CN102058666B - 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，主要由以下重量份的中药饮片制成：羌活6～14份、薄荷6～12份、柴胡8～12份、黄芩9～12份、青蒿8～12份、石膏15～40份、大青叶12～18份、鸭跖草10～15份、生甘草2～6份。根据不同中药饮片的性质及有效成分或部位的性质而确定水煎煮、纯化、浓缩、干燥等各工艺，以出膏率和黄芩苷的含量为指标，用正交试验来确定。薄荷、青蒿、羌活中的挥发油为有效成分，采用单独提取挥发油，并在固体剂型最后成型时加入。本制剂治疗病毒性上呼吸道感染性发热，能有效抗病毒、快速退烧和改善咽痛、咳嗽等上呼吸道临床症状。

Description

一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗病毒性上呼吸道感染的退热中药制剂。 

背景技术

急性病毒性上呼吸道感染(acute upper respiratory tract infection)简称为上感，主要病原体是病毒，少数是细菌。通过呼吸道传播，如患者喷嚏和含有病毒的飞沫经空气传播，或经污染的手和用具接触传播。上呼吸道感染为自鼻孔至环状软骨下缘包括鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称。因引起上感的病原体大多为自然界中广泛存在的多种病毒，且病毒存在变异性，同时健康人亦可携带，且人体对其感染后产生的免疫力较弱、短暂，病毒间也无交叉免疫，故可反复发病。临床以发热、头痛、身痛、咽痛或鼻塞、流涕、咳嗽为主症，具有起病急、病程短的特点，好发于冬春季节的一种常见病，中医称之为外感发热。高热退热是门、急诊主要治疗目标。中药治疗外感发热的常用治法有解表法，包括辛温解表、辛凉解表、养阴解表、温阳解表等；清热法，包括清热解毒法。攻下法、和解法、活血化瘀法、清气凉营法、宣透利湿法等，但目前中医治疗病毒性上呼吸道感染一般见效较慢，尚没有能快速退烧和改善上呼吸道临床症状的中药制剂。 

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，以能快速退烧和改善咽痛、咳嗽等上呼吸道临床症状。 

本发明一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，主要由以下重量份的中药饮片制成：羌活6～14份、薄荷6～12份、柴胡8～12份、黄芩9～12份、青蒿8～12份、石膏15～40份、大青叶12～18份、鸭跖草10～15份和生甘草2～6份。 

所述中药饮片各组分的重量份优选为：羌活10份、薄荷10份、柴胡10份、黄芩10份、青蒿10份、石膏30份、大青叶15份、鸭跖草15份、生甘草5份。 

所述中药制剂为口服剂型，包括颗粒剂、口服液、散剂、片剂、胶囊剂或丸剂，优选为颗粒剂、口服液或散剂。 

本发明提供上述中药退热制剂的制备方法，按下步骤： 

a.将薄荷、青蒿和羌活三中药饮片加水蒸馏，分离并收集挥发油，药渣备用；b.石膏先水煎30分钟，然后与步骤a中的药渣及柴胡、黄芩、大青叶、鸭跖草和生甘草五饮片合并共煎煮二次，每次加水量至少为生药重量的5倍，每次煎煮至少0.5小时，合并二次煎液，浓缩至相对密度为1.10～1.15的清膏；c.清膏加乙醇混匀，冷藏12～24小时，滤过，得水提醇沉液；水提醇沉液回收乙醇，并继续浓缩至相对密度为1.30以上，得浸膏。 

所述薄荷、青蒿、羌活的加水量为该三组份重量的12倍量，并浸泡0.5小时后蒸馏，所述石膏水煎的加水量为石膏10倍重量。 

所述清膏加乙醇至醇重量含量为60％(重量)。 

所述柴胡、黄芩、大青叶、鸭跖草和生甘草五原药与石膏煎煮液合并之前预先用水浸泡0.5小时，与石膏煎煮液合并煎煮的第一次加水量为总饮片的10倍重量，第二次为总饮片的8倍重量。 

所述柴胡、黄芩、大青叶、鸭跖草和生甘草在与石膏煎煮液及分离出挥发油后的药渣合并之前预先用水浸泡0.5小时，与石膏煎煮液及所述药渣合并煎煮的第一次加水量为总饮片量的10倍重量，第二次为总饮片量的8倍重量。 

所述浸膏减压干燥，粉碎成细粉，按剂型要求加入相应辅料，以常规工艺制成颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂或丸剂，也可直接将浸膏加水稀释，制成口服液。 

