CN104324073B - 苦参提取物在治疗hpv中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了苦参提取物在治疗HPV中的应用，通过乙醇回流法提取苦参总碱，采用纤维素酶和亚硫酸钠处理提取液得到苦参提取物。本发明治疗HPV的苦参提取物通过临床研究，治疗宫颈HPV感染疗效确切、明显。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体的涉及苦参提取物在治疗HPV中的应用。
背景技术
宫颈癌的发病率在女性肿瘤中位居第二，是全世界最常见的恶性肿瘤之一。我国宫颈癌的发病率和死亡率约占全世界的1/3，而甘肃地区的死亡率高达39/10万。研究已证实，人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的主要危险因素，从HPV感染到出现宫颈癌前病变，进而发展为宫颈癌，这是一个较为漫长的过程，一般需要3～8年的时间。目前，临床上对于宫颈HPV感染的处理并没有统一的方案。如果能够早期诊断、早期预防、早期治疗，宫颈癌将有望成为可以预防并治愈的疾病。
目前尚没有发现疗效肯定的对抗HPV病毒的药物，只是咪喹莫特等常规抗病毒药物，还有重组人干扰素制剂，如安达芬栓，舒润栓等。现有技术已经报道过苦参碱软膏具有广谱抗病毒和免疫调节功能，具有抗宫颈HPV感染的作用。但如何进一步提高苦参软膏治疗HPV效果是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗HPV的苦参提取物，为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：
本发明一方面涉及一种苦参提取物在制备治疗HPV药物中的应用，其特征在于所述的苦参提取物通过如下方式得到：
(1)以苦参为原料，以体积百分浓度为45-75％乙醇回流提取得到回流液，减压蒸馏回收乙醇并得到提取浸膏；
(2)在提取浸膏中加入1％重量的纤维素酶以及1％亚硫酸钠，在37±1℃保温培育12-24小时，然后过滤得到滤液；
(3)以HCl调节所述滤液pH至3～4之间后，过滤所述滤液，并以NaOH调节pH至10～11之间，然后将所述滤液浓缩；
(4)以氯仿萃取所述浓缩滤液，合并氯仿层，减压蒸干得苦参碱提取物。
在本发明的一个优选实施方式中，所述苦参原料为目数为20～60目苦参粉。
在本发明的一个优选实施方式中，所述乙醇的体积百分浓度为60％。
在本发明的一个优选实施方式中，所述乙醇回流法中，料液比为1:12；采用所述乙醇回流法提取2次。
在本发明的一个优选实施方式中，通过氯仿四段萃取萃取浓缩滤液，氯仿用量分别为滤液体积的1倍、1/2倍、1/2倍和1/2倍。
在本发明的一个优选实施方式中，所述的治疗HPV的药物为软膏制剂，优选的，所述的软膏制剂辅料包括凡士林、甘油、十八醇、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、三氯叔丁醇、轻质液体石蜡以及二甲亚砜。
本发明的治疗HPV的苦参提取物通过临床研究，治疗宫颈HPV感染疗效确切、明显。
具体实施方式
若未特别说明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：
取苦参粉10g，按照表1正交实验安排进行提取，以苦参得率为指标衡量提取结果。
采用乙醇回流法提取苦参碱，包括以下步骤：
(1)以苦参为原料，以体积百分浓度为60％乙醇回流提取得到回流液，料液比为1:12；采用所述乙醇回流法提取2次，减压蒸馏回收乙醇并得到提取浸膏；
(2)在提取浸膏中加入1％重量的纤维素酶以及1％亚硫酸钠，在37±1℃保温培育12-24小时，然后过滤得到滤液；
(3)以HCl调节所述滤液pH至3～4之间后，过滤所述滤液，并以NaOH调节pH至10～11之间，然后将所述滤液浓缩；
(4)以氯仿萃取所述浓缩滤液，合并氯仿层，减压蒸干得苦参碱提取物。
实施例2：药效学实验
1.病例资料2012年12月～2013年12月在兰州某医院妇产科门诊常规体检宫颈HPV感染阳性的患者，按照入院编号随机分为3组，治疗组120例，阳性对照组120例，阴性对照组剔除一些因其他因素不宜入组的患者，共120例。
2纳入标准(1)有性生活史或已婚而非妊娠妇女，年龄18～45岁；(2)HPV-DNA感染阳性；(3)宫颈上皮内瘤变(CIN)I级；(4)无重大脏器疾患；·(5)无药物过敏史(特别是过敏体质者)；(6)患者知情同意，接受本次试验。排除标准为:急性生殖道炎症(淋病、支原体或衣原体感染)；用药过程中中断治疗者，包括没有坚持用药或者用药有不良反应者。
3仪器与试剂主要试剂:人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒购自深圳凯普生物技术有限公司；主要仪器:PCR扩增仪PEApplied Biosystems(Eppendorf)产品、涡旋振荡器KP-XW80(常州中捷实验设备公司)、医用核酸分子快速杂交仪HHM-2(HybriMax)产品。
4标本采集和检测两组均在治疗前及治疗后约3、6、9个月分别进行HPV-DNA分型检测。所有患者均由同一位妇产科医师采用凯普公司配套专用宫颈刷置于宫颈口(鳞柱交接处)，沿顺时针旋转3～5w获得足够的移行区上皮细胞样本取出，放入3ml专用细胞保存液中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧管盖，做好样本标记，立即送检。HPV感染基因亚型检测步骤和方法，严格按照试剂盒说明操作。
5用药方案
在月经干净后3d开始用药，1次/d，1管/次，睡前洗外阴后放至阴道深部，2周为1个疗程，连用3个疗程，月经期停用，停药3d后复诊。
治疗组：(3g每支，含300mg实施例1所制备的苦参提取物，辅料为凡士林、甘油、十八醇、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、三氯叔丁醇、轻质液体石蜡以及二甲亚砜)
阳性对照组：中药苦参软膏药(3g/支，每支含苦参总碱300mg，市售产品)。
阴性对照组：不使用任何药物，3个月后复查。
6统计学处理由专人负责数据输入和核对。
2结果
3个月后，阴性对照组HPV转阴15例，转阴率为12.5％；治疗组HPV转阴69例，转阴率为57.5％，阳性对照组HPV转阴45例，转阴率为37.5％，两组HPV转阴率比较有显著差异(P＜0.05)。相比于市售苦参软膏，本发明的苦参总碱软膏在治疗HPV上有显著的提高，能明显改善患者临床症状体征。
以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种苦参提取物在制备治疗HPV药物中的应用，其特征在于所述的苦参提取物通过如下方式得到：
(1)以苦参为原料，以体积百分浓度为45-75％乙醇回流提取得到回流液，减压蒸馏回收乙醇并得到提取浸膏；
(2)在提取浸膏中加入1％重量的纤维素酶以及1％亚硫酸钠，在37±1℃保温培育12-24小时，然后过滤得到滤液；
(3)以HCl调节所述滤液pH至3～4之间后，过滤所述滤液，并以NaOH调节pH至10～11之间，然后将所述滤液浓缩；
(4)以氯仿萃取所述浓缩滤液，合并氯仿层，减压蒸干得苦参碱提取物。
2.根据权利要求1所述的应用，所述苦参原料为目数为20～60目苦参粉。
3.根据权利要求1所述的应用，所述乙醇的体积百分浓度为60％。
4.根据权利要求1所述的应用，所述乙醇回流法中，料液比为1:12；采用所述乙醇回流法提取2次。
5.根据权利要求1所述的应用，通过氯仿四段萃取萃取浓缩滤液，氯仿用量分别为滤液体积的1倍、1/2倍、1/2倍和1/2倍。
6.根据权利要求1－5任一项所述的应用，所述的治疗HPV的药物为软膏制剂。
7.根据权利要求6所述的应用，所述的软膏制剂辅料包括凡士林、甘油、十八醇、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、三氯叔丁醇、轻质液体石蜡以及二甲亚砜。
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| 苦参软膏的制备及质量评价;梁煜霞等;《国际医药卫生导报》;20120131;第18卷(第1期);第77-79页 * |
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| Publication number | Publication date |
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| CN104324073A (zh) | 2015-02-04 |
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