CN104371949A - 一种杀灭根结线虫的复合菌剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种杀灭根结线虫的复合菌剂及其制备方法，该杀灭根结线虫的复合菌剂由以下重量份数的原料制成：解淀粉芽孢杆菌50～70、淡紫拟青霉50～70；该杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法包括：根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂；根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉；按照质量份数比为50～70∶50～70，将所述单一菌剂和所述孢子粉进行混合，得到杀灭根结线虫的复合菌剂。本发明有益效果：该菌剂无污染、无残留，杀灭线虫能力强，繁殖快，并且该菌剂所含活性菌株还可以产生吲哚乙酸、菌素等物质，对植物具有促生、抗病功能。

Description

一种杀灭根结线虫的复合菌剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及微生物菌剂技术领域，具体来说，涉及一种杀灭根结线虫的复合菌剂及其制备方法。 
背景技术
根结线虫是一种较为普遍的病原生物，主要存在于大豆、西红柿等作物的根部，患了根结线虫的土地，植物一般生长比较缓慢，而且易患病，所以如何杀灭及控制根结线虫已成农业发展要解决的重大课题。 
目前，杀灭根结线虫的主要措施有两种：一是通过化学药剂处理土壤；二是开展生物治理，即通过发现线虫的天敌，扩大培养，投入到土壤中，进行一个良性的生物循环。其中，通过化学药剂处理土壤虽然能够在一定程度上对根结线虫的防治起到作用，但是，其也带来了严重的环境污染，此外，在实际应用时，一般的化学药剂也无法将根结线虫完全杀灭；而生物治理的方法虽然比化学药剂处理方法的效果要好，但需要投入大量的成本来培养根结线虫的天敌，这不仅投入成本较高，而且时间周期也较长。 
针对相关技术中的上述技术问题，目前尚未提出有效的解决方案。 
发明内容
针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种杀灭根结线虫的复合菌剂及其制备方法。 
本发明的技术方案是这样实现的： 
根据本发明的一个方面，提供了一种杀灭根结线虫的复合菌剂，该杀灭根结线虫的复合菌剂由以下重量份数的原料制成：解淀粉芽孢杆菌50～70、淡紫拟青霉50～70。 
根据本发明的另一方面，提供了一种杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方 法，该杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法包括：根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂；根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉；按照质量份数比为50～70∶50～70，将所述单一菌剂和所述孢子粉进行混合，得到杀灭根结线虫的复合菌剂。 
其中，在根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂时，可对所述解淀粉芽孢杆进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌菌种接种至装有预先配置的活化培养基的摇瓶中进行活化培养；并将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到装有预先配置的发酵培养基的发酵罐内进行发酵培养；再根据预先配置的载体，对所述发酵培养得到的单菌进行吸附，制得所述单一菌剂。 
其中，所述活化培养基的体积占所述摇瓶的体积的15％～30％，所述活化培养的温度36～40℃，所述活化培养的时间为24～32h，所述摇瓶的转速150～200rpm；并且，所述活化培养基由以下原料组成：葡萄糖15～20g/L、蛋白胨10～15g/L、氯化钠3～7g/L和牛肉膏0.3～0.8g/L。 
其中，所述发酵培养基的体积占所述发酵罐的体积的50％～70％，体积接种量为1～3％，并且，所述发酵罐中解淀粉芽孢杆菌含量大于等于1×109个/mL；此外，所述发酵培养基的温度为36℃～40℃，所述发酵培养基的时间为24～40h，发酵罐的搅拌转速为200～220rpm；并且，所述发酵培养基由以下原料组成：玉米粉10～15g/L、葡萄糖3～8g/L、豆饼粉18～22g/L、鱼粉3～8g/L、碳酸钙5～10g/L、硫酸铵0.8～1.0g/L、磷酸氢二钾0.1～0.5g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L和硫酸锰0.1～0.3g/L。 
其中，所述单菌按质量百分比5～15％的比例经所述载体吸附，并且，所述单一菌剂中菌体所占质量百分比为10％～20％，所述载体由草炭、蛭石、凹凸棒组成，其中，所述草炭、蛭石、凹凸棒的质量比为1～5∶1～3∶0.2～0.5。 
此外，在根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉时，可对所述淡紫拟青霉进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的淡紫拟青霉菌种接种至装有预先配置的活化培养基的摇瓶中进行活化培养；并将活化培养的淡紫拟青霉菌种接种到装有预先配置的发酵培养基的发酵罐内进行发酵培养；再将发酵得到的菌种接种到预先配置的固体培养基上，并将发酵后的菌体和培 养基粉碎后，制成孢子粉。 
其中，所述活化培养基的体积占所述摇瓶的体积的15％～30％，所述活化培养的温度26℃～30℃，所述活化培养的时间为45～60h，所述摇瓶的转速200～220rpm；并且，所述活化培养基由以下原料组成：马铃薯200～300g煮出的水、葡萄糖20～40g、水1L，pH自然。 
其中，所述发酵培养基的体积占所述发酵罐的体积的50～70％，体积接种量为1～3％；并且，所述发酵罐中淡紫拟青霉孢子含量大于等于1×108个/mL，此外，所述发酵培养基的温度为27℃～30℃，所述发酵培养基的时间为3～9d，所述发酵罐的搅拌转速为200～220rpm；并且，所述发酵培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉30％～40％、葡萄糖10％～20％、氯化铵3％～5％、豆饼粉3％～5％、鱼粉1％～5％、碳酸钙1％～3％。 
其中，所述固体培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉20％～40％、麸皮20％～40％、大米10％～20％、秸秆5％～10％。 
本发明的有益效果：该菌剂无污染、无残留，杀灭线虫能力强，繁殖快，并且该菌剂所含活性菌株还可以产生吲哚乙酸、菌素等物质，对植物具有促生、抗病功能。 
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。 
实施例一 
根据本发明的实施例，提供了一种杀灭根结线虫的复合菌剂，该杀灭根结线虫的复合菌剂由重量份数的原料制成：解淀粉芽孢杆菌50、淡紫拟青霉50。 
根据本发明的实施例所述的一种杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法包括：根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂；根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉；按照质量份数比为50∶50，将所述单一菌剂和所述孢子粉进行混合，得到杀灭根结线虫的复合菌剂。 
其中，在根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂时，包括以下步骤： 
对所述解淀粉芽孢杆进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为15％的活化培养基的摇瓶中，在36℃的温度下活化培养24h，其中，所述摇瓶的转速150rpm，所述活化培养基由以下原料组成：葡萄糖15g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠3g/L和牛肉膏0.3/L。 
将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为50％的发酵培养基的发酵罐内，在36℃温度进行发酵培养24h，其中，所述发酵罐的搅拌转速为200rpm；体积接种量为1％；所述发酵罐中解淀粉芽孢杆菌含量大于等于1×109个/mL；所述发酵培养基由以下原料组成：玉米粉10g/L、葡萄糖3g/L、豆饼粉18g/L、鱼粉3g/L、碳酸钙5g/L、硫酸铵0.8g/L、磷酸氢二钾0.1g/L、硫酸镁0.1g/L和硫酸锰0.1g/L。 
再根据预先配置的载体，对所述发酵培养得到的单菌进行吸附，制得所述单一菌剂，其中，所述单菌按质量百分比5％的比例经所述载体吸附，并且，所述单一菌剂中菌体所占质量百分比为10％，所述载体由草炭、蛭石、凹凸棒组成，其中，所述草炭、蛭石、凹凸棒的质量比为1∶1∶0.2。 
此外，在根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉时，包括以下步骤： 
对所述淡紫拟青霉进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的淡紫拟青霉菌种接种至装有体积比为15％的活化培养基的摇瓶中，在26℃的温度下活化培养45h，其中，所述摇瓶的转速200rpm；并且，所述活化培养基由以下原料组成：马铃薯200g煮出的水、葡萄糖20g、水1L，pH自然。 
将活化培养的淡紫拟青霉菌种接种到装有体积比为50％的发酵培养基的发酵罐内，在27℃的温度下发酵培养3d；其中，所述发酵罐的搅拌转速为200rpm；体积接种量为1％，并且，所述发酵罐中淡紫拟青霉孢子含量大于等于1×108个/mL，所述发酵培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉30％、葡萄糖10％、氯化铵3％、豆饼粉3％、鱼粉1％、碳酸钙1％。 
再将发酵得到的菌种接种到预先配置的固体培养基上，并将发酵后的菌体和培养基粉碎后，制成孢子粉，其中，所述固体培养基由以下质量百分比的原 料组成：玉米粉20％、麸皮20％、大米10％、秸秆5％。 
实施例二 
根据本发明的实施例，提供了一种杀灭根结线虫的复合菌剂，该杀灭根结线虫的复合菌剂由重量份数的原料制成：解淀粉芽孢杆菌60、淡紫拟青霉60。 
根据本发明的实施例所述的一种杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法包括：根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂；根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉；按照质量份数比为60∶60，将所述单一菌剂和所述孢子粉进行混合，得到杀灭根结线虫的复合菌剂。 
其中，在根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂时，包括以下步骤： 
