CN113278555A - 一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂及其制备方法，是将枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉和盾壳霉分别进行培养，之后进行气流干燥，得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉成品和盾壳霉成品，并按照(2～3):(3～5):(1～3)的比例混合粉碎，得到微生物菌粉。通过多种微生物共同作用促进淡紫拟青霉对根结线虫的寄生和侵占，提高淡紫拟青霉对根结线虫的侵占率和速度，防治西红柿根结线虫的效果明显，显效快；并且本发明的微生物菌剂安全、无毒、无残留，可以应用于大规模病害防治。

Description

一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及防治西红柿根结线虫领域，具体涉及一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
番茄根结线虫主要侵染番茄根部，尤其侧根受害多。根上形成很多近球状瘤状物，似念珠状相互连接，初表面白色，后变褐色或黑色，地上部表现萎缩或黄化，天气干燥时易萎蔫或枯萎。线虫以成虫或卵在病组织里或以幼虫在土壤中越冬。病土和病肥是发病主要来源。该线虫发育适温25～30℃，幼虫遇低温失去活动能力，48～60℃经5分钟致死，在土中存活一年，2年即全部死亡。由于根部被破坏，影响正常的吸收机能，所以地上部生长发育受阻，轻者症状不明显，重者生长缓慢，植株比较矮小，生育不良，结果小而且少。在中午气温较高时，地上部植株呈萎蔫状态；早晚气温较低或浇水充足时，暂时萎蔫又可恢复正常。随着病情的发展，植株逐渐枯死。
根结线虫连年严重发生，发生面积和作物都在增加，国内21个省都有报道，据悉，因根结线虫造成的农业损失已高达700亿！近年来，线虫病害迅速蔓延，全国蔬菜根结线虫发生面积已经超过2000万亩。专家表示，随着发生态势的不断扩大，根结线虫即将成为全球作物第一大病害！
目前，番茄根结线虫的防治主要依靠化学农药和农业防治措施，但是长期利用化学农药进行化学防治，会使病虫等防治对象产生抗药性，而且还会杀害到其它害虫的天敌，使其更加难以防治。农业防治具有悠久的历史传统且应用普遍，没有不良副作用，但应用上易受地区、劳动力和季节的限制；生物防治，是利用有益生物或其他生物来抑制或消灭有害生物的一种防治方法，而作为防治副作用少、污染少、环保效果好的生物防治受到各界广泛重视。
发明内容
本发明的目的是提供一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂及其制备方法，以提供一种安全环保的可以快速防治西红柿根结线虫的微生物菌剂。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1.菌种活化：枯草芽孢杆菌、将淡紫拟青霉、盾壳霉分别接种到PDA培养基中进行培养，之后均为1～2×108CFU/ml的淡紫拟青霉菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液和盾壳霉菌悬液；
S2.液体发酵培养：将S1得到的枯草芽孢杆菌菌悬液接种到第一液体培养基内进行摇瓶培养；
将S1得到的淡紫拟青霉接种到第二液体培养基内进行摇瓶培养；
将S2得到的盾壳霉菌悬液接种到第三液体培养基中进行培养；
S3.吸附干燥：将枯草芽孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌液和盾壳霉菌液分别与吸附载体混合吸附，之后进行气流干燥，得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉成品和盾壳霉成品；
S4.混合粉碎：将S3得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉和盾壳霉成品按照(2～3):(3～5):(1～3)混合粉碎，既可得到微生物菌粉。
进一步优选，S2中所述第一液体培养基包括以下组分：麦麸15～20％、稻草5～10％、玉米粉1～3％、尿素0.6～1.0％、碳酸钙1.5～2.0％、KH2PO4 0.8～1.2％,水40～60％，PH＝6～8、硫酸亚铁0.3～0.6％；