所述细粉按1∶1～3比例加入糊精，混匀，制成颗粒剂，干燥，喷入挥发油。 

本中药制剂中，黄芩为君药，其所含的黄芩苷为有效成分，黄芩苷含量作为本品主要的质量控制指标，每10毫升成品口服液或每克其它口服剂型的成品药中，黄芩苷不少于15mg。 

本药清气透表、寒温并用。其中柴胡轻清升散，疏邪透表；黄芩苦寒，善清表里之火，一散一清，清解邪热，共为君药。石膏除烦解肌，泄热；羌活、薄荷配合柴胡加强疏邪解表之力，且可避免全方过于寒凉，兼能除湿，为治肢体酸痛之要药；青蒿清热泻火助黄芩清表里郁热，三者同为臣药。大青叶、鸭跖草辅黄芩清热解毒，泻火，故为佐药。甘草为使，扶正以助祛邪。全方透表清气，共奏退热之功。本制剂治疗病毒性上呼吸道感染性发热，能有效抗病毒、快速退烧和改善咽痛、咳嗽等上呼吸道临床症状。本中药制备方法中，根据不同中药饮片的性质及有效成分或部位的性质而确定不同的工艺；水煎煮、纯化、浓缩、干燥等各工艺以出膏率和黄芩苷的含量为指标，用正交试验来确定。薄荷、青蒿、羌活中的挥发油为有效成分，采用单独提取挥发油， 并在固体剂型最后成型时加入。 

具体实施方式

实施例所用原药材均为2000版药典所收载的药材，经鉴定，各项指标均符合规定。 

实施例1 

分别称取中药饮片：羌活10g，薄荷10g，柴胡10g，黄芩10g，青蒿10g，石膏30g，大青叶15g，鸭跖草15g和生甘草5g。 

将薄荷、青蒿和羌活合并加12倍量水，浸泡0.5小时，蒸馏至挥发油馏出完毕，分离并收集按发油，药渣备用。 

石膏先煎30分钟；将柴胡、黄芩、大青叶、鸭跖草、生甘草合并，加水浸泡20分钟后加入石膏煎煮液中，第一次加水10倍量水，煎煮0.5小时，第二次加8倍量煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15(60℃的密度值)的清膏，加乙醇至含醇量达60％(重量)，混匀，冷藏24小时，滤过。滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度为1.30(60℃)，得浸膏，减压干燥，粉碎成细粉；加入糊精等辅料制粒，干燥，加入挥发油，混匀，制成颗粒剂(下称“上感颗粒”)20g，包装成5g/袋。 

经高效液相色谱法测定，颗粒中黄芩苷的含量为23mg/g。 

实施例2 

称取饮片：羌活8g、薄荷8g、柴胡12g、黄芩10g、青蒿8g、石膏40g、大青叶12g、鸭跖草12g和生甘草3g。 

制法同实施例1，得上感颗粒。 

经高效液相色谱法测定，颗粒中黄芩苷的含量为21mg/g。 

实施例3 

称取饮片：羌活14g、薄荷12g、柴胡12g、黄芩12g、青蒿12g、石膏40g、大青叶18g、鸭跖草15g和生甘草6g。 

制法同实施例1，得上感颗粒。 

经高效液相色谱法测定，颗粒中黄芩苷的含量为20mg/g。 

实施例3 

称取原料药：羌活14g，薄荷12g，柴胡12g，黄芩12g，青蒿12g，石膏40g，大青叶18g，鸭跖草15g，生甘草6g。 

制法同实施例1，得上感颗粒。 

经高效液相色谱法测定，颗粒中黄芩苷的含量为20mg/g。 

实施例4动物试验 

一、实验方法和结果 

1.甲型流感病毒鸡胚抗毒试验 

取9龄鸡胚，于照蛋机上标记气室，放置无菌净化台内，用75％乙醇和2％碘酊分别消毒2次后，用无菌砂轮轻轻于气室隔膜处磨一小口，约0.05cm直径大小(为针尖大小)。 

取甲型流感病毒(粉状)，分次加入0.3ml生理盐水2-3次，混匀后，吸出置无菌试管内，并稀释至2ml，吹打后，每个鸡胚接种0.2ml甲型流感病毒，置37℃恒温箱内培养72h-48h(36℃72h)(37℃48h)。 

以上9日龄鸡胚培养72h后，放入4℃冰箱内，使血管内血液凝固，次日取出，置超净台内，用75％乙醇和2％碘酊消毒后，用无菌镊子除去封口处石蜡，用镊子除去气室及隔膜层，用无菌吸管轻轻吸取尿囊液(弃去混浊尿囊液)以上收集为增毒一次的尿囊液。以上试验重复3次后，用于实验，实验前做血凝试验。 

