮为基础日粮，其成分配比见表1；对照组和试验组饲喂方案见表2；试验天数14天，试验期间，仔猪自由采食和饮水，免疫和驱虫程序按照猪场饲养管理程序进行；计算试验起始平均体重，试验结束平均体重，平均日增重(AGD)，平均日采食量(ADFI)，料肉比(F/G)，试验结果见表3。
由表3表明：处理1的料肉比(F/G)小于对照组、处理2、处理3、处理4，因此本发明产品按每kg饲喂基础日粮添加100ml短短芽孢杆菌微生态制剂(即处理1)对断奶仔猪具有明显优于其他处理组的增重作用。
表1基础日粮成分配比
表2试验设计
表3短短芽孢杆菌微生态制剂对断奶仔猪生产性能的影响
综上，本发明通过利用短短芽孢杆菌菌株FJAT-0809-GLX制备获得一种能够有效抑制杂菌生长的微生态制剂(即有效降低杂菌率)，从而解决了现有液体微生态制剂保存过程中易染杂菌的问题，从而能够长期保存，而且以一定量添加至饲料中饲喂动物例如仔猪时能够起到很好的增重效果，即本发明微生态制剂能够为我国的禽畜养殖业和绿色生态农业带来无限的生机。
Claims (1)
1.一种短短芽孢杆菌微生态制剂，其特征在于：其制备方法的具体操作步骤如下：
(1)用接种环将短短芽孢杆菌FJAT-0809-GLX(Brevibacillus brevis)划线于菌株培养基上，并于恒温培养箱中培养24h，并且培养温度为30℃；
(2)将步骤(1)所获得的单菌落接种于100ml的种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养24h，温度30℃，转速180rpm/min；
(3)按1％接种量将步骤(2)所获得的种子液接入发酵罐中进行液体发酵，发酵罐中装有已消毒灭菌的发酵培养基，发酵参数为温度30℃、转速170rpm/min、通气量30L/min、发酵时间48h，则获得液体发酵液，备用；
(4)取步骤(3)获得的液体发酵液，添加入NaCl、柠檬酸钙、黄原胶，且NaCl、柠檬酸钙、黄原胶在溶液中的质量百分数分别为4％、0.1‰、2‰，并调节pH值至7.0-7.2，则得所述的短短芽孢杆菌微生态制剂；
所述菌株培养基的组分：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，琼脂粉1.7％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2；
所述种子培养基的组分：酵母浸粉0.5％，胰蛋白胨1.0％，氯化钠0.5％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2；
所述发酵培养基的组分：可溶性淀粉0.8％，豆饼粉3％，蛋白胨0.2％，蔗糖2％，CaCl20.5％，消泡剂0.17％，蒸馏水配制，pH7.0-7.2。
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