CN104328201B - 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents

一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104328201B
CN104328201B CN201410657146.3A CN201410657146A CN104328201B CN 104328201 B CN104328201 B CN 104328201B CN 201410657146 A CN201410657146 A CN 201410657146A CN 104328201 B CN104328201 B CN 104328201B
Authority
CN
China
Prior art keywords
methylation
disease
primer
alzheimer
gene promoter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201410657146.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104328201A (zh
Inventor
段世伟
季慧慧
王钦文
刘桂利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ningbo University
Original Assignee
Ningbo University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ningbo University filed Critical Ningbo University
Priority to CN201410657146.3A priority Critical patent/CN104328201B/zh
Publication of CN104328201A publication Critical patent/CN104328201A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104328201B publication Critical patent/CN104328201B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/154—Methylation markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，所述的一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物；其通过检测与阿尔茨海默病相关的Kappa阿片受体基因启动子区甲基化程度辅助诊断阿尔茨海默病，简单、方便，检测效率高，针对性强，具有准确可靠、灵活快速和经济节约的优点，有利于阿尔茨海默病的早期发现和及时治疗。

Description

一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法
技术领域
本发明涉及阿尔茨海默病的辅助诊断技术领域，特别涉及一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法，尤其指一种能用于检测与阿尔茨海默病相关的Kappa阿片受体(KappaOpoioidReceptor1，OPRK1)基因启动子区甲基化程度的检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)是一种系统性神经退行性疾病，其临床表现为高级认知功能低下，主要特征包括脑细胞内神经纤维缠结及细胞外老年斑。阿尔茨海默病患者需要终生护理，因此给社会和家庭带来极大的经济负担。阿尔茨海默病是一种由遗传因素和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，寻找阿尔茨海默病相关基因进而阐明痴呆症发病的遗传机制已经成为目前研究的热点。虽然有越来越多的医学研究机构重视并开展阿尔茨海默病的病因研究，且研究多集中于相关候选基因的单核苷酸多态性与阿尔茨海默病的关联性上，但其发病机理仍未被完全阐释清楚，这无疑妨碍了阿尔茨海默病预防及治疗水平的提高。
Kappa阿片受体(KappaOpoioidReceptor1,OPRK1)是G蛋白欧联受体家族中阿片受体中的一员。Kappa阿片受体是由位于8号染色体的Kappa阿片受体基因(KappaOpoioidReceptor1,OPRK1)(chr8:53225716..53251697)编码而成的。国内外已有大量研究报道了OPRK1基因单核苷酸多态性与阿尔茨海默病发病的关系。