进一步优选，S2中所述第二培养基包括以下组分：蔗糖1.0～1.5％、甘草2～4％、艾叶1～3％、菌菇渣20～30％、豆粕10～15％、中药渣5～10％、紫苏1～3％，氯化钠0.08～0.12％，硫酸锌0.08～0.12％、硫酸铜0.08～0.12％，硫酸亚铁0.08～0.12％、氯化钙0.08～0.12％、淘米水40～50％；
进一步优选，S2中所述第三培养基包括以下组分：去皮马铃薯35～40％、葡萄糖0.5～0.8％、硝酸钾0.08～0.12％、水50～60％。
进一步优选，S1中淡紫拟青霉的培养温度为22～28℃，培养时间为6～7天；枯草芽孢杆菌的培养温度为35～38℃，培养时间为22～26小时；盾壳霉的培养温度为18～22℃、培养时间为6～9天。
进一步优选，S2中枯草芽孢杆菌在进行摇瓶培养过程种，培养时间为22～28小时，转速为200～230r/min，温度为35～38℃。
进一步优选，S2中淡紫拟青霉在进行摇瓶培养时，培养时间为4～6天、温度为26～28℃、转速为120～130r/min。
进一步优选，S2中盾壳霉在进行摇瓶培养时，培养时间为12～17天、温度为18～23℃、转速为180～220r/min。
进一步优选，S3中所述吸附载体为稻草秸秆粉、玉米粉和米糠中的至少一种。
有益效果：淡紫拟青霉与跟结线虫乱囊接触，菌丝包围整个卵进行寄生，所产生的的几丁质酶穿透线虫的卵壳、幼虫及雌性成虫体壁，菌丝在其体内进行汲取营养、进行繁殖，影响其正常生理代谢，从而导致根结线虫的死亡；
盾壳霉可产生丰富的几丁质酶，在淡紫拟青霉计生并侵占跟结线虫的过程中提供有利的条件，促进淡紫拟青霉对跟结线虫的侵占率和速度，提高西红柿跟结线虫的防治效果；
枯草芽孢杆菌不仅能提高土壤肥力，还能提高菌种在土壤微粒上的附着能力。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1：
一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法：包括以下步骤：
S1.菌种活化：将淡紫拟青霉、枯草芽孢杆菌、盾壳霉分别接种到PDA培养基中进行培养，其中，淡紫拟青霉的培养温度为22℃，培养时间为6天；枯草芽孢杆菌的培养温度为35℃，培养时间为22小时；盾壳霉的培养温度为18℃、培养时间为6天。之后均为1～2×108CFU/ml的淡紫拟青霉菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液和盾壳霉菌悬液；
S2.液体发酵培养：将S1得到的枯草芽孢杆菌菌悬液接种到第一液体培养基内进行摇瓶培养；其中第一液体培养基包括以下组分：麦麸15％、稻草5％、玉米粉1％、尿素0.6％、碳酸钙1.5％、KH2PO4 0.8％,水40％，PH＝6、硫酸亚铁0.3％；培养时间为22小时，转速为200r/min，温度为35℃；
将S1得到的淡紫拟青霉接种到第二液体培养基内进行摇瓶培养；其中第二液体培养基包括以下组分：蔗糖1.0％、甘草2％、艾叶1％、菌菇渣20％、豆粕10％、中药渣5％、紫苏1％，氯化钠0.08％，硫酸锌0.08％、硫酸铜0.08％，硫酸亚铁0.08％、氯化钙0.08％、淘米水40％；培养时间为4天、温度为26℃、转速为120r/min；
将S2得到的盾壳霉菌悬液接种到第三液体培养基中进行培养，第三液体培养基包括以下组分：去皮马铃薯35％、葡萄糖0.5％、硝酸钾0.08％、水50％；培养时间为12天、温度为18℃、转速为180r/min。
S3.吸附干燥：将枯草芽孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌液和盾壳霉菌液分别与吸附载体混合吸附，之后进行气流干燥，得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉成品和盾壳霉成品，吸附载体为玉米粉；
S4.混合粉碎：将S3得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉和盾壳霉成品按照2:3:1混合粉碎，既可得到微生物菌粉。
实施例2：
一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法：包括以下步骤：