对所述解淀粉芽孢杆进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为22.5％的活化培养基的摇瓶中，在38℃的温度下活化培养28h，其中，所述摇瓶的转速175rpm，所述活化培养基由以下原料组成：葡萄糖17.5g/L、蛋白胨12.5g/L、氯化钠5g/L和牛肉膏0.55/L。 
将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为60％的发酵培养基的发酵罐内，在38℃温度进行发酵培养32h，其中，所述发酵罐的搅拌转速为210rpm；体积接种量为2％；所述发酵罐中解淀粉芽孢杆菌含量大于等于1×109个/mL；所述发酵培养基由以下原料组成：玉米粉12.5g/L、葡萄糖5.5g/L、豆饼粉20g/L、鱼粉5.5g/L、碳酸钙7.5g/L、硫酸铵0.9g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸镁0.2g/L和硫酸锰0.2g/L。 
再根据预先配置的载体，对所述发酵培养得到的单菌进行吸附，制得所述单一菌剂，其中，所述单菌按质量百分比10％的比例经所述载体吸附，并且，所述单一菌剂中菌体所占质量百分比为15％，所述载体由草炭、蛭石、凹凸棒组成，其中，所述草炭、蛭石、凹凸棒的质量比为3∶2∶0.35。 
此外，在根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉时，包括以下步骤： 
对所述淡紫拟青霉进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的淡紫拟青霉菌种接种至装有体积比为22.5％的活化培养基的摇瓶中，在26℃的温度下活化培养52h，其中，所述摇瓶的转速210rpm；并且，所述活化培养基由以 下原料组成：马铃薯250g煮出的水、葡萄糖30g、水1L，pH自然。 
将活化培养的淡紫拟青霉菌种接种到装有体积比为60％的发酵培养基的发酵罐内，在28℃的温度下发酵培养6d；其中，所述发酵罐的搅拌转速为210rpm；体积接种量为2％，并且，所述发酵罐中淡紫拟青霉孢子含量大于等于1×108个/mL，所述发酵培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉35％、葡萄糖15％、氯化铵4％、豆饼粉4％、鱼粉4％、碳酸钙2％。 
再将发酵得到的菌种接种到预先配置的固体培养基上，并将发酵后的菌体和培养基粉碎后，制成孢子粉，其中，所述固体培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉30％、麸皮30％、大米15％、秸秆7.5％。 
实施例三 
根据本发明的实施例，提供了一种杀灭根结线虫的复合菌剂，该杀灭根结线虫的复合菌剂由重量份数的原料制成：解淀粉芽孢杆菌70、淡紫拟青霉70。 
根据本发明的实施例所述的一种杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法包括：根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂；根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉；按照质量份数比为70∶70，将所述单一菌剂和所述孢子粉进行混合，得到杀灭根结线虫的复合菌剂。 
其中，在根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂时，包括以下步骤： 
对所述解淀粉芽孢杆进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌菌种接种至装有体积比为35％的活化培养基的摇瓶中，在40℃的温度下活化培养32h，其中，所述摇瓶的转速200rpm，所述活化培养基由以下原料组成：葡萄糖20g/L、蛋白胨15g/L、氯化钠7g/L和牛肉膏0.8/L。 
将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到装有体积比为70％的发酵培养基的发酵罐内，在40℃温度进行发酵培养40h，其中，所述发酵罐的搅拌转速为220rpm；体积接种量为3％；所述发酵罐中解淀粉芽孢杆菌含量大于等于1×109个/mL；所述发酵培养基由以下原料组成：玉米粉15g/L、葡萄糖8g/L、豆饼粉22g/L、鱼粉8g/L、碳酸钙10g/L、硫酸铵1.0g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.3g/L和硫酸锰0.3g/L。 
再根据预先配置的载体，对所述发酵培养得到的单菌进行吸附，制得所述 单一菌剂，其中，所述单菌按质量百分比15％的比例经所述载体吸附，并且，所述单一菌剂中菌体所占质量百分比为20％，所述载体由草炭、蛭石、凹凸棒组成，其中，所述草炭、蛭石、凹凸棒的质量比为5∶3∶0.5。 
此外，在根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉时，包括以下步骤： 
对所述淡紫拟青霉进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的淡紫拟青霉菌种接种至装有体积比为30％的活化培养基的摇瓶中，在30℃的温度下活化培养60h，其中，所述摇瓶的转速220rpm；并且，所述活化培养基由以下原料组成：马铃薯300g煮出的水、葡萄糖40g、水1L，pH自然。 
将活化培养的淡紫拟青霉菌种接种到装有体积比为70％的发酵培养基的发酵罐内，在30℃的温度下发酵培养9d；其中，所述发酵罐的搅拌转速为220rpm；体积接种量为3％，并且，所述发酵罐中淡紫拟青霉孢子含量大于等于1×108个/mL，所述发酵培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉40％、葡萄糖20％、氯化铵5％、豆饼粉5％、鱼粉5％、碳酸钙3％。 
再将发酵得到的菌种接种到预先配置的固体培养基上，并将发酵后的菌体和培养基粉碎后，制成孢子粉，其中，所述固体培养基由以下质量百分比的原料组成：玉米粉40％、麸皮40％、大米20％、秸秆10％。 
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。 

Claims (10)

1.一种杀灭根结线虫的复合菌剂，其特征在于，由以下重量份数的原料制成：解淀粉芽孢杆菌50～70、淡紫拟青霉50～70。
2.一种杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，用于权利要求1所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备，其特征在于，包括以下步骤：
根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂；
根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉；
按照质量份数比为50～70∶50～70，将所述单一菌剂和所述孢子粉进行混合，得到杀灭根结线虫的复合菌剂。
3.根据权利要求2所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，根据预先配置的解淀粉芽孢杆菌，制备解淀粉芽孢杆菌的单一菌剂包括：
对所述解淀粉芽孢杆进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌菌种接种至装有预先配置的活化培养基的摇瓶中进行活化培养；
将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到装有预先配置的发酵培养基的发酵罐内进行发酵培养；
根据预先配置的载体，对所述发酵培养得到的单菌进行吸附，制得所述单一菌剂。
4.根据权利要求3所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述活化培养基的体积占所述摇瓶的体积的15％～30％，所述活化培养的温度36～40℃，所述活化培养的时间为24～32h，所述摇瓶的转速150～200rpm；并且，所述活化培养基由以下原料组成：
葡萄糖15～20g/L、蛋白胨10～15g/L、氯化钠3～7g/L和牛肉膏0.3～0.8g/L。
5.根据权利要求3所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基的体积占所述发酵罐的体积的50％～70％，体积接种量为1～3％，并且，所述发酵罐中解淀粉芽孢杆菌含量大于等于1×109个/mL；此外，所述发酵培养基的温度为36℃～40℃，所述发酵培养基的时间为24～40h，发酵罐的搅拌转速为200～220rpm；并且，所述发酵培养基由以下原料组成：
玉米粉10～15g/L、葡萄糖3～8g/L、豆饼粉18～22g/L、鱼粉3～8g/L、碳酸钙5～10g/L、硫酸铵0.8～1.0g/L、磷酸氢二钾0.1～0.5g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L和硫酸锰0.1～0.3g/L。
6.根据权利要求3所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述单菌按质量百分比5％～15％的比例经所述载体吸附，并且，所述单一菌剂中菌体所占质量百分比为10％～20％，所述载体由草炭、蛭石、凹凸棒组成，其中，所述草炭、蛭石、凹凸棒的质量比为1～5∶1～3∶0.2～0.5。
7.根据权利要求2所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，根据预先配置的淡紫拟青霉，制备淡紫拟青霉的孢子粉包括：
对所述淡紫拟青霉进行纯化培养，并将纯化培养的斜面培养基上的淡紫拟青霉菌种接种至装有预先配置的活化培养基的摇瓶中进行活化培养；
将活化培养的淡紫拟青霉菌种接种到装有预先配置的发酵培养基的发酵罐内进行发酵培养；
将发酵得到的菌种接种到预先配置的固体培养基上，并将发酵后的菌体和培养基粉碎后，制成孢子粉。
8.根据权利要求7所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述活化培养基的体积占所述摇瓶的体积的15％～30％，所述活化培养的温度26℃～30℃，所述活化培养的时间为45～60h，所述摇瓶的转速200～220rpm；并且，所述活化培养基由以下原料组成：
马铃薯200～300g煮出的水、葡萄糖20～40g、水1L，pH自然。
9.根据权利要求7所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基的体积占所述发酵罐的体积的50％～70％，体积接种量为1～3％；并且，所述发酵罐中淡紫拟青霉孢子含量大于等于1×108个/mL，此外，所述发酵培养基的温度为27℃～30℃，所述发酵培养基的时间为3～9d，所述发酵罐的搅拌转速为200～220rpm；并且，所述发酵培养基由以下质量百分比的原料组成：
玉米粉30％～40％、葡萄糖10％～20％、氯化铵3％～5％、豆饼粉3％～5％、鱼粉1％～5％、碳酸钙1％～3％。
10.根据权利要求7所述的杀灭根结线虫的复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述固体培养基由以下质量百分比的原料组成：
玉米粉20％～40％、麸皮20％～40％、大米10％～20％、秸秆5％～10％。
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