2.血凝试验 

取24孔微孔板，每孔加入生理盐水(NS)0.5ml，(第1管加NS 0.9ml)，将尿囊液编号(以每只鸡胚)，取尿囊液0.1ml加入第1管混匀后取出0.5ml，加入第二管内，依次稀释至第8管，第9管不加病毒，做空白对照(生理盐水)，随后取新鲜公鸡血(啼叫)用生理盐水洗涤3次后配成0.5％鸡红细胞溶液(生理盐水)0.25ml轻轻加入后摇匀，置室温放置2h后观察记录。 

观察标准： 

++++：一层红细胞呈增殖状均匀铺于管底 

+++：基本同上，但边缘较薄 

++：血球于管底形成一个环状，但四周有小凝集块 

+：血球于管底形成小团，边缘不光滑整齐 

-：血球沉于管底形成小团，边缘光滑整齐 

实验结果判断：第2、4、5、6、8管收集尿囊液的血凝滴定均为640以上，可以用于体内感染小鼠。 

病毒感染小鼠半数死亡(LD50)滴定 

取ICR小鼠56只，体重13-16g，雌雄各半，随机分7组，每组8只，取增毒3 次病毒尿囊液，以10倍稀释，每组滴以各病毒浓度，观察14d内死亡数，按Reed Muench法计算。 

病毒感染小鼠半数死亡(LD₅₀)滴定(Reed Muench法) 

(83.3-50)/(83.3-36.4)＝0.71 

LD50＝1+0.71＝1.71 

结果：按Reed Muench法计算LD50＝1.71 

甲型流感病毒LD50＝10-1.71 

3.用上感颗粒对甲型流感病毒A/PR8/34致上呼吸道小鼠肺指数、肺组织病理及抗病毒机制的试验 

3.1实验动物分组及给药 

取ICR小鼠70只，体重13-16g，雌雄各半，随机分7组，每组10只。 

a.正常组：等量NS，0.2ml/10g 

b.模型组：等量NS，0.2ml/10g 

c.抗病毒口服液组：10ml/kg，0.2ml/10g 

d.利巴韦林组：150mg/kg，0.1ml/10g 

e.上感颗粒大剂量：37.66g/kg，0.2ml/10g 

f.上感颗粒中剂量：18.83g/kg，0.2ml/10g 

g.上感颗粒小剂量：9.42g/kg，0.2ml/10g 

各组小鼠按以上剂量灌胃给药，每天1次连续7天。 

3.2上呼吸道感染模型制备 

正常组小鼠于给药当日，乙醚轻度麻醉下，以生理盐水滴鼻，每鼠30μl，其余各组于给药当日，乙醚轻度麻醉下，以4LD50的甲型流感病毒(A/PR8/34)毒液滴鼻感染，每鼠30μl。 

3.3实验指标及测定方法 

(1)上感颗粒对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响 

各组动物于末次给药后，脱颈椎处死动物，摘取小鼠完整肺组织，洁净纱布吸干水分，称重后计算肺指数及肺指数抑制率。 

肺指数抑制率＝(模型组平均肺指数-实验组平均肺指数)×100％ 

表1上感颗粒对上呼吸道感染小鼠肺指数的影响 

“△△”代表与正常组比较P＜0.01；“*”代表与模型组比较P＜0.05 

由实验结果可见：模型对照组小鼠肺指数与正常组相比具有显著性差异(P＜0.01)，经药物治疗后抗病毒口服液、利巴韦林、上感颗粒大剂量、上感颗粒中剂量、上感颗粒小剂量均能降低上呼吸道感染小鼠肺指数，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)。 

提示：上感颗粒能抑制甲型流感病毒引起的小鼠上呼吸道感染。 

(2)上感颗粒对上呼吸道感染小鼠血清中TNF-α、IL-2、sIL-2R水平的影响 

各组小鼠于末次给药后，摘眼球取血，静置后4℃1500r/min离心10min，取血清，-20℃保存，测定血清中TNF-α、IL-2、sIL-2R水平。 

血清中IL-2水平测定： 

采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定样品中小鼠白介素-2的水平，向预先包被了小鼠IL-2单克隆抗体的酶标孔中加入IL-2，温育，洗涤后，加入HRP标记过的IL-2抗体，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的 作用下转化成最终的黄色。颜色深浅与样品中小鼠IL-2的浓度呈正相关。 

