CN104381010A - 冬虫夏草子实体的培养方法及其组合物和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种培养冬虫夏草子实体的方法，冬虫夏草子实体组合物及其应用。所述培养冬虫夏草子实体的方法，包含如下步骤：筛选优势菌株，所述优势菌株可快速及稳定生产冬虫夏草子实体；将所述优势菌株接种于包含蚕蛹萃取液、蛋白胨、酵母萃取物、葡萄糖、特砂、食品级羧甲基纤维素、微量元素和食品级寒天粉或洋菜胶的人工培养基中；经过可变温度和具LED光照的环境培养后，达到工业化的规模，批次量产冬虫夏草子实体的目的。且经检测，由本发明方法培养得到的冬虫夏草子实体，其指针性成分，如多醣、虫草酸以及腺苷等含量，皆高于天然冬虫夏草子实体。

Description

冬虫夏草子实体的培养方法及其组合物和应用

技术领域

本发明涉及一种冬虫夏草的培育技术，特别涉及一种能够以人工的方法稳定批次量产培养冬虫夏草子实体的方法，以及含冬虫夏草子实体的组合物及其应用。 

背景技术

冬虫夏草(Ophiocordycepssinensis)菌是药用真菌中的一大类，属真菌门(Eumycota)、子囊菌亚门(Ascmycotina)、核菌纲(Pyenomycetes)、麦角菌科(Clavicipiracese)、虫草属(Cordyceps)。冬虫夏草无性型中华被毛孢，可在人工培养基、人工培养条件下持续繁殖，当进行有性生殖时需要两个同源菌丝体进行核融合形成一个双核菌丝体，及在特定环境下诱导菌丝分化，形成子实体。冬虫夏草中两个同源菌丝体由交配型基因决定菌丝亲合性，其可分为MAT1型和MAT2型。MAT1型和MAT2型的等位基因分别为MAT1-1和MAT1-2。MAT1-1含有MAT1-1-1和MAT1-1-2两个基因(部分还包含基因MAT1-1-3)，MAT1-2包含一个基因MAT1-2-1。在MAT1-1-1编码的蛋白质中有一个称为“α框”的保守区域，而在MAT1-2-1编码的蛋白质中有一个称为“HMG框”的保守区域，通过保守序列设计引子对编码“α框”的核酸序列(属于MAT1-1)和编码“HMG框”的核酸序列(属于MAT1-2)进行扩增、克隆、测序，可以得到MAT1和MAT2交配型基因的保守区域(HU.Xiao et al.,2013)。冬虫夏草的交配型基因的核苷酸序列相似性很低，但其两端侧翼序列具有高度同源性，可作为分子生物标记，提供快速筛选优势菌株的方法。 

冬虫夏草自古即为名贵中药材，具有提高免疫功能、抗肿瘤、保肺益肾、壮阳等作用，广被大众食用。冬虫夏草主要产于四川、西藏、云南、青海等地，海拔3,000公尺以上的寒冷地带，由于生长条件的限制以及过度开挖，造成冬虫夏草价格昂贵，分布地区范围逐渐缩小。基于冬虫夏草的药用及食用性的重要性，因此极需开发出人工栽培子实体的技术，目前现有技术是将冬虫夏草的无性型中华被毛孢菌株，接种在人工培养基上长出虫草复合体或子座；而目前揭露以人工培养基培育冬虫夏草子实体的文献有： 

(1)申请号：00108486.0，授权公告号：CN1274006A，发明名称：人工培育冬虫夏草的方法。此发明公开了人工培育冬虫夏草的方法：将菌种接种入大米、玉米、谷糠等人工培养基中，在12-17℃避光环境下培养20-25天，并于200勒克斯(LUX)光照下刺激10天转色，然后在昼夜温差10℃下刺激子实体生长。 

(2)申请号：200910075839.0，授权公告号：CN101695255A，发明名称：用中华被毛孢培育冬虫夏草子座的方法。此发明公开了人工培育冬虫夏草的方法：该方法将菌种接种入玉米渣、黄豆粉、小麦粒谷粒等人工培养基中，经避光培养、滤液、温室培养，最后可得冬虫夏草子座；而以中华被毛孢培育冬虫夏草子座，其生物转化率在40％左右。但此发明的特征为需在1800公尺以上的高海拔及昼夜温差大于等于15℃的环境中进行。 