目前，国内外还没有公开任何关于用于检测与阿尔茨海默病相关的Kappa阿片受体基因启动子区甲基化程度的检测试剂盒相关研究报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供检测方便、针对性强、检测准确率高的一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒；通过对样品DNA甲基化水平测定辅助诊断阿尔茨海默病，检测方法简单、检测效率高。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：
一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，所述的一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物：
所述的甲基化特异性上游引物包括以下核苷酸序列：
5’-GTGGGTTTGGTGGGTAAT-3’；
所述的甲基化特异性下游引物包括以下核苷酸序列：
5’-Biotin-CTCTTCTAAAAAACCACCCTATAACAT-3’；
所述的甲基化特异性测序引物包括以下核苷酸序列：
5’-GGTTTGGTGGGTAATT-3’。
为优化上述技术方案，采取的具体措施还包括：
一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒的检测方法：包括以下步骤：
步骤一：提取样本的全血基因组DNA，并检测所得DNA的浓度；
步骤二：采用甲基化试剂盒对样本DNA进行亚硫酸氢盐转化；
步骤三：取步骤二中转化过的DNA样本20ng加入到ZymoTaqTMPreMix酶，并加入一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物，进行PCR扩增；
步骤四：焦磷酸测序的前期准备：在PSQ96板中预先加入45μl含有0.3μM甲基化特异性测序引物的退火缓冲液，将需要使用的混匀的琼脂糖珠转移到一个微量离心管中，在琼脂糖珠中加入结合缓冲液混匀；将以上混合液加入PCR扩增产物中，将PCR产物在常温下混匀10分钟，使得磁珠与生物素结合；在真空预备工作站中，四个样品板中依次加入180ml的高纯水、70％乙醇、洗涤缓冲液和120ml的变性缓冲液；打开真空预备工作站的泵，将真空准备工具在高纯水中清洗30秒；然后将真空准备工具移到PCR板中，抓取琼脂糖珠；拿起PCR板，检查是否大部分磁珠都被吸附在了真空准备工具上；将真空准备工具放入70％乙醇中5秒；然后移到变性缓冲液中5秒；再移到洗涤缓冲液中清洗5至10秒；关掉泵；将真空准备工具放入含有甲基化特异性测序引物的板中，摇动，释放琼脂糖珠；使用高纯水清洗真空准备工具；将放有样品的PSQ96板放在加热板上加热到80℃2分钟，再冷却到室温；
步骤五：焦磷酸测序：在焦磷酸测序仪上，采用PyromarkGoldQ24试剂盒对步骤四中的PSQ96板中的样本进行测序，然后应用PyroMarkCpG软件对结果进行甲基化分析。
上述的步骤一中采用Lab-Aid820全自动核酸提取仪提取全血基因组DNA，再通过NanoDrop2000超微量分光光度计检测DNA的浓度。
上述的步骤二中采用EZDNA甲基化试剂盒。
上述的步骤三中PCR扩增条件为：首先95℃10min的变性；接着95℃30s，Tm40s，72℃50s，共45个循环的退火反应；然后延伸反应72℃7min。
上述的步骤五中焦磷酸测序仪采用PyroMarkQ24焦磷酸测序。
本发明一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法，所述的检测试剂盒包含一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，所述的一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物；其优点在于：通过检测与阿尔茨海默病相关的Kappa阿片受体基因启动子区甲基化程度辅助诊断阿尔茨海默病，简单、方便，检测效率高，针对性强，具有准确可靠、灵活快速和经济节约的优点，有利于阿尔茨海默病的早期发现和及时治疗。
附图说明
图1为被检测序列所在区域以及3个CpG位点的相关性示意图；
图2为DNA甲基化水平检测结果示意图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包含一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，所述的一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物：
所述的甲基化特异性上游引物包括以下核苷酸序列：
5’-GTGGGTTTGGTGGGTAAT-3’；
所述的甲基化特异性下游引物包括以下核苷酸序列：