血清中TNF-α水平测定： 

采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定样品中小鼠TNF-α的水平，向预先包被了小鼠TNF-α单克隆抗体的酶标孔中加入IL-2，温育，洗涤后，加入HRP标记过的TNF-α抗体，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色深浅与样品中小鼠TNF-α的浓度呈正相关。 

血清中sIL-2R水平测定： 

采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定样品中小鼠sIL-2R的水平，向预先包被了小鼠sIL-2R单克隆抗体的酶标孔中加入sIL-2R，温育，洗涤后，加入HRP标记过的sIL-2R抗体，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色深浅与样品中小鼠sIL-2R的浓度呈正相关。 

表2上感颗粒对上呼吸道感染小鼠血清中IL-2、TNF-α、SIL-2R的影响 

“△△”代表与正常组比较P＜0.01；“*”代表与模型组比较P＜0.05；“**”代表与模型组比较P＜0.01 

由实验结果可见：上呼吸道感染模型组小鼠与正常对照组比较，血清中TNF-α、SIL-2R水平显著升高，IL-2水平显著降低，二者比较具有显著性差异。经药物治疗后，抗病毒口服液、利巴韦林、上感颗粒大剂量能降低血清中TNF-α水平；利巴韦林、上感颗粒大剂量、上感颗粒中剂量能降低血清中SIL-2R水平；上感颗粒大剂量、利巴韦林能升高血清中IL-2水平。 

试验结果提示：上感颗粒对甲型流感病毒引起的上呼吸道感染抑制作用与升高血清中IL-2及降低TNF-α、SIL-2R水平有关。 

(3)上感颗粒对病毒性呼吸道感染小鼠肺组织CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的影响 

1.实验步骤 

1.1制备组织切片：各组动物于末次给药后，脱颈椎处死动物，取小鼠肺脏，4％多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明后，石蜡包埋切片。 

1.2免疫组化过程：采用免疫组化二步法。取石蜡切片脱蜡水化，置0.01mol/L，PH6.0的柠檬酸盐缓冲液中微波中档抗原修复20min，自然冷却，PBS清洗3次，每次2min。正常山羊血清封闭，室温孵育10min。滴加1∶50稀释的一抗，37℃孵育1h，PBS冲洗，每次3min。滴加即用型快速免疫组化MaxVisionTM二抗，37℃或室温孵育10～15min，PBS清洗3次，每次2min。滴加新鲜配制的DAB显色剂显色3～5min，显微镜下观察，自来水充分冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返蓝，梯度酒精脱水二甲苯透明，中性树胶封片。 

1.3阳性细胞计数：100倍镜下观察，400倍镜下计数，采用双盲法，由两个观察者对各组标本每个切片看5个视野，并记录各抗体的表达情况，通过评分对它们的染色强度进行分级。CD4+和CD8+蛋白定位于细胞浆，以细胞浆着色呈棕黄色为阳性细胞。染色强度评分标准：阳性细胞百分数＜5％、未被染色为阴性(-)，5％～15％、浅棕色为弱阳性(±)，15％～30％、深棕色为阳性(+)，＞30％，棕褐色为强阳性(++)。光学显微镜观察拍照。 

2.统计分析 

实验数据统计用 表示，采用t检验，用spss11.0统计软件进行统计分析。 

3.结果 

模型组小鼠与正常对照组比较，肺组织中的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平显著升高，二者比较具有显著性差异(P＜0.05)。经药物治疗后，抗病毒口服液、利巴韦林的CD4+/CD8+水平降低，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)，利巴韦林的CD4+、上感颗粒大剂量的CD4+、CD4+/CD8+水平明显降低，与模型组比较具有高度显著性差异(P＜0.01)。 

上感颗粒对上呼吸道感染小鼠肺组织CD₄ ⁺、CD₈ ⁺的影响 

(n＝10) 