与冬虫夏草同属不同种的蛹虫草，为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属，其学名为Cordycepsmilitaris，又名北冬虫夏草、北虫草等。蛹虫草人工培育常用的培养基含有白米、PDB、蛋白胨、家蚕蛹、黄豆粉；其培养条件为：温度20℃、光照强度1500～2000lux、相对湿度70％，然后于固态培养90～120天后采收其子实体。由上叙述可知，蛹虫草的培育方式与冬虫夏草的培育方式差异很大，从菌种、培养基到培养条件通通不同，所以无法直接将成功培育出 蛹虫草子实体的方法移植至冬虫夏草。 

综合前述研究，虽然目前已可实现以人工培养基培育冬虫夏草子实体，但现有技术仍有其不足之处，该不足之处包括：生物转化率低、工业化效率有待提高、诱导转色时间长、低海拔平地培养条件及稳定量产等问题需要克服。 

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种可在平地低海拔环境，以人工培养基培育冬虫夏草子实体的方法，该方法具有提高生物转化率至100％、缩短诱导转色时间及批次稳定量产冬虫夏草子实体的优点。 

为了实现上述目的，本发明采取如下技术方案。 

一种培养冬虫夏草子实体的方法，包括如下步骤：A.筛选优势菌株，所述优势菌株可用以快速及稳定生产冬虫夏草子实体；B.将所述优势菌株接种到人工培养基，所述人工培养基成分包括但不限定于蚕蛹萃取液、蛋白胨、酵母萃取物、葡萄糖、特砂、食品级羧甲基纤维素、微量元素及食品级寒天粉或洋菜胶；C.所述优势菌株于所述人工培养基上培育，得到长满菌丝的人工培养基；D.将所述长满菌丝的人工培养基移到一可变温度和具LED光照的环境中培养，得所述冬虫夏草子实体。于培养时采用LED灯管或相等强度灯源照射，以缩短子实体转色时间5-7天。 

依据上述方法还可以进行工业级批次量产所述冬虫夏草子座。 

在其中一个实施例中，步骤(A)所述筛选优势菌株是利用冬虫夏草菌交配型基因序列(Mating type)(分子生物技术)筛选出具MAT1-1基因(SEQ ID NO:1)且不具MAT1-2基因(SEQ ID NO:2)的优势菌株。 

在其中一个实施例中，步骤(B)所述人工培养基包括质量百分比为：3-5％ 的蚕蛹萃取液、1-3％的蛋白胨、1-3％的酵母萃取物、2-6％的葡萄糖、4-6％的特砂、0.2-0.6％的食品级羧甲基纤维素、0.05-0.2％的微量元素及1-3％的食品级寒天粉或洋菜胶。 

在其中一个实施例中，步骤(C)所述培育为将所述优势菌株以14-20℃的温度培养。 

在其中一个实施例中，步骤(D)所述可变温度的环境是指可变温度为6-20℃。 

在其中一个实施例中，步骤(D)所述可变温度的环境是指温差时间为10-14小时。 

在其中一个实施例中，步骤(D)所述具LED光照的环境是指以LED或相等强度的灯源照射6-12小时。 

在其中一个实施例中，步骤(D)所述具LED光照的环境是指LED或相等强度的灯源以2,000-6,000勒克斯照度照射。 

在其中一个实施例中，步骤(D)所述可变温度和具LED光照的环境的相对湿度为根据所述可变温度和具LED光照的环境的温度而调控的，当所述温度介于14-20℃时，相对湿度设定为85-90％；当所述温度介于6-10℃时，相对湿度设定为50-70％。藉此加速诱导冬虫夏草子实体生长，并缩短子实体培育时间。 

此外，本发明所述培养冬虫夏草子实体的方法，可简述如下(流程图如图1所示):利用分子生物技术筛选出具特定基因型的优势菌株，将所述优势菌株培养于人工培养基，并于可变温度和具LED或相等强度的灯源光照的环境中培养，最后所述优势菌株被培育成为冬虫夏草子实体。 

本发明还提供一种冬虫夏草子实体组合物，包含所述冬虫夏草子实体，及药学上可接受的载体。其中，所述冬虫夏草子实体是以上述培养冬虫夏草子实 体的方法所培养得到的冬虫夏草子实体。 

