CN104381221B - 桔小实蝇规模化饲养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物保护领域，具体涉及桔小实蝇规模化饲养方法。所述方法包括步骤：成虫的饲养，改进的人工饲料包括质量比1:8酵母膏和蔗糖；卵的收集；幼虫的饲养，人工饲料饲养幼虫，其中，玉米粉和酵母粉的质量比为19：7；以及蛹的管理。该方法具有较高产卵量、卵孵化率、化蛹率和羽化率。
Description
技术领域
本发明涉及植物保护领域，具体涉及桔小实蝇规模化饲养方法。
背景技术
桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)，又名东方果实蝇Oriental fruit fly、黄苍蝇、果蛆，属双翅目Diptera，实蝇科Tephritidae，果实蝇属Bactrocera，主要分布在东南亚和太平洋一些岛屿(Waterhouse,1993,1997)。桔小实蝇的寄主达250多种，尤以番石榴、芒果、桃、杨桃、青枣等多个水果品种的受害最为严重(梁广勤等，2008)。鉴于该虫寄主范围广，繁殖快及对水果贸易造成的严重危害，许多国家将其列为检疫对象。利用环境友好型防治方法防治害虫是当今害虫防治的趋势。实现桔小实蝇的规模化饲养，有利于开发环保型防控技术，如不育昆虫技术(sterile insect technique,SIT)和利用天敌昆虫(如寄生蜂)防治害虫。
利用人工饲料饲养桔小实蝇，可以解决季节性食料短缺等问题，获得大量发育齐整的虫源。实蝇类成虫的饲养，通常可以用5～10％的天然蜂蜜水作为饲料。天然蜂蜜富含糖分和维生素，基本能够满足桔小实蝇成虫的营养需求，但不足之处是成虫死亡率较高，而产卵量和卵的孵化率相对较低。后来也有改进配方，但成虫在取食的过程中常常会因为饲料变粘稠而被粘死或淹死。有文献报道利用蛋白胨、酵母和蔗糖等为主要营养成分组成人工饲料可以提高产卵量，但卵的孵化率不太稳定，且饲料需添加成分多，工序复杂。并且，现有桔小实蝇幼虫饲养配方存在其中一些组分如麦胚难以购买的问题，且实用性不高，改进的幼虫饲料配方也普遍存在饲料容易发霉、幼虫存活率低和发育不良等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有较高产卵量、卵孵化率、化蛹率和羽化率的桔小实蝇规模化饲养的方法。
本发明所述的桔小实蝇规模化饲养方法可以通过以下步骤实现：
(1)成虫的饲养：采用改进的成人工饲料饲养成虫，其产卵前期为6d，产卵量在第1d较低，后急剧上升，最高日产可达1000粒/雌，在饲料充足的条件下，产卵量在产卵1个月之后无明显下降。此外，避免了食物粘稠度增加而粘死或淹死成虫的问题，提高了成虫的存活率；
(2)卵的收集：成虫8日龄后开始采卵，这段时间为成虫的产卵高峰期。采卵时间为每天9:00～17:00，为保证繁育的整齐性，可以缩短每次采卵时间，获得更多发育齐整的卵，将收集的卵挑入幼虫饲料表面，孵化幼虫自动扩散钻入饲料取食。
(3)幼虫的饲养：采用玉米粉和酵母粉为主要营养成分的人工饲料F饲养幼虫，其成本稍高于E饲料，远低于G饲料，在幼虫历期、化蛹率和蛹重等指标上均远优于A饲料，与G饲料差异不显著。利用F饲料饲养幼虫，成本较低，操作简单。由于幼虫饲料中不需添加新鲜水果，避免了季节性食源短缺、水果被农药污染或水果中存在其他果实蝇的卵和幼虫等潜在问题。