注：“△”代表与正常组比较P＜0.05，“*”代表与模型组比较P＜0.05，“**”代表与模型组比较P＜0.01 

大剂量上感颗粒能明显降低小鼠肺组织中的CD4+含量，表明上感颗粒对甲型流感病毒引起的上呼吸道感染抑制作用与降低肺组织中CD4+水平有关。 

实施例5临床试验 

一、临床研究观察外感发热465例的对风寒、风热、卫气同病及挟湿证候的退热作用，评价上感颗粒的适应证和疗效。 

1资料与方法 

1.1一般资料病例来源于2009年5月～2010年4月北京中医药大学附属东直门医院、成都中医药大学附属医院、广东省中医院、江苏省中医院、安徽中医学院附属医院、昆山市中医医院、无锡市中西医结合医院、徐州市中医院8个中心急诊患者。入组465例，脱落28例，脱落率6.02％，剔除4例，剔除率0.86％，治疗组433例。461例(全分析集)患者中，男性205例，女性256例，年龄18～70岁。中医诊断为外感发热风寒、风热、卫气同病及风邪袭表(寒热不显、寒热兼夹)、挟湿证。其中风寒证男性29例，女性33例，年龄平均30.97±11.90岁；风热证男性52例，女性56例，年龄平均31.08±11.01岁；卫气同病男性70例，女性77例，年龄平均31.39±11.28岁；寒热不显男性27例，女性41例，年龄平均29.18±9.44岁；寒热兼夹男性27例，女性49例，年龄平均31.53±12.55岁。各组性别、年龄、生命体征、病程、食物过敏史及药物过敏史、病情差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。 

1.2病例选择 

(1)西医诊断标准：参照陈灏珠主编《实用内科学》第十二版，符合病毒性上呼吸道感染^[1]

(2)中医辨证标准：参照国家中医管理局制定的《中医外感高热症急症诊疗规范》制定^[2]：①风寒证：自觉发热轻，恶寒，流清涕，口不干。②风热证：自觉发热重，恶风，流浊涕，咽痛，口干。③卫气同病证：发热，烦渴小便短赤，舌红苔黄，且伴 有卫分证(如恶寒或恶风，流涕，咽痒，咽痛，头痛，头胀，喷嚏)。④风邪袭表(寒热不显)：发热，喷嚏，咽痒，鼻塞，无汗或有汗。⑤风邪袭表(寒热兼夹)：发热，咽痛、流清涕。兼夹证兼夹湿邪：中脘痞闷，纳呆，恶心呕吐，大便溏，苔腻等六个症状体征中至少具备2项。 

(3)纳入标准：符合病毒性上呼吸道感染发热诊断标准及中医外感高热症诊疗规范标准者。年龄在18～70岁之间。急性起病，病程在48小时内。体温≥38.0℃。血白细胞总数＞3.5×109/L、且≤10.00×109/L，中性粒细胞≤85％者。知情同意，志愿受试。 

(4)排除标准：下呼吸道病毒性感染及其他呼吸、消化、泌尿、血液系统等疾病感染致发热者。妊娠期、哺乳期妇女。 

1.3治疗方法上感颗粒(羌活12克、薄荷6克、柴胡12克、黄芩10克、青蒿10克、石膏30克、大青叶15克、鸭跖草15克、生甘草3克)。配方颗粒由江阴天江药业有限公司提供。口服，体温＜39.0℃时，每次1帖，每日2次；体温≥39.0℃时，加服1帖。每天加服不超过1帖。中医调摄：休息(慎起居、避风寒)、饮水、中药温服、使之微汗。疗程3天，随访至上呼吸道感染痊愈。 

1.4疗效标准(1)体温：①即刻退热作用：首次给药后1小时、2小时、3小时和4小时体温下降的幅度；首次给药后1小时、2小时、3小时和4小时体温下降≥0.5℃的例数；②起效时间：从首次服药开始到体温下降0.5℃所需时间；③退热时间(首次给药至体温恢复正常≤37.2℃，且此后不再复升的时间)。(2)综合疗效：临床痊愈：精神、食欲好、体温恢复正常、鼻咽部症状消失、咽充血消失；临床未愈：未达到临床痊愈标准者。 

1.5统计方法所有数据均采用SAS 9.13统计分析软件处理。描述性统计分析，定性指标以频数表，百分率或构成比描述；定量指标以均数，标准差，或中位数，下四分位数(Q1)，上四分位数(Q3)，最小值，最大值描述。两组对比分析，定性资料采用卡方检验，Fisher精确概率法，Wilcoxon秩和检验，CMHx2检验。定量资料符合正态分布用t检验，不符合正态分布用Wilcoxon秩和检验，Wilcoxon符号秩和检验。体温测量采用GLM重复测量统计分析，统计假设检验统一使用双侧检验，给出检验统计量及其对应的P值，以P≤0.05作为有统计学意义，以P≤0.01作为有高度统计学意义。 