S1.菌种活化：将淡紫拟青霉、枯草芽孢杆菌、盾壳霉分别接种到PDA培养基中进行培养，其中，淡紫拟青霉的培养温度为28℃，培养时间为7天；枯草芽孢杆菌的培养温度为38℃，培养时间为26小时；盾壳霉的培养温度为22℃、培养时间为9天。之后均为1～2×108CFU/ml的淡紫拟青霉菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液和盾壳霉菌悬液；
S2.液体发酵培养：将S1得到的枯草芽孢杆菌菌悬液接种到第一液体培养基内进行摇瓶培养；其中第一液体培养基包括以下组分：麦麸20％、稻草10％、玉米粉3％、尿素1.0％、碳酸钙2.0％、KH2PO4 1.2％,水60％，PH＝8、硫酸亚铁0.6％；培养时间为28小时、转速为230r/min、温度为38℃；
将S1得到的淡紫拟青霉接种到第二液体培养基内进行摇瓶培养；其中第二液体培养基包括以下组分：蔗糖1.5％、甘草4％、艾叶3％、菌菇渣30％、豆粕15％、中药渣10％、紫苏3％，氯化钠0.12％，硫酸锌0.12％、硫酸铜0.12％，硫酸亚铁0.12％、氯化钙0.12％、淘米水50％；培养时间为6天、温度为28℃、转速为130r/min
将S2得到的盾壳霉菌悬液接种到第三液体培养基中进行培养，第三液体培养基包括以下组分：去皮马铃薯40％、葡萄糖0.8％、硝酸钾0.12％、水60％；培养时间为17天、温度为23℃、转速为220r/min。
S3.吸附干燥：将枯草芽孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌液和盾壳霉菌液分别与吸附载体混合吸附，之后进行气流干燥，得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉成品和盾壳霉成品，吸附载体为米糠；
S4.混合粉碎：将S3得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉和盾壳霉成品按照3:5:3混合粉碎，既可得到微生物菌粉。
实施例3：
一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法：包括以下步骤：
S1.菌种活化：将淡紫拟青霉、枯草芽孢杆菌、盾壳霉分别接种到PDA培养基中进行培养，其中，淡紫拟青霉的培养温度为25℃，培养时间为7天；枯草芽孢杆菌的培养温度为37℃，培养时间为25小时；盾壳霉的培养温度为20℃、培养时间为7天。之后均为1～2×108CFU/ml的淡紫拟青霉菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液和盾壳霉菌悬液；
S2.液体发酵培养：将S1得到的枯草芽孢杆菌菌悬液接种到第一液体培养基内进行摇瓶培养；其中第一液体培养基包括以下组分：麦麸18％、稻草8％、玉米粉2％、尿素0.8％、碳酸钙1.8％、KH2PO4 1.0％,水50％，PH＝7、硫酸亚铁0.4％；培养时间为25小时，转速为220r/min，温度为37℃；
将S1得到的淡紫拟青霉接种到第二液体培养基内进行摇瓶培养；其中第二液体培养基包括以下组分：蔗糖1.2％、甘草3％、艾叶2％、菌菇渣15％、豆粕12％、中药渣7％、紫苏2％，氯化钠0.1％，硫酸锌0.1％、硫酸铜0.1％，硫酸亚铁0.1％，氯化钙0.1％，淘米水45％；培养时间为5天、转速为125r/min，温度为27℃；
将S2得到的盾壳霉菌悬液接种到第三液体培养基中进行培养，第三液体培养基包括以下组分：去皮马铃薯37％、葡萄糖0.6％、硝酸钾0.1％、水55％；培养时间为15天、温度为20℃、转速为200r/min。
S3.吸附干燥：将枯草芽孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌液和盾壳霉菌液分别与吸附载体混合吸附，之后进行气流干燥，得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉成品和盾壳霉成品，吸附载体为玉米粉；
S4.混合粉碎：将S3得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉和盾壳霉成品按照2:3:1混合粉碎，既可得到微生物菌粉。
本发明的微生物菌剂的田间试验：
试验地点为某番茄种植基地。
试验方法：随机选取5亩试验田，并随机分为A、B、C、D、E五组，其中1-3组分别使用上述实施例1-3得到的微生物菌粉，在番茄育苗时将微生物菌粉拌细土进行撒施，每亩地施用微生物菌粉0.5kg，每隔一个月施用一次；D组施用某品牌淡紫拟青霉菌剂，每个月施用一次；E组为空白组。所有试验田具按常规方法进行管理。