在其中一个实施例中，所述冬虫夏草子实体组合物的剂型可为胶囊、锭剂、粉剂或口服液。 

本发明更进一步提供以上述培养冬虫夏草子实体的方法所培养出的冬虫夏草子实体在制造含冬虫夏草子实体的药剂中的应用。 

在其中一个实施例中，所述药剂为包含所述冬虫夏草子实体，及药学上可接受的载体。 

在其中一个实施例中，所述药剂的剂型可为胶囊、锭剂、粉剂或口服液。 

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 

1、本发明将所述优势菌株接种于人工培养基上，于所述人工培养基培育出的冬虫夏草子实体，其外观形态相似于天然冬虫夏草子实体，且经分析，经本发明方法培养得到的所述冬虫夏草子实体的指针性成分(包括多醣、虫草酸以及腺苷等含量)，皆高于天然冬虫夏草子实体，且所述方法可提高冬虫夏草子实体的产量。 

2、运用冬虫夏草的交配型基因序列，筛选出具有MAT1-1基因序列片段，且无MAT1-2基因序列片段的优势菌株，此优势菌株经本发明方法培养产出的冬虫夏草子实体，其生物转化率可达100％。 

3、运用冬虫夏草的交配型基因序列，所快速筛选出的优势菌株，可在低海拔(平地)环境、昼夜温差10℃的环境中被培育成冬虫夏草子实体。 

4、利用冬虫夏草的交配型基因序列，所快速筛选的优势菌株，还可维持至少6批次冬虫夏草子实体的稳定生产。 

5、使用LED灯管或相等强度的灯源，在2,000-6,000勒克斯(LUX)光照后，透过温、湿度变化刺激冬虫夏草子实体生成，可大幅缩短其生成的时间，提高 其生物转化率。 

附图说明

图1为本发明所述培养冬虫夏草子实体的方法的流程图； 

图中， 

S11  筛选菌株； 

S12  接种； 

S13  人工培养基培育； 

S14  可变温度、湿度及光照环境中培养。 

具体实施方式

本发明所述蚕蛹萃取液由如下方法制备而成：取蚕蛹粉，每50g所述蝉蛹粉加入1L水，混合均匀，高温高压灭菌20分钟，冷却后经过固液分离，取液体，即为所述蚕蛹萃取液。 

本发明主要是关于一种培养冬虫夏草(Ophiocordycepssinensis)子实体的方法，该方法中所利用的冬虫夏草的基本培育原理，为该技术领域技术人员所熟知，故下文做简要说明，不再作完整描述。 

本发明提供一种培养冬虫夏草子实体的方法，包括如下步骤： 

A.筛选优势菌株，所述优势菌株可快速及稳定生产冬虫夏草子实体； 

B.将所述优势菌株接种到人工培养基，其中该培养基成分包括但不限定于蚕蛹萃取液、蛋白胨、酵母萃取物、葡萄糖、特砂、食品级羧甲基纤维素、微量元素及食品级寒天粉或洋菜胶等； 

C、所述优势菌株于所述人工培养基上培育，得到长满菌丝的人工培养基； 

D.将所述长满菌丝的人工培养基移到一可变温度和具LED光照的环境中培养，得所述冬虫夏草子实体。 

依据上述方法还可以进行工业级批次量产所述冬虫夏草子座。 

培养时采用LED灯管或相等强度灯源照射，可缩短子实体转色时间5-7天；根据所述可变温度和具LED光照的环境的温度而调控相对湿度，当所述温度介于14-20℃时，相对湿度设定为85-90％；当所述温度介于6-10℃时，相对湿度设定为50-70％，藉此加速诱导冬虫夏草子实体生长，并缩短子实体培育时间； 

在本发明的较佳具体实施例中，所述人工培养基中蚕蛹萃取液的质量百分比为3-5％，并以4％为较佳。 

在本发明的较佳具体实施例中，所述人工培养基中蛋白胨的质量百分比为1-3％，并以2％为较佳。 

在本发明的较佳具体实施例中，所述人工培养基中酵母萃取物的质量百分比为1-3％，并以2％为较佳。 

在本发明的较佳具体实施例中，所述人工培养基中葡萄糖的质量百分比为2-6％，并以4％为较佳。 

在本发明的较佳具体实施例中，所述人工培养基中特砂的质量百分比为4-6％，并以5％为较佳。 

在本发明的较佳具体实施例中，培养时采用LED灯管或相同强度灯源照射，以缩短子实体转色时间，其中所述照射的较佳照射强度为2,000-6,000勒克斯。 

以下结合具体实施例来详细说明本发明。 

实施例1 

以冬虫夏草交配型基因序列分析技术(亲合性基因序列分析技术)筛选中华 被毛孢优势菌株，包括如下步骤： 

1.将无菌手术刀在酒精灯火焰下高温消毒后，浸泡于75％酒精中降温备用； 

2.取冬虫夏草子实体组织块，于其表面喷洒75％的酒精消毒，并以步骤1所述无菌手术刀切取所述冬虫夏草子实体组织块，将切取得到的子实体的组织块贴附于洋菜培养基(含100ppm链霉素(streptomycin))中，于14-20℃中培养至产生菌丝； 