5’-Biotin-CTCTTCTAAAAAACCACCCTATAACAT-3’；
所述的甲基化特异性测序引物包括以下核苷酸序列：
5’-GGTTTGGTGGGTAATT-3’。
一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒的检测方法：包括以下步骤：
步骤一：提取样本的全血基因组DNA，并检测所得DNA的浓度；
步骤二：采用甲基化试剂盒对样本DNA进行亚硫酸氢盐转化；
步骤三：取步骤二中转化过的DNA样本20ng加入到ZymoTaqTMPreMix酶，并加入一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物，进行PCR扩增；
步骤四：焦磷酸测序的前期准备：在PSQ96板中预先加入45μl含有0.3μM甲基化特异性测序引物的退火缓冲液，将需要使用的混匀的琼脂糖珠转移到一个微量离心管中，在琼脂糖珠中加入结合缓冲液混匀；将以上混合液加入PCR扩增产物中，将PCR产物在常温下混匀10分钟，使得磁珠与生物素结合；在真空预备工作站中，四个样品板中依次加入180ml的高纯水、70％乙醇、洗涤缓冲液和120ml的变性缓冲液；打开真空预备工作站的泵，将真空准备工具在高纯水中清洗30秒；然后将真空准备工具移到PCR板中，抓取琼脂糖珠；拿起PCR板，检查是否大部分磁珠都被吸附在了真空准备工具上；将真空准备工具放入70％乙醇中5秒；然后移到变性缓冲液中5秒；再移到洗涤缓冲液中清洗5至10秒；关掉泵；将真空准备工具放入含有甲基化特异性测序引物的板中，摇动，释放琼脂糖珠；使用高纯水清洗真空准备工具；将放有样品的PSQ96板放在加热板上加热到80℃2分钟，再冷却到室温；
步骤五：焦磷酸测序：在焦磷酸测序仪上，采用PyromarkGoldQ24试剂盒对步骤四中的PSQ96板中的样本进行测序，然后应用PyroMarkCpG软件对结果进行甲基化分析。
实施例中，步骤一中采用Lab-Aid820全自动核酸提取仪提取全血基因组DNA，再通过NanoDrop2000超微量分光光度计检测DNA的浓度。
实施例中，步骤二中采用EZDNA甲基化试剂盒。
实施例中，步骤三中PCR扩增条件为：首先95℃10min的变性；接着95℃30s，Tm40s，72℃50s，共45个循环的退火反应；然后延伸反应72℃7min。
实施例中，步骤五中焦磷酸测序仪采用PyroMarkQ24焦磷酸测序。
Kappa阿片受体基因启动子区域的高甲基化水平导致阿尔茨海默病基因的低表达，从而影响阿尔茨海默病的发生和发展。因此，Kappa阿片受体基因启动子区甲基化水平与阿尔茨海默病的患病率呈正相关，以检测阿尔茨海默病基因启动子区甲基化水平为基础的诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对阿尔茨海默病的检测，检测效率高，针对性强。
下面通过实验证明Kappa阿片受体基因启动子区甲基化水平与阿尔茨海默病的患病率呈正相关。
1、研究对象的收集
从宁波市某三甲医院收集阿尔茨海默病患者，痴呆诊断标准依据世界卫生组织的国际疾病分类第10版(ICD-10)，阿尔茨海默病(AD)诊断标准采用NINCDS-ADRDA标准。排除血管性痴呆，路易体痴呆等疾病后，最后确定阿尔茨海默病人48例作为病例组(81.23±9.00岁)，同时收集年龄匹配且无痴呆家族史的58名正常者作为对照组(79.68±7.94岁)。对所有研究对象在知情同意的前提下，抽血检测载脂蛋白、同型半胱氨酸等一般生化指标，同时抽取静脉血3ml入EDTA抗凝管中，-80℃低温储存，以备用于标本统一提取基因组DNA。
2、基因组DNA的提取
应用Lab-Aid820全自动核酸提取仪(中国厦门，致善生物科技)提取上述步骤得到的样本的全血基因组DNA，再通过NanoDrop2000超微量分光光度计(美国，ThermoFisherScientific)检测所得DNA的浓度，以供OPRK1基因启动子区DNA甲基化水平的检测。
3、DNA甲基化水平测定
本实验采用焦磷酸测序技术对OPRK1基因启动子区的4个CpG位点(如图1)进行了DNA甲基化水平分析。此技术的基本原理：用重亚硫酸盐处理DNA样品后，再应用聚合酶链反应(PCR)扩增，可使发生甲基化的胞嘧啶(C)碱基保持不变，而使未发生甲基化的C转变成了尿嘧啶(U)，然后通过测序引物进行PCR测序，从而得到哪个位点发生了甲基化。本次研究采用PyroMarkAssayDesign软件进行引物设计，用于实验的PCR扩增引物和测序引物如下：
所述的甲基化特异性上游引物包括以下核苷酸序列：
5’-GTGGGTTTGGTGGGTAAT-3’；
所述的甲基化特异性下游引物包括以下核苷酸序列：
5’-Biotin-CTCTTCTAAAAAACCACCCTATAACAT-3’；
所述的甲基化特异性测序引物包括以下核苷酸序列：
5’-GGTTTGGTGGGTAATT-3’。
DNA甲基化水平测定的具体步骤：