Figure BDA0003081765700000071
Figure BDA0003081765700000072
根结分级标准：
0级-无根结；
1级-有根结，根数占整个根系的10％以下；
2级-有根结，根数占整个根系的35％以下；
4级-有根结，根数占整个根系的70％以下；
5级-有根结，根数占整个根系的70％以上。
调查结果和统计方法：100天后调查西红柿根瘤病级指数。
实验结果：
表1跟结线虫防治实验数据调查表
Figure BDA0003081765700000073
Figure BDA0003081765700000081
本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.菌种活化：枯草芽孢杆菌、将淡紫拟青霉、盾壳霉分别接种到PDA培养基中进行培养，之后均为1～2×108CFU/ml的淡紫拟青霉菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液和盾壳霉菌悬液；
S2.液体发酵培养：将S1得到的枯草芽孢杆菌菌悬液接种到第一液体培养基内进行摇瓶培养；
将S1得到的淡紫拟青霉接种到第二液体培养基内进行摇瓶培养；
将S2得到的盾壳霉菌悬液接种到第三液体培养基中进行培养；
S3.吸附干燥：将枯草芽孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌液和盾壳霉菌液分别与吸附载体混合吸附，之后进行气流干燥，得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉成品和盾壳霉成品；
S4.混合粉碎：将S3得到枯草芽孢杆菌成品、淡紫拟青霉和盾壳霉成品按照(2～3):(3～5):(1～3)混合粉碎，既可得到微生物菌粉。
2.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中所述第一液体培养基包括以下组分：麦麸15～20％、稻草5～10％、玉米粉1～3％、尿素0.6～1.0％、碳酸钙1.5～2.0％、KH2PO4 0.8～1.2％,水40～60％，PH＝6～8、硫酸亚铁0.3～0.6％。
3.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中所述第二培养基包括以下组分：蔗糖1.0～1.5％、甘草2～4％、艾叶1～3％、菌菇渣20～30％、豆粕10～15％、中药渣5～10％、紫苏1～3％，氯化钠0.08～0.12％，硫酸锌0.08～0.12％、硫酸铜0.08～0.12％，硫酸亚铁0.08～0.12％、氯化钙0.08～0.12％、淘米水40～50％。
4.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中所述第三培养基包括以下组分：去皮马铃薯35～40％、葡萄糖0.5～0.8％、硝酸钾0.08～0.12％、水50～60％。
5.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S1中淡紫拟青霉的培养温度为22～28℃，培养时间为6～7天；枯草芽孢杆菌的培养温度为35～38℃，培养时间为22～26小时；盾壳霉的培养温度为18～22℃、培养时间为6～9天。
6.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中枯草芽孢杆菌在进行摇瓶培养过程种，培养时间为22～28小时，转速为200～230r/min，温度为35～38℃。
7.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中淡紫拟青霉在进行摇瓶培养时，培养时间为4～6天、温度为26～28℃、转速为120～130r/min。
8.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S2中盾壳霉在进行摇瓶培养时，培养时间为12～17天、温度为18～23℃、转速为180～220r/min。
9.根据权利要求1所述的一种防治西红柿根结线虫的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：S3中所述吸附载体为稻草秸秆粉、玉米粉和米糠中的至少一种。
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