3.取中华被毛孢菌的genomic DNA：收集步骤2所述菌丝于无菌研钵中，加入液态氮并研磨成粉状后，置入微量离心管中，加入700μL裂解缓冲液(lysis buffer)，混和均匀，然后置于65℃水浴槽中反应1小时，其后加入700μL苯酚/氯仿(phenol/chloroform)，轻微翻转所述微量离心管数次使其混合均匀后，于4℃下以12,000g离心10分钟，吸取600μL上清液至另一新的微量离心管，并加入等体积(600μL)的氯仿(chloroform)，轻微翻转微量离心管数次使混合均匀，于4℃下以12,000g离心4分钟；吸取500μL上层液至另一新的微量离心管，并加入0.1倍体积(50μL)的3M NaOAc及1倍体积(500μL)的异丙醇(isoprop-anol)，混合均匀后静置20分钟，再于室温下以12,000g离心20分钟以沉淀DNA，倒去上清液，沉淀物加入200μL的70％冰冷酒精，再于室温下以12,000g离心10分钟后，倒去上清液，待自然风干后，以适当的TE缓冲液(10mMTris-HCl；0.1mM EDTA,pH 7.5)溶解沉淀物，即得所述中华被毛孢菌的genomic DNA粗萃取液，置于-20冷冻柜备用； 

4.DNA浓度测定：将步骤3所述中华被毛孢菌的genomic DNA粗萃取液，利用核酸定量仪测定其260nm、280nm的O.D.值及260nm/280nm的比值，以260nm/280nm的比值介于1.8-2.0之间，作为纯度较高的DNA样品； 

5.利用广泛性ITS 1/ITS 4引子对进行PCR反应，增幅内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)：5.1取1μL的所述DNA样品(10μg/ml)为范本，10X buffer 2.5μL，2.5mM脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)1μL，10μM primer1μL与5U Tap聚合酶(Taq polymerase)0.2μL，加入二次蒸馏水(dd H₂O)至25μL，混合好置于PCR反应器；条件如下：先以94下变性5分钟；然后于下列程序反应30个循环：94℃变性45秒，46℃黏合45秒，72℃延伸1分钟；经30个循环之后，设定在72℃延伸6分钟，降至4℃保存。取4μLPCR产物与1μL的上样缓冲液(loading dye)混合均匀后，进行2％琼脂凝胶(agarose gel)电泳分析； 

5.2 DNA定序与比对分析：将PCR增幅出的内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)以电泳进行预期大小确认后，进一步将所述PCR产物送交成功大学(台南市)进行核酸定序。核酸序列分析与NCBI GenBank基因库资料，结果与冬虫夏草(Ophiocordycepssinensis)相近，其序列相似度为100％； 

6.以分子生物技术建立亲合性基因系统(MAT1和MAT2序列)，利用MAT1-1和MAT1-2引子对进行PCR反应，增幅MAT1-1(SEQ ID NO:1)和MAT1-2(SEQ ID NO:2)基因序列片段，结果若菌株同时具有两个MAT1-1和MAT1-2基因序列片段，此菌株经人工培养产出的所述冬虫夏草子实体，其生物转化率为50％，其子实体型态为圆型、短小型；若菌株仅有MAT1-1基因序列片段，无MAT1-2基因序列片段，则该菌株经人工培养产出的所述冬虫夏草子实体，其生物转化率高达100％，且其子实体型态相似于天然的冬虫夏子实体。而利用此技术所筛选出的中华被毛孢优势菌株可维持至少6批次所述冬虫夏草子实体的稳定生产。 

实施例2 

人工培养所述冬虫夏草子实体，包括如下步骤： 

1.配制人工培养基，该人工培养基的组成包括质量百分比为：3-5％的蚕蛹萃取液、1-3％的蛋白胨、1-3％的酵母萃取物、2-6％的葡萄糖、4-6％的特砂、0.2-0.6％的食品级羧甲基纤维素、0.05-0.2％的微量元素(铁、镍、锰、铜、锌、硼、钼及氯等)、1-3％的食品级寒天粉或洋菜胶，以及水(其余不足100％的部份为水)，其中，所述蚕蛹萃取液制备流程如下:将50g蚕蛹粉加入1L水中混合均匀，并高温高压灭菌20分钟，冷却后经过固液分离，该液体即为蚕蛹萃取液；所述微量元素包括(质量百分比):硫酸镁0.01％、磷酸氢二钾0.01％、氯化钠0.05％、氯化钙0.05％。上述人工培养基经过高温高压灭菌，压力约1.2atm(kg/cm²)，消毒温度为120-130℃，灭菌时间从灭菌开始到结束约50分钟； 

2.经过高温高压灭菌的人工培养基置于UV灯管下照射消毒12小时； 

3.取无菌手术刀在酒精灯火焰下高温消毒后，浸泡于75％酒精降温后，以所述无菌手术刀切取所述中华被毛孢优势菌株的菌丝，将所述菌丝接种到步骤2所述人工培养基上，于14-20℃中培养约25-30天； 

4.所述人工培养基上长满菌丝后，将其移到可变温的培养箱中培养，而培养时的可变温度变化为6℃到20℃、温差时间的设定为约10-14小时、LED照射时间设定为约6-12小时、LED照度为2,000-6,000勒克斯(LUX)、培养箱环境于高温14-20℃时湿度设定为85-90％，低温6-10℃时设定为50-70％； 

5.经步骤4培养的菌落表面开始出现刺状突起物，其分布位置包括在菌落顶部以及菌落的周围部位都可观察到，然后持续地培养至突起物底部逐渐变粗(子座)，最后培养成的冬虫夏草子实体的高度可达2公分，最高可达4公分； 

人工培养的所述冬虫夏草子实体型态相似于天然的冬虫夏草子实体，而且筛选出的所述中华被毛孢优势菌株可维持至少6批次所述冬虫夏草子实体的稳 定生产。 

实施例3 

工业级批次量产冬虫夏草子实体，包括如下步骤： 

1.取所述中华被毛孢优势菌株的菌丝，经过捣碎机作用后，接种到三角瓶，进行震荡培养，培养温度为14-20℃，培养箱转速为100-200rpm，最后培养至菌丝生长布满三角瓶即成为种菌； 

2.制备人工培养基，所述人工培养基的组成包括质量百分比为：3-5％的蚕蛹萃取液、1-3％的蛋白胨、1-3％的酵母萃取物、2-6％的葡萄糖、4-6％的特砂、0.2-0.6％的食品级羧甲基纤维素、0.05-0.2％的微量元素(铁、镍、锰、铜、锌、硼、钼及氯等)、1-3％的食品级寒天粉或洋菜胶，以及水(其余不足100％的部份为水)，其中，所述蚕蛹萃取液制备流程如下:将50g蚕蛹粉加入1L水中混合均匀，并高温高压灭菌20分钟，冷却后经过固液分离，该液体即为蚕蛹萃取液；所述微量元素包括(质量百分比):硫酸镁0.01％、磷酸氢二钾0.01％、氯化钠0.05％、氯化钙0.05％。将所述人工培养基放入高x直径＝13cm x 3cm的平底玻璃瓶中，经过高温高压灭菌，压力约1.2atm(kg/cm²)，消毒温度为120-130℃，灭菌时间从开始到结束约50分钟； 

3.将步骤1所述种菌接种至所述人工培养基上，待长满菌丝后移到可变温的培养室中培养，培养时可变温度为6到20℃、温差时间设定为约10-14小时、LED照射时间设定为约6-12小时、LED照度为2,000-6,000勒克斯(LUX)、培养箱环境于高温14-20℃时湿度设定为85-90％，低温6-10℃时设定为50-70％，其中，所述培养室面积的大小为长x宽x高＝300cm x 238cm x 230cm，所述培养室可量产28,000支所述冬虫夏草子实体，并且可维持至少6批次冬虫夏草子实体稳定生产。 

实施例4 

本发明人工培养冬虫夏草子实体(实施例2所述冬虫夏草子实体)与天然冬虫夏草子实体活性成分的比较： 

1.人工培养冬虫夏草子实体的氨基酸成分的分析委任嘉义大学检验中心食品检验组分析，人工培养冬虫夏草子实体中，组氨酸、精氨酸以及半胱氨酸皆为天然冬虫夏草子实体的2.5-3倍，其他氨基酸含量两者间无明显差异(如表1所示)。 

2.人工培养冬虫夏草子实体的多醣含量5.11％与天然冬虫夏草子实体的多醣含量5.0％相近(如表2所示)。 

3.人工培养冬虫夏草子实体的虫草酸含量3.24％高于天然冬虫夏草子实体虫草酸含量0.19％，约17倍(如表3所示)。 

4.人工培养冬虫夏草子实体的腺苷含量0.06％高于天然冬虫夏草子实体腺苷含量0.02％(如表4所示)。 

表1.人工培养具MAT1-1基因且不具MAT1-2基因的冬虫夏草子实体与天然冬虫夏草子实体的氨基酸组成 

表2人工培养具MAT1-1基因且不具MAT1-2基因的冬虫夏草子实体与天然冬虫夏草子实体多醣含量的比较 

表3人工培养具MAT1-1基因且不具MAT1-2基因的冬虫夏草子实体与天然冬虫夏草子实体虫草酸含量的比较 

表4.人工培养具MAT1-1基因且不具MAT1-2基因的冬虫夏草子实体与天然冬虫夏草子实体腺苷含量的比较 

经本发明所述培养冬虫夏草子实体的方法产出的人工培育冬虫夏草子实体可作为但不限定于一般食品、保健食品之用。除了可以直接食用外，将本发明所述冬虫夏草子实体干燥后研粉，可以作为但不限定于锭片、胶囊、颗粒剂、粉剂等产品的开发，也可以萃取后作为口服液使用。 

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。 

Claims (14)

1.一种培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，包括以下步骤:

A、筛选优势菌株；

B、将所述优势菌株接种到人工培养基，所述人工培养基包括蚕蛹萃取液、蛋白胨、酵母萃取物、葡萄糖、特砂、食品级羧甲基纤维素、微量元素和食品级寒天粉或洋菜胶；

C、所述优势菌株于所述人工培养基上培育，得到长满菌丝的人工培养基；

D、将所述长满菌丝的人工培养基移到一可变温度和具LED光照的环境中培养后，得所述冬虫夏草子实体。

2.根据权利要求1所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(A)所述筛选优势菌株为以分子生物技术筛选出具有如SEQ ID NO.1所示MAT1-1基因且不具有如SEQ ID NO.2所示MAT1-2基因的优势菌株。

3.根据权利要求1所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(B)所述人工培养基包括质量百分比为：3-5％的蚕蛹萃取液、1-3％的蛋白胨、1-3％的酵母萃取物、2-6％的葡萄糖、4-6％的特砂、0.2-0.6％的食品级羧甲基纤维素、0.05-0.2％的微量元素及1-3％的食品级寒天粉或洋菜胶。

4.根据权利要求1所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(C)所述培育为将所述优势菌株以14-20℃的温度培养。

5.根据权利要求1所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(D)所述可变温度的环境是指可变温度为6-20℃。

6.根据权利要求5所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(D)所述可变温度的环境是指温差时间为10-14小时。

7.根据权利要求1所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(D)所述具LED光照的环境是指以LED照射6-12小时。

8.根据权利要求7所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(D)所述具LED光照的环境是指LED以2,000-6,000勒克斯照度照射。

9.根据权利要求1所述培养冬虫夏草子实体的方法，其特征在于，步骤(D)所述可变温度和具LED光照的环境的相对湿度为高温14-20℃时，相对湿度为85-90％；低温6-10℃时，相对湿度为50-70％。

10.一种冬虫夏草子实体组合物，其特征在于，包含权利要求1-9任一项所述的方法培养得到的冬虫夏草子实体，及药学上可接受的载体。

11.根据权利要求10所述冬虫夏草子实体组合物，其特征在于，所述冬虫夏草子实体组合物的剂型为胶囊、锭剂、粉剂或口服液。

12.权利要求1-9任一项所述的方法培养得到的冬虫夏草子实体在制造含有冬虫夏草子实体的药剂中的应用。

13.根据权利要求12所述应用，其特征在于，所述药剂包含所述冬虫夏草子实体，及药学上可接受的载体。

14.根据权利要求12所述应用，其特征在于，所述药剂的剂型为胶囊、锭剂、粉剂或口服液。