第一步：采用EZDNA甲基化试剂盒-Gold(EZDNAMethylation-GoldTMKit;ZYMORESEARCH)对样本DNA进行亚硫酸氢盐转化。
第二步：取第一步中转化过的DNA样本20ng加入到ZymoTaqTMPreMix酶(ZymoTaqTMPreMix,ZYMORESEARCH)，并加入上述一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物，进行PCR扩增，扩增条件：首先95℃10min的变性；接着95℃30s，Tm40s，72℃50s，共45个循环的退火反应；然后延伸反应72℃7min。(注：Tm在实验中根据跑PCR梯度温度确定)
第三步：焦磷酸测序的前期准备：在PSQ96板中预先加入45μl含有0.3μM上述甲基化特异性测序引物的退火缓冲液(PyroMarkAnnealingBuffer;Qiagen)；将需要使用的混匀的琼脂糖珠总量(每样本3μl)转移到一个微量离心管中；在琼脂糖珠中加入结合缓冲液(PyroMarkBindingBuffer;Qiagen)，使得平均每个样品约有50μl的体积，将混合物混匀；将以上混合物加入PCR产物(50μl反应体积)中，每样本50μl；将PCR产物在常温下混匀10分钟，使得磁珠与生物素结合；在真空预备工作站中，四个样品板中依次加入180ml的高纯水、70％乙醇、洗涤缓冲液(PyroMarkWashBuffer;Qiagen;)和120ml的变性缓冲液(PyroMarkDenaturationSolution;Qiagen)；打开真空预备工作站的泵，将真空准备工具在高纯水中清洗30秒；然后将真空准备工具(PyroMarkVacuumPrepFilterProbes;Qiagen)移到PCR板中，抓取琼脂糖珠(在磁珠与PCR产物结合后三分钟内完成此操作)；拿起PCR板，检查是否大部分磁珠都被吸附在了真空准备工具上；将真空准备工具放入70％乙醇中5秒；然后移到变性缓冲液中5秒；再移到洗涤缓冲液中清洗5－10秒；关掉泵；将真空准备工具放入含有测序引物的板中，摇动，释放琼脂糖珠(测序引物也可最后加入)；使用高纯水清洗真空准备工具；将放有样品的PSQ96板放在加热板上加热到80℃2分钟，再冷却到室温，即可进行焦磷酸测序反应。
第四步：焦磷酸测序：在PyroMarkQ24焦磷酸测序仪上，采用PyromarkGoldQ24试剂盒(PyromarkGoldQ24Reagents;Qiagen)对第三步中的PSQ96板中的样本进行测序，然后应用PyroMarkCpG软件对结果进行甲基化分析(甲基化水平检测结果示例见图2)。图2中所示百分数为对应CpG位点的甲基化程度，如图2所示CpG1到CpG3的甲基化程度分别为5%，7%，22%。
4、数据分析
本次实验采用SPSS16.0对数据进行整理分析，我们发现：被检测的3个CpG位点间存在显著关联(相关系数r>0.715，p<0.001，有统计学意义，见图1)(注：p<0.05时表示有统计学意义，下同)，所以我们把CpG1-CpG3求平均值后参与到后续的分析中，发现病例组和对照组之间的DNA甲基化水平存在显著差异(p=0.006，见表1)。因此，我们分性别比较了病例组和对照组间阿尔茨海默病基因启动子区甲基化水平的差异，结果(见表2)发现平均甲基化在男性中与阿尔茨海默病存在关联(p=0.049)，而CpG3在女性中与阿尔茨海默病相关(p=0.045)。
图1为被检测序列所在区域：具体位置为Chr8:54163184..54163384；以及所检测的3个CpG点之间的关联性分析结果（例如CpG1与CpG2的相关系数为0.881，CpG2与CpG3的相关系数为0.869）。
表1病例组与对照组间的比较(n=106)
表2分层后病例组与对照组间的比较(n=106)
注：n表示样本个数，p值小于0.05，具有统计学意义；加a表示进行过对数转换；加b表示运用非参数秩和检验。
本发明的最佳实施例已被阐明，由本领域普通技术人员做出的各种变化或改型都不会脱离本发明的范围。
SEQUENCELISTING
<110>宁波大学
<120>一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法
<130>
<160>3
<170>PatentInversion3.3
<210>1
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
gtgggtttggtgggtaat18
<210>2
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
ctcttctaaaaaaccaccctataacat27
<210>3
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
ggtttggtgggtaatt16