2结果 

2.1体温 

2.1.1即刻退热时间 

风寒证、风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹各症候组在给药前、给药后1h、2h、3h和4h体温组间有明显差异(P＜0.0001)，卫气同病组体温最高，其次为风热证、寒热兼夹、寒热不显、风寒证，给药后4h体温各组间两两比较体温有明显差异(P＜0.0001)。体温变化表上显示首次服药后4小时内体温呈明显下降趋势(见表1)。 

表1首次服药后4小时内体温(℃)重复测量分析(PPS) 

注：a：组间比较；b：组内比较。 

各症候在首次服药后4小时内体温(℃)下降值的变化：给药后1h与给药前相比较，风寒证体温下降0.17±0.63、风热证下降0.12±0.37、卫气同病下降0.08±0.54、寒热不显下降0.13±0.56、寒热兼夹下降0.07±0.41，各组间比较无差异(P＞0.05)；给药后4h与给药前相比较，风寒证体温下降了0.53±0.67、风热证下降0.50±0.52、卫气同病下降0.46±0.73、寒热不显下降0.50±0.75、寒热兼夹下降0.54±0.64，体温下降幅度基本在0.50℃左右，有明显下降趋势，但各组间比较无差异(P＞0.05)。 

各证候首次服药后4小时内体温下降≥0.5℃的例数：给药后1h风寒证14例(23.33％)，风热证16例(15.09％)，卫气同病28例(20.74％)，寒热不显12例(19.05％)，寒热兼夹7例(10.14％)，各组间比较无明显差异(P＞0.05)。给药后4h风寒证30例(50％)，风热证53例(50％)，卫气同病69例(51.11％)，寒热不显30例(47.92％)，寒热兼夹34例(49.28％)，各组例数为50％左右，组间比较无明显差异(P＞0.05)。 

2.1.2起效时间： 

各证候首次服药后4小时内体温下降≥0.5℃者的退热时间，风寒证2.32±1.25小时，风热证2.39±1.05小时、卫气同病2.37±1.18小时、寒热不显2.39±1.23小时、寒热兼夹2.26±0.90小时，基本在2.35小时左右，各组间无差异。 

因此上感颗粒的起效时间为2.35小时，对各症候的退热起效时间无差别。 

2.1.3退热时间 

各症候首次服药后体温与给药前体温相比呈明显下降趋势，有显著统计学意义(P＜0.0001)。风寒证给药前体温38.40±0.37℃，给药后4h体温37.87±0.60℃，第2天8:00体温37.95±0.60℃，12:00体温37.41±0.61℃，16:00体温37.43±0.64℃，20:00体温37.38±0.58。第3天8:00体温37.26±0.58℃，12:00体温37.15±0.61℃，16:00体温37.15±0.61℃，20:00体温37.08±0.61℃，第72h体温36.71±0.40℃。其他风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹体温均下降，在第3天12:00体温时体温均正常。其中给药前、给药后4h体温各组间有明显差异，有统计学意义，其他时点各组间无差别。 

表2各证候首次服药后体温(℃)重复测量分析(PPS) 

各证候首次服药后内体温恢复正常的例数：在给药后第1天卫气同病例数9例(14.07％)，例数最少，与起病时体温较高有关；给药后第2天寒热不显体温恢复正常者50例(79.37％)，最高，其次为寒热兼夹、风寒证、卫气同病、风热证，组间比较有显著性差异(P＜0.05)。 

给药后第72h各证候体温恢复正常者所占比例均在93％以上，提示服用上感颗粒后93％以上的患者在72小时内体温可恢复正常，其退热疗效可达到93％。 

表3退热时间(小时)分析(PPS) 

各证候的退热时间风寒证为18.09±24.03小时、风热证10.87±12.84小时、卫气同 病12.53±15.06小时、寒热不显14.19±17.46小时、寒热兼夹12.10±13.59小时，平均为13.55小时，风寒证时间最长，风热证最短，但组间比较无明显差异。 

提示体温完全恢复正常的时间为13.55小时。风寒证、风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹各证候间无明显差异。 

2.2综合疗效 

风寒证的总有效率为86.67％、风热证90.57％、卫气同病94.81％、寒热不显80.95％、寒热兼夹98.55％。寒热兼夹总有效率最高，其次为卫气同病、风热证、风寒证、寒热不显，各证候间综合疗效比较有显著性差异(P＝0.0022，P＜0.01)。 

表4疾病疗效分析(PPS) 

2.3对兼夹湿邪的退热作用及综合疗效 

2.3.1即刻退热作用： 

兼夹湿邪、不兼夹湿邪两组首次服药后4小时内体温与给药前相比较均有明显下降，有显著性统计学意义(P＜0.0001)，但两组间比较无差别。首次服药后4小时内体温下降幅度比较，两组服药后4h与给药前相比较体温下降分别为0.49±0.60℃、0.50±0.70℃，有明显下降，但组间比较无差异。 

2.3.2起效时间 

首次服药4h内，兼夹湿邪起效时间为2.34±1.16小时、不兼夹湿邪起效时间2.36±1.11小时，组间比较无差别。 

表5兼夹湿邪退热时间(小时)分析(PPS) 

三、疾病证候分布特点 

1.证候的地域分布 

证候的地域分布特点：在北方(包括北京、徐州)五种证型分布基本无差别，在江南附近(包括南京、合肥、无锡、昆山)：以卫气同病、风热证为主，西南地区(成 都)：以卫气同病、风热证为主；南方(广州)：以风热证、寒热兼夹为主。 

兼夹证(湿邪)的地域、季节分布特点：兼夹湿邪以南京和广州多见，6～10月多见。 

表7证候的地域、兼夹证(湿邪)的分布 

表8兼夹证(湿邪)的季节分布 

2.适应证候类别的分析 

疾病的证候分类：病毒性上呼吸道感染中医证候基本分类包括风寒，风热，卫气同病，临床还可见风邪袭表，其寒热属性不明显者，或同时兼有风寒、风热属性者。以方测证：上感颗粒处方辛温、辛寒药并用、透表与清气药同用，因此推测本方可用于风寒、风热，以及卫气同病者。 

适应证候类别的观察结果：即刻退热时间，上感颗粒对病毒性上呼吸道感染发热患者有较好疗效，服药后4h内体温明显下降，下降幅度在0.50℃左右；首次服药后4h内体温下降≥0.5℃的例数占50％左右。上感颗粒对风寒证、风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹各证候的即刻退热作用无显著性差别。 

起效时间，上感颗粒起效时间为2.35h，对各证候的起效时间无差别。

退热时间，服用上感颗粒后72h内体温恢复正常者所占比例在94％以上，提示其退热疗效可达到94％。平均退热时间即体温完全恢复正常的时间为13.55h。风寒证退热时间18.09±24.03小时，与其它证候14.19±17.46-10.87±12.84小时有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹各证候间无明显差异。 

综合疗效上，寒热兼夹的总有效率最高，其次为卫气同病、风热证、风寒证、寒热不显，各证候间综合疗效比较有显著性差异。 

综上所述，上感颗粒对风寒证、风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹五种证 型均有效，对寒热兼夹、卫气同病、风热证疗效更佳。 

3对兼夹湿邪的退热作用及综合疗效 

3.1即刻退热作用： 

兼夹湿邪、不兼夹湿邪两组首次服药后4h内体温与给药前相比较均有明显下降，有显著性统计学意义(P＜0.0001)，但两组间比较无差别。首次服药后4h内体温下降幅度比较，两组服药后4h与给药前相比较体温下降分别为0.49±0.60℃、0.50±0.70℃，有明显下降，但组间比较无差异。 

3.2起效时间 

首次服药4h内，兼夹湿邪起效时间为2.34±1.16h、不兼夹湿邪起效时间2.36±1.11h，组间比较无差别。 

表9兼夹湿邪退热时间(h)分析(PPS) 

3.3综合疗效： 

兼夹湿邪总有效率为93.67％、不兼夹湿邪总有效率为89.82％，组间比较无明显差异。 

结果 

1.即刻退热作用：服药后4小时内体温明显下降，下降幅度为在0.50℃左右；首次服药后4小时内体温下降≥0.5℃的患者例数在50％左右。 

2.起效时间：上感颗粒的起效时间为2.35小时。 

3.退热时间：服用上感颗粒后72小时内体温恢复正常者所占比例在93％以上，提示其退热疗效可达到93％。平均退热时间为13.55小时。 

4.临床症状消失率：上感颗粒对自觉发热轻、自觉发热重、恶风、恶寒、寒战、汗出、鼻塞、流涕、喷嚏、咽痒、咽痛、纳呆、恶心呕吐、小便短赤、大便溏、大便干结等症状的改善都比较好，其消失率均在85％以上，但对咳嗽、乏力症状的改善效果欠佳。 

5.适应的证候：上感颗粒对风寒证、风热证、卫气同病、寒热不显、寒热兼夹各证候的体温变化、临床症状的改善均无差别。故这五种证型均是上感颗粒的适应证候。 

6.肺指数结果：模型对照组小鼠肺指数升高与正常组相比具有显著性差异(P＜0.01)，抗病毒口服液、利巴韦林、上感颗粒大、中、低剂量均能降低上呼吸道感染小 鼠肺指数，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)。 

7.血清TNF-α结果：模型对照组小鼠与正常对照组比较，血清中TNF-α水平显著升高，二者比较具有显著性差异(P＜0.05)。抗病毒口服液、利巴韦林、上感颗粒大剂量能降低血清中TNF-α水平，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)。 

8.血清IL-2、SIL-2R结果：模型对照组小鼠与正常组比较，血清中SIL-2R水平显著升高，IL-2水平显著降低，二者比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。利巴韦林、上感颗粒大、中剂量能降低血清中SIL-2R水平，与模型组比较有显著性差异；利巴韦林、上感颗粒大剂量能升高血清中IL-2水平，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。 

9.肺组织CD4+、CD8+结果：模型对照组小鼠与正常组比较，肺组织中的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平显著升高，二者比较具有显著性差异(P＜0.05)。抗病毒口服液、利巴韦林的CD4+/CD8+水平降低，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)，利巴韦林的CD4+、上感颗粒大剂量的CD4+、CD4+/CD8+水平明显降低，与模型组比较具有高度显著性差异(P＜0.01)。 

10.肺组织TLR3及PKRmRNA结果：模型对照组小鼠与正常组比较，肺组织中的TLR3及PKR mRNA表达显著增强，二者比较具有高度显著性差异(P＜0.01)。抗病毒口服液、利巴韦林、上感颗粒大剂量的TLR3及PKR mRNA表达降低，与模型组比较具有高度显著性差异(P＜0.01)，上感颗粒中、低剂量的TLR3及PKR mRNA表达降低，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)。 

结论 

本中药制剂采用透表清气治疗病毒性上呼吸道感染性发热能有效退热，改善症状，具有较好的临床疗效，且对各症候均有效。其有效性与上感颗粒对病毒所致的肺损伤具有保护作用有关，能抗病毒，抗炎，调节免疫反应，而其免疫调节作用的机制可能为抑制肺组织中TLR3及PKR mRNA的表达，减轻宿主细胞的破坏。 

Claims (9)

1.一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，其特征是由以下重量份的中药饮片制成：羌活6～14份、薄荷6～12份、柴胡8～12份、黄芩9～12份、青蒿8～12份、石膏15～40份、大青叶12～18份、鸭跖草10～15份和生甘草2～6份。

2.根据权利要求1所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，其特征是所述中药饮片各组分的重量份为：羌活10份、薄荷10份、柴胡10份、黄芩10份、青蒿10份、石膏30份、大青叶15份、鸭跖草15份和生甘草5份。

3.根据权利要求1或2所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，其特征是其口服剂型是颗粒剂、口服液、散剂、片剂、胶囊剂或丸剂。

4.根据权利要求1或2所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂，其特征是其剂型为颗粒剂、口服液或散剂。

5.一种如权利要求1所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂的制备方法，其特征是按下步骤：

a.将薄荷、青蒿和羌活三中药饮片加水蒸馏，分离并收集挥发油，药渣备用；b.石膏先水煎30分钟，然后与步骤a中的药渣及柴胡、黄芩、大青叶、鸭跖草和生甘草五饮片合并共煎煮二次，每次加水量至少为生药重量的5倍，每次煎煮至少0.5小时，合并二次煎液，浓缩至相对密度为1.10～1.15的清膏；c.清膏加乙醇混匀，冷藏12～24小时，滤过，得水提醇沉液；水提醇沉液回收乙醇，并继续浓缩至相对密度为1.30以上，得浸膏。

6.根据权求5所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂的制备方法，其特征是所述薄荷、青蒿、羌活的加水量为该三组分重量的12倍量，并浸泡0.5～1小时后蒸馏，所述石膏水煎的加水量为石膏10倍重量。

7.根据权求5所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂的制备方法，其特征是所述清膏加乙醇至醇重量含量为60％。

8.根据权求5或6或7所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂的制备方法，其特征是所述柴胡、黄芩、大青叶、鸭跖草和生甘草在与石膏煎煮液及分离出挥发油后的药渣合并之前预先用水浸泡0.5小时，与石膏煎煮液及所述药渣合并煎煮的第一次加水量为总饮片量的10倍重量，第二次为总饮片量的8倍重量。

9.根据权求8所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药制剂的制备方法，其特征是所述浸膏减压干燥，粉碎成细粉，细粉按1∶1～3重量比例加入糊精，混匀，制粒，干燥，喷入挥发油。