(4)蛹的管理：化蛹前2d将幼虫养虫盒开盖放入化蛹盒，老熟幼虫自动钻出饲料，弹入沙子中化蛹，避免挑取幼虫造成的人为伤害。化蛹用的沙子需先洗净，过20目筛，高压灭菌锅灭菌15min，再在70℃烘箱烘烤2h，备用。化蛹盒内沙子约2cm高度，用无菌水配制成湿度为1％～1.5％的湿沙。
根据本发明的方法，步骤(1)改进了成虫饲料配方，其优点是成虫产卵前期缩短为6d，产卵量较高，且提高了成虫的存活率，延长了成虫的产卵期；
根据本发明的方法，步骤(2)确定新羽化成虫开始采卵时间为成虫8日龄后，其优点是此时间点后成虫产卵量高，可以在尽量短的时间收集到更多发育齐整的卵；
根据本发明的方法，步骤(3)改进了幼虫饲料配方，包括组分及其用量的改良，其优点是幼虫生长良好，节省饲料成本，简化操作，避免了新鲜水果饲养存在季节性食源短缺和被农药和其它果实蝇污染等潜在问题；
根据本发明的方法，步骤(4)确定化蛹前2d，即6日龄幼虫转移到化蛹盒，利用自身弹跳活性化蛹，其优点是避免人为挑老熟幼虫造成的人为伤害；步骤(4)化蛹沙子高温灭菌，湿度为1％-1.5％。
具体实施方式
实施例1桔小实蝇规模化饲养
1.成虫人工饲料筛选
每笼30对初羽化雌、雄成虫，分别提供4种不同的饲料，A饲料为酵母：蔗糖＝1:3；B饲料为酵母膏：蔗糖＝1:5；C饲料为酵母膏：蔗糖＝1:8(均为质量比)；D饲料为袁胜勇(2006)的成虫饲料配方。成虫羽化后第7天开始采卵，每天9：00放入采卵管，17：00取出，记录每天产卵量和成虫死亡数。卵的孵化率为随机取100粒卵后观察幼虫孵化数，统计幼虫孵化率和成虫的死亡率。
表1不同成虫饲料对桔小实蝇产卵量、卵孵化率和成虫死亡率的影响
注：表中成虫死亡率为累计死亡率，同列不同字母表示在P＝0.05水平差异显著。
从表中可以看出，成虫在取食A、B饲料的过程中，死亡率显著高于C、D饲料，主要是因为成虫在取食过程中饲料边粘稠而将成虫粘死。C饲料在产卵量、卵的孵化率和成虫死亡率等指标上都优于A、B两种配方。与D饲料相比，C饲料因添加的蔗糖比例高，成虫在取食过程中，饲料中剩下的是蔗糖颗粒，成虫不易被粘死，且取食剩下的蔗糖还可以为配制饲料重复使用，此外，C饲料配方及配制方法也很简单，因此，认为C饲料最适于成虫规模化养殖。
2.幼虫人工饲料筛选
采用几种不同营养成分为组分的幼虫人工饲料，E饲料主要成分为酵母粉，蔗糖和麦麸(过80目)；F饲料为玉米粉(过80目)和酵母粉；G饲料为胡萝卜粉和酵母粉。每种饲料设3个重复，每个90mm的培养皿盛25g饲料，每个培养皿内接300粒卵于饲料表面，以发育历期、化蛹率、蛹重为测试指标。配制1L幼虫饲料F各组分用量见以下饲料配制方法，E饲料中酵母粉，蔗糖和麦麸的用量分别为42g、12g和94g，其它与F饲料一致；G饲料用胡萝卜粉替代玉米粉，其它与F饲料一致。
饲料配制方法包括以下几个步骤(以配制1升F饲料为例)：第一步，称量2.5g琼脂于200mL的水，微波炉煮沸，至琼脂完全溶解，称量4g纸巾于200mL水中搅拌溶解；第二步，称量95g玉米粉，35g酵母粉溶于400mL的水中，混匀防止结块，置于微波炉加热，搅拌至糊状，后加入4g苯甲酸钠，继续搅拌，再加入约4mL浓盐酸调pH至4.8±0.5；第三步，将第一步的混合物倒入第二步，搅匀；第四步，用10mL乙醇溶解2.86g尼泊金，待第三步混合物温度到约60℃左右，加入预先溶解的尼泊金，最后加水定容至1L，分装至幼虫饲养盒中。
表2不同幼虫饲料配方对桔小实蝇幼虫历期、化蛹率及蛹重的影响
注：表中化蛹率是成功化蛹个数与卵的基数(300粒)之比。
从表2中可以看出，利用F饲料和G饲料饲养桔小实蝇幼虫优于E饲料，利用F饲料和G饲料饲养桔小实蝇幼虫在幼虫历期、化蛹率及蛹重等3个测试指标上均不存在显著差异，因幼虫玉米粉的成本远低于胡萝卜粉，因此认为F饲料最适于幼虫规模化养殖。
3.规范桔小实蝇饲养各个环节
(1)成虫饲养：成虫于养虫笼内群养，饲养温度为27±1℃，光周期为L：D＝14:10h，湿度在65％～75％之间。规格为25×25×25cm的养虫笼饲养密度可达2000头/笼，笼内放置自助取水三角瓶，以酵母膏：蔗糖质量比为1:8的混合物作为成虫期补充营养的饲料，当饲料被取食到只剩蔗糖后，再添加新的饲料。用这种方法饲养成虫，成虫寿命在3个月以上，且能保持产卵能力。
(2)卵的收集：利用10mL离心管作为采卵管，在离管底2cm以上的位置扎孔径为1～1.5mm，列宽为1cm的排孔，在离心管一侧共扎5排。成虫羽化6-7d后开始产卵。一般可以在成虫羽化8d后开始采卵，在采卵管内加入橙汁，至约1cm高的位置，放入成虫养虫笼内，扎孔的一面朝上。采卵时间为每天8:00～17:00。为获得繁育龄期一致的桔小实蝇幼虫，可以缩短每次采卵时间，获得更多发育齐整的卵。
(3)幼虫饲养：在规格为21×13×7cm的微波炉四方盒的盒盖上开口，并粘上同样大小的100目纱网，以保持养虫盒的通透性。将采卵管取出后，用喷壶和毛笔将杯壁上的卵冲刷到用100目纱网自制的卵筛上滤去水分，用毛笔将卵轻轻挑入盛有人工饲料的养虫盒内，一般300ml饲料最后可以产出5000-6000粒蛹，饲养的过程中可以根据幼虫虫口密度和长势决定是否需要添加饲料。
(4)化蛹准备和蛹期管理：利用规格为29×23×13cm的整理盒制备化蛹盒，在盒盖上开口，并粘上同样大小的100目纱网，以保持盒的通透性。化蛹的细沙需过20目网筛，洗净，晾干后装人布袋内高压灭菌，灭菌后与70℃烘箱烘干备用。化蛹前用无菌水将沙子配成湿度为1％～1.5％的湿沙，沙子的厚度约2cm高。利用老熟幼虫的弹跳活性让其弹入沙子里化蛹。约6日龄幼虫开始进入老熟阶段，将幼虫饲养盒开盖在湿度为1％～1.5％的湿沙上。约9日龄的蛹开始羽化，需要在成虫羽化前2～3d，用20目网筛将蛹筛出放入90mm的培养皿，并将培养皿放入养虫笼，培养皿盖打开，成虫羽化后及时放入取水三角瓶和成虫饲料。须注意的是蛹不能堆积太厚，否则会影响羽化率，应尽量避免，如蛹多，分开放在几个培养皿内。
Claims (3)
1.桔小实蝇规模化饲养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)成虫的饲养：采用改进的成虫人工饲料饲养成虫，其产卵前期为6d，所述成虫人工饲料包括质量比1:8的酵母膏和蔗糖；
(2)卵的收集：成虫8日龄后开始采卵，将收集的卵挑入幼虫人工饲料表面，孵化幼虫自动扩散钻入幼虫人工饲料取食；
(3)幼虫的饲养：采用玉米粉和酵母粉为主要营养成分的幼虫人工饲料饲养幼虫，其中，玉米粉和酵母粉的质量比为19：7；
(4)蛹的管理：化蛹前2d将幼虫养虫盒开盖放入化蛹盒，老熟幼虫自动钻出所述幼虫人工饲料，弹入沙子中化蛹。
2.根据权利要求1所述的桔小实蝇规模化饲养方法，其特征在于，在步骤(4)中，化蛹用的沙子需先洗净，过20目筛，高压灭菌锅灭菌15min，再在70℃烘箱烘烤2h，备用。
3.根据权利要求1所述的桔小实蝇规模化饲养方法，其特征在于，在步骤(4)中，化蛹盒内的沙子用无菌水配制成湿度为1％～1.5％的湿沙。
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