Claims (1)

1.一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒，其特征是：所述的检测试剂盒包含一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，所述的一对Kappa阿片受体基因启动子区甲基化特异性扩增引物包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物：
所述的甲基化特异性上游引物为：
5’-GTGGGTTTGGTGGGTAAT-3’；
所述的甲基化特异性下游引物为：
5’-Biotin-CTCTTCTAAAAAACCACCCTATAACAT-3’；
所述的甲基化特异性测序引物为：
5’-GGTTTGGTGGGTAATT-3’。
CN201410657146.3A 2014-11-18 2014-11-18 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法 Expired - Fee Related CN104328201B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410657146.3A CN104328201B (zh) 2014-11-18 2014-11-18 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410657146.3A CN104328201B (zh) 2014-11-18 2014-11-18 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104328201A CN104328201A (zh) 2015-02-04
CN104328201B true CN104328201B (zh) 2016-04-06

Family

ID=52403006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410657146.3A Expired - Fee Related CN104328201B (zh) 2014-11-18 2014-11-18 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104328201B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107475382A (zh) * 2017-08-17 2017-12-15 宁波大学 基于mthfd1甲基化辅助诊断脑卒中的检测试剂盒及其检测方法
CN108456724A (zh) * 2018-03-23 2018-08-28 宁波大学 一种包含阿片受体基因的检测试剂盒及其检测方法
CN110257517A (zh) * 2019-06-27 2019-09-20 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 基于焦磷酸测序法检测mlh1启动子基因甲基化的引物、试剂盒和方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103966340A (zh) * 2014-05-26 2014-08-06 宁波大学 一种用于辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103966340A (zh) * 2014-05-26 2014-08-06 宁波大学 一种用于辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
mu-,delta- and kappa-opioid receptor populations are differentially altered in distinct areas of postmortem brans of Alzheimer"s disease patients;Anne-Marie Mathieu-Kia et al;《Brain Research》;20011231;121-134 *
针对阿尔茨海默病治疗的G蛋白偶联受体及其药物研究进展;何玲等;《国际药学研究杂志》;20130630;255-260 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104328201A (zh) 2015-02-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103911456B (zh) 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法
CN104328200B (zh) 辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法
CN103103256B (zh) 可用于检测与精神分裂症相关的drd4基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用
TW201639967A (zh) 檢測胎兒基因資訊的方法、試劑盒、裝置和系統
CN104328201B (zh) 一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法
CN103966228B (zh) 一种Rh血型DEL型RHD93T＞A等位基因及其检测方法
CN102732633B (zh) 人idh基因突变的检测引物和试剂盒
CN103937884A (zh) 一种用于结核分枝杆菌检测的环介导等温扩增试剂盒及其使用方法
CN113999901B (zh) 心肌特异性甲基化标记物
CN103602722B (zh) 可用于检测与精神分裂症相关的drd3基因甲基化程度的试剂盒及其应用
CN103937806B (zh) 一种Rh血型DEL型RHD838G＞A等位基因及其检测方法
CN103757100A (zh) 检测mpl基因515位点突变类型的方法和引物
CN103160582B (zh) 可用于检测与2型糖尿病相关的gck基因甲基化程度的试剂盒及其应用
CN102952850A (zh) 用于检测结核分枝杆菌的实时荧光定量pcr方法、引物、探针及试剂盒
CN103966340B (zh) 一种用于辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其应用
CN103122378B (zh) 可用于检测与原发性高血压相关的α-内收蛋白基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用
JP2013236627A (ja) Ｙ染色体及びｙ染色体上精子形成領域の欠失部位の分析方法
CN105316349A (zh) 结核分枝杆菌KatG突变基因及其用途
CN104561258B (zh) 一种用于直结肠癌早期诊断的检测试剂盒及其应用
CN104087671A (zh) 一种用于检测人21号染色体数目的试剂盒
CN108456724A (zh) 一种包含阿片受体基因的检测试剂盒及其检测方法
CN108715894A (zh) 一种包含精神分裂症断裂基因的检测试剂盒及检测方法
CN105671188A (zh) 用于诊断结核分枝杆菌感染的分子标志物、引物组及应用
CN105886641A (zh) 用于辅助诊断原发性高血压的检测试剂盒及其应用
CN104726589A (zh) 可用于检测与大肠癌相关的cmtm3基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160406

Termination date: 20181118

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee